粘膜疫苗组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及作为感染症、癌的预防或治疗剂有用，且能够对口腔内粘膜、眼粘膜、 耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、肠道粘膜或直肠 粘膜给药的粘膜疫苗组合物。特别是本发明涉及通过将特定的脂多糖作为佐剂、与抗原一 起对粘膜表面给药，能够安全且有效地诱导全身性免疫应答和粘膜免疫应答的粘膜疫苗组 合物。
【背景技术】
[0002] 作为疫苗制剂的剂型，现在产品化的制剂大部分为注射剂。注射型疫苗存在如下 问题:诱导血中（全身性）的免疫应答（IgG抗体的产生)而不会诱导粘膜中的免疫应答（IgA 抗体的产生），虽然可以防止由于感染后所导致的病原体的增殖，但是难以防御由于粘膜途 径所导致的病原体的感染自身。
[0003] 因此，近年由粘膜的疫苗接种受到关注，其中，使用流感病毒作为抗原的粘膜给药 (经鼻给药)型疫苗的开发显露头角。
[0004] 粘膜给药型疫苗不仅能够诱导全身性免疫（IgG抗体的产生），而且还能够诱导粘 膜免疫（IgA抗体的产生）。该IgA抗体的特征在于，不怎么严格区别成为对象的疾病的病原 体的类型，即使每年改变的病原体的流行型变化也能够应对，认为对于防止流行病而言是 有效的。
[0005] 另外，经鼻给药型疫苗显露头角的理由之一，可列举出对消化道粘膜给予抗原时， 容易受到胃酸的影响、蛋白分解酶的影响却难以防止这些影响，与此相对，经鼻对粘膜给予 抗原时，没有这些影响。进而，在鼻腔粘膜上存在被称为NALT的抗原识别组织对于免疫应答 而言是有效的也是理由之一。
[0006] 但是，对鼻腔粘膜的抗原的给药，虽然效果高但是急性脑病等严重副作用的可能 性也高，另外对于老人、婴儿等而言，经鼻给药自身繁杂且困难，进而存在由于鼻涕等身体 上主要原因而得不到稳定的效果的问题。
[0007] 另一方面，也进行了很多想要将抗原经口给药，咽下后，在消化道粘膜(小肠)等诱 导全身性免疫和粘膜免疫的尝试。此时担心的是，如何防止由于胃酸所导致的抗原的分解、 由于蛋白分解酶所导致的抗原的分解。为了解决这些问题，含有大量的中和胃酸的抗酸剂、 或者通过微球等覆膜技术防护抗原的技术得到开发。
[0008] 但是，实际上开发成功的是，本来在胃酸中的稳定性高的存活弱毒化脊髓灰质炎 病毒疫苗、存活弱毒化轮状病毒疫苗。
[0009] 作为在口腔粘膜途径诱导粘膜免疫和全身性免疫的例子，提出了以下的报告。 [0010]专利文献1中提出了在经口（例如舌下给药)组合物中含有一种以上的抗原和Toll 样受体(TLR)激动剂的免疫原性组合物，作为抗原，公开了流感抗原，作为佐剂，公开了 TLR4 激动剂。
[0011]但是，专利文献1中提出的免疫原性组合物中的TLR4激动剂在免疫诱导方面效果 弱，谋求可以诱导更强的免疫并且安全的佐剂。
[0012]另外，专利文献2中提出了源自泛菌属菌的脂多糖（lipopolysaccharide、LPS)，记 载了与以往的LPS相比安全性高，与抗原同时给药的情况下免疫响应得到增强。
[0013] 但是，专利文献2中，对于对获得性免疫的使用没有明确的提及、例示，另外，对于 最合适的佐剂/抗原的比率也没有提及。进而，专利文献2中，对于源自泛菌属菌的LPS的作 为粘膜疫苗的使用也没有明确提及。
[0014] 另外，专利文献3中提出了含有病原体的灭活抗原、以及作为免疫刺激剂(佐剂）的 Poly(I:C)与酵母聚糖的组合的疫苗，记载了使用源自成团泛菌(Pantoea agglomerans)的 脂多糖(LPS)作为佐剂，使用流感病毒作为病原体的例子。
[0015]但是，专利文献3中记载的使用源自成团泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖 (LPS)的疫苗的例子是对鼻粘膜给药，没有示范对口腔内粘膜等特定的粘膜的给药。通常若 给药部位不同则有效的佐剂不同是技术常识。由此由该专利文献3中记载的使用源自成团 泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖（LPS)的疫苗的例子，在口腔内粘膜、眼粘膜、耳粘 膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、肠道粘膜或直肠粘 膜，源自成团泛菌(Pantoea agglomerans)的脂多糖(LPS)是否发挥效果还不明确。
[0016]现有技术文献 [0017]专利文献
[0018] 专利文献1:日本特表2013-527218号公报 [0019] 专利文献2:日本专利第4043533号公报 [0020] 专利文献3:日本特开2009-242367号公报
【发明内容】
[0021] 发明要解决的问题
[0022] 本发明鉴于上述现状，其目的在于，提供安全，作为感染症、癌的预防或治疗剂有 用，可以有效地诱导全身性免疫应答和粘膜免疫应答，且能够对口腔内粘膜、眼粘膜、耳粘 膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、肠道粘膜或直肠粘膜 给药的疫苗组合物。
[0023] 用于解决问题的方案
[0024]本发明人等为了解决上述问题而进行深入研究，结果发现，在对口腔内粘膜、眼粘 膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、肠道粘膜或 直肠粘膜的给药中，将源自革兰氏阴性细菌的脂多糖或其盐作为佐剂，与抗原一起对口腔 内粘膜、眼粘膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、 肠道粘膜或直肠粘膜给药，并且使得与抗原的质量比处于特定范围内，由此可以安全且有 效地诱导全身性免疫应答和粘膜免疫应答，从而完成了本发明，所述革兰氏阴性细菌选自 由沙雷氏菌属（Serratia)、勒克菌属（Leclercia)、拉恩菌属（RahneIla)、嗜热酸菌属 (Acidical dus)、嗜酸菌属（Acidiphili um)、酸球形菌属（Acidisphaera )、酸胞菌属 (Acidocella)、酸单胞菌属（Acidomona s )、亚细亚菌属（Asaia)、别尔纳普氏菌属 (Belnapia)、脆弱球菌属(Craurococcus)、葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter)、葡糖杆菌 属(Gluconobacter)、柯扎克氏菌属（Kozak ia)、利亚杆菌属（Leahi bacter)、鼠球菌属 (Muricoccus)、新亚细亚菌数（Neoasaia)、嗜油单胞菌属（Oleomonas)、副脆弱球菌属 (Paracraurococcus)、红球状菌属(Rhodopila)、玫瑰球菌属(Roseococcus)、如比特皮达 (Rubritepida)、糖杆菌属（Saccharibac ter)、星状菌属（St el la)、斯瓦米纳坦氏菌属 (Swaminathania)、替考球菌属(Teichococcus )、扎瓦尔金氏菌属(Zavarzinia)、假单胞菌 属(Pseudomonas)、无色杆菌属(Achromobacter)、芽抱杆菌属(Bacillus)、甲焼袋状菌属 (Methanoculleus)、甲焼八叠球菌属(Methanosarcina)、梭菌属（Clostridium)、微球菌属 (Micrococcus)、黄杆菌属（Flavobacterium)、泛菌属（Pantoea)、醋酸杆菌属 (Acetobacter)、发酵单胞菌属（Zymomonas )、黄单胞菌属（Xanthomonas)和肠杆菌属 (Enterobacter)组成的组中的至少一种D
[0025] 即，本发明为一种粘膜疫苗组合物，其特征在于，其为对选自由人或动物的口腔内 粘膜、眼粘膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽喉粘膜、呼吸道粘膜、支气管粘膜、肺粘膜、胃粘膜、肠 道粘膜和直肠粘膜组成的组中的至少一种粘膜给药的粘膜疫苗组合物，其含有至少一种抗 原和作为免疫刺激剂的源自革兰氏阴性细菌的脂多糖或其盐，所述革兰氏阴性细菌选自由 沙雷氏菌属（Serratia)、勒克菌属（Leclercia)、拉恩菌属（RahneIla)、嗜热酸菌属 (Ac idi caldus)、嗜酸菌属（Acidiphi I ium)、酸球形菌属（Ac idi sphaera)、酸胞菌属 (Acidocella)、酸单胞菌属（Acidomona s )、亚细亚菌属（Asaia)、别尔纳普氏菌属 (Belnapia)、脆弱球菌属(Craurococcus)、葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter)、葡糖杆菌 属（Gluconobacter)、柯扎克氏菌属（Kozakia)、利亚杆菌属（Leahibacter)、鼠球菌属 (Muricoccus)、新亚细亚菌数（Neoasaia)、嗜油单胞菌属（Oleomonas)、副脆弱球菌属 (Paracraurococcus)、红球状菌属(Rhodopila)、玫瑰球菌属(Roseococcus)、如比特皮达 (Rubritepida)、糖杆菌属（Saccharibac ter)、星状菌属（St el la)、斯瓦米纳坦氏菌属 (Swaminathania)、替考球菌属(Teichococcus)、扎瓦尔金氏菌属(Zavarzinia)、假单胞菌 属(Pseudomonas)、无色杆菌属(Achromobacter)、芽抱杆菌属(Bacillus)、甲焼袋状菌属 (Methanoculleus)、甲焼八叠球菌属(Methanosarcina)、梭菌属（Clostridium)、微球菌属 (Micrococcus)、黄杆菌属（Flavobacterium)、泛菌属（Pantoea)、醋酸杆菌属 (Acetobacter)、发酵单胞菌属（Zymomonas )、黄单胞菌属（Xanthomonas)和肠杆菌属 (Enterobacter)组成的组中的至少一种，上述免疫刺激剂与上述抗原的质量比（免疫刺激 剂的总质量/抗原的总质量)为0.002~500。
[0026] 另外，本发明的粘膜疫苗组合物优选为液体制剂、喷雾剂、半固体制剂或固体制 剂，上述半固体制剂和固体制剂通过体液和/或体温溶解。
[0027] 另外，本发明的粘膜疫苗组合物优选为通过体液和/或体温溶解的固体制剂。
[0028] 另外，本申请发明的粘膜疫苗组合物优选用于诱导体液免疫。
[0029] 另外，本申请发明的粘膜疫苗组合物中，上述抗原优选为源自感染症的抗原或癌 抗原。
[0030] 另外，上述半固体制剂优选为凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、经阴道剂、栓剂或糖浆剂。
[0031] 另外，上述固体制剂优选为薄膜制剂、崩解片或速溶片。
[0032] 上述抗原优选为选自由源自流感病毒的抗原、源自人类乳头瘤病毒的抗原和源自 肺炎球菌的抗原组成的组中的至少一种。
[0033] 另外，上述抗原优选为源自流感病毒的抗原。
[0034] 以下对本发明进行详细说明。
[0035] 本发明的粘膜疫苗组合物含有至少一种抗原和免疫刺激剂。
[0036] 本发明的粘膜疫苗组合物中，上述免疫刺激剂与上述抗原的质量比（免疫刺激剂 的总质量/抗原的总质量)为0.002~500。若不足0.002则不能诱导充分强度的免疫，若超过 500则产生安全性上的问题。上述免疫刺激剂与上述抗原的质量比的优选的下限为0.01，优 选的上限为100。通过上述免疫刺激剂与上述抗原的质量比处于该范围内，可以确保安全性 的同时诱导充分强度的免疫。
[0037] 本说明书中所称的"抗原的质量"，除了特别记载的情况之外，指的是疫苗中的抗 原中含有的抗原蛋白质的质量。因此，抗原为源自病毒等生物体的物质的情况下，指的是该 抗原中含有的全部蛋白质的质量。
[0038]作为本发明中使用的抗原，优选为源自感染症的抗原或癌抗原。
[0039] 对于源自感染症的抗原而言，为了预防疾病，需要通过疫苗给药来预先形成抗体， 因此优选利用本发明。本发明的粘膜疫苗组合物适于使得体液免疫活化。
[0040] 作为该源自感染症的抗原，若为感染性病原体和源自感染性病原体的抗原则没有 特别限定。
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