4-羟基水杨酰苯胺在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及抗肿瘤药物技术领域，具体地说，是4-径基水杨酷苯胺在制备抗肿瘤 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种克隆性浆细胞异常增殖的恶性疾 病，是血液系统第二位常见的恶性肿瘤，约占血液系统恶性肿瘤的10%，多发于中老年人 群，目前仍无法治愈，其中位生存时间为5~6年。传统治疗多发性骨髓瘤的主要方法是化疗 和造血干细胞移植，其临床疗效很难维持。近10年来，随着新型药物如蛋白酶体抑制剂棚替 佐米、免疫调节剂沙利度胺及来那度胺等的出现，多发性骨髓瘤患者的完全缓解率及总体 生存率明显提高。但同时仍存在W下不足:首先，W上运些药物在复发/难治患者中的单药 有效率仅为25%~50%;其次，尽管无疾病生存时间得到延长，但多数患者终将复发，且出 现显著的药物抵抗;第=，神经炎等某些严重的副作用限制了药物的应用。因而，研发、检验 新的治疗药物仍然是目前多发性骨髓瘤治疗所需面临的重要难题。
[0003] 淋己瘤是血液系统最常见的恶性肿瘤之一，在我国常见恶性肿瘤中占第8位，并且 近年来它的发病率仍在逐渐增加。新的化疗方案、单克隆抗体、细胞免疫治疗等治疗方式已 经显著改善了淋己瘤患者的生存。特别是利妥昔单抗的出现，淋己瘤的治疗有了突破性的 进展，尤其是对CD20阳性的B细胞淋己瘤，有效率更高，缓解时间更长，显著改善预后。但是， 淋己瘤患者出现复发或耐药的比例仍然很高。因此仍需进一步研发新药，W提高淋己瘤的 治疗效果与治愈率。
[0004] 4-径基水杨酷苯胺，其结构式为：
[0006] 该化合物的分子式为Cl出iiN〇3，白色粉末状，分子量为229.24，CAS编号为526-18-1。该化合物的通用名为柳胺酪片，目前用于肝胆病用药，作用机制与去氨胆酸相似，能增加 肝血流量，改善肝功能，可使胆汁中水分显著增加。利胆作用较去氨胆酸强，能使Oddi括约 肌松弛。研究已表明，4 -径基水杨酷苯胺为核糖核巧酸还原酶（R i b O n U C 1 e O t i d e reductase，RR)的抑制剂。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供4-径基水杨酷苯胺的新用途。
[000引为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
[0009] 4-径基水杨酷苯胺在制备预防或治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用。
[0010] 4-径基水杨酷苯胺在制备预防或治疗淋己瘤的药物中的应用。
[0011] 所述的药物包含4-径基水杨酷苯胺和药学上可接受的载体。
[0012] 所述的药物制备成片剂、颗粒剂、针剂或胶囊剂等常规剂型。
[0013] 实验研究发现，在体外，该化合物能有效抑制多发性骨髓瘤及淋己瘤细胞生长，在 体内，该化合物能有效抑制小鼠多发性骨髓瘤及淋己瘤肿瘤生长，可发展为多发性骨髓瘤 及淋己瘤的预防及治疗药物。该化合物可添加药物可接受的载体，制成常规的剂型如片剂、 颗粒剂、针剂等。
[0014] 本发明优点在于：
[001引1、本发明对已知药物4-径基水杨酷苯胺发掘了新的医疗用途，开拓了新的应用领 域。
[0016] 2、4-径基水杨酷苯胺对多发性骨髓瘤及淋己瘤细胞具有较高的杀伤活性。
[0017] 3、4-径基水杨酷苯胺是保肝老药，安全性高，预示着其在癌症领域有很好的药用 前景。
【附图说明】
[0018] 图1-图5为4-径基水杨酷苯胺对多发性骨髓瘤细胞化929细胞、0PM2细胞、U266细 胞、0CI-MY5细胞、RPMI 8266细胞)的抑制曲线；
[0019] 图6-图7为4-径基水杨酷苯胺抑制多发性骨髓瘤的动物实验；
[0020] 图8-图14为4-径基水杨酷苯胺对淋己瘤细胞（SUDHk4细胞、OCI-LYl细胞、OCI-LY8细胞、DB细胞、NU-孤L-I细胞、U2932细胞、TMD8细胞）的抑制曲线；
[0021] 图15-图16为4-径基水杨酷苯胺抑制淋己瘤的动物实验。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0023] 实施例1:针对人多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性
[0024] 1.实验材料；
[0025] (1)细胞株:人多发性骨髓瘤细胞化929细胞、0PM2细胞、U266细胞、0CI-MY5细胞、 RPMI 8266细胞)（美国ATCC，本实验室传代保存），培养于1640培养基(含10 %胎牛血清）。
[0026] (2)主要试剂：1640培养基（美国Gibco公司），胎牛血清（美国Gibco公司），4-径基 水杨酷苯胺(上海泰坦化学有限公司），Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK8,日本株式会社 同仁化学研究所）。
[0027] (3)主要仪器：二氧化碳培养箱（美国化ermo Forma公司），全自动酶标仪(Bio-T邸，ElxSOO)。
[002引2.实验方法：
[0029] (1)细胞培养
[0030] 细胞培养于1640培养基(含10%胎牛血清，pH 7.2)，培养基加2mmol/L谷氨酷胺， 置于细胞培养箱中在37 °C、5 % C02环境下培养。
[0031 ] (2)CCK8试剂盒测定各药物的细胞毒性
[0032] 取人多发性骨髓瘤细胞(H929细胞、0PM2细胞、U266细胞、0CI-MY5细胞、RPMI 8266 细胞）的单细胞悬液，计数后调整细胞浓度至2X IO5个/mL。取96孔培养板每孔加入95化上 述细胞悬液，然后加不同浓度的用培养基配制的药物化L，对照组加入相应体积的培养基， 每组设置3个平行孔。连续培养72h，培养结束前化，每孔加入CCK8试剂10化，于C02解箱中继 续培养。2h后自动酶标仪检测450nm各孔OD值。计算细胞存活率与抑制率:细胞存活率（％ ) =(实验孔OD均值/对照孔OD均值）X 100%。细胞抑制率（％ ) = 100%-细胞存活率（％ )。拟 合函数求出抑制细胞生长达50%时药物浓度IC50。实验重复=次。
[0033] 3.实验结果
[0034] 实验结果见图1-图5。
[0035] 结论:4-径基水杨酷苯胺对人多发性骨髓瘤细胞具有杀伤活性，H929细胞、0PM2细 胞、U266细胞、0CI-MY5细胞和RPMI 8266细胞的IC50分别为17化]?、84咖、271咖、211咖和170 JiMo
[0036] 实施例2:针对多发性骨髓瘤的动物实验
[0037] 1.实验材料
[0038] (1)细胞株:人多发性骨髓瘤细胞化929细胞）（美国ATCC，本实验室传代保存），培 养于1640培养基(含10%胎牛血清）。
[0039] (2)实验动物：雄性BALB/C裸鼠（6-8周，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公 司），置于SPF级环境中饲养(上海第十人民医院中屯、实验室动物房）。
[0040] 2.实验方法
[0041 ] (1)细胞培养参见实施例1。
[0042] (2)动物实验
[0043] 将含2X IO6个朋29细胞的1640培养基注射到裸鼠右蔽窝皮下，当瘤子长成并可测 量时，随机分至对照组和给药组。给药组裸鼠隔天尾静脉注射4-径基水杨酷苯胺lOOmg/kg, 对照组裸鼠注射相同体积的溶剂(200化，5 %DMS0+4 %藍麻油+91 %生理盐水）。每两天测量 一次瘤子大小(测量瘤子的长和宽，瘤子体积= 4V3 X (宽/2)~2 X (长/2))。给药20天后处 死老鼠并取瘤子拍照。
[0044] 3.实验结果
[0045] 实验结果见图6-图7。
[0046] 结论:4-径基水杨酷苯胺能够有效抑制裸鼠多发性骨髓瘤的生长。
[0047] 实施例3:针对人淋己瘤细胞的杀伤活性 [004引 1.实验材料
[0049] 人淋己瘤细胞(SU的正-4细胞、OCI-LYl细胞、0CI-LY8细胞、DB细胞、NU-D化-1细胞、 U2932细胞、TMD8细胞）（美国ATCC，本实验室传代保存）。IMDM培养基(美国Gibco公司）。DMEM 培养基(低糖）（美国Gibco公司）。其他同实施例1。
[(K)加]2.实验方法
[0051 ] 0CI-LY8细胞培养于IMDM培养基。U2932细胞培养于DMEM培养基(低糖）。其他同实 施例1。
[0化2] 3.实验结果
[0化3] 实验数据见图8-图14。
[0054] 结论:4-?基水杨酷苯胺对人淋己瘤细胞具有杀伤活性，SUD化-4细胞、OCI-LYl细 胞、0CI-LY8细胞、DB细胞、NU-DUkl细胞、U2932细胞和TMD8细胞的IC50分别是73測、117測、 76亂 17祉M、18祉M、156iiM和 16補。
[0055] 实施例4:针对淋己瘤的动物实验
[0化6] 1.实验材料
[0057] (1)细胞株:人淋己瘤细胞(OCI-U^细胞）（美国ATCC，本实验室传代保存），培养于 IMDM培养基(含10 %胎牛血清）。
[0058] (2)实验动物:参见实施例2。
[0化9] 2.实验方法
[0060] (1)细胞培养参见实施例3。
[0061 ] (2)动物实验
[0062] 将含3 X IO6个OCI-U^细胞的IMDM培养基注射到裸鼠右蔽窝皮下，当瘤子长成并 可测量时，随机分至对照组和给药组。给药组裸鼠隔天尾静脉注射4-径基水杨酷苯胺60mg/ kg，对照组裸鼠注射相同体积的溶剂（200化，5 %DMS0+4%藍麻油+91 %生理盐水）。每两天 测量一次瘤子大小（测量瘤子的长和宽，瘤子体积=4V3 X (宽/2 r 2 X (长/2))。给药20天 后处死老鼠并取瘤子拍照。
[0063] 3.实验结果
[0064] 实验结果见图15-图16。
[0065] 结论:4-径基水杨酷苯胺能够有效抑制裸鼠淋己瘤的生长。
[0066] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可W做出若干改进和补充，运些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1.4- 羟基水杨酰苯胺在制备预防或治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用。 2.4- 羟基水杨酰苯胺在制备预防或治疗淋巴瘤的药物中的应用。3. 根据权利要求1、2任一所述的应用，其特征在于，所述的药物包含4-羟基水杨酰苯胺 和药学上可接受的载体。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的药物制备成片剂、颗粒剂、针剂或胶 囊剂。
【专利摘要】本发明涉及4-羟基水杨酰苯胺在制药领域中的新用途，可用于制备防治多发性骨髓瘤和淋巴瘤的药物。其优点表现在：在体外，该化合物能有效抑制多发性骨髓瘤及淋巴瘤细胞生长；在体内，该化合物能有效抑制小鼠多发性骨髓瘤及淋巴瘤肿瘤生长，可发展为多发性骨髓瘤及淋巴瘤的预防及治疗药物。4-羟基水杨酰苯胺是保肝老药，安全性高，预示着其在癌症领域有很好的药用前景。
【IPC分类】A61K31/609, A61P35/00
【公开号】CN105663147
【申请号】CN201610220405
【发明人】施菊妹, 朱维良, 邵吉民, 杨洸, 徐志建, 刘霞, 高露, 李波, 陈新焕
【申请人】施菊妹
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年4月11日