白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种白藜芦醇?磺丁基醚?β?环糊精包合物及其制备方法，所述白藜芦醇?磺丁基醚?β?环糊精包合物中白藜芦醇和磺丁基醚?β?环糊精的摩尔比为1:2。本发明的白藜芦醇?SBE?β?CD包合物属于一种新剂型。通过使用SBE?β?CD这种辅料，提高了白藜芦醇的水溶性及稳定性，拓宽其应用范围。现有技术多采用β?CD或者羟丙基?β?CD，相比之下采用SBE?β?CD作为辅料，包合物各方面性能都得到显著提高，具有更好的水溶性，更高的包合率，并且副作用较小，肾毒性和溶血作用等不良反应可降至最低。本发明的方法可得到较满意的包合率，并解决了白藜芦醇难溶于水，稳定性差的问题，可应用于生产与临床需要。
【专利说明】
白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物及其制备方法
技术领域
[0001 ]本发明属于中药制剂技术领域，具体地说，涉及一种白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊 精包合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，中药活性成分在抗癌作用方面的应用引起了广泛关注，使中药活性成分 抗癌作用的研究成为热点。有关专家认为:预防心、脑血管疾病、癌症、动脉硬化、延缓衰老 等的保健药品将有着广阔的市场。而白藜芦醇正是这种心、脑血管疾病及癌症的天然化学 预防剂。白藜芦醇有多种药理活性，如抗菌、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝聚、保护 肝脏、雌激素作用、防辐射、免疫调节、抗艾滋病活性等，也能修复非典型肺炎方剂所致的细 胞DNA损伤。白藜芦醇能抑制多种酶或细胞因子的活性，抑制白三烯Β 4生成而起抗炎效果， 抑制前列腺素 ΗΖ合成酶、还氧酶I、蛋白激酶、酪氨酸酶、核糖核普酸还原酶、肿瘤坏死因子 等而起抗肿瘤作用。尤为重要的是白藜芦醇对正常的人体细胞毫无损害，具有良好的药理 活性和选择性。
[0003] 白藜芦醇(Resveratrol)是一种非黄酮类的多酚化合物，化学名称为3,4,5_三羟 基-1,2-二苯乙稀（3,4 7，5-trihydrolystilbene)，是非黄酮类的多酸化合物。分子式为 C14H1203 ,分子量为228.25,有顺、反两种结构。白藜芦醇为无色针状结晶，熔点为256~257 °C，升华点为261°C。易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等。是一种植物抗毒素，存在于 自然界70多种植物中，其中多种为常见中药，如虎杖、土茯苓、补骨脂等。
[0004] 但白藜芦醇水溶性很差、不稳定，使其应用范围受到了限制，因此提高其水溶性及 稳定性是拓宽其应用范围的关键。
[0005] 环糊精(Cyclodextrin，简称CD)是淀粉在环糊精葡萄糖基转移酶(CGT酶）的作用 下，生成的6个以上的葡萄糖以α_1，4糖苷键结合的环状低聚糖，分为α、β、γ三种，目前β-⑶ 应用最广泛。目前，在制药领域中广泛应用的是β-CD及其衍生物。未修饰的β-CD在溶解度、 毒性和溶血性等方面不能满足应用要求。在众多的β-CD衍生物中，Μ-β-CD、HP-f3-CD和SBE-β-CD常作为药物辅料，其中后两种是最安全的两种β-CD衍生物。
[0006] 横丁基酿-0-环糊精（8111;1^〇13此7161:1161-0-〇5^1〇(1611：1'；[11简称31^-0-00)是对0-CD进行磺酸化修饰的衍生物，具有肾毒性小、水溶性好、溶血作用小等优点。SBE-β-Ο)在毒 性、包合能力、增溶效果等方面优于ΗΡ-β-CD。因为SBE-β-⑶中引入了极性强大的磺丁基醚 基团，并且伸向外侧，扩大了β-CD的洞穴范围，在和药物包合时，与β-CD的其他衍生物相比， 它结合的更加牢固，因此溶解度也更高。作为一种优良的药物辅料，主要应用于增加药物溶 解度和稳定性、提高药物生物利用度、调节药物释放速度、防止挥发性成分逸散、改善不良 气味、减少刺激性、降低不良反应等方面。
[0007] 白藜芦醇的抗癌机制使其研究前景十分可观，但因为对光、热等不稳定，水溶性 小，生物利用度低的限制，并未体现出强大的市场前景。现以出现β-CD和其他β-CD衍生物对 白藜芦醇进行包和，但包合率并不高，水溶性增加不明显。
【发明内容】
[0008] 有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是白藜芦醇对光、热等不稳定，水溶性小， 生物利用度低，而现有β-CD和其他β-CD衍生物对白藜芦醇进行包和，包合率不高，水溶性增 加不明显，提供一种白藜芦醇-SBE-β-⑶包合物及其制备方法。
[0009] 为了解决上述技术问题，本发明公开了一种白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物 (白藜芦醇-SBE-i3-CD包合物），所述包合物中白藜芦醇和磺丁基醚-β-环糊精(SBE-i3-CD)的 摩尔比为1:2。
[0010] 本发明还公开了一种上述白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，包括 以下步骤:取磺丁基醚-β_环糊精（SBE-i3-CD)，加入适量水溶解，然后边搅拌边加入白藜芦 醇，继续搅拌，使所述SBEKD与所述白藜芦醇完全反应，待反应完成后，将上述溶液过滤， 滤液冷冻干燥得固体白藜芦醇-SBE-β-⑶包合物。
[0011] 进一步的，所述白藜芦醇和磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-⑶)的摩尔比为1:2。
[0012] 进一步的，在50°C边搅拌边加入白藜芦醇，并继续搅拌，使所述SBE-β-⑶与所述白 藜芦醇完全反应，至反应完成。
[0013] 进一步的，所述搅拌时间为5h。
[0014]进一步的，所述过滤采用0.45μηι微孔滤膜过滤。
[0015] 进一步的，所述冷冻干燥的温度为-80°C。
[0016] 与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
[0017] 1)本发明的白藜芦醇-SBE-i3-CD包合物属于一种新剂型。通过使用SBE-i3-CD这种 辅料，提高了白藜芦醇的水溶性及稳定性，拓宽其应用范围。与现有技术相较，之前文献所 报道的白藜芦醇包合物的制备多采用β-⑶或者羟丙基-β-CD，相比之下采用SBE-β-⑶作为 辅料，包合物各方面性能都得到显著提高，具有更好的水溶性，更高的包合率，并且副作用 较小，肾毒性和溶血作用等不良反应可降至最低。
[0018] 2)本发明采用正交试验法优选制备处方，分析了对包合物制备工艺的主要影响因 素和包合率的关系，从而了解因素与包合率的相关性。制备的包合物经工艺鉴别证明已形 成，相对白藜芦醇而言溶解度得到很大提高。
[0019] 3)本发明的方法可得到较满意的包合率，并解决了白藜芦醇难溶于水，稳定性差 的问题，可应用于生产与临床需要。
[0020] 当然，实施本发明的任一产品必不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
【附图说明】
[0021] 此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发 明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
[0022] 图1为本发明实施例中白藜芦醇标准曲线；
[0023]图2为本发明实施例中白藜芦醇、SBE-β-⑶、混合物、包合物紫外扫描图；
[0024] 图3为本发明实施例中白藜芦醇红外谱图；
[0025] 图4为本发明实施例中SBE-β-环糊精红外谱图；
[0026]图5为本发明实施例中白藜芦醇和SBE-β-环糊精的物理混合物红外谱图；
[0027]图6为本发明实施例中白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合物红外谱图；
[0028]图7为本发明实施例中白藜芦醇DSC图；
[0029]图8为本发明实施例中SBE-β-环糊精DSC图；
[0030]图9为本发明实施例中白藜芦醇和SBE-β-环糊精的物理混合物DSC图；
[0031]图10为本发明实施例中白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合物DSC图；
[0032]图11为本发明实施例中白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合物相溶解度图。
【具体实施方式】
[0033]以下将配合附图及实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用 技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
[0034] 实施例
[0035] 一、包合率测定方法
[0036] 1.1色谱条件
[0037] 色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18柱(4·6mmX250mm，5um);流动相：甲醇-水(55: 45);流速：1. OmL/min;柱温：30 °C ;进样量：10yL;检测波长:307nm。
[0038] 1.2标准曲线
[0039]精密称取白藜芦醇对照品10mg，用甲醇定容到10mL棕色容量瓶中，配成浓度为 lmg/mL储备液;分别精密吸取储备液20，30，40，50，60和70yL，用甲醇定容到10mL，摇匀。用 0.45um微孔滤膜过滤。分别吸取10yL注入液相色谱仪。以色谱峰面积A为纵坐标，白藜芦醇 浓度C为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程A = 85086C+8933.6，R2 = 09993，n = 6。可以看 出白藜芦醇浓度在2~7yg/mL范围内线性关系良好。白藜芦醇标准曲线见图1。
[0040] 1.3包合率测定方法
[00411 精密称取包合物适量，用5mL水溶解，摇匀。取50yL包合物溶液，加甲醇定容至 10mL，振荡，配制成样品溶液。在上述1.1液相条件下进样，记录色谱峰面积，代人1.2的回归 方程，计算得到包合物中药物的含量。
[0042] 包合率=测定的包合物中药物的量/实际投入的药物的量X 100%。
[0043] 二、白藜芦醇-磺丁基-β-环糊精包合物制备方法研究
[0044] 2.1白藜芦醇-磺丁基-β-环糊精包合物制备方法筛选
[0045] 2.1.1溶液搅拌法
[0046] 精密称取白藜芦醇和SBE-β-⑶适量，SBEKD加入适量水溶解，在室温条件下搅 拌，将白藜芦醇分次加入SBE-β-Ο)水溶液中，搅拌lh。搅拌完成后，将上述溶液过0.45μπι微 孔滤膜，滤液冷冻干燥得固体包合物。平行3份。
[0047] 2.1.2超声法
[0048] 精密称取适量白藜芦醇和SBE-f3-CD，SBE-f3-CD加入适量水溶解，在SBE-f3-CD水溶 液中加入白藜芦醇后，立即超声lh。超声完成后，将上述溶液过0.45μπι微孔滤膜过滤，滤液 冷冻干燥得固体包合物。平行3份。
[0049] 2.1.3 研磨法
[0050] 精密称取白藜芦醇和SBEKD适量，加适量蒸馏水将SBEKD研匀，在研磨条件 下，缓慢分次加入白藜芦醇，充分研磨lh，将获得的糊状物冷冻干燥。平行3份。
[0051 ] 2.1.4三种制备方法的优选结果
[0052]溶液搅拌法、超声法及研磨法3种方法制备获得包合物的包合率分别为（72.23土 5.99) %，（27.11 ±6.30) %，（63.22±4· 12) % (n = 3)。由三种制备方法所得的包合率可以 看出，研磨法和超声法所制得的包合物包合率过低，因此最终选择溶液搅拌后冷冻干燥制 备白藜芦醇包合物。
[0053] 2.2正交试验设计
[0054] 2.2.1单因素试验
[0055] 采用冷冻干燥法制备包合物，分别考察投料比、包合温度、包合时间对包合率影 响，通过包合率大小，确定最佳包合条件.每次准确称取白藜芦醇5mg，分别以投料比(m 〇L/ 111〇〇(1:1，1:1.5，1:2，1 :3)，包合温度（25,30,37,45,50,60°(：)，包合时间（1，2,3,4,5,2411) 为影响因素进行试验。
[0056] 2.2.2正交试验
[0057] 在单因素试验的基础上，并结合实际需要，确定各因素水平值，以包合率为考察指 标，进行正交试验设计，试验因素水平见表1。
[0058]表1试验因素水平见表
[0060] η为白藜芦醇，m为SBE-β-Ο)。
[00611 2.2.3正交试验及结果
[0062]以包合率为指标，按L9(34)正交试验表进行试验，结果见表2。
[0063] 表2正交试验结果
[0065] 2.2.4最佳工艺验证
[0066] 按照以上所选最优处方，分别取白藜芦醇和SBE-β-⑶按投料比1:2,包合温度50 °C，包合时间5h，进行试验验证，平行6份，测定包合率，结果如表3所示，平均包合率为 93.64%，RSD为3.58%。
[0067] 表3最佳工艺
[0068]
[0069] 2.3包合物的物相鉴定
[0070] 2.3.1紫外光谱法
[0071]分别称取白藜芦醇、SBE-β-环糊精、白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合物、白藜芦醇和 SBE-β-环糊精的物理混合物适量，加甲醇溶解并稀释成适宜质量浓度。以甲醇溶液为空白， 在200~800nm波长分别进行紫外扫描，结果如图2所示。
[0072]由图2可见，在200-800nm之间，SBE-β-环糊精没有吸收，白藜芦醇和混合物有吸 收，且吸收强度基本相同，这说明SBE-β-环糊精对测定无干扰；白藜芦醇-SBE-β-环糊精包 合物吸收减小，这可以证明包合物已经形成。
[0073] 2.3.2红外光谱法
[0074]各取微量白藜芦醇、SBE-β-环糊精、白藜芦醇和SBE-β-环糊精混合物、白藜芦醇_ SBE-β-环糊精包合物样品，加入适量固体KBr，充分研磨均匀并压片，分辨率为2cnf1，扫描次 数64次，4000-500(^+ 1全谱扫描。对白藜芦醇、SBE-β-环糊精、白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合 物、白藜芦醇和SBE-β-环糊精的物理混合物分别进行红外测定，结果如图3-6所示。
[0075] 由图3-6可见，白藜芦醇与SBE-β-环糊精各有自身的红外特征吸收峰。混合物的光 谱图具有加和性，表现为两组分的叠加;包合物则表现不同，包合物有部分峰发生紫移，部 分峰发生红移，部分峰消失。包合物与环糊精的图谱比较，包合物以环糊精的图谱为主，而 白藜芦醇的光谱特征部分消失。这可以说明实验结果和理论预期几乎一致，环糊精空腔孔 径与客体分子相匹配，白藜芦醇分子包埋于SBE-β-环糊精的空腔内，其分子振动受到限制 而不能完全显现其原有的红外特性。白藜芦醇与SBE-β-环糊精之间形成了超分子包合物。
[0076] 2.3.3DSC 扫描法
[0077]以空铝钳锅为参考池，另一空铝钳锅为样品池，分别放白藜芦醇-SBE-β-环糊精包 合物、白藜芦醇和SBE-β-环糊精的物理混合物、SBE-β-环糊精以及白藜芦醇这4种样品各 2mg，进行差热分析，升温速率为10°C/min，升温范围为30-400°C，测定气体为氮气，流速为 10mL/min，对白藜芦醇、SBE-β-环糊精、白藜芦醇-SBE-β-环糊精包合物、白藜芦醇和SBE-β-环糊精的物理混合物分别进行DSC扫描，结果如图7-10所示。
[0078] 由图7-10可见白藜芦醇在270 °C左右有一个峰，SBE-β-环糊精在50 °C和360 °C有2 个吸热峰，混合物在50°C，280°C和360°C有3个吸热峰；由此可见，白藜芦醇和SBE-β-环糊精 混合物的图谱基本上是白藜芦醇和SBE-β-环糊精图谱的叠加，这说明物理混合不起包合作 用。包合物与混合物的曲线有显著差异，包合物的曲线药物的特征吸收峰消失，证明包合物 制备成功。
[0079] 差示扫描量热分析对形成的包合物进行初步鉴定，充分显示了包合物的独特表 征。SBE-β-环糊精对白藜芦醇的包合作用，展示了 SBE-β-环糊精在中药领域的应用前景，有 望解决一些中药活性成分存在难溶性、挥发性、不稳定性及刺激性等问题。
[0080] 2.3.4溶解度测定
[00811称取过量包合物与白藜芦醇置10mL容量瓶中，制成过饱和溶液，于25°C振荡24h。 取上清液离心10min，各精密量取上清液适量于10mL容量瓶，40 %的甲醇定容，超声lOmin， 按"1.Γ项下色谱条件进行测定，记录峰面积，代入回归方程计算出包合物与白藜芦醇的溶 解度，得出包合物在水中的溶解度为22.440mg/L，白藜芦醇的溶解度为0.189mg/L。结果表 明包合物较白藜芦醇的溶解度提高了 118.73倍。
[0082] 2.3.5相溶解度的测定
[0083] 准确称取SBE-β-环糊精3.8mg置于100mL容量瓶中，加入水使其充分溶解，定容至 刻度，制成储备液;依次分别量取储备液〇，5，10，15，20，25mL置于50mL的锥形瓶中，用水定 容到刻度，分别配制成浓度为0、3.80、7.60、10.8、15.2、19.0. mg/mL的SBE-β-环糊精的水溶 液;在此环糊精的水溶液中分别加入20mg (过量）的白藜芦醇，超声1 Omin，分别在25、35、45 °C的恒温振荡水槽中振荡24h;静置lOmin，待平衡后，分别取上清液0. lmL用水定容至10mL， 摇匀，用〇.45μπι滤膜过滤。分别取滤液10yL注入液相色谱仪，记录峰面积，代入标准曲线方 程，求得白藜芦醇的浓度。以白藜芦醇浓度为纵坐标，SBE-β-环糊精浓度为横坐标，绘制相 溶解度图。结果见图11。
[0084]相溶解度图（即药物分子浓度对环糊精浓度的函数图）通常分为A型和B型。环糊精 对药物不是以1:1物质的量比进行包合，相溶解度曲线不呈线性增加，表现为An型。
[0085]由图11可见，在25°C，37°C和50°C时，白藜芦醇的溶解度随着SBE-β-环糊精浓度的 增加先是增加，然后到一定浓度后又开始降低，该结果符合相溶解度图中的An类型，这说明 白藜芦醇在此温度范围内不是按摩尔比1:1的比例形成的包合物。综上讨论可知，其相溶解 度图为An类型。
[0086] 本发明的白藜芦醇-SBE-β-Ο)包合物属于一种新剂型。通过使用SBEKD这种辅 料，提高了白藜芦醇的水溶性及稳定性，拓宽其应用范围。与现有技术相较，之前文献所报 道的白藜芦醇包合物的制备多采用⑶或者羟丙基-β-CD，相比之下采用SBE-β-⑶作为辅 料，包合物各方面性能都得到显著提高，具有更好的水溶性，更高的包合率，并且副作用较 小，肾毒性和溶血作用等不良反应可降至最低。
[0087]本发明采用正交试验法优选制备处方，分析了对包合物制备工艺的主要影响因素 和包合率的关系，从而了解因素与包合率的相关性。制备的包合物经工艺鉴别证明已形成， 相对白藜芦醇而言溶解度得到很大提高。本发明的方法可得到较满意的包合率，并解决了 白藜芦醇难溶于水，稳定性差的问题，可应用于生产与临床需要。
[0088]如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定成分或方法。本领域技术 人员应可理解，不同地区可能会用不同名词来称呼同一个成分。本说明书及权利要求并不 以名称的差异来作为区分成分的方式。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的"包含"为 一开放式用语，故应解释成"包含但不限定于"。"大致"是指在可接收的误差范围内，本领域 技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。说明书后续 描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本发明的一般原则为目的，并非 用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
[0089]还需要说明的是，术语"包括"、"包含"或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的 包含，从而使得包括一系列要素的商品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确 列出的其他要素，或者是还包括为这种商品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情 况下，由语句"包括一个……"限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系统中还 存在另外的相同要素。
[0090]上述说明示出并描述了本发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本发明 并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、 修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识 进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发 明所附权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物，其特征在于，所述包合物中白藜芦醇和 磺丁基醚-β-环糊精的摩尔比为1: 2。2. 如权利要求1所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β_环糊精包合物，其特征在于，取磺丁基 醚-β-环糊精，加水溶解，在50°C边搅拌边加入白藜芦醇，继续搅拌5h，使所述磺丁基醚-β-环糊和所述白藜芦醇完全反应，待反应完成后，将上述溶液用〇.45μπι微孔滤膜过滤，滤液 在-80°C冷冻干燥得固体白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物。3. -种白藜芦醇-磺丁基醚-β_环糊精包合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 取磺丁基醚-β-环糊精，加水溶解，然后边搅拌边加入白藜芦醇，继续搅拌待反应完成后，将 上述溶液过滤，滤液冷冻干燥得固体白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物。4. 如权利要求3所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，其特征在于， 所述白藜芦醇和磺丁基醚-β-环糊精的摩尔比为1:2。5. 如权利要求4所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，其特征在于， 在50Γ边搅拌边加入所述白藜芦醇，并继续搅拌至反应完成。6. 如权利要求5所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，其特征在于， 所述搅拌时间为5h。7. 如权利要求6所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，其特征在于， 所述过滤采用0.45μπι微孔滤膜过滤。8. 如权利要求7所述的白藜芦醇-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备方法，其特征在于， 所述冷冻干燥的温度为_80°C。
【文档编号】A61K9/19GK105903033SQ201610456921
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月21日
【发明人】尚京川, 王靖雯, 李晶, 文瑶
【申请人】重庆医科大学