芹菜素在制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品中的用图
【专利摘要】本发明公开了芹菜素在制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品中的用途。经体内外药理实验证明，芹菜素（化学名称为5,7?二羟基?2?(4?羟基苯基)?4H?1?苯并吡喃?4?酮）对酒精诱导的肝脏/肝细胞损伤具有明显的保护作用，其主要作用机制与抑制肝脏/肝细胞中CYP2E1表达有关，可以作为CYP2E1抑制剂来制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品，具有重要的科研和经济价值。
【专利说明】
芹菜素在制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保 健食品中的用途
技术领域
[0001] 本发明设及生物医药技术领域，设及芹菜素在制备用于预防和/或治疗酒精性肝 损伤的药物或保健食品中的用途。
【背景技术】
[0002] 酒精性肝损伤(alcoholic liver damage)是由长期或大量饮酒导致的肝脏疾病， 初期表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化，严重者可诱发肝癌和肝 功能衰竭，已被西方国家列为因肝脏疾病引发的死亡的主要原因之一。近年来，我国酒精性 肝损伤的发病率呈现出显著增加的趋势。
[0003] 酒精在人体内的主要代谢过程如图1所示，其中绝大部分乙醇首先经乙醇脱氨酶 (ADH)的作用代谢为乙醒，然后在乙醒脱氨酶(ALDH)的催化下代谢为乙酸，乙酸可转化为乙 酷辅酶A，或者进入Ξ簇酸循环并最终分解为二氧化碳和水，或者用于合成脂肪酸。酒精代 谢过程的第一步（即将乙醇代谢为乙醒的步骤)主要通过两种氧化体系来实现，其中一种为 胞质内乙醇氧化体系，摄入体内的乙醇大约有80%经该体系代谢，另一种为内质网内微粒体 乙醇氧化体系（microsomal ethanol oxidizing system，ME0S)，摄入体内的乙醇大约有 20%经该体系代谢。ME0S中参与乙醇代谢的酶主要是细胞色素 P450 2E1 (巧tochrome P450 2E1，CYP2E1)，长期饮酒可对其产生明显的诱导作用。当乙醇浓度较低时，主要被胞质内乙 醇氧化体系催化分解;若乙醇浓度过高，则需同时借助于ME0S进行代谢。长期饮酒所导致的 体内高浓度乙醇会诱导ME0S中关键酶CYP2E1的大量表达，此时乙醇主要由ME0S代谢，进而 产生大量的活性氧自由基，运正是乙醇导致肝损伤的重要机制之一。
[0004] 目前，临床上治疗酒精性肝损伤仍W戒酒和营养支持为主，辅W药物治疗，而且药 物治疗的效果也并不理想。用于治疗酒精性肝损伤的药物W西药为主，不良反应较多，价格 较贵，病人无法坚持长期服用。相比而言，一些天然产物(尤其是从药食两用植物中获得的 活性物质）则表现出较少的不良反应。因此，从天然产物中寻找安全、有效且价格低廉的酒 精性肝损伤防治药物，具有重要的意义。
[0005] 芹菜素(apigenin)是一种常见的天然黄酬类化合物单体，广泛存在于各种蔬菜、 水果和一些中草药中，许多科研文献记载其具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化和屯、血管保护等作 用，但是在其对CYP2E1的抑制作用W及用于防治酒精性肝损伤等方面则未见报道。
【发明内容】
[0006] 针对上述情况，本发明公开了芹菜素(化学名称为5,7-二径基-2-(4-?基苯基)- 4H-1-苯并化喃-4-酬，结构式如下所示)的一种新用途，即利用作为CYP2E1抑制剂的芹菜素 来制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品。
[0007]药理实验证明，芹菜素对酒精诱导的肝脏/肝细胞损伤具有明显的保护作用，其主 要作用机制与抑制肝脏/肝细胞中CYP2E1表达有关，可W作为CYP2E1抑制剂来制备用于预 防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品。
[000引本发明中的芹菜素既可W单独给药，又可W与一种或多种药学上可接受的载体联 合给药;优选的，药学上可接受的载体包括(但不限于)稀释剂、填充剂、着色剂、矫味剂、润 滑剂、色素等。
[0009] 本发明中的芹菜素既可W作为药物中唯一的活性物质，又可W与一种或多种用于 预防和/或治疗肝损伤的活性化合物联合制剂;优选的，活性化合物包括(但不限于)水飞劑 素、肌巧、还原型谷脫甘肤、维生素 E、葡萄糖、Ξ憐酸腺巧、辅酶A、葡醒内醋等。
[0010] 本发明中的药物可W按照药学领域中熟知的方法制成相应的剂型如片剂、胶囊 剂、颗粒剂、丸剂、散剂、溶液剂、注射剂、栓剂、搔剂等，适用于口服、直肠、局部、日腔、舌下、 皮下、肌肉、静脉等多种给药途径。另外，本发明中的药物的用量可W根据患者的生理特征、 疾病的严重程度W及具体的剂型等因素而做出调整和修改。
[0011] 本发明中的芹菜素既可W单独制成保健食品，又可W与选自食品主料、食品辅料 和食品添加剂中的一种或多种可食用组分联合制剂;优选的，食品主料包括(但不限于)米、 面、油、肉、糖、蛋、奶、水果、茶等，食品辅料包括(但不限于)淀粉、糖醇、酵母粉、膳食纤维、 馆料、调味料等，食品添加剂包括(但不限于)酸度调节剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松 剂、着色剂、乳化剂、增味剂、水分保持剂、防腐剂、增稠剂、香精等。
[0012] 本发明中的保健食品可W按照保健食品领域中熟知的方法制成相应的食品形态 剂型或药物形态剂型;优选的，食品形态剂型包括(但不限于)饼干、方便面、糖果、果脯、茶 饮等，药物形态剂型包括(但不限于）口服液、胶囊剂、膏剂、露剂、散剂、片剂、颗粒剂等。
[0013] 由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点： (1) 首次将天然产物芹菜素应用于防治酒精性肝损伤中，为该病的防治提供了新的药 物来源； (2) 首次发现芹菜素可抑制酒精诱导肝脏/肝细胞中的CYP2E1表达，运不同于现有药物 防治酒精性肝损伤的作用机制。
【附图说明】
[0014] 图1为乙醇在人体内的主要代谢过程示意图。
[0015]图2为给药30天后芹菜素对酒精性肝损伤小鼠肝脏中〔￥口261、104、^-1〇化65和 TNF-a含量的影响示意图，其中与正常对照组相比，##表示户<0.01;与肝损模型组相比，* 表示P<0.05，* * 表示P<0.01。
[0016]图3为芹菜素对酒精诱导培养肝细胞中CYP2E1蛋白表达和上清液中MDA含量的影 响示意图，其中与正常对照组相比，##表示户<0.01;与乙醇损伤组相比，* *表示户<0.01。
【具体实施方式】
[0017] 下面将结合附图及具体的实施例对本发明做出进一步的描述。除非另有说明，下 列实施例中使用的试剂、药品、仪器均可通过商业手段获得。
[0018] 实施例一:芹菜素在酒精性肝损伤防治方面的应用。
[0019] 1.受试药物： 芹菜素，黄褐色粉末，纯度>98%，由苏州宝泽堂医药科技有限公司提供。临用时，采用 0.5%簇甲基纤维素钢溶液分别配制成浓度为0.75%和1.5%的溶液。
[0020] 2.对比试验制剂： 古拉定(注射用还原型谷脫甘肤钢），白色冻干块状物，由意大利Pharminvest SPA生 产，国内分包装企业名称：昆明积大制药股份有限公司，产品批号：2329,进口药品注册证 号：肥0090005。
[00別]3.实验材料： 3.1动物： 昆明种小鼠，雄性，体重20~22克，清洁级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司供应， 实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2012-0002,实验动物使用许可证:SYXK(苏)2012-0045。
[0022] 3.2 细胞株： B化大鼠肝细胞株，由中科院上海生科院生化细胞所提供。
[0023] 4.试验方法与结果： 4.1芹菜素对小鼠酒精性肝损伤的保护作用： 昆明种雄性小鼠50只，适应性喂养2天后，随机分为5组(每组10只），即正常对照组、肝 损模型组、芹菜素150 mg/kg组、芹菜素300 mg/kg组和古拉定240 mg/kg组。
[0024] 每天上午9:00~10:00，给药组小鼠分别按上述剂量灌胃给药，正常对照组和肝损 模型组给予相同体积的0.5%簇甲基纤维素钢溶液;每天下午2:00~3:00，肝损模型组和给药 组小鼠给予56°红星二锅头白酒，按0.1 ml/10 g体重的剂量灌胃，并且在一周之内将灌胃 剂量逐渐加大到0.15 ml/10 g体重，肝损模型组小鼠只给酒不给药，给药组小鼠连续30天 同时给药给酒。
[0025] 实验结束后，处死小鼠，取一部分肝脏用生理盐水制成10%肝匀浆，用于测定肝组 织中的肿瘤坏死因子-日（TNF-a)和丙二醒(MDA)的含量，另取一部分肝脏用10%福尔马林溶 液固定，用于肝脏的病理学检查，将剩下的肝脏放置在-80°C冰箱中，用于检测肝组织中的 CYP2E1和核因子-K化65(NF-K化65)蛋白的表达。
[0026] 表1中给出了给药30天后芹菜素对酒精性肝损伤小鼠肝脏中脂肪变性程度的影响 结果。从中可知，经30天灌服56°红星二锅头白酒后，肝损模型组小鼠的肝脏具有不同程度 的脂肪变性，与正常对照组相比，差异较为明显(代〇.05)。若预先给予芹菜素，则肝脏中脂 肪变性的程度可W得到缓解，尤其是300 mg/kg剂量的芹菜素的作用更为显著(代0.05)，提 示芹菜素对小鼠酒精性肝损伤具有明显的保护作用。
[0027] 图2中给出了给药30天后芹菜素对酒精性肝损伤小鼠肝脏中CYP2E1、MDA、NF-K 化65和TNF-a含量的影响。从中可知，经30天灌服56°红星二锅头白酒后，肝损模型组小鼠的 肝组织中MDA(图2B)和TNF-a(图2D)的含量W及CYP2E1 (图2A)和NF-K化65(图2C)的蛋白表 达均有所增加，与正常对照组相比，差异显著(代〇.01);若预先给予芹菜素，则运些指标升 高的程度可明显减小，尤其是300 mg/kg剂量的芹菜素的作用更为显著(代0.01)，运些指标 几乎接近于正常水平，提示芹菜素对小鼠酒精性肝损伤的保护作用与抑制肝脏中的CYP2E1 有关，芹菜素可能是CYP2E1的抑制剂。CYP2E1被抑制后，酒精经ME0S代谢而产生的活性氧自 由基相应减少，一方面可W使由活性氧激活的NF-K化65表达受到抑制并减少TNF-a的生成， 另一方面也可W使由活性氧产生的脂质过氧化程度得到减轻，降低肝组织中的MDA水平。运 些实验结果证实了芹菜素可W通过抑制CYP2E1来减轻由酒精引起的肝脏氧化应激损伤。
[0028] 4.2芹菜素降低酒精诱导培养肝细胞中CYP2E1的表达和培养上清液中MDA的水 平： 为了直观地考察芹菜素对肝细胞中CYP2E1的影响，在体外采用B化大鼠肝细胞进行试 验。实验分为5组，即正常对照组、乙醇损伤组W及3个浓度(6、12和24 μΜ)的芹菜素+乙醇处 理组，每组设3个复孔。
[0029] 实验开始时，先将不同浓度的芹菜素加入到培养的肝细胞中作用2小时，然后再加 入100 mM的乙醇作用8小时。实验结束时，收集细胞和培养上清液，分别用于测定CYP2E1蛋 白表达和MDA含量。
[0030] 图3中给出了芹菜素对酒精诱导培养肝细胞中CYP2E1蛋白表达和上清液中MDA含 量的影响。如图3A所示，乙醇作用于肝细胞8小时后，与正常对照组相比，乙醇损伤组的 CYP2E1蛋白表达显著增加(户<0.01)，而在预先给予不同浓度的芹菜素2小时后，再用乙醇 作用于肝细胞8小时，给药组的CYP2E1蛋白表达逐渐降低，尤其是芹菜素24 liM组的作用最 为明显(户<0.01)，证明芹菜素确实可W抑制肝细胞中CYP2E1的表达，运与动物实验的结果 一致。另外，如图3B所示，乙醇作用于肝细胞8小时后，与正常对照组相比，乙醇损伤组的培 养上清液中的MDA含量显著增加(户<0.01)，而在预先给予不同浓度的芹菜素2小时后，再用 乙醇作用于肝细胞8小时，给药组的培养上清液中的MDA含量逐渐降低，尤其是芹菜素12和 24 liM组的作用较为明显(户<0.01)，提示芹菜素对乙醇引起的肝细胞氧化应激损伤具有保 护作用。
[003。 5.结论： 经过体内外实验证实，芹菜素对酒精诱导的肝脏/肝细胞损伤具有明显的保护作用，其 主要作用机制与抑制肝脏/肝细胞中CYP2E1表达有关，可W作为CYP2E1抑制剂来制备用于 预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品。
【主权项】
1. 芹菜素在制备用于预防和/或治疗酒精性肝损伤的药物或保健食品中的用途，其中 所述芹菜素的化学名称为5,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4Η-1-苯并吡喃-4-酮。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 除了所述芹菜素以外，所述药物还包含一种或多种药学上可接受的载体； 所述药学上可接受的载体包括稀释剂、填充剂、着色剂、矫味剂、润滑剂和色素。3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 除了所述芹菜素以外，所述药物还包含一种或多种用于预防和/或治疗肝损伤的活性 化合物； 所述活性化合物包括水飞蓟素、肌苷、还原型谷胱甘肽、维生素 E、葡萄糖、三磷酸腺苷、 辅酶A和葡醛内酯。4. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、溶液剂、注射剂、栓剂和搽剂。5. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 所述药物的给药途径包括口服、直肠给药、局部给药、口腔给药、舌下给药、皮下注射、 肌肉注射和静脉注射。6. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 除了所述芹菜素以外，所述保健食品还包含选自食品主料、食品辅料和食品添加剂中 的一种或多种可食用组分； 所述食品主料包括米、面、油、肉、糖、蛋、奶、水果和茶； 所述食品辅料包括淀粉、糖醇、酵母粉、膳食纤维、馅料和调味料； 所述食品添加剂包括酸度调节剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、着色剂、乳化剂、 增味剂、水分保持剂、防腐剂、增稠剂和香精。7. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于： 所述保健食品的剂型包括食品形态剂型和药物形态剂型； 所述食品形态剂型包括饼干、方便面、糖果、果脯和茶饮； 所述药物形态剂型包括口服液、胶囊剂、膏剂、露剂、散剂、片剂和颗粒剂。
【文档编号】A23L33/105GK105919992SQ201610284466
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月3日
【发明人】谢梅林, 王峰, 薛洁, 朱增燕
【申请人】苏州大学