一种内层释放no气体的多结构人工血管支架及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架及其制备方法，该人工血管支架包括内层、中层和外层，所述外层套设在所述中层的外部，所述中层套设在所述内层的外部，所述内层由静电纺丝纤维制成，所述静电纺丝纤维由水溶胶和释放NO的物质共混而成。该方法将释放NO气体的物质均匀分散的包裹在水溶胶的静电纺丝溶液中，然后通过微溶胶静电纺丝的技术构建纳米纤维小口径血管支架，从而制备出内层含有释放NO物质的微溶胶静电纺丝纤维膜，进而得到内层释放NO气体的多结构人工血管支架，该方法制备简单、操作方便，药物装载效率高，能够实现NO气体的缓慢释放。通过释放NO气体，到达抗血栓性和抑制内膜增生的作用。
【专利说明】
一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及医疗领域，尤其涉及一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架及其制备方法。【背景技术】
[0002]血管类疾病严重危害人类身体健康，全球每年都有数以万计的人由于血管老化、 损伤、病变等多方面原因患有血管类疾病。血管缺损修复，特别是小口径血管(内径<6毫米)的修复一直是临床的难点之一。
[0003]栓塞是小口径血管移植术后失败的主要原因。引起栓塞的原因是多方面的，而植入体内后人工血管和宿主血管的顺应性不匹配是导致小口径人工血管血栓形成和内膜增生的主要诱因之一。
[0004]目前通过人工血管支架能够有效解决这一问题。
[0005]N0是目前所知的最强的血管舒张因子和收缩因子，它能作为介质、信使、递质或细胞功能调节因子参与集体许多生理或病理过程
[0006]在生理情况下血管内皮细胞可产生内皮衍化舒张因子和内皮衍化收缩因子，调节血管舒缩，血管内皮细胞产生的N0，通过细胞膜迅速传递至血管平滑肌细胞，使平滑肌松弛，动脉血管扩张，从而调节血压和血流分布。这种舒血管作用可被N0S抑制剂L-单甲基精氨酸(L-NMMA)阻断。内源性N0调节血管内皮生长，触发血管活性物质，促进血管生长与再生。血管内皮细胞产生的N0在生理、病理情况下均有保持血管内皮细胞完整性的作用。实验证明，N0作为一种强有力的脑血管扩张剂，参与脑血管基本张力的调节，脑血管内皮细胞所释放的N0可提高血管平滑肌细胞中的鸟苷酸环化酶的活性，导致环一磷酸鸟苷水平升高， 从而使血管松弛;相反，如给实验动物应用N0S抑制剂，则发现环一磷酸鸟苷含量下降，脑动脉收缩。N0还通过抑制血小板和白细胞聚集以保护脑的血管内皮。基础含量的N0亦能阻止脑动脉对去甲肾上腺素和5-羟色胺等物质所致的收缩效应。基于以上原理，在缺血性脑损害发生的早期，N0对脑缺血的边缘带、脑侧支循环的开放和脑微循环血流灌注及恢复有肯定的促进作用。
[0007]人工血管内中外，分别有不同的功能，其中内层要初期促进内皮化，进一步缓慢释放N0气体，到达抗血栓性和抑制内膜增生的作用。
[0008]现有制备释放N0气体的人工血管的方法有很多，但都或多或少存在一些问题，下面列举一些现有的技术:
[0009]—.水溶性药物是一类常规药物，由于其亲水性好，可以再水中快速溶解，从而在体内被迅速吸收。但也正因为其高溶解度，在人体内快速溶解、扩散的过程中会被人体迅速吸收、代谢的特点，导致很难达到长效稳定的释放，达到理想的治疗效果。为了提高水溶性药物在临床运用中的效果，研究人员已经制备了很多药物的载体，例如:脂质体，微胶囊，纳米微球以及水凝胶等，利用这些载体携载水溶性药物，能够治疗各种病变损伤器官或组织。 然而，利用这些载体的给药方式由于各种因素存在很多问题，例如，药物的快速释放、非三维支架、难以控制创伤部位的给药量等问题，因此设计出一个新的给药技术和药物释放体系仍然非常重要，希望通过此技术，能够实现水溶性药物在组织或器官损伤部位维持稳定可控的药物释放。
[0010]二.静电纺丝作为一种新型、高效低耗的聚合物纳米纤维制备方法，因工艺参数可调，制作过程可控，原料利用率高，操作过程简单方便，重现性好以及可批量生产等优势被广泛应用。其中，生物医学方向越来越受研究人员的重视，而静电纺丝在载药方面的应用更是深受青睐。现如今，已经开发了很多种静电纺丝技术，来制备装载药物的聚合物纳米纤维膜，其中包括混纺、乳液静电纺丝、同轴静电纺丝、表面修饰静电纺丝等。而针对水溶性药物，主要采用的是乳液电纺、同轴电纺等来制备包裹水溶性药物的聚合物微米纤维膜。同轴电纺能够制备出具有芯壳结构的电纺纤维，该结构的纤维能够很明显的降低水溶性药物的初期突释情况，且能够保持稳定的释放速率。但是，同轴电纺也存在着缺陷，喷丝设备要求复杂，纺丝过程不稳定性也降低了这一技术的可操作性。乳液电纺作为制备携载水溶性药物电纺纤维膜的技术，其工艺更为简单，该技术首先通过乳化法制备载药的乳液体系，然后加入聚合物形成静电纺丝溶液并纺丝。这一技术所需要的纺丝设备简单，静电纺过程也比同轴电纺要稳定，但是也存在着无法避免的缺陷:药物装载效率低。因此，开发一项设备简单，制作过程方便，药物装载效率高的静电纺丝技术来制备包裹水溶性药物的纤维膜一直面临着挑战。
[0011]三.水溶胶是以水为分散介质、透明或半透明、介于乳液和溶液之间的中间状态交替分散液，其中分散的粒子可以是单个大分子，也可以是许多分子的聚集体。有较高的分散稳定性。目前，水溶胶作为药物载体有很多应用，然而，我们发现，由于水溶胶体系内水分子的自由进出作用，单纯的水溶胶体系中的药物可以很快就溶解到水溶液中。不过，水溶胶体系可以有效抵制有机溶剂的进入，从而将水溶胶作为一个隔离体系，保护内部药物的活性等。因此，基于水溶胶的优点，有望通过静电纺丝纤维包裹水溶胶可以有望实现静电纺纤维携载水溶性药物。
[0012]四.透明质酸(HA)是一种酸性粘多糖，1934年美国哥伦比亚大学眼科教授Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。HA大量存在于细胞外基质(ECM)中，目前被广泛运用在载药应用中。将HA溶解在水中以后，由于HA分子链段互相交错缠绕，形成类似于三维网状结构，可以将药物包裹束缚在里面，从而达到载药给药的效果。
[0013]有鉴于上述的缺陷，本设计人，积极加以研究创新，以期创设一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，使其更具有产业上的利用价值。
【发明内容】
[0014]为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架及其制备方法，该方法制备简单、操作方便，药物装载效率高，能够实现N0气体的缓慢释放。
[0015]本发明提出的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架，包括内层、中层和外层，所述外层套设在所述中层的外部，所述中层套设在所述内层的外部，其特征在于:所述内层由静电纺丝纤维制成，所述静电纺丝纤维由水溶胶和释放NO的药物共混而成。
[0016]进一步的，所述释放N0的药物选自氮醇、亚硝基硫醇、硝普盐、有机或无机亚硝酸盐和硝酸盐、亚硝胺、氮芥、联氨中的一种或几种。
[0017]本发明提出的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其特征在于:包括以下步骤:
[0018]步骤(1)制备水溶胶静电纺丝溶液；
[0019]步骤(1.1)将水溶性高分子聚合物加到水中，搅拌使其全部溶解，制得水溶胶；
[0020]步骤(1.2)在水溶胶中加入释放N0的药物，并完全溶解，得到携载释放N0药物的水溶胶；
[0021]步骤(1.3)向有机溶剂中加入乳化剂，再将步骤(2)制备的携载释聚放N0药物的水溶胶缓慢滴加到其中，高速搅拌，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系；
[0022]步骤(1.4)向所述乳液体系中加入可降解材料，搅拌溶解完全后，再加入有机溶剂，持续搅拌，制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液；[〇〇23]步骤(2)制备微溶胶静电纺丝纤维膜；
[0024]步骤(2.1)用连接了针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电性连接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，设定好电压和微量注射栗的推进速度，调整好注射器针头与接收器之间的距离，进行纺丝，制备出微溶胶静电纺丝纤维膜，该微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层含有释放N0气体物质的多结构人工血管支架。
[0025]进一步的，步骤(1.1)中所述水溶性高分子聚合物与水的质量比为1:99,所述水溶胶的浓度为lwt%，所述水溶性高分子聚合物选自透明质酸、胶原、壳聚糖、纤维素、明胶、纤维蛋白原、丝素蛋白等天然高分子聚合物中的一种或几种。[〇〇26]进一步的，步骤(1.2)中，水溶胶与在加入水溶胶中的释放N0的药物的质量比为 100:5?100:15，所述释放N0的药物选自氮醇、亚硝基硫醇、硝普盐、有机或无机亚硝酸盐和硝酸盐、亚硝胺、氮芥、联氨中的一种或几种。[〇〇27]进一步的，步骤(1.3)中，所述有机溶剂与所述乳化剂的质量比为400:1，所述高速搅拌时间为10-20分钟，所述乳化剂选自司盘80、氢氧化钙、氢氧化锌、硬脂酸镁中的一种或几种。
[0028]进一步的，步骤(1.4)中，所述可降解材料与所述有机溶剂的质量比为1:2,所述可降解材料选自聚羟基乙酸、聚乳酸、聚L-乳酸、聚羟基烷酸酯和聚-4-羟基丁酸中的一种或几种。
[0029]进一步的，步骤(1.3)和步骤(1.4)中，所述的有机溶剂选自氯苯、二氯苯、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、三乙醇胺中的一种或几种。
[0030]进一步的，步骤(2.1)中，所述电压设定为10-15kv，所述微量注射栗推进的速度设定为0.6-1.0mL/min，所述注射器针头与接收器之间的距离为10-20cm。[〇〇31]进一步的，步骤(2.1)中所述电压设定为12kV，所述微量注射栗推进的速度设定为 0.8mL/min，所述注射器针头与接收器之间的距离为15cm。
[0032]借由上述方案，本发明至少具有以下优点:该人工血管支架的中层和外层与现有的人工血管支架一样，但是内层是通过微溶胶静电纺丝的技术，将释放NO气体的物质，通过在水溶胶溶解，再复合到静电纺丝体系中，构建出装载释放NO气体的水溶性物质到纤维内， 实现NO气体的缓慢释放，释放时间可达20天-30天。可通过微透析结合分光光度法进行检测。
[0033]本发明方法利用油包水乳液体系是将连续相为油相，分散相为水相的特性，将能够释放N0气体的物质均匀分散的包裹在水溶胶的静电纺丝溶液中，然后通过微溶胶静电纺丝的技术构建纳米纤维小口径血管支架，从而制备出内层含有释放N0物质的微溶胶静电纺丝纤维膜，进而得到内层释放N0气体的多结构人工血管支架，该方法制备简单、操作方便， 药物装载效率高，能够实现N0气体的缓慢释放。[〇〇34]上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段， 并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。【附图说明】
[0035]图1为本发明水溶胶静电纺丝溶液的电镜图；[〇〇36]图2为本发明内层含有释放N0物质的微溶胶静电纺丝纤维膜的电镜图；[〇〇37]图3为本发明内层含有释放N0物质的微溶胶静电纺丝纤维膜单个纤维的电镜图； [〇〇38]图4为本发明内层释放N0气体的多结构人工血管支架制备流程示意图；
[0039]图5为本发明内层释放N0气体的多结构人工血管支架的结构示意图。【具体实施方式】
[0040]下面结合附图和实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0041]实施例一:[〇〇42]首先，将0.lg透明质酸(HA)加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出 lwt %浓度的水溶胶。取0.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.005g的氮醇，并使其完全溶解。 [〇〇43]接着，先在4g二氯甲烷(DCM)中加入0.0lg的司盘80(Span-80)，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟， 从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇44]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚L-乳酸，搅拌溶解完全后再加入2g的二甲基甲酰胺(DMF)，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0045]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0046]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0047]实施例二:所述乳化剂选自司盘80、氢氧化钙、氢氧化锌、硬脂酸镁中的一种或几种。氯苯、二氯苯、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、三乙醇胺中的一种或几种。
[0048]首先，将0.lg丝素蛋白加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt%浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.010g的氮醇，并使其完全溶解。
[0049]接着，先在4g氯苯中加入0.0lg的氢氧化钙，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。
[0050]然后在此乳液体系中加入1.0g的聚羟基乙酸，搅拌溶解完全后再加入2g的二氯甲烷，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0051]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0052]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。[〇〇53] 实施例三:[〇〇54]首先，将0.lg胶原加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt %浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.015g的氮醇，并使其完全溶解。[〇〇55]接着，先在4g二氯苯中加入0.0lg的氢氧化锌，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇56]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚乳酸，搅拌溶解完全后再加入2g的三乙醇胺， 持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。[〇〇57]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0058]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0059] 实施例四:
[0060]首先，将0.lg纤维素加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt%浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.005g的亚硝基硫醇，并使其完全溶解。
[0061]接着，先在4g二甲基甲酰胺中加入0.0lg的硬脂酸镁，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇62]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚羟基烷酸酯，搅拌溶解完全后再加入2g的氯苯，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0063] 静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0064]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0065]实施例五:[〇〇66]首先，将0.lg明胶加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt %浓度的水溶胶。取0.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.010g的亚硝基硫醇，并使其完全溶解。
[0067]接着，先在4g三乙醇胺中加入0.01 g的Span-80，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇68]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚-4-羟基丁酸，搅拌溶解完全后再加入2g的氯苯，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0069]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0070]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。[〇〇71]实施例六:[〇〇72]首先，将0.lg壳聚糖加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt%浓度的水溶胶。取〇.1 g的lwt %水溶胶，在其中加入0.015g的亚硝基硫醇，并使其完全溶解。 [0〇73]接着，先在4g氯苯中加入0.0 lg的Span-80，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇74]然后在此乳液体系中加入1.0g的聚L-乳酸，搅拌溶解完全后再加入2g的DMF，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0075]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0076]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。[〇〇77] 实施例七:[〇〇78]首先，将0.lg明胶加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt %浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.015g的硝普盐，并使其完全溶解。[〇〇79]接着，先在4g二氯苯中加入0.0lg的Span-80,再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。
[0080]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚羟基乙酸，搅拌溶解完全后再加入2g的DMF，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0081]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0082]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0083]实施例八:[〇〇84]首先，将0.lg胶原加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt %浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt%水溶胶，在其中加入0.015g的有机或无机亚硝酸盐，并使其完全溶解。[〇〇85]接着，先在4gDCM中加入0.0lg的Span-80,再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇86]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚乳酸，搅拌溶解完全后再加入2g的DMF，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0087]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0088]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0089]实施例九:
[0090]首先，将0.lg明胶加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt %浓度的水溶胶。取〇.lg的lwt %水溶胶，在其中加入0.015g的亚硝胺，并使其完全溶解。
[0091]接着，先在4g二甲基甲酰胺中加入0.0lg的Span-80,再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇92]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚羟基烷酸酯，搅拌溶解完全后再加入2g的DMF， 持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0093]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0094]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放NO气体的多结构人工血管支架。
[0095] 实施例十:[0〇96]首先，将0.lg纤维蛋白原加到9.9g的蒸馏水中，搅拌使其全部溶解，制备出lwt% 浓度的水溶胶。取〇.1 g的lwt %水溶胶，在其中加入0.015g的氮芥，并使其完全溶解。[〇〇97]接着，先在4g三乙醇胺中加入0.01 g的Span-80，再将制备好的携载释放N0物质的水溶胶缓慢的滴加到其中，并在室温下用磁力搅拌器上高速搅拌约20分钟，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/0)乳液体系。[〇〇98]然后在此乳液体系中加入l.0g的聚-4-羟基丁酸，搅拌溶解完全后再加入2g的 DMF，持续搅拌，最后制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液。
[0099]静电纺丝的过程在室温下进行，实验设备包括:高压直流电源、精确微量注射栗， 电动搅拌机。
[0100]用连接了内径为9mm针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗上，针头处接上高压电源装置，另外一端电压接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，开始纺丝，其中使用的电压为12kV，微量注射栗推进的速度为0.8mL/min，注射器针头与接收器之间的距离为15cm。制备出的微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层释放N0气体的多结构人工血管支架。
[0101]本发明方法利用油包水乳液体系是将连续相为油相，分散相为水相的特性，将能够释放N0气体的物质均匀分散的包裹在水溶胶的静电纺丝溶液中，然后通过微溶胶静电纺丝的技术构建纳米纤维小口径血管支架，从而制备出内层含有释放N0物质的微溶胶静电纺丝纤维膜，进而得到内层释放N0气体的多结构人工血管支架，该方法制备简单、操作方便， 药物装载效率高，能够实现N0气体的缓慢释放。
[0102]以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架，包括内层、中层和外层，所述外层套设 在所述中层的外部，所述中层套设在所述内层的外部，其特征在于:所述内层由静电纺丝纤 维制成，所述静电纺丝纤维由水溶胶和释放NO的药物共混而成。2.根据权利要求1所述的一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架，其特征在于:所 述释放NO的药物选自氮醇、亚硝基硫醇、硝普盐、有机或无机亚硝酸盐和硝酸盐、亚硝胺、氮 芥、联氨中的一种或几种。3.—种内层释放NO气体的多结构人工血管支架的制备方法，其特征在于:包括以下步 骤:步骤(1)制备水溶胶静电纺丝溶液；步骤(1.1)将水溶性高分子聚合物加到水中，搅拌使其全部溶解，制得水溶胶；步骤(1.2)在水溶胶中加入释放NO的药物，并完全溶解，得到携载释放NO药物的水溶 胶；步骤(1.3)向有机溶剂中加入乳化剂，再将步骤(2)制备的携载释聚放NO药物的水溶胶 缓慢滴加到其中，高速搅拌，从而制备出相对均一的并包含载药的水溶胶颗粒的油包水(W/ 〇)乳液体系；步骤(1.4)向所述乳液体系中加入可降解材料，搅拌溶解完全后，再加入有机溶剂，持 续搅拌，制备出均一稳定的水溶胶静电纺丝溶液；步骤(2)制备微溶胶静电纺丝纤维膜；步骤(2.1)用连接了针头的注射器吸入制备好的静电纺丝溶液，然后放到微量注射栗 上，针头处接上高压电源装置，另外一端电性连接在包裹了铝箱纸的滚筒接收器上，设定好 电压和微量注射栗的推进速度，调整好注射器针头与接收器之间的距离，进行纺丝，制备出 微溶胶静电纺丝纤维膜，该微溶胶静电纺丝纤维膜即为内层含有释放N0气体物质的多结构 人工血管支架。4.根据权利要求3所述的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(1.1)中所述水溶性高分子聚合物与水的质量比为1:99,所述水溶胶的浓度 为lwt%，所述水溶性高分子聚合物选自透明质酸、胶原、壳聚糖、纤维素、明胶、纤维蛋白 原、丝素蛋白等天然高分子聚合物中的一种或几种。5.根据权利要求4所述的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(1.2)中，水溶胶与在加入水溶胶中的释放N0的药物的质量比为100:5? 100:15，所述释放N0的药物选自氮醇、亚硝基硫醇、硝普盐、有机或无机亚硝酸盐和硝酸盐、 亚硝胺、氮芥、联氨中的一种或几种。6.根据权利要求5所述的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(1.3)中，所述有机溶剂与所述乳化剂的质量比为400:1，所述高速搅拌时间 为10-20分钟，所述乳化剂选自司盘80、氢氧化钙、氢氧化锌、硬脂酸镁中的一种或几种。7.根据权利要求6所述的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(1.4)中，所述可降解材料与所述有机溶剂的质量比为1:2，所述可降解材料 选自聚羟基乙酸、聚乳酸、聚L-乳酸、聚羟基烷酸酯和聚-4-羟基丁酸中的一种或几种。8.根据权利要求7所述的一种内层释放N0气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(1.3)和步骤(1.4)中，所述的有机溶剂选自氯苯、二氯苯、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、三乙醇胺中的一种或几种。9.根据权利要求8所述的一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(2.1)中，所述电压设定为10-15kV，所述微量注射栗推进的速度设定为0.6-1.0mL/min，所述注射器针头与接收器之间的距离为10-20cm。10.根据权利要求9所述的一种内层释放NO气体的多结构人工血管支架的制备方法，其 特征在于:步骤(2.1)中，所述电压设定为12kV，所述微量注射栗推进的速度设定为0.8mL/ min，所述注射器针头与接收器之间的距离为15cm。
【文档编号】A61L27/50GK105963778SQ201610397559
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年6月7日
【发明人】倪庆, 吴巍, 赵昕, 崔文国, 戴勇, 万丽萍
【申请人】扬州市第人民医院, 扬州市第一人民医院