滇桂艾纳香提取物及用图
【专利摘要】本发明公开了一种滇桂艾纳香提取物，通过药理实验证明其具有强烈的促进排卵作用，且没有明显毒性，可开发为促进排卵作用的药物。
【专利说明】
演桂艾纳香提取物及用途
技术领域
[0001] 本发明设及一种中药提取物，属于中药的医疗技术领域。
【背景技术】
[0002] 滨桂艾纳香是广西地区独有的天然名贵草药滨桂艾纳香(Blumea riparia(Bl.) DC.，菊科植物假东风草的干燥全草。临床研究表明，滨桂艾纳香用于流产后子宫出血不净 (血疲证)疗效确切，服用安全方便。其具有补血活血、桂疲生新、敛血止血之功效，能促进子 宫平滑肌收缩，使血管闭合，加快子宫内膜脱落，具有很好的止血作用。
【申请人】通过研究发 现其提取物具有强烈的促进排卵作用，且没有明显毒性，可开发为促进排卵作用的药物。
【发明内容】
[0003] 本发明公开了一种滨桂艾纳香提取物，并公开了其促进排卵作用。
[0004] 本发明通过如下技术方案实现：
[0005] 取滨桂艾纳香，加入10倍量(V: W)50%乙醇，超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得 过；
[0006] 将过滤后的药渣加入10倍量的5%乙酸溶液超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得 b;
[0007] 将a加入5倍量(V:W)乙酸乙醋溶解，将b加入10倍量(V:W)1 %氨氧化钢溶液溶解， 将a、b溶液混合后，100°C加热30min，过滤，干燥即得。
[000引其药理活性实验如下：
[0009] 1仪器与材料
[0010] 1.1 仪器
[0011] FMA-87型全自动放免丫计数器(上海技术监督局实验工厂）；SaパoriusBS110S电 子天平(德国赛多利斯公司）；HP8453紫外可见分光光度计（美国安捷伦公司）；門-200高速 分散均质机(上海标本模型厂生产）。
[0012] 1.2 试药
[0013] 本发明滨桂艾纳提取物;滨桂艾纳香水提物(取干燥的滨桂艾纳香，加10-12倍量 水，煮2次，第1次1.5-2小时，第2次0.5-1小时，合并2次水提液，纱布过滤，滤液真空浓缩至 比重为1.05-1.1(50°〇，干燥，即得）；己締雌酪(合肥久联制药有限公司，规格:0.5111邑.片- 1;批号：20110102); -抗:ERa (MC-20)兔抗大鼠多克隆抗体(SANTA C抓Z BIOTECHNOLOGY公 司，批号：SC-542);二抗：即用型二步法（非生物素）PV6001兔二步法检测试剂盒（SANTA C抓Z BIOTECHNOLOGY公司，批号：SC-658) ;DAB显色试剂盒（北京中山公司，批号：110820); 孕酬放射免疫试剂盒(北方生物技术研究所，批号：110912);雌二醇放射免疫试剂盒(北方 生物技术研究所，批号：111015);黄体生成素放射免疫试剂盒(北方生物技术研究所，批号： 111020);卵泡刺激素放射免疫试剂盒(北方生物技术研究所，批号：110723)。
[0014] 1.3 动物
[0015] Wistar未成年大鼠，罕，6-7周龄，体重95~110g，SPF级，购自广西医科大学实验动 物中屯、，合格证号:SCXKG (桂)2009-0002。
[0016] 2 方法
[0017] 2.1分组和标本取材
[0018] 取Wister未成年大鼠40只，随机分成滨桂艾纳香水提物组、本发明组、阳性对照组 和空白对照组，每组10只。滨桂艾纳香水提物组和本发明提取物组均ig(〇.3g · kg-1 · d- 1)，阳性对照组ig己締雌酪（Img · kg-1 · d-1)，空白对照组同法ig等量生理盐水，每天1次， 连续给药14d。于末次给药化后，拔眼球采血3ml置于未加抗凝的试管中，静置20分钟后，W 3000转· min-1离屯、20min，取血清，-80°C保存备用。
[0019] 2.2性激素指标ii定
[0020] 通过放射免疫分析法常规测定血清卵泡刺激激素(F甜)、黄体生成素化H)、雌二醇 化2)和孕激素(P)的含量，按照相应的试剂盒的方法步骤分别测定。
[0021] 2.3卵泡成熟总数计算及卵巢、子宫的组织形态观察
[0022] 处死动物，剖取卵巢、子宫，分别称重后固定于10%甲醒液内，常规脱水，浸蜡包 埋，6WI1切片，苏木精-伊红化E)染色，光镜观察卵巢、子宫的组织形态变化。卵泡成熟总数W 每只大鼠双侧卵巢切片中黄体数与成熟卵泡数相加之和计。通过卵泡成熟总数测定、卵巢、 子宫病理切片观察，了解滨桂艾纳香对卵巢形态结构的影响。
[0023] 2.4统计学处理
[0024] 数据均W±s表示。采用SPSS 17.0统计软件进行方差分析，组间差异进行t检验。 计数资料采用秩和检验;α = 0.05为显著性检验水准。
[0025] 3 结果
[00%] 3.1对大鼠血清FSH、LH、E2和Ρ的分泌量的影响
[0027]与空白对照组比较，滨桂艾纳香水提物组可明显减少F甜的分泌量(P<0.05)，本 发明组则对的分泌量无显著影响(P>0.05)。滨桂艾纳香水提物组、本发明组和己締雌 酪对照组均能显著提高大鼠血清LH的分泌量（P<0.05)，降低大鼠血清P的分泌量（P< 0.05)。本发明高剂量组可减少E2的分泌量(P<0.05)。各组大鼠血清中FSH、LH、E2和P的含 量比较见表1。
[002引表1各组大鼠血清中FSH、LH、E沸P的含量比较（无 ±s，n=10)
[0029] Tab 1 Comparison of the content of FSH、LH、E2 and P in serum of rats among each 邑roup(乂:ts, n=10)
[0030]
[0031] 与空白对照组比较:冲<0.05，*冲<0.01
[0032] 3.2对大鼠成熟卵泡总数的影响
[0033] 肥染色，镜下观察，与空白对照组比较，本发明组较滨桂艾纳香水提物组和己締雌 酪对照组能均能提高大鼠成熟卵泡总数(P<〇.01);本发明组能明显提高大鼠成熟卵泡总 数(P<0.05)，显示本发明对卵泡有促成熟作用。各组大鼠成熟卵泡总数的比较见表2。
[0034] 表2各组大鼠成熟卵泡总数的比较(5故n=10)
[0035] Tab 2 Comparison of the amount of mature follicle of rats among each group( x±s, n=10)
[0036]
[003引与空白对照组比较:冲<0.05，*冲<0.01
[0039] 3.3对大鼠卵巢组织形态学的影响
[0040] 大体观察:己締雌酪组卵巢略大，颜色较深;其余各组差异不大。镜下观察:空白对 照组可见较多原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，成熟卵泡较少见，偶见黄体;滨桂艾纳香水提 物组和本发明组可见各级卵泡，成熟卵泡略增，黄体增多，颗粒细胞层变厚；己締雌酪组可 见各级卵泡，较多的成熟卵泡，黄体增多，卵细胞清晰可见，颗粒细胞层明显增厚。各组大鼠 卵巢组织形态学变化图见图1-2。
[0041 ] 3.4对大鼠子宫组织形态学的影响
[0042]大体观察:滨桂艾纳香水提物组、本发明组与空白对照组无明显差异，子宫外观色 白，直径较细；己締雌酪组子宫轻度充血，明显增粗、子宫长度没有明显变化。镜下观察：空 白对照组子宫管壁较薄，粘膜较薄，固有层结缔组织较致密，腺体较少，腺腔小，上皮细胞呈 柱状，排列紧密;滨桂艾纳香水提物组和本发明组表现腺体数目略增多，略大，其他不太明 显；己締雌酪组子宫内膜增厚明显，组织疏松，子宫腺体增多、变大，上皮细胞高柱状排列， 间质内有水肿。各组大鼠子宫组织形态学变化图见图3。
[00创姆论
[0044]在卵泡发育过程中，卵泡细胞表达的功能性的促性腺激素受体是卵泡获得对促性 腺激素发生反应能力的前提。由于卵泡发育成熟及成熟卵泡排出是连续过程，正常排卵需 要完整的下丘脑-垂体-卵巢化P0巧由之间的正常功能，其中任何一个环节失调，或器质性病 变，都可造成暂时或长期的卵泡发育障碍、无排卵。卵泡能否发育成熟直接关系到妇女生殖 及内分泌功能是否正常。在下丘脑促性腺激素释放激素的作用下，垂体分泌的F甜和LH直接 参与卵巢功能的调节。FSH主要促进卵泡的各种细胞的生长发育，W利生殖细胞的成熟，并 刺激卵巢颗粒细胞的增生，使卵泡激素分泌及芳香化酶活化等。LH主要作用是排卵，在卵巢 周期中期出现高峰，促使卵泡成熟，排出卵子，使排卵后的卵泡变成黄体，黄体的形成与维 持都需要有LH，并能使黄体合成分泌PdFSH是刺激卵泡发育最重要的激素，可促使窦前卵泡 及窦状卵泡的颗粒细胞(GC)增殖与分化，缝隙连接形成、分泌卵泡液，使卵泡生长发育。FSH 和LH在卵巢功能调节中，具有协同作用。
[0045] 本研究结果表明，本发明组较滨桂艾纳香水提物组能明显提高未成年雌性大鼠血 清LH水平及增加卵泡成熟总数。
【附图说明】
[0046] 图1各组大鼠卵巢组织形态学变化图化EX100)A.空白对照组;B.滨桂艾纳香水提 物组;C.本发明组;D.己締雌酪组
[0047] 图2各组大鼠卵巢组织形态学变化图化EX200)空白对照组;B.滨桂艾纳香水提物 组;C.本发明组;D.己締雌酪组
[004引图3各组大鼠子宫组织形态学变化图化EX400)A.空白对照组;B.滨桂艾纳香低剂 量组;C.滨桂艾纳香高剂量组;D.己締雌酪组
【具体实施方式】
[0049]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但运些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人 员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可W对本发明技术方案的细节和形式进 行修改或替换，但运些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[(K)加]实施例1:
[0051 ] 取滨桂艾纳香，加入10倍量(V: W)50%乙醇，超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得 过；
[0052] 将过滤后的药渣加入10倍量的5%乙酸溶液超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得 b;
[0053] 将a加入5倍量(V:W)乙酸乙醋溶解，将b加入10倍量(V:W)1 %氨氧化钢溶液溶解， 将a、b溶液混合后，100°C加热30min，过滤，干燥即得。
【主权项】
1 · 一种漬桂艾纳香提取物，其特征在于由如下方法获得： 取滇桂艾纳香，加入10倍量50 %乙醇，超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得a; 将过滤后的药渣加入10倍量的5 %乙酸溶液超声提取30min，过滤，浓缩并干燥得b; 将a加入5倍量乙酸乙酯溶解，将b加入10倍量1 %氢氧化钠溶液溶解，将a、b溶液混合 后，100 °C加热30min，过滤，浓缩，干燥即得。2.根据权利要求1所述的一种滇桂艾纳香提取物在制备促进排卵药物中的应用。
【文档编号】A61P15/08GK105998120SQ201610247160
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年4月21日
【发明人】包国庆, 黄河
【申请人】广西桂西制药有限公司