专利名称：含有日本扁柏多糖的皮肤外用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有日本扁柏(Chamaecyparis obtusa)多糖作为活性成分的皮肤外用组合物，更具体地，本发明涉及一种含有日本扁柏多糖的皮肤外用组合物，所述组合物通过促进胶原蛋白生成而增强皮肤弹性并减少皱纹，通过抑制黑色素形成而表现出优异的皮肤美白效果，通过促进角化细胞分化而改善皮肤保湿，且具有优异的抗炎和皮肤再生效果。
背景技术：
由于各种各样的内在和外在因素，人们的皮肤随着年龄而历经着变化。具体地，关于内在因素，各种调节新陈代谢的激素的分泌减少，免疫细胞的功能及细胞的活性下降，这导致构成活体的免疫蛋白和结构蛋白的合成减少。关于外在因素，到达地球表面紫外线的量由于臭氧层的破坏而增加，并随着环境污染而日趋严重，自由基和活性氧增多。结果，皮肤变薄、皱纹增多、皮肤弹性下降、肤色变得暗沉、皮肤问题频繁出现，而且老人斑、雀斑及黑斑也随之增多。随着年龄的增长，构成皮肤的胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸及糖蛋白的含量和排布(arrangement)改变或减少，且由于自由基和活性氧而发生氧化应激。同时，众所周知， 随着年龄的增长或紫外线的作用，在皮肤的大部分细胞中，环氧酶-2(Cox-2)的合成导致产生引发炎症的前炎症因子的增加，由于这些炎症因子使皮肤组织退化的基质金属蛋白酶 (MMP)的合成增加，并且通过诱导型一氧化氮合酶(iNOQ使一氧化氮(NO)的产生增加。换句话说，由于自然发展的本身的老龄化，细胞的活性降低，由于轻微的炎症使得基质的合成减少。而且，由于外在因素，如各种有害污染物引起的压力增加以及日光引起的活性氧的增加，加速了退化和变性，因此皮肤基质被破坏并变得越来越薄，既而各种各样的皮肤衰老症状出现。因此，人们进行了许多关于能防止和改善这种衰老现象的活性成分的研究。人肤色的决定涉及各种因素。其中，重要的有，产生黑色素的黑色素细胞的活性、 血管的分布、皮肤的厚度、及人体中的色素(如类胡萝卜素和胆红素)的存在与缺乏。其中最重要的因素是通过各种酶(如黑色素细胞中的酪氨酸酶)的活动产生的黑色素。遗传因素、生理因素与激素分泌和压力，以及环境因素如UV辐射共同影响黑色素的产生。由黑色素细胞产生的黑色素是黑色素/蛋白质组合物形式的酚类聚合物 (phenolic polymer)且具有保护真皮层下的皮肤组织免受太阳UV辐射的有效功能并同时会捕获皮肤的自由基，从而保护皮肤中的蛋白质和基因。如上所述，皮肤由于内在或外在的压力产生的黑色素是一种稳定的物质且即使当压力不存在了，也直到通过皮肤角质化排出时它才会消失。然而，如果黑色素的产生多于所需，将会诱导色素沉着(如雀斑和斑点)，导致美感上令人不快的结果。目前，东方国家的女性更喜欢如白宝石般白净的皮肤并以这样的皮肤作为重要的美的标准。因此，增加了对解决色素沉着疗效及美容问题的需求。
为了满足这个需求，已经将抗坏血酸、曲酸、熊果苷、对苯二酚、谷胱甘肽或其衍生物、或具有酪氨酸酶抑制活性的物质用于美容或医学药物中。然而由于将他们加入化妆品时会发生美白效果不足及各种问题(如皮肤安全、配方和稳定性)，限制了对其的应用。皮肤的最外层是表皮，表皮最重要的功能是保护皮肤免受外部刺激(物理和化学刺激如化学制品、污染物、干燥的环境和UV辐射)和防止通过皮肤丧失过多的水分。只有当正常形成含有角质细胞的表皮角质层时才能维持这种保护功能。角质层(horny layer) (角质层(stratum comeum))，是表皮的最外层，由角质细胞形成并含有被脂质层环绕的终端分化角质细胞。角质细胞是在表皮最底层不断增殖的基细胞经历一系列的结构和功能改变时移向皮肤的表面过程中产生的细胞。经过一段特定的时期后，从皮肤上脱落的旧角质细胞由新的角质细胞代替。该重复过程被称为“表皮细胞的分化”或“角质化”。在角质化过程期间，形成角质层的角质细胞产生天然保湿因子(NMFs)和细胞间脂质(神经酰胺、胆固醇和脂肪酸)，从而使角质层具有牢固度和柔软度以作为皮肤屏障发挥功能。但是，由于生活方式如过度的洗脸或洗澡、环境因素如干燥的空气或污染物、以及固有的疾病如过敏(atopy)或老年皮肤疾病，角质层容易丧失其功能。实际上，由于最近增加的各种因素，越来越多的人受到皮肤干燥症状和各种失调(disorders)的困扰。因此，为了使皮肤保持湿润达到适宜的水平，人们进行了许多以利用外界水分或防止已经被身体吸收的水分流失为重点的研究。实际上，在化妆品领域主要开发和使用了各种具有保水能力的保湿产品。然而，随着生活环境中对人体有害的因素的逐渐增加和老年人口的迅速增加，角质层的更新率变得更慢，且角质细胞的脂质合成能力下降，或表皮中的细胞分裂、生长和分化效率变低。结果，更多的人具有保湿因子和脂质不足的皮肤状况且角质层不再维持其功能(即不再保持皮肤屏障功能)。表皮细胞的分裂和分化异常引起各种皮肤疾病，包括干皮病、过敏和牛皮癣。这些疾病只在具有保水功能保湿产品的存在下能得到轻微地缓解，但是很难期望从根本上治愈这些疾病。皮肤疾病指的是在动物包括人类皮肤上发生的所有失调。炎症性皮肤病指的是涉及一系列临床症状和症候(例如瘙痒、水肿、红疹和脱皮)的疾病，由于各种在皮肤的表皮上引起一系列炎症反应的刺激因素。众所周知的炎症性皮肤疾病包括过敏性皮肤炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎(seborrhoic dermatitis)、痤疮等。目前抗组胺剂制剂、维生素软膏和肾上腺皮质激素用于治疗炎症性皮肤疾病。但这些药物大部分只有短暂效果且在某些情况下表现出严重的副作用。同时，皮肤作为身体对外界环境的保护屏障而发挥功能。当皮肤受伤时，受伤部位会因为自然愈合作用充满血液，并且血小板颗粒减少以及哈格曼因子(hageman factor) 的激活被启动而进行伤口愈合过程。血液凝固是保护外露的伤口组织和提供愈合过程中细胞移动基础的临时防御行为(Lee SH AS, Jung SG. Skin Barrier. Seoul :Ryo Moon Gak, 2004)。伤口愈合过程通常分为4个阶段发炎期、上皮再生期(re-印ithelization phase)、增殖期和成熟期(maturation phase) 0在发炎期，免疫细胞在伤口部位出现，细胞迁移到伤口部位。然后，分泌诱导颗粒组织形成的生长因子和信号物质。在不是严重感染的状态下，发炎期通常很短(Care KRGf. Advances in wound Care. Seoul =Korea Medical Book Publisher，2002)。发炎期对于伤口愈合过程是非常重要的。增殖期的发生与上皮再生期相似，且特征是在伤口部位形成颗粒组织(Kubo KKY. Spongy matrix of hyaluronic acid and collagen as a cultured dermal substitute evaluation in an animal test. J Artif Organs 2003 ；6(1) :64-70)。颗粒组织包括细胞外基质成分的组合物(如未成熟的胶原蛋白、纤连蛋白和透明质酸以及纤维母细胞和炎性细胞)，且这些迅速填满伤口部位并具有纹理结构的颗粒组织对伤口愈合是重要的。由于表皮脱落的伤口表面被一层角质细胞覆盖，生成了新的表皮并重新形成上皮层。细胞从伤口边缘或皮肤的真皮碎片通过伤口向上移动并开始通过疤和活跃的结缔组织迁移。当伤口的上皮再生完成，发生一系列由于结缔组织增加和重塑而使伤口面积减小的过程。之后，在成熟期期间，凝结细胞和组织的毛细血管在修复期间逐渐消失，且如果该组织过度形成或不正常退化，将会形成疤痕。这是常规的伤口愈合过程。在伤口愈合过程中，不仅伤口快速愈合是重要的，而且使伤口愈合而没有副作用或疤痕也是重要的。因此， 组织细胞在抑制炎症和调节生长因子表达时以均衡地方式填充是更重要的，而且人们已经在不断努力寻找具有这种功效的物质。关于日本扁柏的研究重点是日本扁柏精油中含有的植物杀菌素(phytoncide)的作用。Wiytoncide是一个“phyton”意为植物且“cide”意为“消灭”的复合词。也被称为 “被植物消灭”且可以说是“木香(Woody scent)”。植物杀菌素是由植物释放或分泌以抵抗病原体、有害昆虫和霉菌的物质。如果人服用植物杀菌素，将会减小人的压力、增强肠道和心肺功能并有杀死细菌的作用。所述植物杀菌素含有酚类化合物如萜烯、生物碱、糖苷等， 并可以利用有机溶剂提取。因此，含有日本扁柏树的植物杀菌素的日本扁柏精油从日本扁柏树中提取得到。虽然用于改善皮肤状况的含有普通日本扁柏提取物的化妆品组合物是已知的，但日本扁柏多糖及其在抗衰老、减少皮肤皱纹、增强皮肤弹性、皮肤美白、皮肤保湿、防止和改善干性皮肤疾病、抗炎、皮肤再生等方面的作用是未知的。
发明内容
因此，本发明的发明人努力寻找可以保护皮肤免受外界有害环境或UV射线伤害以防止皮肤衰老和改善皮肤状况的成分，结果，发现了一种含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物，在增强皮肤弹性、减少皮肤皱纹、皮肤美白、皮肤保湿、抑制炎症和皮肤再生方面具有优异的效果，从而完成本发明。因此，本发明的目的是提供一种含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物。为了达到上述目的，本发明提供一种含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物。本发明的含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物可以促进胶原蛋白的产生、抑制黑素原生成、促进角质细胞分化、减少皮肤炎症反应和皮肤刺激以提供抗衰老的作用，并在减少皮肤皱纹、增强皮肤弹性、皮肤美白、皮肤保湿、防止和改善干性皮肤疾病、抗炎、皮肤再生等方面具有非常好的效果。
图1表示利用体外伤口愈合试验测试使用日本扁柏多糖前后伤口愈合效果的一组照片。
具体实施例方式本发明提供一种含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物。本发明所用的日本扁柏是属于柏科(Cupressaceae)的常绿高树且生长到高50m 和直径an。所述日本扁柏的枝条水平伸展而形成圆锥形的树冠，树皮的颜色是红褐色且垂直的裂开并脱落。所述日本扁柏长得笔直而具有很广的应用。主要被用于建筑材料、土木工程材料、船或雕刻材料(chip materials)。本发明组合物中用作活性成分的日本扁柏多糖能促进胶原蛋白的产生、抑制 MMP-I的表达而防止皮肤衰老、减少皮肤皱纹和增强皮肤弹性。同时，所述日本扁柏多糖能抑制黑素原生成而提供良好的皮肤美白效果，诱导角质细胞分化而增强皮肤保湿，从而防止和改善干性皮肤疾病，并抑制由炎症反应诱导物诱导的环氧酶-2的合成而在减少皮肤炎症、皮肤刺激和皮肤问题方面显示出优异的效果。因此，本发明的含有日本扁柏多糖作为活性成分的皮肤外用组合物对抗衰老、减少皮肤皱纹、增强皮肤弹性、皮肤美白、皮肤保湿、防止和改善干性皮肤疾病如过敏、抗炎、 皮肤再生、防止可改善皮肤问题等是非常有效的。常规的日本扁柏提取物是通过使用例如，水或乙醇水溶液，从日本扁柏中提取各种成分而获得的提取物的混合物，并且当将其用作皮肤外用组合物时，由于其中含有的叶绿素等而会引起如变色(discoloration)或色素沉着问题。但是，本发明所用的日本扁柏多糖可以解决日本扁柏提取物的问题，因为它主要含有通过对日本扁柏提取物运用特殊的分离方法而获得的多糖。本发明的日本扁柏多糖可以通过本领域所熟知的方法制得，且制备的方法同样没有特殊限制。作为一个具体的例子，用溶剂提取法除去干燥的日本扁柏树叶中的叶绿素。作为提取溶剂优选选自由己烷、乙醇和甲醇组成的组中的一种或多种。更优选地，采用乙醇以避免当所述日本扁柏多糖用于化妆品用组合物时因为剩余的叶绿素而出现毒性问题。将干燥的日本扁柏树叶加入到溶剂中并在室温下充分搅拌，之后，将含有溶解在其中的叶绿素的溶剂通过离心除去。干燥得到的日本扁柏树叶残余物，借以获得不含叶绿素的日本扁柏树叶。为了从制得的日本扁柏树叶残余物中提取水溶性的活性成分，进行热水提取工艺。所述热水提取工艺优选在温度30-40°C下进行。如果所述热水提取工艺在高于40°C的温度下进行，高温会导致发生热变性，而如果在低于30°C的温度下进行，则不能充分提取多糖。所述热水提取工艺时间优选为6-他。如果提取时间超过他，会发生微生物污染，而如果提取时间短于他，则不能充分提取多糖。利用过滤装置过滤所述热水提取获得的提取物， 然后在减压条件下浓缩。为了只从热水提取物中分离出多糖，进行超滤和乙醇沉淀反应。所述多糖的分子量为100000道尔顿或更大，比游离蛋白质的分子量更大。利用分子量的差异进行超滤过程，借以增加所述日本扁柏多糖的含量。此外，所述超滤过程是一个连续的过程且在低分子量物质的分离方面具有优势并且可以同时进行滤液的浓缩而且由于所述过程是在室温下进行的故不会发生热变性的问题。然后，将乙醇缓慢加入所述超滤浓缩液中，从而进行所述乙醇沉淀反应。在此，乙醇的加入速度优选为100-200mL/min。如果乙醇的加入速度高于200mL/min，产生的颗粒会变得过大或成团。乙醇沉淀反应完成后，除去乙醇，而将剩余的日本扁柏多糖在40-50°C的温度下进行真空干燥，从而获得日本扁柏多糖粉末。以所述皮肤外用组合物的总重为基准，本发明的日本扁柏多糖的含量优选为 0.001-10重量％。如果所述日本扁柏多糖的含量低于0.001重量％，将不具有明显的效果以至于不能作为活性成分，而如果含量高于10重量％，会带来制剂(formulation)稳定性方面的问题。根据本发明的皮肤外用组合物含有与化妆有关的且与皮肤科学有关的可接受的基质或基料。所述组合物可以配制成局部使用制剂。局部使用的制剂的例子包括溶液、凝胶、固体、脱水团(dough anhydride)、通过在水相中分散油相而制得的乳液(emulsion)、 悬浮液(suspension)、微乳液(microemulsion)、微囊剂(microcapsules)、微颗粒 (microgranules)、离子(月旨质体)禾口非离子囊泡(non-ionic vesicles)、面霜(cream)、润肤霜(skin lotion)、软膏(ointment)、散粉(powder)、喷雾和遮瑕棒(conceal stick)。而且，本发明的组合物可以按照本领域已知的常规方法配制。同时，根据本发明的皮肤外用组合物可以配制成泡沫组合物或还含有可压缩推进剂的气雾剂组合物。根据本发明的皮肤外用组合物可以含有化妆品领域或皮肤科学领域常规的添加剂，例如，脂肪物质、有机溶剂、加溶剂、增稠剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、 稳定剂、泡沫剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、充填剂(filler)、掩蔽剂(sequestering agent)、螯合剂、防腐剂、维生素、阻隔剂(blocker)、保湿剂、精油(essential oil) ( 牛仝望)、染料、色素、亲水或疏水活化剂、脂质囊泡(lipid vesicle)或其他常用于化妆品的成分。这些添加剂的含量为化妆品领域或皮肤科学领域的常规用量。对本发明的含有所述日本扁柏多糖的皮肤外用组合物的剂型没有特殊限定。可以制成美容产品，如润肤霜、收敛化妆水、乳液、营养霜、按摩霜、精华液、眼霜、眼部精华、洁面霜、洁面泡沫、卸妆水、面膜、散粉、润肤露、美体霜、身体油和身体精华(body essence) 0根据本发明公开的皮肤外用组合物可以是药物组合物。所述药物组合物可以含有医药添加剂如防腐剂、稳定剂、保湿剂、用于渗透控制的乳化助剂或盐和/或缓冲剂， 并还可以进一步含有其他有利于治疗的有用的物质。所述药物组合物可以被制成乳液 (lotion)、霜(cream)、软膏、凝胶或其它等。所述药物组合物优选经皮给药。所述药物组合物的活性成分日本扁柏多糖的给药剂量可以依需要治疗的受体的年龄、性别和体重，待治疗的具体疾病或其病理状况 (pathological conditions)、其疾病或病理状况的严重程度、给药途径、以及医师或药剂师的判断而不同。所述给药剂量可以根据本领域技术人员考虑到的那些因素而确定。通常的给药剂量在约0. 0001mg/kg/天至约2000g/kg/天的范围内。
下文中，根据实施例和试验例来进一步详细描述本发明的制备和作用。然而应当理解的是，这些实施例和测试例是说明性目的而不能理解成是对本发明范围的限制。制备例1 :日本扁柏多糖的制备将IOL乙醇加入到Ikg干燥的日本扁柏树叶中，并在室温下搅拌Mh，之后通过离心除去溶剂。将得到的日本扁柏树叶残余物在30°C的热水中提取几，并利用压滤设备(硅藻土过滤)提取得到的热水提取物并收集，之后在减压条件下、在50°C下浓缩以达到初始体积的1/10。然后，将浓缩液进行超滤(截留分子量1000Da)以除去低分子量的游离蛋白质，并缓慢地以lOOmL/min的速率向浓缩液中加入为得到的超滤浓缩液5倍体积的乙醇，从而进行乙醇沉淀反应。在45°C下将沉淀的日本扁柏多糖进行真空干燥，从而获得53g日本扁柏多糖粉末。试验例1 :1型溶胶原蛋白(ftOcollagen)试验在12孔培养板中以IO5细胞/孔的浓度培养正常的人成纤维细胞，并分别用含有由制备例1获得的lppm、10ppm和50ppm的日本扁柏多糖的培养基代替培养基。用 TGF-β (人转化生长因子1，罗氏公司)作为阳性对照。培养3天，收集细胞，并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)试验测定细胞中产生的I型溶胶原蛋白的量。以不含日本扁柏多糖的对照为0，以阳性对照为100，计算出每一测量值，计算结果如下表1所示。表 权利要求
1.一种含有日本扁柏(Chamaecyparis obtusa)多糖作为活性成分的皮肤外用组合物。
2.权利要求1所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述日本扁柏多糖的含量为0. 001-10重量％。
3.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于抗衰老。
4.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于减少皮肤皱纹。
5.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于增强皮肤弹性。
6.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于皮肤美白。
7.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于皮肤保湿。
8.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于干性皮肤疾病的预防和改善。
9.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于抗炎。
10.权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物用于皮肤再生。
全文摘要
本发明涉及一种皮肤外用组合物，所述组合物含有日本扁柏(Chamaecyparis obtusa)多糖作为活性成分，且更具体地，本发明涉及一种皮肤外用组合物，所述组合物含有日本扁柏多糖以不仅能促进胶原蛋白的生成、增强皮肤弹性、除皱、抑制黑色素形成从而达到优异的皮肤美白效果的目的，而且能促进角化细胞分化，改善皮肤保湿效果、并获得优越的抗炎和皮肤再生效果。
文档编号A61Q19/02GK102421412SQ201080020473
公开日2012年4月18日 申请日期2010年5月27日 优先权日2009年5月29日
发明者廉明勋, 朴元锡, 金德姬, 金正玉, 金汉坤 申请人:株式会社爱茉莉太平洋, 香港生物技术株式会社