专利名称：一种用于体重控制的基因芯片、制备方法、使用方法及其试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于遗传测试领域，具体涉及一种用于体重控制的基因芯片、制备方法、使用方法及其试剂盒。
背景技术：
世界卫生组织(WHO)警告称，超重和肥胖是全球引起死亡的第五大风险。全球有11亿超重人群，3. 5亿的肥胖人群。2007年，中国的肥胖人群已超过2亿。人类肥胖是基因与环境共同作用的结果。缺乏运动和过度饮食是导致肥胖的主要外在因素。然而控制体重并非简单的少吃多动。采取同样的少吃多动的瘦身方式，有人成 功有人失败。这主要是由于遗传差异引起的。个人的遗传信息决定了饮食和运动对其体重的影响。目前已有相关研究报道确定了单核苷酸多态性(SNPs)与饮食和运动的关系。比如，具有FABP2PPARG ADRB2-2AP0A2AP0A5基因单核苷酸多态性的人对饮食中的脂肪量敏感，此类人应采取低脂饮食减肥的策略；而具有ADRB3ADRB2LIPC PPARG基因单核苷酸多态性的人对运动敏感，此类人运动减肥效果明显。因此具有不同单核苷酸多态性的人应采取不同的瘦身方式。因此如可通过对受测者的相关基因进行检测，可分析得到导致其肥胖的遗传因素及环境因素，从而为受测者获得一个合适的减肥方案而提供更多的有用信息，以采取相应的策略避免对其无效的方法。DNA芯片技术是近年来新开发的一种基因检测工具。其原理是将大量的寡核苷酸探针有规律地排列在一张玻片上，这些探针可以与信号显示物质标记的样品DNA的扩增序列的互补序列进行相结合，通过对信号物质进行检测，对杂交结果进行计算机软件处理分析，从而获得杂交信号的强度及其分布模式图。基于寡核苷酸芯片的方法为分析SNP提供了一种高通量的技术，为SNP或基因突变提供了一个高通量的检测平台，可用来平行分析已知基因在不同样本中的单核苷酸多态性。经检索，利用肥胖相关基因多态性检测的基因芯片至今还未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足而提供一种用于体重控制的基因芯片、制备方法、使用方法及其试剂盒。一种用于体重控制的基因芯片，其特征在于它包括固相载体和固定于该固相载体上用于与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点检测的特异性寡核苷酸探针，所述与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点为与肥胖风险相关SNPs :rs3751812、rsl0871777与饮食有关的肥胖基因SNPs :rsl799883、rsl801282、rsl042714、rs5082、rs662799
与运动有关的肥胖基因SNPs :rs4994、rsl042713、rsl800588、rsl801282针对肥胖相关基因单核苷酸多态性位点，设计了一组寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 1-20所示，具体见表I :表I用于体重控制的基因芯片的寡核苷酸探针序列
权利要求
1.一种用于体重控制的基因芯片，其特征在于它包括固相载体和固定于该固相载体上用于与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点检测的特异性寡核苷酸探针，所述与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点为 与肥胖风险相关 SNPs :rs3751812、rsl0871777 与饮食有关的肥胖基因 SNPs :rsl799883、rsl801282、rsl042714、rs5082、rs662799 与运动有关的肥胖基因 SNPs :rs4994、rsl042713、rsl800588、rsl801282 所述的寡核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 1-20所示，具体见表I : 表I用于体重控制的基因芯片的寡核苷酸探针序列
2.根据权利要求I所述的用于体重控制的基因芯片，其特征在于所述固相载体为硝酸纤维素膜、尼龙膜或载玻片，所述的固相载体经不同的化学修饰使其表面带有可以固定核酸分子的活性基团。
3.根据权利要求I所述的用于体重控制的基因芯片，其特征在于所述用于体重控制的基因芯片包括阳性对照探针和阴性对照探针，所述的阳性对照探针序列如SEQ ID No. 21所示，所述的阴性对照探针序列如SEQ ID No. 18所示。
4.一种用于体重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于它包括以下步骤 (1)将固相载体预处理，待用； (2)根据表I所设计的探针序列，如SEQID No. 1_20所示，人工合成每条寡核苷酸芯片探针； (3)将上述各寡核苷酸芯片探针溶解在点样液中，点样固化即得。
5.根据权利要求4所述的用于体重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于所述固相载体为载玻片，所述的预处理为将载玻片用铬酸洗液洗涤，浸泡过夜，水洗，20% 25%氨水浸泡中过夜，水洗，然后浸入氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，用冰醋酸调节pH值至4. O 6. 0，乙醇超声清洗，烘干4 5小时，戊二醛醛基化处理； 所述每条寡核苷酸芯片探针在合成时5’端经氨基基团修饰； 所述点样时每点点样体积约为O. 4 O. 6nL,点心间距为500 600 μ m,点直径为200 300 μ m，每条探针重复点样2 3次；所述的固化处理为室温放置24 26小时固化。
6.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1-3中任一项所述的用于体重控制的基因-H-* I I心/T O
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于它还包括用于与肥胖相关基因多态性位点扩增对应所需的引物，其序列如SEQ ID No. 22-39所示，和阳性对照扩增对应所需的引物，其序列如SEQ ID No. 40-41所示，具体见表2 表2PCR扩增对应所需的引物序列
8.权利要求1-3任一项所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于它包括以下步骤 1、待测样本的制备 (1)提取样品DNA； (2)采用各与肥胖相关基因多态性位点及阳性对照肌动蛋白扩增对应所需的引物分别进行PCR扩增； (3)PCR结束后经电泳检测确认，然后回收目的片段条带； 2、荧光素标记 对步骤I中回收得到的目的片段和阴性对照品即点样液进行荧光标记； 3、芯片杂交实验 将步骤2中标记后的目的片段和阴性对照品对应滴加到基因芯片上，与固定于上述基因芯片上的寡核苷酸芯片探针进行杂交，然后进行洗涤处理； 4、扫描和结果判定 扫描分析获取杂交信号，判定得到结果。
9.根据权利要求8所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于步骤1(2)中用于肥胖基因多态性位点扩增对应所需的引物序列如SEQ ID No. 22-39所示，阳性对照探针扩增所需的引物序列如SEQ ID No. 40-41所示，见表2。
10.根据权利要求8所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于它还包括将步骤4得到的各位点结果按照与肥胖风险相关的基因位点、与饮食有关的肥胖基因位点、与运动有关的肥胖基因位点对结果进行分类统计分析。
全文摘要
本发明涉及一种用于体重控制的基因芯片、制备方法、使用方法及其试剂盒。它包括固相载体和固定于该固相载体上用于与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点检测的特异性寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1-20所示。本发明还公开了该基因芯片的制作方法，使用方法，以及包括该基因芯片的试剂盒。它提供了肥胖各相关基因多态性检测系统，可快速、准确检测待测样本中与肥胖基因相关SNPs，灵敏度高，对于科学减肥控制体重有重要的意义，可广泛用于欲减肥人群；本基因位点选取中国人特有的SNPs，对中国人更具有针对性；PCR引物特异性好，可很好地保证实验的成功率。
文档编号C40B50/06GK102912452SQ20121036779
公开日2013年2月6日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者徐谋胜, 李兵, 王珊, 袁雅燕, 王宁 申请人:湖北维达健基因技术有限公司