一种抗病杀虫生物有机肥及其制备方法与流程

文档序号:14995808发布日期:2018-07-24 13:41阅读:268来源:国知局
本发明属于微生物肥料
技术领域
,具体地说,涉及一种抗病杀虫生物有机肥及其制备方法。
背景技术
:肥料是各种农作物实现高产、稳产的重要保证,我国化肥在产销方面均居世界首位,长期大量施用化肥,在一段时期内一定程度上保证了我国农作物的稳产增收,但也会由此引发一系列严重的生态环境问题和影响人类健康的问题。生物肥料产品因其具有改良土壤板结、低毒甚至无毒,能刺激作物生长与提高作物品质等多重功能而得到越来越广泛地应用,成为发展生态农业、生产绿色食品的主要施肥品种之一。生物有机肥既能够保证农作物的稳产增收,又不破坏生态环境和影响人类健康,可以实现社会、经济、生态三方效益的良性循环,市场潜力巨大,发展前景十分看好。目前,由于农业生产中为了提高产量各种化学肥料和农药的大量使用,使土壤板结、团粒结构被破坏,根系难以同时获得氧气和水分。土壤的ph变化(通常下降)、化学元素的改变,植物难以正常生长,果不香、瓜不甜、菜无味。化肥中的n、p等成分流失到水体中,导致水体的富营养化,产生环境污染。同时很多种类的病虫害已经对这类药物产生了耐药性,我国许多农副产品出口国外时,常常因为农药残留超标而遭遇国外的“绿色壁垒”封杀,每年的损失高达百亿美元,引起了全社会的广泛关注。农药残留以及病菌抗药性等一系列问题日趋严重,是制约农业产业转向绿色发展之路的瓶颈,迫使人们在尽量科学应用化学农药、加强品种抗病性研究的同时,也在不断寻求新的防治措施。生物防治作为植物病害管理系统的一项重要措施有其固有的优势,生物防治环境和谐、无污染、无残留,作用机制复杂,不易产生抗药性,符合市场对绿色农产品的需求,因此开发环保、高效同时又能促进农产品增收的生物肥料具有重要意义。目前,市场上的有机肥存在以下几个方面的问题:(1)原料复杂,施用后产生二次污染;(2)生物肥料中的菌株存活时间较短,按照我国国家微生物肥料标准,固体菌剂中的有效活菌数在6~12个月保持2.0×l09cfu/g;液体菌剂中的有效活菌数3~6个月保持5.0x109cfu/ml。远远低于国际现行技术能够达到的标准。(3)产品效果不明显或夸大使用效果,导致农民使用的积极性不高。技术实现要素:有鉴于此,本发明提供了一种抗病杀虫生物有机肥及其制备方法,该有机肥具有抗病杀虫的效果,能够增强农作物抗病性和免疫力,能够疏松土壤、改善生态环境,对农作物害虫的幼虫有一定的杀灭效果,可有效降解农药残留和大分子有机物,并且能够提高农作物的产量和质量。为了解决上述技术问题,本发明公开了一种抗病杀虫生物有机肥,原料按重量份计包括以下组分:有机肥85份,细黄链霉菌1-10份,解淀粉芽孢杆菌1-4份,苏云金芽孢杆菌1-4份,黄腐酸钾1-3份。进一步地,所述抗病杀虫生物有机肥中的有机质含量≥40.0%,粪大肠菌群≥100个/g,有效活菌数≥0.2cfu亿/g,蛔虫卵死亡率≥95%。进一步地,所述有机肥通过以下方法制备得到:以禽粪便和秸秆为原料,其中,粪便与秸秆的重量比为8:2-9:1,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%;加入石灰粉调节ph到6.8-7.2之间,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成;低温烘干,使其水分含量≤30%,制备得到有机肥。本发明还公开了一种抗病杀虫生物有机肥的制备方法,包括以下步骤:步骤1、制备有机肥;步骤2、制备细黄链霉菌活体菌;步骤3、制备解淀粉芽孢杆菌活体菌;步骤4、制备苏云金芽孢杆菌活体菌;步骤5、称量:按照质量百分比称量以下组分:有机肥85份,细黄链霉菌1-10份,解淀粉芽孢杆菌1-4份,苏云金芽孢杆菌1-4份,黄腐酸钾1-3份;步骤6、将称量好的有机肥,细黄链霉菌,解淀粉芽孢杆菌,苏云金芽孢杆菌,黄腐酸钾进行混合,检验各活体菌数≥0.20亿个/克,有机质含量≥40%,水分含量≤30%,分大肠菌群数≤100个/g,检验合格后包装。进一步地,所述有机肥通过以下方法制备得到:以禽粪便和秸秆为原料,其中,粪便与秸秆的重量比为8:2-9:1,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%;加入石灰粉调节ph到6.8-7.2之间,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成;低温烘干,使其水分含量≤30%,制备得到有机肥。进一步地,所述制备细黄链霉菌活体菌种具体为:步骤2.1、制备高氏合成1号培养基:选用高氏合成1号培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃左右加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;步骤2.2、菌种活化:将细黄链霉菌接种至高氏合成1号培养基试管斜面上,28℃培养2-3天,检查有无杂菌;步骤2.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至高氏合成1号培养基的茄子瓶斜面上,28℃培养3天;步骤2.4、无菌状态下将无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤2.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到三角瓶液体发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,210r/mim,28℃培养3天,得到发酵用液体菌种;步骤2.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,210r/mim培养3天,有大量孢子产生,发酵结束;步骤2.7、将发酵完成的菌种吸附于灭菌糠粉或草木灰载体上,发酵完备的菌种与灭菌糠粉或草木灰载体的重量比为1:1-1:4,烘干,使其水分≤10%。进一步地,所述高氏合成1号培养基的组分如下:可溶性淀粉20.0g,k2hp40.5g,nacl0.5g,kno31.0g,mgso4·7h2o0.5g,feso40.01g,蒸馏水1.0l;液体发酵培养基为:可溶性淀粉4.5%(w/w),蔗糖0.5%(w/w),豆饼粉4.5%(w/w),nano30.2%(w/w),znso40.01%(w/w),kh2po40.001%(w/w),余量为水,以上质量百分含量总量为100%,ph7.4,121℃,20mim灭菌,备用。进一步地,所述根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述制备解淀粉芽孢杆菌活体菌种具体为:步骤3.1、制备营养肉汤培养基,选用营养肉汤培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;步骤3.2、菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,37℃培养18小时,检查有无杂菌;步骤3.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,37℃培养18小时;步骤3.4、无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的营养肉汁培养基的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤3.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,37℃培养18小时,得到发酵用液体菌种;步骤3.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,37℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束;步骤3.7、将发酵完成的菌种吸附于灭菌糠粉或草木灰载体上,发酵完备的菌种与灭菌糠粉或草木灰载体的重量比为1:1-1:4,烘干,使其水分≤10%。进一步地,所述营养肉汤培养基,按1.0l计,包括以下组分:蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0。进一步地,所述制备苏云金芽孢杆菌活体菌种具体为:步骤4.1、制备营养肉汤培养基,选用营养肉汤培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃左右加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;步骤4.2、菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,30℃培养18小时,检查有无杂菌;步骤4.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,30℃培养18小时;步骤4.4、无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤4.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,30℃培养18小时,得到发酵用液体菌种;步骤4.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束;步骤4.7、搅拌液体使菌体分布均匀,在液体中加入灭菌糠粉,其中,液体和糠粉的重量比为1:2,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。与现有技术相比,本发明可以获得包括以下技术效果:传统有机肥生产过程中功能菌和有机肥原料一起发酵,有可能使功能菌失活,影响成品中功能菌的有效数量,使其效果减弱。本发明方法制作的生物有机肥是先将有机肥原料载体先行腐熟,高温下载体杂菌数量大大减少;而后加入在发酵罐中培养的各个功能菌活体菌,这样以来,成品中功能菌的有效数量大大增加,从而加强了生物有机肥的施用效果。当然,实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式,藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。本发明公开了一种抗病杀虫生物有机肥,原料按重量份计包括以下组分:有机肥85份,细黄链霉菌1-10份,解淀粉芽孢杆菌1-4份,苏云金芽孢杆菌1-4份,黄腐酸钾1-3份。其中,该抗病杀虫生物有机肥中的有机质含量≥40.0%,粪大肠菌群≥100个/g,有效活菌数≥0.2cfu亿/g,蛔虫卵死亡率≥95%,符合国家标准。其中,细黄链霉菌主要分布在土壤中,是放线菌属细菌,其代谢产物中含有生长素、抗菌素、苯乙酸,具有转化土壤中氮、磷、钾,提高土壤肥力,减少化肥用量,抑制病菌繁殖;琥珀酸及细胞分裂素等作物生长所必须的生长调节剂成分防病保苗,刺激细胞分裂,促进作物生根、发芽、成熟,提高作物产量;促进有效物质合成,显著提高农产品的品质等作用。解淀粉芽孢杆菌是一种和枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌,在其自身的生长过成长可产生一系列的代谢产物,这些代谢产物使得解淀粉芽孢杆菌能够具有广泛地抑制真菌和细菌的活性。苏云金杆菌是一种革兰氏阳性、好氧、包括许多变种的一类产晶体芽孢杆菌,简称bt。该菌可产生两大类毒素,即内毒素(伴孢晶体)和外毒素,使害虫摄取后停止取食,最后因饥饿中毒死亡。用于防治直翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目等多种害虫。黄腐酸钾是一种活性钾元素肥,包括纯天然矿物质黄腐酸钾或黄腐植酸与氧化钾制成的有机型黄腐酸钾。黄腐酸钾内含微量元素、稀土元素、植物生长调节剂、病毒抑制剂等多种营养成分,使养分更充足、补给更合理,从而避免作物因缺少元素而造成的各种生理性病害的发生,使作物株型更旺盛叶色更浓绿,抗倒伏能力更强。黄腐酸钾能及时的补充土壤中所流失的养分,使土壤活化,具有生命力,减少土壤内养分被过度吸收引起的重茬病害。本发明所用菌种为购自中国农业微生物菌种保藏管理中心,细黄链霉菌(accc40027),解淀粉芽孢杆菌(accc04274),苏云金杆菌(accc02306);黄腐酸钾外购于济南裕沅生物科技有限公司,含量≥45%,水分≤0.1%。本发明还公开了一种抗病杀虫生物有机肥的制备方法,包括以下步骤:步骤1、制备有机肥:以禽粪便和秸秆为原料,其中,粪便与秸秆的重量比为8:2-9:1,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%。加入石灰粉调节到合适的酸碱度,调节ph到6.8-7.2之间,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天左右,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成。低温烘干,使其水分含量≤30%即可。步骤2、制备活体菌种:步骤2.1、制备高氏合成1号培养基:选用高氏合成1号培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃左右加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;其中,高氏合成1号培养基的组分如下:可溶性淀粉20.0g,k2hp40.5g,nacl0.5g,kno31.0g,mgso4·7h2o0.5g,feso40.01g,蒸馏水1.0l;步骤2.2、菌种活化:将保藏的细黄链霉菌接种至高氏合成1号培养基试管斜面上,28℃培养2-3天,检查有无杂菌;步骤2.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至高氏合成1号培养基的茄子瓶斜面上,28℃培养3天;步骤2.4、无菌状态下将无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤2.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,210r/mim,28℃培养3天,得到发酵用液体菌种;其中,液体发酵培养基为:可溶性淀粉4.5%(w/w),蔗糖0.5%(w/w),豆饼粉4.5%(w/w),nano30.2%(w/w),znso40.01%(w/w),kh2po40.001%(w/w),余量为水,以上质量百分含量总量为100%,ph7.4,121℃,20mim灭菌,备用;步骤2.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,210r/mim培养3天,有大量孢子产生,发酵结束;步骤2.7、将发酵完成的菌种吸附于灭菌糠粉或草木灰载体上,发酵完备的菌种与灭菌糠粉或草木灰载体的重量比为1:1-1:4,烘干,使其水分≤10%;步骤3、制备解淀粉芽孢杆菌活体菌种:步骤3.1、制备营养肉汤培养基,选用营养肉汤培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃左右加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;其中,营养肉汤培养基,按1.0l计,包括以下组分:蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0;步骤3.2、菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,37℃培养18小时,检查有无杂菌;步骤3.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,37℃培养18小时;步骤3.4、无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的营养肉汁培养基的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤3.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,37℃培养18小时,得到发酵用液体菌种;步骤3.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,37℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束;步骤3.7、将发酵完成的菌种吸附于灭菌糠粉或草木灰载体上,发酵完备的菌种与灭菌糠粉或草木灰载体的重量比为1:1-1:4,烘干,使其水分≤10%;步骤4、制备苏云金芽孢杆菌活体菌种:步骤4.1、制备营养肉汤培养基,选用营养肉汤培养基调节好ph值,121℃,0.15mp条件下灭菌20min,降温至45℃左右加入到试管和茄子瓶中,将处理好的试管和茄子瓶37℃培养24小时后,备用;步骤4.2、菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,30℃培养18小时,检查有无杂菌;步骤4.3、将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,30℃培养18小时;步骤4.4、无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液,菌悬液浓度为150-200亿/ml;步骤4.5、摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,30℃培养18小时,得到发酵用液体菌种;步骤4.6、发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束;步骤4.7、搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%;步骤5、称量:按照质量百分比称量以下组分:有机肥85份,细黄链霉菌1-10份,解淀粉芽孢杆菌1-4份,苏云金芽孢杆菌1-4份,黄腐酸钾1-3份;步骤6、将称量好的有机肥,细黄链霉菌,解淀粉芽孢杆菌,苏云金芽孢杆菌,黄腐酸钾进行混合,检验各活体菌数≥0.20亿个/克,有机质含量≥40%,水分含量≤30%,分大肠菌群数≤100个/g,检验合格后包装。实施例1步骤1、生物肥料的生产:(1)用禽粪便和秸秆做原料,其中,粪便与秸秆的重量比为8.5:1.5,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%。(2)加入石灰粉调节到合适的ph到7.0,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天左右,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成。烘干,使其水分含量≤30%即可。步骤2、细黄链霉菌活体菌种的制备,采用固态发酵产孢子:(1)菌种活化:将保藏的细黄链霉菌接种至高氏合成1号培养基试管斜面上,28℃培养2-3天,检查有无杂菌。其中,高氏合成1号培养基:可溶性淀粉20.0g,k2hp40.5g,nacl0.5g,kno31.0g,mgso4·7h2o0.5g,feso40.01g,蒸馏水1.0l,ph7.2-7.4,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至高氏合成1号培养基的茄子瓶斜面上,28℃培养3天。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,210r/mim,28℃培养3天,得到发酵用液体菌种。其中,液体发酵培养基为:可溶性淀粉4.5%(w/w),蔗糖0.5%(w/w),豆饼粉4.5%(w/w),nano30.2%(w/w),znso40.01%(w/w),kh2po40.001%(w/w),余量为水,以上质量百分含量总量为100%,ph7.4,121℃,20mim灭菌备用。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,210r/mim培养3天,有大量孢子产生,发酵结束。(6)搅拌液体使孢子分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤3、解淀粉芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,37℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,37℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,37℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,37℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤4、苏云金芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,30℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,30℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,30℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤5、称量:按照质量份称量以下组分:生物肥85份,细黄链霉菌菌粉4份,解淀粉芽孢杆菌菌粉4份,苏云金芽孢杆菌菌粉4份,黄腐酸钾3份;步骤6、将称量好的生物肥,细黄链霉菌菌粉,解淀粉芽孢杆菌菌粉,苏云金芽孢杆菌菌粉和黄腐酸钾进行混合,即得本产品,产品最终有效活菌数为10亿/g,有机质含量≥40%,水分含量≤30%,粪大肠菌群数≤100个/g,符合标准。实施例2步骤1、生物肥料的生产:(1)用禽粪便和秸秆做原料,其中,粪便与秸秆的重量比为8:2,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%。(2)加入石灰粉调节到合适的ph到7.2,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天左右,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成。烘干,使其水分含量≤30%即可。步骤2、细黄链霉菌活体菌种的制备,采用固态发酵产孢子:(1)菌种活化:将保藏的细黄链霉菌接种至高氏合成1号培养基试管斜面上,28℃培养2-3天,检查有无杂菌。其中,高氏合成1号培养基:可溶性淀粉20.0g,k2hp40.5g,nacl0.5g,kno31.0g,mgso4·7h2o0.5g,feso40.01g,蒸馏水1.0l,ph7.2-7.4,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至高氏合成1号培养基的茄子瓶斜面上,28℃培养3天。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,210r/mim,28℃培养3天,得到发酵用液体菌种。其中,液体发酵培养基为:可溶性淀粉4.5%(w/w),蔗糖0.5%(w/w),豆饼粉4.5%(w/w),nano30.2%(w/w),znso40.01%(w/w),kh2po40.001%(w/w),余量为水,以上质量百分总量为100%,ph7.4,121℃,20mim灭菌备用。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,210r/mim培养3天,有大量孢子产生,发酵结束。(6)搅拌液体使孢子分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤3、解淀粉芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,37℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,37℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,37℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,37℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤4、苏云金芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,30℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,30℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,30℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤5、称量:按照质量份称量以下组分:将生物肥85份,细黄链霉菌菌粉7份,解淀粉芽孢杆菌菌粉3.5份,苏云金芽孢杆菌菌粉3.5份,黄腐酸钾1份;步骤6、将称量好的生物肥,细黄链霉菌菌粉,解淀粉芽孢杆菌菌粉,苏云金芽孢杆菌菌粉和黄腐酸钾进行混合,即得本产品,产品最终有效活菌数为10亿/g,有机质含量≥40%,水分含量≤30%,粪大肠菌群数≤100个/g,符合标准。实施例3步骤1、生物肥料的生产:(1)用禽粪便和秸秆做原料,其中,粪便与秸秆的重量比为9:1,将原料粉碎后搅拌均匀,加水,使其含水量达到75%,再加入菌渣或尿素拌和均匀,其中,菌渣或尿素占粪便、秸秆和水混合物质量总量的1%。(2)加入石灰粉调节到合适的ph到6.8,将原料堆成条堆,当堆温升到60℃以上后,每隔4-5天翻堆一次,如此反复,使堆温保持在60℃以上12天左右,原料呈黑褐色、无臭味,温度开始降至常温,表明发酵完成。烘干,使其水分含量≤30%即可。步骤2、细黄链霉菌活体菌种的制备,采用固态发酵产孢子:(1)菌种活化:将保藏的细黄链霉菌接种至高氏合成1号培养基试管斜面上,28℃培养2-3天,检查有无杂菌。其中,高氏合成1号培养基:可溶性淀粉20.0g,k2hp40.5g,nacl0.5g,kno31.0g,mgso4·7h2o0.5g,feso40.01g,蒸馏水1.0l,ph7.2-7.4,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至高氏合成1号培养基的茄子瓶斜面上,28℃培养3天。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,210r/mim,28℃培养3天,得到发酵用液体菌种。其中,液体发酵培养基为:可溶性淀粉4.5%(w/w),蔗糖0.5%(w/w),豆饼粉4.5%w/w,nano30.2%(w/w),znso40.01%(w/w),kh2po40.001%(w/w),余量为水,以上质量百分总量为100%,ph7.4,121℃,20mim灭菌备用。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,210r/mim培养3天,有大量孢子产生,发酵结束。(6)搅拌液体使孢子分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤3、解淀粉芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,37℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,37℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,37℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,37℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤4、苏云金芽孢杆菌活体菌种的制备(1)菌种活化:将保藏的解淀粉芽孢杆菌接种至营养肉汁培养基试管斜面上,30℃培养18小时,检查有无杂菌。其中,营养肉汤培养基(按1.0l计):蛋白胨10.0g,nacl5.0g,牛肉提取物3.0g,ph7.0,121℃,20mim灭菌备用。(2)将活化好的试管斜面菌种划线接种至营养肉汁培养基的茄子瓶斜面上,30℃培养18小时。(3)无菌状态下将100ml无菌蒸馏水加入培养好的茄子瓶中,用接种环轻轻刮下菌苔,摇匀制成菌悬液。(4)摇瓶发酵菌种液的制备:将制好的菌悬液接种到液体三角瓶发酵培养基中,1000ml三角瓶装液量200ml,接种量3%,200r/mim,30℃培养18小时,得到发酵用液体菌种。(5)发酵生产:收集上述摇瓶发酵液,接种至300l液体发酵罐中,接种量5%,装量240l液体发酵培养基,30℃,200r/mim培养24小时,镜检,当菌液浓度达到100亿/ml时,发酵结束。(6)搅拌液体使菌体分布均匀,按液体:糠粉=1:2(重量比)的比例加入灭菌糠粉,进行吸附,吸附后的糠粉低温烘干使其水分≤10%。步骤5、称量:按照质量份称量以下组分:生物肥85份,细黄链霉菌菌粉9份,解淀粉芽孢杆菌菌粉3份,苏云金芽孢杆菌菌粉1份,黄腐酸钾1.5份;步骤6、将称量好的生物肥,细黄链霉菌菌粉,解淀粉芽孢杆菌菌粉,苏云金芽孢杆菌菌粉和黄腐酸钾进行混合,即得本产品,产品最终有效活菌数为10亿/g,有机质含量≥40%,水分含量≤30%,粪大肠菌群数≤100个/g,符合标准。下面结合实施例1-实施例3说明本发明的技术效果:一、抑菌实验:采用打孔法进行抑菌实验,将按照各个实施方案配制好的成品样分别与草莓根腐病进行抑菌实验,五个重复,根据抑菌圈大小确定本发明的最佳配比。将培养好的草莓根腐病菌制成浓度100个/ml的菌悬液,取此菌悬液0.1ml涂布于pca培养基上(要求菌落均匀、致密分布),30℃培养,待菌落长出、肉眼可见后,用无菌打孔器在培养基上均匀打三个孔,并以火焰封底,做好标记。将适量的上述三个样品放入对应的孔中,并加入一滴无菌水,重复五次。以只接入根腐病菌的培养皿为对照,另取一打好孔的培养皿,每个孔中只加入一滴无菌水,作为空白。30℃培养,定期观察抑菌情况。测量抑菌圈直径,其大小反映拮抗的强弱,用“+”表示,“+”越多,表示其拮抗效果越明显。结果见下表1:表1从以上结果可以看出,实施例1有一定的抑菌性但不明显;实施例2也有一定的抑菌性,有的比实施例1效果好,但不太稳定;实施例3抑菌效果明显、稳定。二、杀虫效果实验取一灭菌后的500ml烧杯,称取本产品100g加入无菌水200ml,封闭杯口,20度左右下放置24小时,过滤液体,取干净小白菜叶子数片,浸入过滤后的液体中2分钟,取出晾干备用。捉取菜青虫10只,放入此前制备好的菜叶,饲养。每天观察虫子的生长情况,共计6天。结果:经过观察,菜青虫在第一、二天进食正常,无明显变化;从第三天开始有5只出现行动迟缓、少进食现象;第四天共有7只出现不进食、行动迟缓、身体僵硬的菜青虫;6天实验结束后死亡菜青虫8只,死亡率80%。由此证明本发明有一定的杀虫效果。三、对作物的产量影响在同一区域取平行排列的1.5m×4m试验田四块,保持其原始肥力相当,种植上海青小白菜,分别施用本发明实施例1-3和对照,实施例1-3施用本发明制备的产品按20kg/亩的施肥量作为底肥。对照组施用市售的氮肥、磷肥、钾肥作为底肥,按总量20kg/亩,氮肥:磷肥:钾肥=2:1:5的比例,氮肥5kg/亩,磷肥5kg/亩,钾肥10kg/亩进行施用,各组除施用底肥不同,后期管理和施肥均相同。作物收获后记录产量。如下表2:表2实施例1实施例2实施例3对照平均产量(kg/亩)2750270029002100从结果可以看出,使用本发明的产品作为底肥的区块,小白菜的平均产量都比对照组的产量高,至少增产(实施例2)29%,最高增产(实施例3)38%,说明本发明能有效增加作物产量。上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例,但如前所述,应当理解发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围,则都应在发明所附权利要求的保护范围内。当前第1页12
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