专利名称：小分子肺癌抗体导向免疫毒素及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素及其制备方法和用途。
肺癌是一种常见的肿瘤，在世界范围内其发病率和死亡率均居各种肿瘤的首位，自40年代以来，肺癌的发病率逐年上升，90年代初我国的肺癌发病率位48.5/10万，目前我国的肺癌死亡率已上升为恶性肿瘤死亡率的第三位，研究表明中国人属肺癌易患人群。(2000.4.6《人民卫生报》)，在上海肺癌死亡率已上升为恶性肿瘤死亡率的第一位。肺癌的早期发现难，尤其是小细胞肺癌易于早期和广泛转移存活率低，5年以上生存率仅为13％。
目前对肺癌的诊断方法有，细胞学检查、侵入性检查、X片、CT扫描、NMR、CT引导下的胸穿针吸等，各种方法都有不同的缺陷，X片、CT扫描、NMR等方法对早期诊断的效果不好，细胞学检查和侵入性检查对外周孤立性肺结节的诊断用处不大，CT引导下的胸穿针吸假阴性率高，易发生气胸。对肺癌的治疗目前也没有特别有效的方法。
本发明的目的是建立一对各种肺癌均有良好特异性和敏感性的小分子抗体导向免疫毒素的制备方法及用途。
为了达到上述目的，本发明采取下列措施小分子肺癌抗体导向免疫毒素，其基因和氨基酸序列为ATG GGC AAG GAA TCC CGG GCC AAG AAA TTC CAG CGG CAG CAT ATGGAC TCA GAC AGT TCC CCC AGC AGC AGC TCC ACC TAC TGT AAC CAAATG ATG AGG CGC CGG AAT ATG ACA CAG GGG CGG TGC AAA CCA GTGAAC ACC TTT GTG CAC GAG CCC CTG GTA GAT GTC CAG AAT GTC TGTTTC CAG GAA AAG GTC ACC TGC AAG AAC GGG CAG GGC AAC TGCTAC AAG AGC AAC TCC AGC ATG CAC ATC ACA GAC TGC CGC CTG ACAAAC GGC TCC AGG TAC CCC AAC TGT GCA TAC CGG ACC AGC CCG AACGAG AGA CAC ATC ATT GTG GCC TGT GAA GGG AGC CCA TAT GTG CCAGTC CAC TTT GAT GCT TCT GTG GAG GAC TCT ACC GCA AAG AAG CTCAAC GAC GCA CAG GCA CCT AAG TCA GAT CAG GTC CAA CTG CAGGAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCT GGA GGG TCC CTG AAACTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGC TAT GCC ATGTCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TGG GTCGCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TAT CCA GAC AAT GTGAAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCC GGG AAC ATC CTGTTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC ACG GCC ATG TATTAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACC TAC ACA TAT GCTATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGTGGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCGGAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCT GCA TCT CCAGGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCA AGT ATA AGTTCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAA ACC TCC CCCAAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCT GGA GTC CCTGTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TAT TCT CTC ACAATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TAT TAC TGT CAACAG TGG AGT AGT TAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGG ACC AAG TTGGAG ATC AAA CGG小分子肺癌抗体导向免疫毒素的制备方法的步骤如下1)取新鲜肺小细胞癌和肺腺癌组织匀浆，用抗人正常肺组织抗血清复被后免疫小鼠，取被免疫小鼠脾细胞和同系的骨髓瘤细胞SP20杂交融合，得多株单克隆抗体，经筛选获得一株对各种亚型的肺癌均有良好特异性和敏感性的单克隆抗体LA1。
2)在37℃，5％CO2条件下培养单克隆抗体细胞LA1，当培养至107/ml时，用Trizol反应液提取细胞的总RNA，用逆转录酶逆转录成cDNA，以重链3′引物TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CAG，5′引物AG GTCCAA CTG CAG GAG TCA GG和轻链5′引物GAC ATT GAG CTC ACC CAGTCT CCA，3′引物G TTT GAT CTC GGT CCC，为引物用PCR的方法进行基因扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。
3)用基因片段C TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCCTCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGCGGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT C和轻链3′引物修饰扩增轻链可变区，用各200ng的重链可变区基因和经修饰的轻链可变区基因进行SOE连接。所得基因用重链5′引物和轻链3′引物进行基因扩增。将扩增所得的基因命名为SLA1，将该基因克隆到pBluescript并测序。
4)用RNA5′引物ATA GGC GCC ATG GGC GAA TCC CGG GCC AAGAAA TTC CGG GCC AAG AAA TTC，RNA 3′引物CCC TGA CTC CTG CAGTTG GAC CTG ATC TGA CTT AGG TGC CTG TGC GTC GTT GAG CTT CTTTGC GGT AGA GTC CTC CAC AGA AGC ATC，扩增人胰腺RNA酶基因，用各200ng的RNA酶基因和SLA1基因进行SOE连接，所得的免疫毒素基因用RNA5′引物和轻链3′引物进行扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。
5)基因组装到质粒pGEX-4T-2，用该质粒转化大肠杆菌B121(λDE3)，在37℃用含有20μg/ml Amp的LB培养基，摇床培养含有SLA1基因的大肠杆菌6小时，收集大肠杆菌，在0.1mol/l的PBS缓冲液中用溶菌酶酶解10分钟，超声波裂解30分钟(超声1分钟，冰浴1分钟)，6000rmp离心20分钟收集包涵体，经透析后用4mol/l的尿素复性，过GST柱，用2μg/ml的谷光苷肽洗液洗脱，收集得到纯化的小分子抗体导向免疫毒素。
小分子肺癌抗体导向免疫毒素的用途是将肺癌抗体SLA1与其他生物或化学物质连接后用于肺癌的诊断和治疗。
本发明的优点是1)经筛选获得的抗体分泌株对四种类型的肺癌均有良好的敏感性和特异性，克服了以往一些抗体对某种肺癌敏感对其他类型敏感性或特异性不够的缺点，使应用面更广；2)本抗体的分子量只有原代抗体的1/8，抗体更容易透过血管壁和组织间隙，从而提高抗体到达靶细胞的量，使抗体的用量更少，疗效更好副作用更少。并且由于抗体分子量较小，使抗体本身的抗原性大大降低，避免了免疫排斥现象的发生，更加安全；3)在抗体制备的过程中没有使用有毒的微生物或试剂，进一步保证了安全性。
下面结合实施例对本发明作详细说明。
上述肺癌抗体SLA1的基因和氨基酸序列为CAG GTC CAA CTG CAG GAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCTGGA GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTCAGT AGC TAT GCC ATG TCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGGCTG GAG TGG GTC GCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TATCCA GAC AAT GTG AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCCGGG AAC ATC CTG TTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GACACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACCTAC ACA TAT GCT ATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACCGTC TCC TCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGTGGC GGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCTGCA TCT CCA GGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCAAGT ATA AGT TCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAAACC TCC CCC AAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCTGGA GTC CCT GTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TATTCT CTC ACA ATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TATTAC TGT CAA CAG TGG AGT AGTTAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGGACC AAG TTG GAG ATC AAA CGG肺癌抗体SLA1导向免疫毒素TI的基因和氨基酸序列为ATG GGC AAG GAA TCC CGG GCC AAG AAA TTC CAG CGG CAG CAT ATGGCC TCA GAC AGT TCC CCC AGC AGC AGC TCC ACC TAC TGT AAC CAAATG ATG AGG CGC CGG AAT ATG ACA CAG GGG CGG TGC AAA CCA GTGAAC ACC TTT GTG CAC GAG CCC CTG GTA GAT GTC CAG AAT GTC TGTTTC CAG GAA AAG GTC ACC TGC AAG AAC GGG CAG GGC AAC TGCTAC AAG AGC AAC TCC AGC ATG CAC ATC ACA GAC TGC CGC CTG ACAAAC GGC TCC AGG TAC CCC AAC TGT GCA TAC CGG ACC AGC CCG AACGAG AGA CAC ATC ATT GTG GCC TGT GAA GGG AGC CCA TAT GTG CCAGTC CAC TTT GAT GCT TCT GTG GAG GAC TCT ACC GCA AAG AAG CTCAAC GAC GCA CAG GCA CCT AAG TCA GAT CAG GTC CAA CTG CAGGAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCT GGA GGG TCC CTG AAACTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGC TAT GCC ATGTCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TGG GTCGCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TAT CCA GAC AAT GTGAAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCC GGG AAC ATC CTGTTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC ACG GCC ATG TATTAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACC TAC ACA TAT GCTATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGTGGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCGGAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCT GCA TCT CCAGGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCA AGT ATA AGTTCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAA ACC TCC CCCAAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCT GGA GTC CCTGTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TAT TCT CTC ACAATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TAT TAC TGT CAACAG TGG AGT AGT TAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGG ACC AAG TTGGAG ATC AAA CGG生物或化学物质为RNA酶、I131。
2)在37℃，5％CO2条件下培养单克隆抗体细胞LA1，当培养至107/ml时，用Trizol反应液提取细胞的总RNA，用逆转录酶逆转录成cDNA，以重链3′引物TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CAG，5′引物AG GTCCAA CTG CAG GAG TCA GG和轻链5′引物GAC ATT GAG CTC ACC CAGTCT CCA，3′引物G TTT GAT CTC GGT CCC，为引物用PCR的方法进行基因扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。
3)用基因片段C TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCCTCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGCGGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT C和轻链3′引物修饰扩增轻链可变区，用各200ng的重链可变区基因和经修饰的轻链可变区基因进行SOE连接。所得基因用重链5′引物和轻链3′引物进行基因扩增。将扩增所得的基因命名为SLA1，将该基因克隆到pBluescript并测序。
4)用RNA5′引物ATA GGC GCC ATG GGC GAA TCC CGG GCC AAGAAA TTC CGG GCC AAG AAA TTC，RNA 3′引物CCC TGA CTC CTG CAGTTG GAC CTG ATC TGA CTT AGG TGC CTG TGC GTC GTT GAG CTT CTTTGC GGT AGA GTC CTC CAC AGA AGC ATC，扩增人胰腺RNA酶基因，用各200ng的RNA酶基因和SLA1基因进行SOE连接，所得的免疫毒素基因用RNA5′引物和轻链3′引物进行扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。
5)将基因组装到质粒pGEX-4T-2，用该质粒转化大肠杆菌B121(λDE3)，在37℃用含有20μg/ml Amp的LB培养基，摇床培养含有SLA1基因的大肠杆菌6小时，收集大肠杆菌，在0.1mol/l的PBS缓冲液中用溶菌酶酶解10分钟，超声波裂解30分钟(超声1分钟，冰浴1分钟)，6000rmp离心20分钟收集包涵体，经透析后用4mol/l的尿素复性，过GST柱，用2μg/ml的谷光苷肽洗液洗脱，收集得到纯化的小分子抗体导向免疫毒素。生物测定1)单克隆抗体特异性和敏感性测定用免疫荧光发测定单克隆抗体LA1和肺腺癌、肺磷癌、肺大细胞癌、肺小细胞癌及肺正常组织、肝癌、组织结合的特异性和敏感性，结果如下组织名称 例数阳性(％) 阴性(％)肺腺癌 20 17(85％)3(15)肺磷癌 18 15(83.3％)3(16.7％)肺大细胞癌 16 13(81.3％)3(18.7％)肺小细胞癌 12 10(83.3％)2(16.7％)肺正常组织 20 0 20(100％)肝癌 15 0 15(100％)胃癌 20 0 20(100％)结论抗体LA1对各种类型的肺癌均有良好的特异性和敏感性。
2)小分子抗体SLA1活力的测定用肺癌细胞包被96孔板(5×105个/孔)，用纯化复性的小抗体和抗体LA1温育竞争，再用抗原代单抗恒定区的酶标抗体识别显色，根据吸光值测定活力大小。
组别 吸光值阴性对照组PBS 0.098阳性对照组(原代单抗) 1.320SLA1原液(1.322mg/ml) 0.233SLA1 1/2稀释液 0.363SLA1 1/4稀释液 0.405SLA1 1/8稀释液 0.485SLA1 1/16稀释液 0.602SLA1 1/32稀释液 0.711SLA1 1/1000稀释液 1.30结论小分子抗体SLA1与原代抗体具有竞争活性。
3)小分子抗体导向免疫毒素TI的活性测定(1)结合活力的测定同2；(2)细胞毒性的测定每瓶接种5×105个肺癌细胞，在37℃、5％CO2条件下培养细胞，将免疫毒素TI30μg/ml加入到肺癌细胞培养液中，培养、观察细胞凋亡的情况。第6天时观察到细胞全部萎缩凋亡。结论小分子抗体导向免疫毒素TI具有良好的特异性和敏感性，并具有非常强的细胞毒性。
权利要求
1.一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素，其特征在于其基因和氨基酸序列为ATG GGC AAG GAA TCC CGG GCC AAG AAA TTC CAG CGG CAG CAT ATGGAC TCA GAC AGT TCC CCC AGC AGC AGC TCC ACC TAC TGT AAC CAAATG ATG AGG CGC CGG AAT ATG ACA CAG GGG CGG TGC AAA CCA GTGAAC ACC TTT GTG CAC GAG CCC CTG GTA GAT GTC CAG AAT GTC TGTTTC CAG GAA AAG GTC ACC TGC AAG AAC GGG CAG GGC AAC TGCTAC AAG AGC AAC TCC AGC ATG CAC ATC ACA GAC TGC CGC CTG ACAAAC GGC TCC AGG TAC CCC AAC TGT GCA TAC CGG ACC AGC CCG AACGAG AGA CAC ATC ATT GTG GCC TGT GAA GGG AGC CCA TAT GTG CCAGTC CAC TTT GAT GCT TCT GTG GAG GAC TCT ACC GCA AAG AAG CTCAAC GAC GCA CAG GCA CCT AAG TCA GAT CAG GTC CAA CTG CAGGAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCT GGA GGG TCC CTG AAACTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGC TAT GCC ATGTCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TGG GTCGCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TAT CCA GAC AAT GTGAAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCC GGG AAC ATC CTGTTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC ACG GCC ATG TATTAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACC TAC ACA TAT GCTATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGTGGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCGGAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCT GCA TCT CCAGGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCA AGT ATA AGTTCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAA ACC TCC CCCAAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCT GGA GTC CCTGTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TAT TCT CTC ACAATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TAT TAC TGT CAACAG TGG AGT AGT TAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGG ACC AAG TTGGAG ATC AAA CGG
2.一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素的制备方法，其特征在于它的步骤如下1)取新鲜肺小细胞癌和肺腺癌组织匀浆，用抗人正常肺组织抗血清复被后免疫小鼠，取被免疫小鼠脾细胞和同系的骨髓瘤细胞SP20杂交融合，得多株单克隆抗体，经筛选获得一株对各种亚型的肺癌均有良好特异性和敏感性的单克隆抗体LA1。2)在37℃，5％CO2条件下培养单克隆抗体细胞LA1，当培养至107/ml时，用Trizol反应液提取细胞的总RNA，用逆转录酶逆转录成cDNA，以重链3′引物TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CAG，5′引物AG GTCCAA CTG CAG GAG TCA GG和轻链5′引物GAC ATT GAG CTC ACC CAGTCT CCA，3′引物G TTT GAT CTC GGT CCC，为引物用PCR的方法进行基因扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。3)用基因片段C TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCCTCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGCGGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT C和轻链3′引物修饰扩增轻链可变区，用各200ng的重链可变区基因和经修饰的轻链可变区基因进行SOE连接。所得基因用重链5′引物和轻链3′引物进行基因扩增。将扩增所得的基因命名为SLA1，将该基因克隆到pBluescript并测序。4)用RNA5′引物ATA GGC GCC ATG GGC GAA TCC CGG GCC AAGAAA TTC CGG GCC AAG AAA TTC，RNA 3′引物CCC TGA CTC CTG CAGTTG GAC CTG ATC TGA CTT AGG TGC CTG TGC GTC GTT GAG CTT CTTTGC GGT AGA GTC CTC CAC AGA AGC ATC，扩增人胰腺RNA酶基因，用各200ng的RNA酶基因和SLA1基因进行SOE连接，所得的免疫毒素基因用RNA5′引物和轻链3′引物进行扩增，将扩增的基因克隆到pBluescript并测序。5)基因组装到质粒pGEX-4T-2，用该质粒转化大肠杆菌B121(λDE3)，在37℃用含有20μg/ml Amp的LB培养基，摇床培养含有SLA1基因的大肠杆菌6小时，收集大肠杆菌，在0.1mol/l的PBS缓冲液中用溶菌酶酶解10分钟，超声波裂解30分钟(超声1分钟，冰浴1分钟)，6000rmp离心20分钟收集包涵体，经透析后用4mol/l的尿素复性，过GST柱，用2μg/ml的谷光苷肽洗液洗脱，收集得到纯化的小分子抗体导向免疫毒素。
3.根据权利要求2所述的一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素的制备方法，其特征在于所说的肺癌抗体SLA1的基因和氨基酸序列为CAG GTC CAA CTG CAG GAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCTGGA GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTCAGT AGC TAT GCC ATG TCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGGCTG GAG TGG GTC GCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TATCCA GAC AAT GTG AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCCGGG AAC ATC CTG TTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GACACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACCTAC ACA TAT GCT ATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACCGTC TCC TCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGTGGC GGA TCG GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCTGCA TCT CCA GGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCAAGT ATA AGT TCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAAACC TCC CCC AAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCTGGA GTC CCT GTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TATTCT CTC ACA ATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TATTAC TGT CAA CAG TGG AGT AGT TAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGGACC AAG TTG GAG ATC AAA CGG
4.根据权利要求2所述的一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素的制备方法，其特征在于所说的肺癌抗体SLA1导向免疫毒素TI的基因和氨基酸序列为ATG GGC AAG GAA TCC CGG GCC AAG AAA TTC CAG CGG CAG CAT ATGGAC TCA GAC AGT TCC CCC AGC AGC AGC TCC ACC TAC TGT AAC CAAATG ATG AGG CGC CGG AAT ATG ACA CAG GGG CGG TGC AAA CCA GTGAAC ACC TTT GTG CAC GAG CCC CTG GTA GAT GTC CAG AAT GTC TGTTTC CAG GAA AAG GTC ACC TGC AAG AAC GGG CAG GGC AAC TGCTAC AAG AGC AAC TCC AGC ATG CAC ATC ACA GAC TGC CGC CTG ACAAAC GGC TCC AGG TAC CCC AAC TGT GCA TAC CGG ACC AGC CCG AACGAG AGA CAC ATC ATT GTG GCC TGT GAA GGG AGC CCA TAT GTG CCAGTC CAC TTT GAT GCT TCT GTG GAG GAC TCT ACC GCA AAG AAG CTCAAC GAC GCA CAG GCA CCT AAG TCA GAT CAG GTC CAA CTG CAGGAG TCA GGG GGG GGC TTA GTG AAG CCT GGA GGG TCC CTG AAACTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGC TAT GCC ATGTCT TGG GTT CGC CAG GCT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TGG GTCGCA TCC ATT AAT TAT GGT GGT GAC ACC TAC TAT CCA GAC AAT GTGAAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAT AAT GCC GGG AAC ATC CTGTTC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC ACG GCC ATG TATTAC TGT GCA AGA GTT TCG TAC TAC GGT CGT ACC TAC ACA TAT GCTATG GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGTGGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCGGAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA GCA CTC ATG GCT GCA TCT CCAGGG GAG AAG GTC ACC ATC ACC TGC AGT GTC AGC TCA AGT ATA AGTTCC AGC AAC TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAG TCA GAA ACC TCC CCCAAA CCC TGG ATC TAT GGC ACA TCC AAC CTG GCT TCT GGA GTC CCTGTT CGC TTC AGT GGC AGT GGA TCT GGG ACC TCT TAT TCT CTC ACAATC AGC AAC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TAT TAC TGT CAACAG TGG AGT AGT TAC CCC CTC ACG TTC GGC TCG GGG ACC AAG TTGGAG ATC AAA CGG
5.一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素的用途，其特征在于将肺癌抗体SLA1与其他生物或化学物质连接后用于肺癌的诊断和治疗。
6.根据权利要求5所述的一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素的用途，其特征在于所说的生物或化学物质为RNA酶、I131。
全文摘要
本发明公开了一种小分子肺癌抗体导向免疫毒素及其制备方法和用途。用经抗正常肺细胞抗血清包被的肺癌细胞免疫小鼠,取小鼠脾脏分离B细胞,与骨髓瘤细胞SP20杂交,经筛选获得一株对各种肺癌均有良好特异性和敏感性的抗体分泌细胞株LA1。提取LA1细胞的总RNA,逆转录成cDNA,用RT PCR扩增抗体的重链和轻链可变区,再用多肽基因片段连接重链、轻链可变区和免疫毒素,将重组基因装入质粒pGEX－4T－2,用该质粒转化大肠杆菌B121(λDE3),发酵培养该大肠杆菌,经裂解、分离、纯化、复性,获得高纯度抗体导向的免疫毒素。
文档编号C07K14/47GK1370783SQ01104858
公开日2002年9月25日 申请日期2001年2月20日 优先权日2001年2月20日
发明者田建峰 申请人:田建峰