专利名称：一种内包裹免疫毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，更具体地，本发明公开了一种内包裹毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒、其制备方法及用途。
背景技术：
免疫毒素是由抗体或抗体片段和蛋白毒素(如绿脓杆菌外毒素PE)进行化学交联或基因融合而形成的复合物。目前，PE构建的免疫毒素是把除去细胞结合 部分的PE和抗体片段进行基因融合而形成的。尽管PE构建的免疫毒素在肿瘤的临床治疗中取得了令人瞩目的成就，然而，其临床应用仍然受限于免疫毒素的严重的非特异毒性，这些非特异毒性主要表现为肝毒性-由于免疫毒素和正常组织非特异性结合造成的一种非特异毒性，PE构建的免疫毒素中的毒素部分在非特异毒性中起着重要的作用。最近人们发现，一些方法(如降低免疫毒素的等电点)可以用作来降低免疫毒素的非特异毒性。此外，针对PE构建的免疫毒素中的毒素部分的免疫反应是治疗固体肿瘤的主要障碍，克服免疫毒素的免疫原性的方法一般为联合使用免疫抑制剂(CTLA4Ig或Rituximab)。如果能减小免疫毒素的免疫原性和非特异毒性，我们便可以加大免疫毒素的临床使用剂量，从而得到更好的临床效果。但是，除了聚乙二醇修饰免疫毒素以外，目前很少有同时可以解决这两个问题的方法。
发明内容
本发明的发明人经过大量实验，将通常应用于包裹小分子药物、减少这些药物毒副作用的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)来包裹PE毒素，这里优选PE38KDEL的I型突变体PE38KDEL I，为了增加其靶向性，本发明的发明人在包裹了 PE38KDEL I的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)表面通过碳化二亚胺技术连接人源化SM5-1单克隆抗体的Fab’片段，得到了一种内包裹PE38KDEL I型突变体，外连接人源化SM5-1抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。本发明的发明人利用本发明得到的内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源化SM5-1抗体Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒(以下简称PE-NP-S)进行了一系列的实验，实验结果表明PE-NP-S显示出更好的抗肿瘤活性，而且具有更小的非特异毒性和免疫原性，对抗PE中和性抗体的敏感度更低，达到了本发明的目的。本发明的发明人还公开了制备上述纳米颗粒的方法，包括首先制备包裹免疫毒素的纳米颗粒，然后在纳米颗粒表面连接抗体两个步骤。类似地，利用本发明公开的方法，还可以连接其它完整抗体或其它人源化抗体片段(例如Fab’片段或F(ab’ )2)得到外部连接上述抗体或片段的包裹了 PE38KDEL I型突变体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒，这些完整抗体或人源化抗体片段可为被肿瘤细胞内吞的抗体或其片段，如重组人源化抗J1ER2单克隆抗体(rhuMAbHER2)和重组人源化抗CD22单克隆抗体。
相应地，利用本发明公开的方法，还可以利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹其他类型的毒素然后再在其外部连接上述的抗体或抗体片段得到各种纳米颗粒，这些毒素可以为篤麻毒素和白喉毒素之一。本发明公开的纳米颗粒可以和其它药学上可接受的辅料一起组成药物制剂。这些药物制剂可以用于治疗肿瘤。肿瘤可以是SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤，或者是HER2、CD22表达阳性的肿瘤。所述的治疗SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤药物，包括但不限于缓解或/和减轻SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤的各种症状的药物。这里所述的SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤包括肝癌、乳腺癌及黑色素瘤等，优选肝癌。更具体地，本发明公开了 I. 一种内包裹免疫毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。2.如I所述的纳米颗粒，其中免疫毒素为篦麻毒素、白喉毒素、PE38KDEL I型突变体之一，抗体为人源化抗体或人源化抗体的Fab’片段。3.如2所述的纳米颗粒为内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源化SM5-1抗体Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。4.如3所述的纳米颗粒，其粒径为70 140nm，包裹效率为35 45%，抗体连接效率为15 25 ii g/mg纳米颗粒。5. 一种制备如I至4任一所述的纳米颗粒的方法，包括首先制备包裹免疫毒素的纳米颗粒，然后在纳米颗粒表面连接抗体两个步骤。6.如5所述的方法，其中制备包裹免疫毒素的纳米颗粒步骤包括a)将免疫毒素溶解到水性溶液中然后和聚乳酸-羟基乙酸共聚物一起加入到油性溶剂，超声得到油包水的初乳；b)利用a)得到的初乳制备复乳；c)复乳再加入到聚乙烯醇溶液中后，搅拌使有机溶剂挥发，溶液经过离心、水洗，低温冻干即制得成品纳米颗粒。7.如6所述的方法，其中步骤a)中的水性溶液为PBS，油性溶剂为乙酸乙酯。8.如6所述的方法，其中步骤a)还包括在溶解了免疫毒素的水性溶液中加入海藻糖。9.如5的方法，其中在纳米颗粒表面连接抗体步骤包括将包裹免疫毒素的纳米颗粒和EDC、NHS在避光的条件下共同孵育，然后将溶于HEPES (pH 7. 4)的抗体或抗体片段加入到沉淀的纳米球中避光反应而得。10.如1-4任一所述的纳米颗粒在制备治疗肿瘤药物中的用途。11.如10所述的用途，其中肿瘤为SM5-1结合蛋白抗原或Her2表达阳性的肿瘤。12.如11所述的用途，其中SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤为乳腺癌、黑色素瘤和肝癌。13.如12所述的用途，其中SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤为肝癌。在本发明中，如没有特别说明，PE-NP-S指的是本发明公开的内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源化SM5-1 Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒，Mut-I为SM5-1单链抗体和PE38KDEL I突变体进行基因融合后的免疫毒素(以下如果没有特别说明，PE38KDEL I均指PE38KDEL I突变体，各附图中也均同)，PE-NP为包裹PE38KDEL I的PLGA 纳米颗粒，FITC-PE-NP-S 为 FITC 标记的 PE-NP-S，PE-NP-CD25 为连接 anti_CD25 的Fab’片段的PE-NP。NP-S为不含免疫毒素的PLGA纳米颗粒(NP)连接上SM5-1的Fab’片段。
图I :PE-NP-S纳米颗粒的形态学和粒径分布图，其中图1-1 =PE-NP-S投射电镜(TEM)的形态学照片，分辨率为0.2微米，图1-2 =PE-NP-S通过粒径仪测定的粒径分布图。图2 :竞争结合实验结果，其中IX 105Ch_h印-3细胞和亚饱和浓度的FITC标记的鼠源SM5-1 (mSM5-l)、逐渐增高浓度的Mut-I、CD25-PE38KDEL或纳米颗粒在4°C孵育I小时，细胞洗涤后用流式进行分析。最大荧光强度定义为在没有竞争抗体时，FITC标记的鼠源SM5-1对Ch-hep-3细胞进行染色得到的平均荧光强度。所有数据为三次独立实验的平均值。
图3 =FITC-PE-NP-S结合并被Ch_h印_3细胞内吞的过程分析，Ch-hep-3细胞在下列时间被染色0，I和30分钟。图3-1 :Ch-h印-3细胞，孵育时间为I分钟，图3-2 Ch-hep-3细胞，孵育时间为30分钟，图3-3 QGY7701细胞，孵育时间为30min，其中图3_1_1为相差，图3-1-2为FITC的绿荧光，图3-1-3为4'，6 二脒基-2-苯吲哚盐酸(对细胞核进行染色)的蓝荧光，图 3-1-4 为重叠图象，图 3-2-1，3-2-2，3-2-3，3-2-4 及 3-3-1，3-3-2，3-3-3，3-3-4均同，分辨率为lOiim。图4 :抗PE抗体测定结果，图4-1 :鼠对PE38KDEL I的IgG反应，5组小鼠在箭头所指的时间分别免疫了 lmg/kg 的 PE-NP-S，PE-NP, PE-NP-CD25，Mut_I，和 PE38KDEL I，血清中抗PE IgG水平在第21天被检测；对照组免疫PBS ;*，P < 0. 05 ;图4-2 :抗PE中和性
测定结果。图5 :] 此-1和？￡-册-5对841^/(3裸鼠的抗肿瘤效应，5\106 Ch_h印_3细胞在第O天皮下注射到小鼠中，一旦肿瘤长到了 50mm3，在第5，7和9天(箭头所指)，小鼠接受每天两次的静脉治疗，每组6只小鼠。数据显示为平均肿瘤体积土标准差(n = 6)。图5有八个治疗组，分别为 PBS、PE38KDEL I (5mg/kg) ,PE-NP (5mg/kg,按包裹的 PE38KDEL I 计算)+SM5-1Fab’ (按实际抗体连接效率与毒素包裹效率折算，抗体量与5mg/kg剂量的PE-NP-⑶25上连接的抗体等量)、PE-NP-CD25 (5mg/kg,包裹的PE38KDEL I的并连接anti_CD25单抗Fab’片段的PLGA纳米颗粒，按包裹的PE38KDEL I计算)、PE-NP-S (0. 5mg/kg,包裹PE38KDEL I并连接SM5-lFab’片段的PLGA纳米颗粒，按包裹的PE38KDEL I计算),PE-NP-S (2. 5mg/kg,按包裹的 PE38KDEL I 计算)、Mut-I (0. 5mg/kg)、Mut-I (5mg/kg)。
具体实施例方式以下实施例、实验例仅仅对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。PE38KDEL I 的制备、纯化和分析方法见(Wang H, Song S, Kou G, et al. Treatmentof hepatocellular carcinoma in a mouse xenograft model with an immunotoxinwhich is engineered to eliminate vascular leak syndrome. Cancer ImmunolImmunother 2007 ；56(11) 1775-1783. Song S，Xue J，Fan K，et al. Preparationand characterization of fusion protein truncated Pseudomonas ExotoxinA(PE38KDEL-I) in Escherichia coli. Protein Expr Purif 2005 ；44 :52-7.);人源化SM5-1 单克隆抗体通过Li B,Wang H, Zhang D，et al. Construction and characterizationof a high-affinity humanized SM5—1 monoclonal antibody. Biochem Biophys ResCommun 2007 ；357(4) :951-6中提供的方法，用Protein A柱对表达人源化SM5-1单克隆抗体的CHO细胞(中国仓鼠卵巢癌细胞)的细胞上清进行亲和层析后得到；另外，除非特别提及，本文中的SM5-1指人源化SM5-1，人源化SM5-1单克隆抗体和人源化anti_CD25单克隆抗体的Fab’片段的方法制备得参见Martin FJ, Hubb ell WL, PapahadjopoulosD. Immunospecific targeting of liposomes to cells a novel and efficient methodfor covalent attachment of Fab’ fragments via disulfide bonds. Biochemistry1981 ；20 :4229-38.;三株肝癌细胞株Ch-hep-1，Ch-hep-3和QGY7701公开资料参见Preparation and Characterization of Paclitaxel-Ioaded PlGA Nanoparticles Coatedwith Cationic SM5—1 Single-chain Antibody,Journal of Biochemistry and MolecularBiology，Vo. 40，No. 5，September 2007，page 731-739 ;PLGA(乳酸和乙醇胺的摩尔比为50 : 50，RG503，分子量为 40 75kDa)购买自德国 Boehringer Ingelheim 公司；Mut_I 的制备方法参见Wang H，Song S，Kou G，et al. Treatment of hepatocellular carcinomain a mouse xenograft model with an immunotoxin which is engineered to eliminatevascular leak syndrome. Cancer Immunol Immunother 2007 ；56 (11) :1775-1783 ;其余化学试剂均购自sigma，为分析级纯度。实施例I :包裹PE38KDEL I的纳米颗粒PE-NP的制备PE38KDEL I按2mg/ml的浓度溶于PBS(pH 7. 4)，称取15毫克的海藻糖加入150 u I上述蛋白溶液，颠倒混匀至完全溶解后，再和40毫克的PLGA共同加入到I. 5毫升的乙酸乙酯中，在冰浴中超声15秒(功率为14瓦)(Branson Sonicator_ 450)得到初乳。然后，2毫升的聚乙烯醇(分子量25-35kDa)，水溶液(质量体积比为1% )加入到制备得到的初乳(油包水)中，再超声15秒(功率为14瓦)得到复乳水(油包水)。得到的复乳再加入到50毫升的聚乙烯醇(分子量25-35kDa)水溶液中(质量体积比为0. 3% )。最终的溶液再搅拌8小时使有机溶剂挥发，最后制得的纳米颗粒经过离心(30000gX30min)，水洗三次后，再低温冻干(冻干过程样品分装至冻干瓶中，2 5ml/瓶，在-20°C条件下预冻4小时，置冻干机内，层板温度设定为-40°C，待样品温度至_30°C以后，开启真空泵，冻干24小时，无菌条件下释放真空，并取出样品)即制得成品纳米颗粒PE-NP。空纳米颗粒NP的制备也是按照上述方法制备(不含2mg/kg的PE38KDEL I)。实施例2 :FITC (异硫氰酸荧光素)标记的PLGA纳米颗粒的制备IOOmg的PLGA溶于5毫升的无水二氯甲烷中，然后用1，3_ 二环己基碳二亚胺(0.7毫克)和N-羟基琥珀酰亚胺(0.4毫克)进行活化。反应4小时以后，副产品dicyclohexyliosurea 用透析的方法除去(透析方法参见 Ataman-Onal，Y.，Munier, S.，Ganee, A.，Terrat, C.，Durand，P. Y.，Battail，N.，Martinon，F.，Le, G. R.，Charles，M. H.，Delair, T.and Verrier, B. (2006)Surfactant-free anionic PLA nanoparticles coatedwith HIV-I p24 protein induced enhanced cellular and humeral immune responsesin various animal models. J. Control. Release 112,175-185.)。透析后，在上述反应液中加入0. 7毫克氨茶碱，反应4小时使PLGA的succinimidyl酯基团转变为伯胺基团，反应完毕，加入到500毫升的的_20°C预冷乙醚用沉淀法进行纯化，然后进行真空干燥(真空度20Pa、干燥温度为25°C、干燥时间12小时)。将溶于二甲亚砜(DMSO)的FITC(1. 2mg)和50毫克的具有伯胺基团的PLGA(真空干燥后的产品)反应。产物对去离子水透析(透析方法上面所述方法相同)后，冻干。将FITC标记的PLGA聚合物和PLGA按照I : 9的比例混合后，按照实施例I的复乳法来制得FITC标记的PLGA纳米颗粒FITC-PE-NP。实施例3 :靶向纳米颗粒的制备I毫升的PLGA纳米颗粒(实施例I产品PE-NP)溶液(5u g/u I, PE-NP溶于pH6. 3 的 IOmM NaH2PO4 水溶液)和 10 U I 的 50mg/ml EDC (l-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide)水溶液、10 u I 的 50mg/ml NHS (N-hydroxysuccinimide)水溶液共同避光孵育20分钟后，30000g离心10分钟后除去上清，然后将溶于50mM HEPES缓冲液(4-羟乙基哌嗪乙石黄酸，4-(2-hydroxyerhyl)piperazine-l-erhanesulfonic acid) (pH 7. 4)的 SM5-1或anti-⑶25Fab’ (I ug/u I)加入到沉淀的纳米颗粒中避光反应2小时后，离心，水洗后制得连接抗体片段的纳米颗粒PE-NP-S或PE-NP-⑶25。NP-S的制备可以利用实施例I得到的NP经过实施例3的步骤得到。FITC-PE-NP-S的制备可以利用实施例2得到的FITC-PE-NP通过实施例3的步骤得到。实验例除非特别说明，以下实验例均利用上述实施例得到的产品进行实验实验例I :包裹效率、平均粒径和粒径分布测定被PLGA纳米颗粒包裹进去的PE38KDELI的百分比为包裹效率，每毫克纳米颗粒中PE38KDEL I的含药量为PE38KDEL I的载药量，抗体片段连接效率为每毫克的PLGA纳米球连接的抗体片段的质量，包裹效率、PE38KDEL I的载药量和抗体片段连接效率都是通过 MicroBCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL)按说明书方法进行测定(Ofra Benny, Maayan Duvshani-Eshet, Theresa Cargioli, Lorenzo Bello, AndreasBikfalvi,Rona S. Carroll,and Marcelle Machluf,Continuous Delivery of EndogenousInhibitors from Poly(Lactic-Co-Glycolic Acid)Polymeric Microspheres InhibitsGlioma Tumor Growth, Clinical Cancer Research 2005 ；768 (11) :768-76)。纳米颗粒的平均粒径和粒径分布是由粒径仪Zeta Sizer 3000HS (Malvern,UK)测定的。纳米颗粒的表面形态和粒径是通过投射电镜JEOL 2010 Transmission Electronic Microscopy测定的。结果PE-NP-S的包裹效率为 41. 8±2. 3%，PE38KDEL I 的载药量是8. 5±0. 2 y g/mg,抗体连接效率是19. 4±2. g SM5-1的Fab’ /mg纳米颗粒(mean土SD ;n = 4)。通过Zeta Sizer 3000HS 粒径仪测量，PE-NP-S 的平均直径为 107. 7±30. 9nm(mean±SD ；n =10)。通过透射电镜TEM的观察，我们发现PE-NP-S的形状为圆形，而且粒径分布比较狭窄为 107. 67±27. 6nm，见图 I。对于PE-NP-⑶25进行上述实验也得到了相同的结果。实验例2 :竞争性结合的结合和内吞活性实验竞争性结合实验I X 105Ch-hep-3细胞和亚饱和浓度的FITC标记的鼠源SM5-1 (制备方法参见U. Trefzer, N. Rietz, Y. Chen, H. Audring, G. Herberth, P. Siegel,S. Reinke, P. Koniger, S. ffu, J. Ma, Y. Liu, H. Wang, ff. Sterry, Y. Guo, SM5-1 a newmonoclonal antibody which is highly sensitive and specific for melanocyticlesions, Arch. Dermatol. Res. 292(2000)583-589.)和逐渐增高浓度的鼠源 SM5-1、Mut-I或PE-NP-S在4 °C孵育I小时，同时以CD25-PE38KDEL、PE-NP-CD25作为阴性对照。细胞通过离心洗涤以后用流式细胞仪进行分析。流式细胞仪结果用FACScan flowcytometer(Becton Dickinson, San Jose, CA)来分析。竞争者的 IC5tl(半数抑制浓度)用四参数算法来计算，结果见图2，结果表明PE-NP-S和Mut-I都可以竞争性阻断鼠源SM5-1结合Ch-hep-3细胞，意味着它们都保留了特异性结合SM5-1结合蛋白抗原的能力。PE-NP-S的亲和力(平均IC50土SD，n = 3)为0. 40±0. 02 y g/ml，大大高于Mut-I的亲和力(16. 47±2. 69iig/ml)，而和鼠源SM5-1的亲和力(0. 32±0. 03 y g/ml)相似，意味着把SM5-1的Fab’抗体片段连接到纳米颗粒上没有改变它的结合活性，最大荧光强度定义为在没有竞争抗体时，FITC标记的鼠源SM5-1对Ch-hep-3细胞进行染色得到的平均荧光强度。
结合和内吞实验通过共聚焦显微镜来测定Ch_h印-3细胞和PE-NP-S在37°C孵育0，I或30分钟，然后用PBS洗涤两次，用10毫升的4% PFA (多聚甲醛)固定30分钟。最后，细胞用 Leica TCS SP2 Confocal Spectral Microscope (UV-VIS)进行拍照，照片用 Leica共聚焦软件分析，结果见图3，结果显示通过I分钟的孵育，FITC的荧光仅仅在Ch-hep-3细胞表面被检测到(图3-1)，在孵育30分钟以后，FITC荧光可以在Ch-hep-3细胞胞质内可以清楚的被检测到(图3-2)。然而，在SM5-1结合蛋白抗原表达阴性的细胞株QGY7701，则没有检测到任何FITC荧光(图3-3)。另外，本发明的发明人利用PE-NP和PE-NP-CD25进行了同样的实验，实验结果表明PE-NP和PE-NP-CD25与PE-NP-S结果相反，表明其均不能结合到细胞表面抗原从而不能被Ch-hep-3细胞内吞。本发明的发明人利用另外一株SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的细胞株Ch-hep-1也得到了与上述实验相似的结果。实验例3 :体外细胞毒性实验三株肝癌细胞在96孔板中以IX IO4/孔的密度在37°C，7. 5% CO2中培养24小时后，和 PE-NP-S、Mut-I 或PE38KDEL I、PE_NP+SM5_lFab’、PE_NP_CD25 在 37°C共孵育两天，药物中PE38KDEL I的浓度为I到10，OOOpM。细胞生存率用细胞效价非放射性细胞增殖试剂盒(Cell Titer 96 non-radioactive cell proliferation assay kit,Promega,Madison,WI，USA)来进行测定。简要地说，20 ill of MTS/PMS溶液加到每个孔中，在37°C孵育两个小时以后，用全自动定量绘图酶标仪在490nm波长进行读数，结果见表I。表I药物对肝癌细胞株的IC5tl(PM)
权利要求
1.一种内包裹免疫毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。
2.权利要求I所述的纳米颗粒，其中免疫毒素为篦麻毒素、白喉毒素、PE38KDELI型突变体之一，抗体为人源化抗体或人源化抗体的Fab’片段。
3.权利要求2所述的纳米颗粒为内包裹PE38KDELI型突变体外连接人源化SM5-1抗体Fab’片段的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒。
4.权利要求3所述的纳米颗粒，其粒径为70 140nm，包裹效率为35 45%，抗体连接效率为15 25 μ g/mg纳米颗粒。
5.一种制备权利要求I至4任一所述的纳米颗粒的方法，包括首先制备包裹免疫毒素的纳米颗粒，然后在纳米颗粒表面连接抗体两个步骤。
6.权利要求5所述的方法，其中制备包裹免疫毒素的纳米颗粒步骤包括 a)将免疫毒素溶解到水性溶液中然后和聚乳酸-羟基乙酸共聚物一起加入到油性溶齐U，超声得到油包水的初乳； b)利用a)得到的初乳制备复乳； c)复乳再加入到聚乙烯醇溶液中后，搅拌使有机溶剂挥发，溶液经过离心、水洗，低温冻干即制得成品纳米颗粒。
7.权利要求6所述的方法，其中步骤a)中的水性溶液为PBS，油性溶剂为乙酸乙酯。
8.权利要求6所述的方法，其中步骤a)还包括在溶解了免疫毒素的水性溶液中加入海藻糖。
9.权利要求5的方法，其中在纳米颗粒表面连接抗体步骤包括将包裹免疫毒素的纳米颗粒和EDC、NHS在避光的条件下共同孵育，然后将溶于HEPES (pH 7. 4)的抗体或抗体片段加入到沉淀的纳米球中避光反应而得。
10.权利要求1-4任一所述的纳米颗粒在制备治疗肿瘤药物中的用途。
11.权利要求10所述的用途，其中肿瘤为SM5-1结合蛋白抗原或Her2表达阳性的肿瘤。
12.权利要求11所述的用途，其中SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤为乳腺癌、黑色素瘤和肝癌。
13.权利要求12所述的用途，其中SM5-1结合蛋白抗原表达阳性的肿瘤为肝癌。
全文摘要
本发明属于生物医药领域，更具体地，本发明公开了一种内包裹毒素外连接抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒、其制备方法及用途。本发明公开的内包裹PE38KDEL I型突变体外连接人源化SM5-1抗体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物具有抗肿瘤活性高、非特异毒性和免疫原性小、对抗PE中和性抗体的敏感度低的优点，可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号A61K47/42GK102697733SQ20121016704
公开日2012年10月3日 申请日期2008年11月19日 优先权日2007年12月4日
发明者寇庚, 李博华, 王皓, 郭亚军, 高洁 申请人:上海抗体药物国家工程研究中心有限公司