专利名称：银杏黄酮甙快速微波水解方法
技术领域：
本发明涉及分析化学领域中用于快速分析银杏叶、银杏提取物及制剂的黄酮含量或用于甙元生产的样品水解前处理的银杏黄酮甙水解方法。
背景技术：
银杏叶及其提取物(GBE)已成为近几年国际市场最为畅销的植物药之一。其活性成分主要分为两类黄酮甙类(flavoinoid glycosides)和萜内酯类化合物(ginkgolides and bilobalide)。其中含黄酮类化合物约有38种，由于目前缺少必要的制备工艺，获得其相应的标准对照品较难，因此检测难度较大。而黄酮甙的定性定量分析对监控和检测银杏叶及其制剂的质量又至关重要的，这些黄酮类化合物中，其主要的甙元是槲皮素、山柰素、异鼠李素，A.Hasler等(Journal of chromatography，508(1990)236-240 and 605(1992)41-48)提出的酸水解法得到了普遍认同。其水解方法是用甲醇将原料溶解，加入一定量的盐酸水溶液，经回流水解60min，然后经液相色谱监测，测定其水解后的三个甙元的含量，再经换算可得其相应的黄酮化合物的含量。其后Michael G.L.等(J.Agric Food Chem.，40(1992)1591-1598)陈钧等(分析化学研究简报，9(2001)450-452)对此水解方法进行了优化，但是所用方法还是回流水解法，所用的时间较长，一般需2～4h。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以大大减少处理时间，且操作简单、高效的银杏黄酮甙的快速微波水解方法。
本发明的技术方案是这样实现的以银杏叶或及其提取物为原料，以甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇或丙酮等有机溶剂，加入一定量的磷酸、硫酸、盐酸水溶液，经微波辅助快速水解。
当用银杏黄酮提取物水解时步骤如下(1)配制水解液按有机溶剂5～40％(v/v)的酸水混合溶液＝4～10∶1(v/v)混合均匀；所述有机溶剂可以为甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、丙酮中的一种；所述酸水溶液为磷酸水溶液、硫酸水溶液、盐酸水溶液中的一种；(2)原料的溶解准确称取一定量的银杏提取物，放置于容器内，再按1∶40～200(g/ml)加入水解液，搅拌，使原料溶解完全；(3)微波辅助水解放入微波炉中，调节其功率为100～1200W，加热2～7min，取出容器并冷却，此时完全水解，经分析可得其黄酮的总含量。
当用银杏叶直接水解时步骤如下(1)准确称取一定量的银杏叶，按银杏叶有机溶剂＝1∶40-60(g/ml)加热回流提取1-1.5h，过滤，滤液放置于容器内，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、丙酮。
(2)加入水解液按1∶20～200(g/ml)加入上述水解液；(3)微波辅助水解放入微波炉中，调节其功率为100～1200W，加热2～7min，取出容器并冷却，此时完全水解，经分析可得其黄酮的总含量。
本发明所使用的微波加热器没有特殊的要求，只要能够透过微波，如聚四氟乙烯、陶瓷罐或者玻璃烧杯。而且最好能够带盖的容器，因为溶剂挥发对微波炉有腐蚀作用。
本发明的方法操作简单、快速、高效。该方法不需加热回流水解，且时间短，用微波辅助水解法，在2～7min内水解效果优于普通回流水解的2～4h。本方法适合于快速分析银杏叶、银杏提取物及制剂的黄酮含量，而且可用于甙元生产的样品水解前处理。
图1为银杏提取物黄酮甙微波水解液相色谱图；图2为银杏叶黄酮甙的微波水解液相色谱图；图3为银杏提取物普通回流水解液相色谱图。
具体实施例方式
实施例1准确称取0.500g银杏黄酮提取物，放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入80ml正丙醇和10ml浓度为35％的盐酸水溶液，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2450MHz，调节功率为280W的微波炉中，微波加热水解5min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，其高效液相色谱的条件如下流动相甲醇∶0.2％H3PO4水溶液＝60∶40(v/v)色谱柱250×4.6mm(大连江申)流速1.0ml/min检测波长360nm进样量10μl可得三甙元的质量百分含量分别为槲皮素6.41％，山柰素2.69％，异鼠李素0.92％。
对比实施例普通回流水解方法准确称取1.000g银杏黄酮含量为20％的银杏提取物，加入分析纯的甲醇溶液100ml和盐酸水溶液(30％)15ml，加热回流水解4h，冷却并过滤，经条件相同高效液相色谱分析，经外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，三甙元的质量百分含量分别为槲皮素5.69，山柰素2.51％，异鼠李素0.87％。可见用本发明的方法与传统方法比较水解还要完全。
实施例2准确称取1.000g银杏黄酮提取物，放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入60ml甲醇和10ml浓度为8％的硫酸水溶液，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为1200MHz，调节功率为800W的微波炉中，微波加热水解7min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例3准确称取1.000g银杏黄酮提取物，放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入80ml乙醇和10ml浓度为15％的磷酸水溶液，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2000MHz，调节功率为1200W的微波炉中，微波加热水解2min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例4准确称取0.5000g银杏黄酮提取物，放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入60ml正丁醇和10ml浓度为8％的硫酸水溶液，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2800MHz，调节功率为280W的微波炉中，微波加热水解5min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例5
准确称取0.5000g银杏黄酮提取物，放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入60ml丙酮和10ml浓度为8％的盐酸水溶液，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2800MHz，调节功率为1200W的微波炉中，微波加热水解5min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例6银杏叶黄酮甙的微波水解方法准确称取1.000g干燥的银杏叶，经50ml正丙醇回流提取1h，过滤，滤液放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入80ml正丙醇和10ml盐酸水溶液(浓度为35％)，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为3000MHz，调节功率为280W的微波炉中，微波加热水解3min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，三甙元的质量百分含量分别为槲皮素0.61％，山柰素0.32％，异鼠李素0.09％。
实施例7准确称取1.000g干燥的银杏叶，经50ml甲醇回流提取1h，过滤，滤液放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入100ml甲醇和20ml硫酸水溶液(浓度为8％)，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为1200MHz，调节功率为800W的微波炉中，微波加热水解7min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例8准确称取1.000g干燥的银杏叶，经50ml甲醇回流提取1h，过滤，滤液放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入60ml正丙醇和10ml磷酸水溶液(浓度为15％)，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2000MHz，调节功率为1200W的微波炉中，微波加热水解5min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
实施例9准确称取1.000g干燥的银杏叶，经50ml正丁醇回流提取1h，过滤，滤液放置于聚四氟乙烯提取罐中，加入80ml正丁醇和10ml磷酸水溶液(浓度为30％)，用玻璃棒搅拌，使其溶解完全，放入频率为2450MHz，调节功率为280W的微波炉中，微波加热水解5min，取出提取罐并冷却。将此水解后的溶液过0.45μm膜，经高效液相色谱分析，用外标法定量，高效液相色谱的条件同实施例1，可测得三甙元的质量百分含量。
权利要求
1.一种银杏黄酮提取物的微波辅助水解方法，其特征在于包括以下步骤(1)配制水解液按有机溶剂5～40％(v/v)的酸水混合溶液＝4～10∶1(v/v)混合均匀；所述有机溶剂可以为甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、丙酮中的一种；所述酸水溶液为磷酸水溶液、硫酸水溶液、盐酸水溶液中的一种；(2)原料的溶解准确称取一定量的银杏提取物，放置于容器内，再按原料∶水解液＝1∶40～200(g/ml)加入水解液，搅拌，使原料溶解完全；(3)微波辅助水解溶解的原料放入微波炉中，调节其频率为1000～3000MHz，功率为100～1200W，加热2～7min，取出容器并冷却，此时完全水解，经分析可得其黄酮的总含量。
2.银杏叶的微波辅助水解方法，其特征在于包括以下步骤(1)准确称取一定量的银杏叶，按银杏叶∶有机溶剂＝1∶40～60(g/ml)加热回流提取1～1.5h，过滤，滤液放置于容器内，所述有机溶剂可以为甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、丙酮中的一种；所述酸水溶液为磷酸水溶液、硫酸水溶液、盐酸水溶液中的一种；(2)加入水解液按滤液∶水解液＝1∶20～200(g/ml)加入上述水解液；(3)微波辅助水解放入微波炉中，调节其频率为1000～3000MHz，功率为100～1200W，加热2～7min，取出容器并冷却，此时完全水解，经分析可得其黄酮的总含量。
全文摘要
本发明公开了一种银杏黄酮甙快速微波水解方法。本方法适用于快速分析银杏叶、银杏提取物及制剂的黄酮含量，而且可用于甙元生产的样品水解前处理。本方法以银杏叶及其提取物为原料，以乙醇、正丙醇、正丁醇及其丙酮等有机溶剂加入一定量的磷酸、硫酸、盐酸水溶液作为水解液，经微波辅助快速水解。本方法较普通回流水解方法简单、快速、高效，在2～7min内水解效果优于普通回流水解的2～4h，速度提高了数十倍。可适用于分析样的前处理及黄酮甙元工业化生产的样品前处理。
文档编号C07D311/30GK1557813SQ200410022840
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月15日 优先权日2004年1月15日
发明者陈波, 姚守拙, 张斐, 陈 波 申请人:陈波, 陈 波