具有ceh活性增强作用和acat活性抑制作用的肽段,含有这些肽段的药用组合物及其在治...的制作方法

专利名称：具有ceh活性增强作用和acat活性抑制作用的肽段,含有这些肽段的药用组合物及其在治 ...的制作方法
技术领域：
肽段在抑制患者炎症部位或动脉硬化部位胆固醇的蓄积以及激活胆固醇动员和促进释放方面的作用已被证实，本发明涉及分离肽段，尤其是涉及人工合成肽段，包括运用化学方法和重组方法合成的肽段，上述肽段和化合物的模拟物，和含有一个或多个上述肽段或其中部分肽段或化合物或模拟物的药用组合物，另外本发明还提供了使用上述成份治疗冠心病，心血管疾病以及在治疗和/或预防动脉硬化和炎症方面的使用方法。
背景技术：
在北美，心血管疾病包括由动脉硬化引发的冠心病是成年人中单病因致病的最大病因。(2002 Heart and stroke最新统计数据)。冠状动脉粥样硬化的发展会进一步引发心脏病发作和心绞痛。据测算，1999年12,600,000美国人患有冠心病。1999年，美国和加拿大分别有超过500,000和42,000人死于该症，即五个死亡者中就有一个死于冠心病。据统计，约有超过102,000,000成年美国人其血液中胆固醇有濒于临界值水平的高风险或具有发展成冠心病的高风险，心脏病除了会给我们的健康维护体系带来直接的社会和经济负担外，其后遗症所带来的开支也是很可观。约有25％的男性和38％的女性死于心脏病发作后的一年内，由冠心病引起的死亡越来越趋向于青壮年(BRFSS，MMWRvol.49，No.SS-2，March 24，2000，CDC/NCHS)这就会使劳动者过早和永久地丧失劳动能力，从而进一步导致经济上的负担。1998年，因为冠心病，有超过100亿美元被用来支付给医疗保险受益人(Health Care Financing Review，Statistical Supplement，HFCA)。
现在患者可以选择多种药物去治疗心血管疾病/冠心病，这些药物分为不同的种类，包括抗高血压药物和抗高血脂药物，虽然这些药物被证明在减慢冠心病发展进程及预防心脏病发作方面有所帮助，但是由于某些个体的低耐受性或者在某些个体中肝的代偿所引起的药物作用降低，使这些药物的作用有局限性(Turley，S.D.(2002)Am.J.Managed Care 8(2 Suppl)S29-32)脂类，尤其是胆固醇在主动脉和动脉细胞如巨噬细胞和平滑肌细胞上的蓄积，是动脉硬化的主要病理特征(Gotlieb et al.(1999)BloodVessels.In Pathology.Rubin，E.and Farber，J.L.，editors.Lippincott-Raven，Philadelphia，New York.481-530)。研究的主要精力花在弄懂与这个问题相关的两个核心问题上，第一个是搞清胆固醇是如何传送到这些细胞内和如何被这些细胞所吸收的机制，第二个是这些细胞是如何外排并清除自身过剩的胆固醇。在动脉硬化的防治中，其中的一个目的就是限制细胞内的胆固醇的大量蓄积，因为大量的胆固醇会对细胞的生存有不利的影响，从而最终改变血管的完整性。
一组类似的结果发生于急性组织损伤中，损伤会导致局部细胞死亡并引发局部炎症，和全身急性期反应(Fantone，J.C.andWard，P.A.(1994)Inflammation.In Pathology.Rubin，E.and Farber，J.editors.Lippincott，philadelphia.32-6)。在这个过程中，局部胆固醇加工过程的变化是其中的要件，在急性组织损伤部位，死亡细胞释放大量包含富含胆固醇的细胞膜碎片的的细胞残骸(Fantone，J.C.and Ward，P.A.(1994)Inflammation.In Pathology.Rubin，E.and Farber，J.editors.Lippincott，philadelphia.32-6)作为急性炎症的一部分，巨噬细胞到达损伤的位置，摄取这些碎片以便用于后续处理，同时获得大量胆固醇，变成泡沫细胞，这一过程类似于动脉硬化中的过程，在急性组织损伤和随后的急性炎症反应中，通过胆固醇的清除机制，动员胆固醇使其外排或被再利用。
血清淀粉样蛋白A(SAA)，是肝脏组织受到损伤时发生应急反应而合成的急性期蛋白，在生理上作用与这些损伤事件及过程是相关的，SAA代表了一组有多基因家族编码的四个多态性蛋白，该多基因家族进化上保守，已有600,000,000年(Jensen等(1997)J.Immunol.158 384-392；Santiago et al.(2000)J.Exp.Zool.2883335-344)。异构体SAA1.1和SAA2.1出现于组织损伤的急性阶段的血浆中，对他们二者的研究最为深入。
对研究人员来说，对人类和模式动物的多SAA基因及其等位基因突变体，必需有一系统的命名，因此在1999年，血清淀粉样蛋白A的命名曾被修订过。最主要的修订是鼠源SAA1和SAA2的命名的重新指定。根据染色体作图，鼠源SAA2基因座与人源SAA1基因座相同，因此变化后的有关于鼠的命名与人的完全相容。
下面的图表列出了修正后的鼠类和人类蛋白的SAA命名及其相应序列，这些图表基于如下的于1999年公开的资料——amyloidInt.J.Exp.Clin.Invest 667-70，为了便于阐明联配方式以及为了能够为具有一个附加氨基酸残基的鼠源异构体SAA3的(-1)位残基编号，这里所列图表经过了修改。
表I鼠SAA蛋白
表II人SAA蛋白
在本专利申请中有关SAA蛋白命名用的是上表所列的修改后的命名法，但是必须要注意的是1999年以前出版的期刊和专利申请文件所用的是修改前的术语，例如当说到鼠SAA2时，实际是指鼠SAA1，反之亦然。
当导致组织损伤和炎症的各种原因存在时，主要会在肝细胞合成SAA异构体SAA1.1和SAA2.1(Morrow等(1981)Proc.Nat1.Acad.Sci.USA 784718-4722)。而SAA1.1和SAA2.1是由白介素-1、白介素-6和肿瘤坏死因子诱导合成的，它们由活化的巨噬细胞所释放，它们通过肝细胞的细胞质和细胞核中下游效应物发挥作用(Ed brooke等(1991)Cytokine 3380-388；Betts等(1993)J.Biol.Chem.26825624-25631；Ray等(1999)J.Biol.Chem.2744300-430810；和Sipe等(1987)LymphokineRes.693-101)。SAA1.1和SAA2.1基因的最大转录速度发生于损伤后的3-4小时内，而在18-24小时这两种蛋白的血浆浓度从1-5μg/ml上升到500-1000μg/ml(500-1000倍的增长)(McAdam等(1978)J.Clin.Invest.61.390-394；McAdam，K.P.，Sipe，J.D.(1976)J.Exp.Med.144.1121-1127)。SAA1.1和SAA2.1从肝细胞中分泌出来后，主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中，占HDL载脂蛋白的30％-80％，并形成了一种HDL载脂蛋白的主要重组形式(Benditt等(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.USA764092-4096；Hoffman，J.S.and Benditt，E.P.(1982)J.Biol.Chem.25710518-10522)。
现今，对组织损伤中观察到的SAA表达的加速对血管粥样硬化的病灶是有益的，还是会加速动脉硬化的进程这一问题仍有争议。
在临床病状显现前的早期病理学事件引起的动脉硬化中，可观察到SAA异构体水平的明显升高(reviewed in Kisilevsky，R.and Tam，S.-P.(2002)Pediatric Pathol.and Mol.Med.21291-303).因此一些研究人员会认为，SAA水平的升高可能导致动脉硬化(Jousilahti等(2001)Atherosclerosis 156451-456；Kumon等(1998)Scand.J.Immunol.48419-424；Liuzzo等.(1994)N.Engl.JMed.331417-424；Ridker等(1998)Circulation 98839-844；Rosenthal，C.J.和Franklin，E.C.(1975)J.Clin.Invest.962758-2767)。
但是，也有报道称，SAA及其异构体促进了巨噬细胞中胆固醇的外流。
例如，已经有证据表明HDL-SAA和LDL和VLDL接受胆固醇的能力有所降低，以确保HDL在进入巨噬细胞时尽可能少地携带胆固醇，因此，这种形式的HDL便有更大的能力从胆固负载的巨噬细胞中接受胆固醇，与单纯的HDL相比HDL-SAA则表现出高出其3-4倍的巨噬细胞亲和力。进一步说，源于动物急性期炎症期的巨噬细胞中，我们可以观察到HDL-SAA结合位点数量的上升。通过对巨噬细胞竞争性实验研究表明，未标记的HDL-SAA而不是HDL，有效地取代了放射性物质标记过HDL-SAA，这种优先的取代表明了巨噬细胞上存在SAA受体，这些SAA受体独立存在或依附于巨噬细胞中的apoA-1结合位点(Kisilevsky，R.和Subrahmanyan，L(1992)Lab.Invest.66778-785；U.S.Patent 6,004,936)。HDL-SAA与巨噬细胞结合后，很快进入被膜小窝；这一事实进一步支持SAA受体存在这一结论。这些小窝和衍生的内体与受体介导的内吞作用相一致，该过程依赖于细胞表面的硫酸肝素，SAA会与硫酸肝素有效结合。(Ancsin，J.和Kisilevsky，R.(1999)J.Biol.Chem.2747172-7181；Rocken，C.和Kisilevsky，R.(1997)Amyloid 4259-273)。
更多最新研究表明，SAA会增强巨噬细胞对HDL的摄取(Banka等(1995)J.Lipid Res.361058-10865)，并且表明SAA与胆固醇有亲和性(Liang，J.S.和Sipe，J.D.(1995)J.Lipid Res.3637-46)。利用人源apoSAA1，(现在用SAA1.1表示)1-18和40-63氨基酸残基对应的肽段和人源apoSAA4(现在用SAA4表示)1-18残基对应的肽段，我们发现apoSAA1而非apoSAA4将胆固醇连接于肽的氨基末端区域(Liang等(1996)J.Lipid Res.372109-2116)。
而且，据表明，是鼠源SAA2.1而不是鼠源SAA1.1能以剂量依赖的方式抑制含完整的鼠源巨噬细胞以及含巨噬细胞的后核匀浆的培养液中的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT)的活性(Ely等(2001)Amyloid 8169-181)。将用溴化氰作用后得到的鼠源SAA2.1裂解碎片用反相HPLC纯化，进一步研究表明，SAA2.1能够以剂量依赖的方式抑制ACAT的活性，而相反鼠源SAA2.1(24-103)对ACAT的活性无影响(Ely等(2001)Amyloid8169-181)。
据表明，鼠源SAA2.1也能激发体外肝、巨噬细胞和胰中胆固醇酯酶的活性(Lindhorst等(1997)Biochim.Biophys.Acta 1339143-154；Ely等(2001)Amyloid 8169-181；Tam等(2002)J.LipidRes.431410-1420)。通过溴化氰作用后得到的鼠源SAA2.1的裂片的分析表明，其功能部位是位于鼠源SAA2.1中距离COOH-末端80个残基区域(Ely等(2001)Amyloid 8169-181)该80残基区域包含鼠源SAA2.1 24-103残基。
通过对培养的巨噬细胞的实验证实，HDL-SAA和含有鼠源SAA2.1的脂质体能够显著降低酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性并能显善增强胆固醇的流出(Tam等(2002)J.LipidRes.431410-1420)。据报道，与未致炎的对照组小鼠相比，给致炎小鼠静脉注射[3H]-胆固醇负载的巨噬细胞后，流入到小鼠中的放射性标记的胆固醇有了3-3.5倍的增加(Tam等(2002)J.Lipid Res.431410-1420)。在这项研究中，巨噬细胞胆固醇流出是与ATP结合盒转运子ABCA1藕连的，ABCA1是胆固醇逆转运途径中第一步中的一个重要的蛋白。进一步，在组织培养中，用HDL-SAA2.1(鼠源)预处理[3H]-胆固醇负载的巨噬细胞，然后注射未致炎的小鼠，巨噬细胞中的胆固醇会迅速地流出至血浆中(Tam等(2002)J.Lipid Res.431410-1420)，而当只用HDL处理时，则没有观察到这种结果。
因此，异构体SAA1.1和SAA2.1在炎症发生时会上调，它们具化进化保守性，并且它们主要和HDL及HDL在胆固醇逆转运途径中已确定的作用相关的(Lindhorst等(1997)Biochem.Biochim.Biophys.Acta 1339143-154；Kisilevsky，R.(1991)Med.Hypotheses 35337-341；Kisilevsky，R.等(1996)Amyloid3252-260；和Kisilevsky，R.和Subranhmanyan，L(1992)Lab.Invest.66778-785)。
美国专利5,318,958公开了一种方法，这种方法通过施以有效剂量的连接在一个具有与HDL有SAA亲和力的配体上的HDL，激活体内巨噬细胞流出和聚集，这种方法中的首选配体是SAA本身。
美国专利6,004,936描述与美国专利5,318,958中相似的方法，但是专利6,004,936所述的方法中在施用于之前不需将具有SAA亲和力的配体连接在HDL上，这个专利表明首选的具有SAA亲和力的配体是SAA的非淀粉样蛋白基因异构体如SAA2.1。
发明概述这里表明，经过筛选的哺乳动物SAA肽段异构体SAA2.1和SAA1.1及其模拟物能够增强CEH的活性和/或抑制ACAT的活性。如这里所表明的，当存在胆固醇转运子和胆固醇受体HDL的情况下，这些肽段及其模拟物能够使巨噬细胞的胆固醇转变成易于转运的形式从而迅速地从细胞中排出。因此，这些肽段及其模拟物在对于抑制患者炎症部位或动脉硬化部位胆固醇的蓄积以及促使胆固醇从上述部位动员和释放方面是有用的。
相应地，本发明提供了肽段，化合物，这些肽段和化合物的模拟物以及含有上述物质的药用组合物。同时，提供了使用上述成份改进巨噬细胞胆固醇代谢酶即胆固醇酯水解酶活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的方法。
本发明的其中一个方面是关于肽段，肽突变体或模拟物，它们衍生于SAA上胆固醇酯水解酶增强区域或酰基辅酶A胆固醇酰基抑制区域。现已被证实，胆固醇酯水解酶活性增强区域位于鼠源SAA2.1 74-103残基的C-端和鼠源SAA1.1 77-103残基的C-端。酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域位于鼠源SAA2.11-16残基N-端和人源SAA1.1和SAA2.1 1-23残基N-端。首选的能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段或模拟物包括含有以下结构或其中部分结构的分离肽段或其模拟物X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸，X6是谷氨酸或赖氨酸或其保守替换氨基酸，并且X2，X3，X4，X5，X7，X8，X10，X11，X13，X14，X15，X16和X17各自可为任何的氨基酸，首选的肽段包含有
DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQEANHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；or或DQAANKWGRSGRDPNHFR(序列26)以及含上述肽段的模拟物，肽突变体或含有下述结构肽段的模拟物或其中部分结构DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)除了本发明范围内的肽段，其它的能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段包含下列结构GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(全长的鼠源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO18)；SAAGFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(全长的鼠源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(全长的人源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO20)；(RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(全长的人源SAA2.1蛋白；SEQID NO21)；KEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO22)；KEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTMIDQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO23)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；orADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)。
本发明首选的能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段包含有一个分离肽段或肽突变体，或其中的部分结构，或人源SAA1.1或SAA2.1 N-端相似的区域或其突变体或其中部分，上述物质含有以下结构或其中部分结构(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6，其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸，并且n为1或2。当n为1时，分离肽段段含有以下结构XFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13)其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸，X X1X4X5和X6各自可为任何的氨基酸，X2是疏水或非极性的氨基酸，X3为组氨酸或其保守替换氨基酸。当n为2时，分离肽段含有以下结构XaXbFFX1FX2X3X4X5FX6(序列14)，其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸，Xa和X6是能够形成盐桥的氨基酸，XbX1X1X2X3X4X5各自可为任何的氨基酸，并且首选的分离肽段包括有下列结构GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(序列1)RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(序列6)，或RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(序列7)，上述肽段之一的突变体或其中一部分，除了本发明范围内的肽段，其它的能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段含有下列结构
isolated peptides consisting of GFFSFVHEAFQGAGDM(SEQ IDNO15)，GFFSFIGEAFQGAGDM(SEQ ID NO16)，RSFFSFLGEAFDGARDMW(SEQ ID NO17)，GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(全长鼠源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO18)，GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(全长鼠源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO19)，RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(全长人源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO20)，orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(全长人源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO21)。
首选的肽段突变体包括但不仅限于含有一个或多个D-氨基酸的肽段和环状肽段，其中前一种肽段突变体与肽段同样有效但不易在体内降解。
另外，本发明中首选的肽段突变体含有两个或多个相连或缀合的肽段。尤其是，首选的肽段突变体由一个能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段连接或缀合在另一个能抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段上。
本发明另一方面是关于上述肽段，肽突变体或其中部分的模拟物。
本发明另一方面是关于具有Y-Z或Q-Y-Z结构的化合物，其中Y含有一个本发明中能够增强胆固醇酰基转移酶活性和/或抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段或肽模拟物；Z含有连接到Y上能够增强Y的功能的化合物；在包括Q的实施方案中，Q可能包括有另一个连接到Y-Z上能够增强Q-Y-Z功能的化合物，Q与Z相同或不同，典型的Z或Q包括靶向试剂，能够治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强化合物的溶解性，吸收度，分布性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/或功效的试剂，或降低化合物的毒性或副作用的试剂。典型的Z和/或Q的靶向试剂包括巨噬细胞靶向因子，如脂质体、微球或SAA受体的配体，肝细胞靶向因子，抗体及其活性片断，如Fab片断，和专门针对动脉硬斑块和/或炎症部分的另一个因子。
本发明另一方面是关于含有肽段，肽段突变体或其中部分肽段或肽突变体、Y-Z或Q-Y-Z化合物或上述物质的模拟物的药用组合物，该药用组合物中所含上述成份能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性和/或增强胆固醇酰基转移酶活性。本发明中药用组合物进一步含有一种适合于体内给药的赋型剂。在实施方案中将肽段或其模拟物或化合物制成脂复合体形式同样也可将其制成磷脂脂质体形式。
本发明另外一方面是关于肽段，化合物，上述物质的模拟物，或含有上述物质的药用组合物，在改进胆固醇代谢酶活性方面的作用，具体来说，是利用上述物质改进胆固醇酰基转移酶活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性。本发明的较佳实施方案是在体内，而对于人类来讲则效果更佳。
本发明另一个方面是关于肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物在增加和/或促进位于动脉硬化斑块上的巨噬细胞中蓄积的胆固醇的代谢和流出方面的作用，本发明的优选实施方案是显现于体内动脉硬化斑块上的巨噬细胞中。而对于人类效果则更佳。
本发明的另一方面是关于肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物有增加和/或促进位于于炎症部位的巨噬细胞中蓄积的胆固醇的代谢和流出方面的作用。本发明的首选实方案显现于体内的炎症部位的巨噬细胞中，而对于人类效果则更佳。
本发明的另一方面是关于给患者施以本发明中的肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物治疗和预防动脉硬化的方法，本发明首选实施对象是针对人类。
本发明的另一方面是关于给患者施以本发明中的肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物治疗和心血管疾病的方法，首选实施对象是针对人类。
本发明的另一方面是关于给患者施以本发明中的肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物治疗冠心病的方法，首选实施对象是针对人类。
本发明的另一方面是关于给患者施以本发明中的肽段，化合物，上述物质的模拟物或含有上述物质的药用组合物治疗或预防炎症的方法，首选实施对象是针对人类。
附图简述

图1是关于检测在体内，包含各种SAA2.1合成肽段的脂质体对于巨噬细胞胆固醇流出的影响的线状图，其中实心圆表示含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体产生的结果，空心圆表示含有鼠源SAA2.1 21-50(序列2)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体产生的结果，实心三角形表示含有鼠源SAA2.1 51-80(序列3)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体所产生的结果，空心三角表示含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体所产生的结果，实心正方形表示含有鼠源SAA1.1 1-20(序列5)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体所产生的结果，空心正方形表示含有人源SAA1.11-23(序列6)氨基酸残基对应合成肽段的脂质体所产生的结果。
图2表示的是由鼠源SAA1.1 77-103氨基酸残基所对应的左旋(序列9)或右旋(序列10)的氨基酸肽段所介导的组织细胞培养环境下胆固醇的流出情况。空心圆表示的是含有由0.5μm的溴化氰作用后的鼠源SAA1.1 77-103氨基酸残基所对应肽段的脂质体对胆固醇流出的治疗作用；实心三角形表示的是含有对应序列的合成的右旋(序列10)氨基酸肽段的脂质体对胆固醇流出的治疗作用。空心三角形表示的是含有鼠源SAA2.1 74-103残基的天然左旋氨基酸的脂质体对于胆固醇流出的治疗作用。而实心圆表示的是对照组，其中是只含有DMEM/BSA的追踪灌注培养基，图中的结果表示的是用这些脂质体预处理过后，胆固醇从位于培养中的细胞中流出到受体，HDL中的情况。在不同的时间点，收集灌注培养基并分析其中的[3H]-胆固醇，总的[3H]胆固醇为每毫克细胞蛋白中有(1.8-2.1)×106dpm[3H]-胆固醇，最终结果为4个数的平均数+标准偏差。
图3A和3B是剂量-反应图，表示的是体外环境下给巨噬细胞分别施以含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸残基所对应的肽段的脂质体，含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸残基所对应肽段的脂质体，及含有上述两种肽段(序列1+序列4)1∶1比例的脂质体后，胆固醇的流出情况，供检测的肽段的浓度分别为0.05，0.1，0.5，1.0，2.5和5.0μm。图3A，X轴表示浓度，为线性关系，图3B中X表示浓度，为对数关系。如图中所示，当增加单一某种肽段的剂量时，胆固醇的流出随之增加，进一步如果当两种肽段的混合物剂量增加时，胆固醇的流出增加则更为明显。
图4是一个线状时程图，它表示的是将胆固醇负载的源THP-1细胞置于含有本发明中不同肽段的脂质体中，胆固醇的流出情况。其中实心圆表示将上述细胞只置于脂质体中胆固醇的流出情况。空心圆表示的是将上述细胞置于HDL中胆固醇的流出情况。实心三角形表示的是将上述人体细胞置于含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸对应肽段的脂质体中，胆固醇的流出情况。空心正方形表示的是将上述细胞置于含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸对应肽段的脂质体中，胆固醇的流出情况。实心正方形表示的是将上述细胞置于N-端连有一个精氨酸的鼠源SAA2.1 1-20(序列7)氨基酸残基所对应肽段的脂质体中，胆固醇的流出情况。空心正方形表示的是将上述细胞置于含有上述前两种肽段的脂质体中，胆固醇的释放情况。
图5A和5B是剂量-反应线状图，它们表示的是给体外巨噬细胞施以含有人源SAA1.1 78-96(序列12)氨基酸残基对应的肽段的脂质体和含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸残基对应的肽段的脂质体，胆固醇的释放情况。供检测的肽段浓度为0.05，0.1，0.5，1.0，2.5和5.0μm。在图5A中，X轴表示浓度，为线性关系，在5B中，X轴表示浓度，为对数关系。由图中看出，当剂量增加时，人源SAA1.1肽段在增加胆固醇的流出方面，效果优于或至少等于鼠源肽段。
图6是时程线状图，它表示的是将胆固醇过饱的人源THP-1细胞置于含有不同浓度的人源SAA1.1 78-96(序列1 2)氨基酸残基对应的肽段的脂质体中，胆固醇的流出情况。空心图，实心三角，实心正方形，空心正方形分别表示下列不同的浓度0.05，0.1，0.5，1.0，2.5，5.0μm。
图7A和7B是柱状图，它们表示的是含有本发明中肽段的脂质体剂型对ApoE敲除的小鼠主动脉损伤恢复方面的能力。图7B除了包含下面在同样条件下进行的实验得到的数据外还包括图7A中的数据。在这些实验里，给小鼠施以四周高脂饮食(Paigen’sAtherogenic Rodent DietPurina 5015 with cocoa butter，cholesteroland cholic acid(CI3002，Research Diet，Inc)。然后将其分成两组，一组继续施以上述饮食2周，而另一组在继续上述饮食的同时，每隔4天施以含有鼠源SAA2.1 1-20氨基酸残基所对应的肽段的脂质体(序列1，图7A中的B组，图7B中的hf+p1)或含有鼠源SAA2.1 74-103氨基酸残基所对应的肽段脂质体(序列4，图7中的D组，图7B中的hf+p4)，对照组只施以高脂饮食而无脂质体(图7A中的C组，图7B中的低脂组)。另一组施以正常鼠饲料，(图7A中C组，图7B中的低脂组)。还有一组(在喂以高脂饮食的同时)施以含有上述两种肽段的脂质体，这一组用图7B中的hf+p1+p4表示。两周后，将小鼠处死，将其主动脉解剖并用油红染色，图7A中所表示的油红染色的区域表示的是存在脂质的区域，及脂类存在区域与总的主动脉组织的比例。图7B中的数据表示的是相对于高脂饮食组(100％)用油红染色的比例。图7A中的每一个组中都有5只小鼠，图7B用n表示小鼠的数量。
图8A和8B表示的是含有本发明中的肽段的脂质体剂型在预防APOE敲除的小鼠主动脉损伤方面的能力，图8除了包含下面在同样条件下进行实验得的数据外还包括图8A中的数据。在图8A中描述的预防性实验中，给ApoE敲除的小鼠喂以高脂饮食，并每4天施以一次含有鼠源SAA2.1 1-20氨基酸残基对应肽段的脂质体(序列1；2组)，含有鼠源SAA2.1 74-103氨基酸对应肽段(序列4；4组)的脂质体或上述两种肽段的脂质体(序列1+4；5组)。对照组只喂以高脂饮食而不施以脂质体(1组)。另外一组施以正常鼠饲料(3组)。20天后，解剖其主动脉用油红染色。图8A的数据表示的是被油红着色的存在脂质的区域，及脂类存在区域与总的动脉组织的比例。在图8A中，1-3组和5组每组使用5只动物，4组中由于一只动物在中途死亡，因而只剩4只动物。图8B中的另外一组“空白脂质体组”与施以肽段的动物的条件相同，只是给其施以脂质体而不施以肽段。而“空白脂质体组”与高脂组和低脂组的不同之处在于那两组不施以脂质体。图8B中的数据表示的是相对于高脂饮食组100％，其它组用油红染色的区域的比例。图8B中n表示动物的个数，图8B中的高脂，低脂，高脂+肽1，高脂+肽2和高脂+肽1+4分别对应图8A中的1，2，3，4，5。
图9是一个线状时程图，它描述了在体外环境下，当存在本发明中各种不同的能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段的脂质体剂型时，鼠J774细胞中胆固醇的流出情况，其中实心圆、空心圆、实心三角，空心三角和实心正方形分别表示人源SAA1.178-96(序列12)，人源SAA2.1 78-96(序列11)，人源SAA2.179-96(序列26)人源SAA2.1 80-96(序列27)，人源SAA2.181-96(序列28)。
图10是一个柱状图，它表示的是等摩尔浓度的全长鼠源SAA2.1蛋白的脂质体，以及含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸残基对应肽段和SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸对应的肽段的脂质体对于胆固醇负载的J774细胞胆固醇流出的比较。
发明详述现今约有13,000,000美国人服用降胆固醇药物，而大部分人服用的是斯他汀类药物，胆固醇合成抑制剂(斯他汀)在很大程度上讲是安全及有效的，但是，这类药最近遇到了一些麻烦，例如出现了，2001年Bayer’s的Bay01TM自愿召回事件，AsrtaZeneca’CrestorTM的推迟进入北美市场，以及最近对于长期服用斯他汀类药物对于健康引起的风险的关注，以上情况都表明需要研制一种新型的药物。
因此，药品厂家现都在研发与现在市场上的药物有着不同作用机制的药物。两种或两种以上有着不同作用机制的药物，在降低胆固醇水平方面可以有一定的加成性或协同性(Brown，W.V.(2001)Am.J.Cardiol.87(5A)23B-27B；Buchkert，E.(2002)Cardiology 9759-66)。最近被FDA证实，单独使用Ezetimike(ZeriaTMMerck)，能够显著地降低胆固醇水平。进一步，由于Ezetimike能够降低胆固醇的吸收(如阻断胆固醇转运)，它可以与胆固醇合成抑制剂(Statin)共同使用以降低血浆胆固醇的水平，其效果在很大程度上优于单独给药。
其它处于临床试验阶段药物如Arasimibe(Pfizer)，Efmcimibe(Eli lilly)和CS-505(Sankyo)主要目标是抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性。
还有一些公司如Esperion Therapeutics，Fularik Inc，和加拿大公司，Xeron Genetics正在研发能够提高HDL这种所谓的“有益的胆固醇”的方法，因为HDL在胆固醇逆转途径中起着关键的作用，它对胆固醇的排出体外有着重要的作用。
但是，由于药物厂家将大量精力放在了研制治疗动脉硬化的新的化合物上，因此现在市场上尚没有能够通过增强胆固醇酯水解酶活性的从而促进位于动脉硬化斑块部位的巨噬细胞中蓄积的胆固醇的代谢和流出的药物。
胆固醇在血管细胞上如巨噬细胞中的蓄积是动脉硬化的主要病理特征。巨噬细胞是脂类储存和移除的关键细胞。动脉硬化斑块形成的早期的重要的病理过程是巨噬细胞转变为泡沫细胞(胆固醇负载巨噬细胞)。
在保持细胞胆固醇平衡方面，两种酶起着关键的作用。
胆固醇酯水解酶也指胆固醇酯酶和胆固醇酯水解酶，能够促进胆固醇从巨噬细胞中的移除和流出，这种酶以中性和酸性形成存在，这两种形式的酶都可适用于本实验，其中中性形式为首选。
酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶会促进巨噬细胞中胆固醇的蓄积，在炎症的急性反应期，SAA异构体SAA1.1和SAA2.1成为HDL的主要构成要素，并且这种化合物被巨噬细胞所内化。如这里所示是鼠源SAA2.1而非鼠源SAA1.1能够同时抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性并增强胆固醇水解酶的活性，使平衡趋向于胆固醇的转运形式。不同于apoA-1与巨噬细胞的亲和力，SAA显示了与巨噬细胞的特殊的亲和力。鼠源异构体SAA2.1是第一个既能够增强胆固醇酯水解酶活性又能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的蛋白。然而，这里所显示的是，人源SAA1.1和人源SAA2.1含有能够增强胆固醇水解酶活性和抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段。
本发明者利用纯化的酶，细胞匀浆和整个细胞研究了体外急性反应期-HDL(AP-HDL；HDL-SAA)对酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶和胆固醇酯水解酶活性及细胞胆固醇排出的作用。利用巨噬细胞后核匀浆作为酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的来源，研究表明，鼠源SAA2.1能够以剂量依存的方式抑制酰基辅酶A胆固醇酯转移酶的活性，而相反，鼠源，SAA1.1和apoA-1却无此功能。对于组织培养中的完整的胆固醇负载巨噬细胞，发明者发现AP-HDL和含有鼠源SAA2.1的脂质体同样能够明显地抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性并且增强胆固醇的酯水解酶的活性，而相反，单独的HDL，无SAA2.1的脂质体以及含有SAA1.1或apoA-1的脂质体对上述两种酶的活性却并没有影响。将用放射性标记过的胆固醇预饱和巨噬细胞静脉注射给致炎或未致炎小鼠，发现致炎小鼠SAA2.1的水平较高，其胆固醇流出的速度明显快于未致炎的对照组(为未致炎小鼠的6倍)。进一步，将用含有鼠源SAA1.1鼠源SAA2.1或apoA-1的脂质体预处理过的胆固醇负载巨噬细胞静脉注射给未致炎的小鼠，发明者发现，只有含有鼠源异构体SAA2.1的那一组重现了致炎小鼠组中出现的胆固醇流出的效果。
通过体内和体外的测定，鼠源SAA2.1的这些特性主要存在于两个肽结构域中。鼠源SAA2.1中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域位于SAA2.1 1-1 6残基N-端，但通过CNBr作用产生的SAA2.1的碎片我们发现该区域对于胆固醇酯水解酶的活性没有影响，然而，鼠源SAA2.1 74-103氨基酸这个残基区域的C-端被证实是鼠源SAA2.1中能够增强胆固醇酯水解酶活性的区域，具体来说是鼠源77-95氨基酸存在这种作用。
正如这里所显示的，氨基酸序列中含有上述鼠源SAA2.1和人源SAA1.1和人源SAA2.1的区域的分离肽段能够促进巨噬细胞胆固醇酯水解酶的活性并能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性，无论是在体内还是在体外。将肽段合成为含有上述氨基酸序列或部分序列的肽段，使其在存在功能性胆固醇转运子和胆固醇受体HDL的情况下，将巨噬细胞中的胆固醇转变为易于转运的形式，使其能迅速地从细胞中排出。进一步，这些分离的肽段具有极高的活性，单单是静脉注射状便能够持续4天影响体内巨噬细胞中的胆固醇。
鼠源SAA2.1蛋白序列1-20(GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY；序列1)，21-50(TDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGG；序列2)，51-80(VWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQE序列3)，74-103(DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY序列4)氨基酸所对应肽段的是分别利用固相肽段合成方法合成的。除了人源SAA2.1 78-96(ADQAANKWGRSGRDPNHFR序列11)，79-96(DQAANKWGRSGRDPNHFR；序列26)，80-96(QAANKWGRSGRDPNHFR序列27)，81-96(AANKWGRSGRDPNHFR序列28)氨基酸残基所对应的肽段外，人源SAA1.1和/或人源SAA2.1 1-23(RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD序列6)氨基酸残基所对应的肽段也是由人工合成的。除了N-端连有一个精氨酸的鼠源SAA1.1 1-20(RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY序列7)氨基酸的残基对应的肽段外，鼠源SAA2.1蛋白序列1-20(GFFSFIGEAFQGAGDMWRAY序列5)氨基酸残基对应的肽段也是由人工合成的。合成的第1到第7肽段含有左旋氨基酸。本发明中的这些肽段是非糖基化的，是SAA1.1和SAA2.1的天然形式。
进一步，鼠源SAA2.1经过CNBr作用裂解产生一个不可溶16聚肽段(SAA2.1 1-16)和两个可溶的片断一个是7聚肽段(SAA2.1 17-23)，一个是80聚肽段(SAA2.1 24-103在这里用序列23表示)(Anscin，J.等Bio.Chem.2747172-7181，1999)对于鼠源SAA1.1，在76残基处将Ile替换成Met引进了另外一个分裂点，从而使80聚肽段裂解为一个53聚肽段(SAA1.124-36)和一个27肽段(SAA1.1 77-103)。鼠源SAA2.1和SAA1.1的最后27个残基结构如下
SAA2.177-103ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLP KY(SEQ ID NO8)SAA1.177-103ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLP KY(SEQ ID NO9)这两个序列的唯一不同位于101残基(加粗和加下划线的)我们利用这个肽段描述出了SAA2.1上能够调整胆固醇酯水解酶活性的区域，并鉴别出了能够调整胆固醇酯水解酶活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的有效成份。
如这所显示，将J774巨噬细胞用含有0.5μM鼠源SAA2.174-103(序列4)氨基酸残基对应肽段的脂质体预孵育，发现从巨噬细胞中释放到含有HDL的培养基中的[3H]胆固醇有明显的增加，而被CNBr作用过的天然鼠源SAA1.1产生的较短的肽段(77-103序列9)也有同样的作用。具体地说，就是用鼠源SAA1.1 77-103和用鼠源SAA2.1 74-103处理过的巨噬细胞，其[3H]胆固醇流入到培养基的情况是相似的。
这些数据表明鼠源SAA2.1 74-76残基并不能促进巨噬细胞胆固醇的流出，进一步，残基101也是非必要的。实际上，通过对12个物种氨基酸序列的检测，发现连有较多脯氨酸的SAA1.1和2.1最后8个残基，并不能增强CEH的活性。相应地，含有鼠源SAA2.1 77-95这19个氨基酸残基的肽段具有增强CEH活性的特性。进一步，含有(ADQAANEWGRSGKDPNHFR序列12)即人源SAA2.1 78-96残基对应序列的肽段，以及人源SAA2.178-96(ADOAANKWGRSGRDPNHFR序列11)和人源SAA2.179-96(DOAANKWGRSGRDPNHFR序列26)残基对应的肽段能够增加胆固醇的排出。因此这个肽段和对应于人源SAA2.178-96(ADQAANKWGRSGRDPNHFR序列11)残基和人源SAA2.1 79-96(DQAANKWGRSGRDPNHFR序列26)残基的肽段同样具有增强CEH活性的功能。
另外，这些数据还阐明了SAA1.1和SAA2.1三维结构(如蛋白质折叠)的不同，因为不同于SAA2.1，天然的SAA1.1蛋白并不能促进巨噬细胞中的胆固醇的流出，这些信息以及建模的工作无论对于SAA蛋白分子模型的建立还是设计小分子肽段模拟物都是有用的。
含有一个或多个右旋氨基酸的这些肽段的修饰物不但效果没有改变，而且其在体内变得更加稳定不易降解。见图2，当用与鼠源SAA2.1天然左旋氨基酸肽段相同的方法处理细胞时，含有下列右旋氨基酸的鼠源SAA1.1 77-103(右旋ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY，序列10)氨基酸序列所对应的合成肽段同样具有促使巨噬细胞胆固醇排出到培养基中的作用。
SAA2.1上具有增强胆固醇酯水解酶活性区域的鉴别是在J774细胞中完成的，其中，J774细胞用以放射性标记的胆固醇酯预饱和。实验是在存在Sandoz 58-035的情况下完成的，因为Sandoz 58-035是一种酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性抑制剂，它可以防止游离的胆固醇和油酸的再酯化。在0-24小时的时间段内，进行多次孵育，然后用细胞中剩余的[14C]标记过的胆固醇油酸来测量胆固醇酯的水解率，由于再酯化被阻断，当细胞培养中存在无蛋白的脂质体或存在分别含有源SAA2.1 1-20，21-50，51-80氨基酸残基对应肽段的脂质体时，[14C]标记过的胆固醇油酸的水解率并没有明显的区别。然而等量的含鼠源SAA2.1 74-103氨基酸残基所对应的合成肽段能够使胆固醇负载的鼠类细胞中的胆固醇酯水解酶活性增加3倍。
在胆固醇酯中混入[14C]油酸是为了通过测量酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性去鉴别抑制该酶活性的成份。酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的相对活性是在胆固醇负载的鼠类细胞中测定的，其中鼠源细胞被培养于培养基中，而培养基中分别为不含脂质体，含有不含蛋白的脂质体，或分别含有0.5μM鼠源SAA2.1 1-20，21-50，51-80和74-103氨基酸对应合成肽段的脂质体，经过6个小时的孵育，发现只有存在含有鼠源SAA2.11-20氨基酸残基的对应合成肽段的脂质体使酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性降低了2倍，而其它的脂质体对该该酶的活性无明显的影响。
另外，还检测了用含上肽段的脂质体预孵育的胆固醇负载的J774细胞中胆固醇的流出情况。在这些实验里，用[3H]胆固醇标记的胆固醇负载的鼠类巨噬细胞用脂质体预孵育4个小时，其中脂质体中分别含有0.5μM的鼠源SAA2.1 1-20，21-50，51-80或74-103氨基酸残基所对应的合成肽段。另外，我们还在一些实验中检测了等摩尔的(各0.5μM)鼠源SAA2.1 1-20或74-103残基对应的合成肽段的混合物对于胆固醇流出的影响。孵育后，用DMEM/BSA对细胞进行彻底清洗以除去的放射性物质和预孵育培养基中的脂质体。被跟踪的流出物含有DMEM/BSA或含添加HDL(50μg/ml)的培养基。在不同的时间点，采集培养基流出物，分析[3H]-标记胆固醇和非[3H]-标记标记胆固醇的量，结果显示，对于含0.2％的BSA的培养基，流出物[3H]胆固醇的量约为总量的6.1％+1.1％。在存在50μg/ml的HDL的情况下进行细胞培养，细胞中有31.2±2.2％[3H]胆固醇。用含有0.5μM鼠源SAA2.1 21-50或51-80氨基酸残基的肽段的脂质体，对细胞进行预孵育，发现流入到含有HDL的培养基中的[3H]胆固醇的比例并无明显的变化。但是，用含有0.5μM鼠源SAA2.11-20或74-103残基酸对应肽段的脂质体对细胞进行预孵育接下来再将细胞置于存在HDL的培养基中培养，观察到分别有60.6±3.6％和46.7±3.1％的[3H]胆固醇流入到培养基中。在同样的条件下，用上述两种肽段的混合物对细胞进行预孵育，会观察到有88.5+3.5％的[3H]胆固醇释放至HDL，并且它在前2个小时内的释放速度是只含有单一某种肽段脂质体的2倍。
进一步，如图10所示，拿含有摩尔浓度的全长鼠源SAA2.1蛋白的脂质体和含有鼠源SAA2.1 1-20或74-103氨基酸残基对应合成肽段的脂质体与含有鼠源SAA2.1 1-20，74-103氨基酸残基对应肽段的脂质体相比，前者对于胆固醇负载的J774细胞胆固醇流出的影响在统计学上大于后者。
当用含有鼠源SAA2.1 1-20氨基酸残基对应肽段的脂质体，含有鼠源SAA2.1 74-103扮酷残基对应肽段的脂质体，及含有上1∶1两种肽段的脂质体，作用于胆固醇负载的巨噬细胞时，会产生一个剂量反应曲线，其结果用3A和3B表示，用来检测肽段的浓度分别为0.05，0.1，1.0，2.5和5.0μM，每一种肽段在单独的情况下，都能够增加胆固醇的排出，而相对于对照组来讲，单独增加任何一种肽段的含量胆固醇排出的百分比就会增加，进一步，如图3A和3B所示，两种肽段的结合物所起的作用大于其加成作用，例如，如3和3B中所示，两种肽段分别以1μM的浓度单独给药，胆固醇的流出量为200％，而施以1μM两种肽段的组合物，胆固醇的流出约为500％。
现已被证实这些肽段同样能够促进人源单细胞中胆固醇的流出，这些人源单细胞在存在100nM的PMA的情况下，分化为巨噬细胞。在这些实验中，将胆固醇负载的人源THP-1细胞置于脂质体中，脂质体中分别含鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸对应的肽段，鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸对应的肽段，N-端连接一个精氨酸的鼠源SAA1.1 1-20氨基酸对应的肽段(序列7)，或鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸对应的肽段和鼠源SAA2.1 74-103(序列4)对应的肽段。实验结果用图4表示，不同于鼠源SAA1.1 1-20(序列5)氨基酸对应的肽段，含有N-端连有一个精氨酸的鼠源SAA2.1 1-20氨基酸对应肽段的脂质体能有效地提高这些人类细胞中胆固醇的流出，其效果至少等于鼠源SAA2.1 1-20(序列1)和鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸对应的肽段。
因此，胆固醇的排出速率会随着肽段种类的变化和/或某一种肽段浓度的上升而上升。
针对人源SAA1.1 78-96(序列12)残基对应的肽段，进行了同样的实验。5A和5B是剂量-反应曲线。它们表示的在对体外巨噬细胞施以含有人源SAA1.1 78-96(序列12)氨基酸对应的肽段的脂质体或含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)氨基酸对应肽段的脂质体时，胆固醇的排出情况。被检测的肽段的浓度分别为0.05，0.1，0.5，1.0，2.5和5.0μM。如图5A和5B所示，当剂量增加时，人源SAA1.1肽段(序列12)对胆固醇流出的影响至少等于鼠源肽段。相应地，这些结果显示了含有序列12的人源肽段在增强胆固醇酯水解酶活性方面的作用。
图9是一个时程图，它表示用含有人源SAA1.1 78-96(序列12)，人源SAA2.1 78-96(序列11)，人源SAA2.1 79-96(序列26)，人源SAA2.1 81-96(序列27)或SAA2.1 81-96(序列28)的脂质体作用于鼠774细胞，胆固醇的流出情况。如图中所示，含有人源SAA1.1 78-96(序列12)的脂质体表现出最强的增强胆固醇排除出的活性。含有人源SAA2.1 78-96(序列11)或人源SAA2.1 79-96(序列26)对应肽段的脂质体只表现出一半的上述SAA1.1 78-96所表现出的活性。而含有人源SAA2.1 80-96(序列27)或人源SAA2.1 81-96(序列28)的脂质体，却几乎没有上述活性，因此我们可以得出结论，即至少79残基的存在对这些肽段的活性是有重要影响的。
另外还进行了胆固醇流出的时程实验，即给胆固醇负载的人THP-1细胞施以含有不同浓度的人源SAA1.1 78-96对应肽段的脂质体剂型，该细胞胆固醇的流出情况，实验结果用图6表示，如图所示，在0～24小时这一时间过程内，对于不同的肽段检测浓度，胆固醇从巨噬细胞中的流出一直在增加。
另一组体内实验，先给小鼠静脉注射[3H]-胆固醇负载的巨噬细胞，24小时后，注射含有0.5μM鼠源SAA2.1 1-20，21-50，51-80，或74-103氨基酸残基对应合成肽段的脂质体，实验结果用图1表示，在图1所示的时间点，从每只小鼠的尾静脉取血25ul，血液用离心机离心，将血细胞从血浆中分离，用闪烁计数法测定血浆中[3H]胆固醇的含量，结果为4个结果的平均值+标准偏差。如图中所示，通过血浆中放射性物质的增加，可知静脉注射含有SAA2.1肽段1-20残基(酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域)或74-103残基(胆固醇水解酶酯增强区域)的脂质体，能显著增加[3H]胆固醇的流出。在同样的研究中，结构与人源和鼠源SAA2.1结构域相当的人源SAA1.1酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制肽结构域，同样能够促进体内胆固醇的排出。
这些实验显示了，含有天然SAA2.1蛋白，或含有鼠源酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域或含有鼠源或人源胆固醇酯水解酶活性增强区域的合成肽段的脂质体，能够显著提高体内胆固醇的排出，而且这种现象能持续4天以上。另外，人源酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制SAA肽结构域同样能够促进体内胆固醇的流出。因此，这些数据表明了SAA，尤其是该蛋白上的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域和胆固醇水解酶酯增强区域，在促进胆固醇从胆固醇负载的巨噬细胞中移除方面起着关键作用。这些数据，证实了可以通过设计和使用这些区域对应的肽段或其模拟物，用增加位于主动脉损伤部位巨噬细胞中胆固醇流出的方法去缓解和预防动脉硬化和/促使主动脉损伤恢复，这些肽段及其模拟物在治疗和预防动脉硬化及与动脉硬化相关的冠心病方面是有用的。
胆固醇的排出过程是伴随ABCA1途径进行的。最近证实，cAMP类似物作用于鼠类巨噬细胞，会引起脂质向流向载脂蛋白(Lin等2002 Biochem Biophys Res.Commun.290663-669；Oram等2000 J.Biol.Chem 27534508-34511)。同样，ABCA1的表达也是由cAMP诱导的(Lin等2002 Biochem Biophys Res.Commun.290663-669；Oram等2000 J.Biol.Chem 27534508-34511)。在这里发明者利用胆固醇负载的J774巨噬细胞孵育过的载脂蛋白脂质体，检测8-Br-CAMP(0.3μM)对胆固醇流出的影响。在存在Sandoz 58-035这种ACAT抑制剂的情况下用[3H]胆固醇将这些细胞预标记，以保证所有的从细胞中释放出来的放射标记过的胆固醇都来源于未酯化胆固醇池，然后细胞用8-Br-cAMP处理12个小时，以上操作是在用各种受体孵育后进行的。细胞内标记的胆固醇的释放量是一时间函数。与未处理过的细胞相比，用cAPM预处理过的细胞，流出到含有SAA2.1和apoA-1脂质体中的胆固醇的最初速率提高了62.1％和32.7％。当将细胞置于经过或未经过cAMP预处理的SAA1.1脂质体中，观察不到胆固醇流出的加速。进一步，先前有研究表明，在促进胆固醇从胆固醇负载的巨噬细胞中流出方面，SAA1.1脂质体，并不比单纯的脂质体有效(Tam等2002 J.Lipid Res.431410-1420)。此外，cAMP作用并未促使胆固醇流入到不含脂质体的培养基中。
为了研究无载脂蛋白受体如环糊精对于胆固醇从巨噬细胞中的移除是否具有催化作用，将胆固醇负载并标记过的J774细胞用脂质体和甲基-β-环糊精(0.1mM)孵育，发现这个浓度的CD并不能促进胆固醇流出到不含脂质体的培养基中，而相反，当细胞用含有SAA2.1而非含有SAA1.1或无蛋白的脂质体处理后，CD能够使胆固醇的最初释放速率提高4倍。进一步，当把用cAMP预处理的细胞置于含有SAA2.1和CD的脂质体中时，胆固醇的流出还会提高45.5％。
因此，本发明提供了能够用于预防和/或治疗动脉硬化、冠心病及与动脉硬化有关的心血管疾病的分离肽段，Y-Z和Q-Y-Z化合物及这些化合物的模拟物，以及含有分离肽段或其中部分肽段，Y-Z或Q-Y-Z化合物或其模拟物的药用组合物。本发明中的药用组合物含有SAA2.1中胆固醇水解酶活性增强区域对应的肽段或部分肽段，一种形式为Y-Z和Q-Y-Z的化合物，或它们的模拟物和/或含有SAA2.1中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域的对应的肽段或部分肽段，一种Y-Z和Q-Y-Z的化合物或他们的模拟物。因此，本发明中的首选成份含有鼠源SAA2.1 77-95氨基酸肽残基段或人源SAA1.1 78-96氨基酸残基肽段或其中的部分结构，和/或含有SAA 1-16残基或其中一部分的肽段，或上述肽段的中任一或两个的模拟物或其中一部分。
所述的“其中的一部分”包括与这里所述的肽段具有相似的生物活性的肽段，但是它们(1)只包括鼠源SAA2.1和人源SAA1.1或人源SAA2.1中胆固醇酯水解酶增强区域19个残基中的较短部分或辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域16个残基中的较短部分，(2)只与鼠源SAA2.1或人源SAA1.1或SAA2.1中具有胆固醇酯增强活性的19个残基区域或具有酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性的16个残基区域部分重合。例如，据信，只含有鼠源SAA2.1或人源SAA1.1或SAA2.1中酰基辅酶A胆固醇抑制区域一部分结构如1-12，1-13或1-14残基的肽段，也能表现出与鼠源SAA2.1 1-20残基或人源SAA1.1和SAA2.11-23残基对应的合成肽段相似的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性。相似的是，已经被证实，具有胆固醇酯水解酶增强活性的鼠源SAA2.1 74-103残基这30个氨基酸序列中的首选的部分是含有该区域中77-95这19个氨基酸残基的部分。相似的是，分别对应人源SAA1.1 79-96这18个氨基酸区域和人源SAA1.1 78-96这19个氨基酸区域被证实也具有胆固醇酯增强特性。运用与77-95，78-96或79-96相同的方法，可以证明77-95，78-96或79-96的较短片断也具有相同生物活性。相应的本发明中所指的肽段的包括这里的肽段。
本发明的首选肽段是N-端一个精氨酸的鼠源SAA1.1蛋白序列1-20残基所对应的合成肽段(RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY序列7)。
这里的“合成”是指用化学方法或重组的方法制备肽段。
进一步，首先要明白的是，暴露的肽段上各种氨基酸替代物在不改变肽段结构的情况下，将会保留胆固醇酯水解酶增强活性或乙酰辅酶A胆固醇乙酰转移酶的抑制活性。专利文献中曾有关于保守替换的描述，如美国专利5,264,558。可以这样预期，非极性脂类中性氨基酸如甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异白氨酸之间的替换将变成可能。同样地，也可以用极性脂类中性氨基酸如丝氨酸、羟丁氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸和谷氨酰胺来进行替换，带电荷的酸性氨基酸，即天冬氨酸和谷氨酸也能象带电荷的碱性氨基酸，即赖氨酸和精氨酸那样被替换。芳香族氨基酸包括苯丙氨酸，组氨酸，色氨酸，酪氨酸也有可能进行替换。在一些情况下，组氨酸和碱性氨基酸，赖氨酸，精氨酸也可能会相互替换。这种替换与交换已被领域内的技术人员所熟知，另外还可能存在其它种类的替换。可以预料，若肽段突变体与这里所述的肽段有越大的序列相同性，那么其生物活性也越多地被保留。相应的，具有胆固醇酯水解酶增强活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性的肽突变体也被纳入发明的范围。
本发明首选使用的分离肽段具有以下结构或其中一部分(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6，其中F为苯丙氨酸或保守替换的氨基酸，并且n为1或2。当n为1时，分离肽段含有下列结构XFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13)其中F为苯丙氨酸或保守替换的氨基酸。X，X1，X4，X5和X6各自可为任何的氨基酸，X2为疏水的或非极性的氨基酸，并且X3为组氨酸或其保守替换氨基酸。当n为2时，分离肽段含有XaXbFFX1FX2X3X4X5FX6(序列14)，其中F为苯丙氨酸或保守替换的氨基酸，Xa和X6是能够形成盐桥的氨基酸，Xb，X，X1，X2，X3，X4和X5各自为非确定氨基酸或其模拟物。能够形成盐桥的氨基酸组合，例如Xa和X6的组合，其中Xa可以是精氨酸但不限于精氨酸，X6可以是天冬氨酸或氨基乙酸但不限于此。本发明中效果更好的分离肽段是那些包含鼠源SAA2.1 1-20(GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY序列1)氨基酸残基、人源SAA1.1或SAA2.1 1-23(RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD序列6)氨基酸残基和RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(序列7)氨基酸残基所对应肽段。除了本发明中的这些肽段，其它能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性的分离肽段包括以下结构GFFSFVHEAFQGAGDM(序列15)，GFFSFIGEAFQGAGDM(序列16)
RSFFSFLGEAFDGARDMW(SEQID NO17)，GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(全长的鼠源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(全长的鼠源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAIDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(全长的人源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO20)；orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVINARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(全长的人源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO21)。
本发明首选使用的能够增强胆固醇活性的肽段包含以下结构X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)或其中部分结构，其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸，X6是谷氨酸或赖氨酸或其保守替换氨基酸，X2，X3，X4，X5，X7，X8，X10，X11，X13，X14，X15，X16和X17都为不确定的氨基酸。首选的肽段含有X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)，其中X1和X9，X21或X81是能够形成盐桥的氨基酸，X2是谷氨酰胺或其保守替换氨基酸，X3和X4各自是丙氨酸或其保守替换氨基酸，X5和X15各自是天冬氨酸或其保守替换氨基酸，X7是色氨酸或其保守替换氨基酸，X8和X11各自是甘氨酸或其保守替换氨基酸，X10是丝氨酸或其保守替换氨基酸，X13是天冬氨酸或其保守替换氨基酸，X14是脯氨酸或被保守替换的脯氨酸，典型的能够形成盐桥的氨基酸结合物中，X1为门冬氨酸，X9，X12或X18为精氨酸。首选的肽段或模拟物最好少于80个氨基酸残基，18-79氨基酸残基，18-50氨基酸残基，18-35氨基酸残基，18-30氨基酸残基，18-20氨基酸残基，随着氨基酸序列的缩短，其效果则随之增加。另外，首选的肽段还含有以下结构DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)，ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)，ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)，ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)，ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQID NO11)，ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)，orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或上述肽段的模拟物或其中部分肽段或含有ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(序列9)或ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(序列24)的肽突变体，除了本发明中的肽段，其它的具有胆固醇酯水解酶活增强活性的分离肽段含有GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(全长鼠源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO18)；SAAGFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(全长鼠源SAA2.1蛋白SEQ ID NO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(全长人源SAA1.1蛋白；SEQ ID NO20)；(RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(全长人源SAA2.1蛋白；SEQ ID NO21)；KEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO22)；KEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTMIDQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO23)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；orADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)。
另外本发明中首选的能够增强胆固醇酯水解酶活性和/或抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的化合物具有以下结构Y-Z或Q-Y-Z。这些化合物中，Z连接到Y上和/或Q通过任何一种可以接受的成键方式连接到Y-Z上，成键方式取决于Z或Q的选择上。典型的可以接受的成键方式包括但不限于共价键结合，非共价健结合，氢键结合，抗原抗体结合或配体结合。在化合物Y-Z和Q-Y-Z中，Y含有一个本发明中能够增强胆固醇酯水解酶活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物；Z含有一个连接到Y上并能够增强Y的功能的化合物；在包含Q的实施方案中，Q可能与Z相同或不同，并且能够增强化合物Q-Y-Z的功能。典型的Z或Q包括但不限于能够治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病靶向试剂，能够增加溶解性，吸收性，分散性、半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/或功效的试剂、或能够降低该化合物的毒性和副作用的试剂。典型的Z和/或Q的靶向试剂包括巨噬细胞靶向因子如脂质体，微球，SAA受体的配体，肝细胞靶向因子，抗体及其活性片断，如Fab片断，以及另外的针对动脉硬化斑块和/或炎症部位的因子。
这里所说的分离是指该肽段是脱离宿主细胞中天然伴随的细胞成份而存在。这个词语所包括的是那种脱离其天然环境而存在的肽段，它与自然条件下得到的所谓“分离肽段”的全部或一部分都没有任何关系。它被有效连接在一种肽上，而这种连接在自然状态下并不存在或是以不同的连接方式存在。它并不作为自然条件下的大序列的一部分存在，它可能包括非天然氨基酸。“分离”这个词还可以用来指重组表达肽段，化学合成肽段或用异源系统进行生物合成的肽段模拟物。
“与人等同体”这里指的是起源于人源SAA2.1和人源SAA1.1且与这里的鼠源肽段有相似活性的肽段序列。
“起源于”这个词组指的是来源于某一具体物种，并从这个特定物种中分离出来的肽段及其模拟物，以及与那些在宿主细胞表达系统重组表达或化学合成的氨基酸序列相同的肽段。
“模拟物”这里指的是那些表现出具有类似于增强酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶和/或胆固醇酯水解酶代谢活性的肽段，重组物，肽模拟物以及小分子有机物，这些肽段包括那些相对于天然SAA2.1或SAA1.1的氨基酸序列来说具有保守替换氨基酸的肽段突变体或那些与天然SAA2.1或SAA1.1具有高度的序列相同性的肽段突变体，这种相同性至少要达到80％，85％，90％，若要达到较优效果序列相同性要至少达到95％，96％，97％，98％或99％，而若能达到99.5％或99％则更佳。用大家熟知的排列技术将突变肽段与参考肽段排列在一起以估测两种肽段的序列相同性。例如，用大家熟知的一种排列方法将一个长度比参考肽段长的突变肽段与参考肽段排列在一起，通过参考肽段的长度，我们可以计算上述两种肽段的序列相同性，尽管突变肽段中的多出氨基酸可能会使突变肽体长度超出参考肽段。
首选的突变肽段包括但又不仅仅限于一个或更多个右旋氨基酸的肽段和环型肽段，其中第一种肽段的功效与普通肽段相当且在体内又不易被降解。环形肽段可以以多种方式成环，其中包括通过肽链或酯环末端残基(如二硫链)成环。
本发明中首选的突变肽段两含有2个或2个以上连接或结合的肽段，具体来说就是一个具有胆固醇酯水解酶增强活性的肽段连接于一个具有酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性的肽段上。
这里“肽模拟物”这个词，想要包括的是为具有调整酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性和/或胆固醇酯水解酶活性功能的肽段，(序列1，4，6，7，8，9，10，11，12，13，14，24，25，26或29)提供适当替换物的肽类似物，这些肽模拟物不仅要与这里的肽段具有相似的化学特性如亲和力，而且要也有类似物功效和功能，即肽模拟物也要具有SAA2.1上具有的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性和/或胆固醇酯水解酶增强活性，但并不受到结构方面的限制。本发明中的肽模拟物，如SAA2.1中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域和/或胆固醇酯水解酶增强区域的类似物，包含能够表现出这里所表述的功能特点的氨基酸或其它成分。肽段模拟物以及其制备方法在Morgan等1989发表的《Approach to the discovery of non-peptide ligands for peptideand peptidases》(临床化学年度报告，Academic出版社，San Diego.CA，243-253)中有描述。
本发明中的肽段模拟物可以被设计成与SAA2.1的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域和SAA2.1胆固醇酯水解酶增强区域具有相类似的结构形状，例如SAA2.1酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域的模拟物可以被设计为模拟具有如(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13或序列14)的中1-11残基(序列1)2-12残基(序列6)或1-12氨基(序列7)特征的仿芳香族氨基酸结构，折叠或堆积(如π键)使其具有酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的抑制活性。在多种ACAT抑制剂中发现了芳香性这一特点，我们有理由期待本发明中具有芳香区域的模拟物同样具有酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性(Mccarthy等J.Med.Chem.1994 371252-1255)。本发明中的多肽和肽模拟物模拟的是SAA2.1中酰基辅酶A胆固醇酯转移酶抑制区域堆叠或折叠的芳香性氨基酸结构，首选的可供选择的氨基酸为色氨酸，苯丙氨酸，组氨酸和酪氨酸，但并不限于此。
本发明中具有胆固醇酯水解酶增强活性的模拟物可以被设计成含有仿X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)盐桥构造的构象或其中部分结构的构象，其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸，X6是谷氨酸，赖氨酸或被保守替换的谷氨酸，赖氨酸。X2X3X4X5X7X8X10X11X13X14X15和X16各自可为任何氨基酸。
SAA2.1酰基辅酶A胆固醇酰基转能移酶抑制区域和SAA2.1胆固醇酯水解酶增强区域的模拟物可以分别设计成与合成肽段序列1，6，7，13，14和序列4，8，9，10，11，12，24，25，26或29相类似的结构，这些模拟物与上述合成肽段相比，具有含保守氨基酸替换物的肽段序列，这些替换物与周围的氨基酸相互作用，从而形成了与合成肽段相似的结构。结构上受到限制的部分，如四氢异喹啉可能会被苯丙氨酸所替换，而组氨酸生物同位体，则可能被替换成组氨酸，从而降低胆汗分泌物的首过效应。另外，本发明中肽模似物和骨架也有可能被改变。含有酰键替换的类似物常常被用来研究肽段的结构和功能，包括骨架转动的自由度，分子间或分子内氢键的形式，对局部或整体亲水性或疏水性的影响，以及口腔生物利用度。典型的配位氨基模拟物包括但不局限于ψ[CH2s]，ψ[CH2NH]，ψ[CSNH2]，ψ[NHCO]，ψ[COCH2]和[(E)或(Z)CH＝CH]。
相对于天然的SAA2.1酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域和/或SAA2.1胆固醇酯水解酶增强区域来讲，模拟物也可以被设计成含有延伸和/或附加氨基酸残基重复片断。例如含有两个或更多个肽段(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13或序列14)重复序列的模拟物，如序列1的1-11残基，序列6的2-12残基，序列7的1-12残基，酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制区域一部分，它们会因稳定性氨基酸残基而彼此分离或/和彼此经由侧面相接，可能具有酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性。可选择的是，这些重要片断可以有一个或多个芳香族替换物去替换另一个芳香性氨基酸，如W，Y，H会替会换F。而且，这些肽段上的氨基酸对于肽段的活性和/或稳定性有重要作用，如序列6上起始的精氨酸与12-13残基区域中的残基形成氢键，而这个精氨酸的引入会使肽段的活性和/或稳定性有所增强，我们可以用常规的方法对宿主细胞进行基因改造来表达这些模拟物。
这些肽段结构域的确定，可以通过建立分子模型的方式来实现，这些模型是根据用来设计和合成具有胆固醇酯水解增强活性和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制活性的小分子有机物所使用的肽段而建造的。这些小的有机分子模拟了肽段(序列1，4，6，7，8，9，10，11，12，12，13，14，24，25，26或29)的结构和活性。这些小分子并不含有氨基酸，而是含有其生物等排体，及具有理化相似性的取代基和基团，这些小分子有机物(与上述肽段相比)普遍表现有类似的生物活性。
在药物设计领域，专业人员常用生物电子等排这种主导的修饰方法去减弱前导化合物如(序列1，4，6，7，8，9，10，11，12，13，14，24，25，26或29)的毒性并改进活性，生物电子等排方法在“标准参考文本”如《药物设计和药物作用的有机化学》(Silverman，RB，Academic Press，Inc.1992 San Diego，CA，pages19-23)中有详细的讨论。经典的生物等排体中含有与价电子数目相同的化学基团但却含有不同的原子数，因此，例如具有一价原子和基团的经典生物等排体包括等不局限于CH3，NH2，OH，F和Cl；Cl，PH2和SH；Br和i-Pr以及I和t-Bu。具有二价原子和基因的经典生物等排体包括但不仅限于-CH2-和NH；O，S和Se和COCH2CONHR，CO2R，和COSR。具有三价原子和基团的经典生物等排体，包括但不限于CH＝和N＝；及P＝和AS＝。具有四价原子和基团的经典生物等排体包括但不仅限于C和Si；及＝C+，＝N+＝＝P+。具有环状等同物的经典生物等排包括但不仅限于苯和三苯；苯和氮苯；及四氢呋喃，四氢三苯，环成烷和吡咯烷。非经典的生物等排体，具有与经典的生物等排体具有相似的生物活性，但不具有相同的电子数，也不遵守经典等排体所遵守的电子和空间规则，典型的非经典生物等排体，列于下表
非经典等排体1.羰基 2.羧基 3.羟基 -NHSO2R -CH2OH-NHCN -CH(CN)24.Catachol
5.卤 CF3CN N(CN)2C(CN)36.硫醚 7.硫脲 8.Azomethine 9.吡啶 10.间隔基团 11.氢 F本发明中用于设计小分子有机模拟物的生物等排体互换包括环链互换。
本发明中的肽段或其中部分肽段，Y-Z或Q-Y-Z化合物或其模拟物最好是用药学上可以接受的赋型剂成形施给患者，而首选的对象是有相应疾病的人，这些成份的成型方法是本领域中很常用的，并且在标准序考文献如Reminton’s PharmaceuticalScience(Mack Publishing Co.，Easton，PA，1985)中有所讲授。本发明中的组合物可含有能够调整酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性或胆固醇酯水解酶活性，或能同的调整两种酶的活性单独的肽段或其中部分结构，Y-Z或Q-Y-Z化合物，或上述物质的模拟物。进一步说，也就是说本发明中的成份含有序列(1，6，7，13，14)对应的肽段或其中部分肽段或其模拟物或含有序列4，8，9，10，11，12，24，25，26或29对应的肽段或其中部分肽段或其模拟物。本发明中药用组合物可以给患者单独服用或与其它降胆固醇药一起服用。例如本发明中含有序列4，8，9，10，11，12，24，25，26或29对应的肽段或其中部分肽段或肽段的模拟物的具有胆固醇酰基转移酶抑制活性的成份，可以与ACAT抑制剂共同施以患者，典型的ACAT抑制剂包括但不仅仅限于ZetiaTM(Merck)，Avasimibe(Pfizer)，Eflucimibe(Eil Lilly)和CS-505(Sankyo)。另外本发明中的成份，还可以与无载脂蛋白受体如环糊精一起施以患者，另一个能够与本发明中分离肽段或模拟物共同使用的典型的降胆固醇类药物或成份包括但不仅仅限于，斯他汀，树脂或胆汁酸多价鳌合剂(Bay等Expert Opinion onPharmacotherapy 2003 4(11)1901-38；Kajinami等Expert Opinionon Investigatioal Drugs 2001 11(6)831-5)，尼克酸(Van等Am.J.Cardiol.2002 89(11)1306-8；Ganji等J.Nutri.Cardiovasc.Nursing2001 16(1)14-20；Knopp，R.H.Am.J.Cardiol.200086(12A)51L-56L)肝X受体激动剂(Tontonoz等MolecularEndocrinology 2003 17985-993)，Ca2+拮抗剂(Delsing等Cardiovasc.Pharmacol.2003 42(1)63-70)和过氧化物酶体增殖物活化受体调节剂(PPARs；Lee等Endocrinology 20031442201-2207)。
本发明中首选使用的方式是将肽段，肽模拟，Y-Z，Q-Y-Z化合物与脂质组成的复合体，而首选的则是用磷脂使其成囊，在随后的申请书中，典型的磷脂球是脂质体，含有肽段，肽段模拟物，Y-Z，Q-Y-Z化合物和上述物质的模拟物的脂质体，可以用大家所熟知的方法制备，如Epstein等的(Proc.Natl.Acad.Sci.USA823688-3692(1985))Hwang等的(Proc.Natl.Acad.Sci.USA774030-4034(1980))，EP52,322，EP36,676；EP 88,046；EP143,949；EP142,641；日本专利申请83-118008和EP102,324和美国专利4,485,045和4,544,545他们当中的内容都通过在此引述而合并于本文。首选的脂质体是小型(200-800埃)单层形式的脂质体，其中的脂类内容物与胆固醇的摩尔比大于10，最好在10～40范围内，这是经过筛选得到的肽段治疗浓度，在读完这个公开的发明后，本领域专业人员很容易知道除了脂质体外，磷脂球同样适用。
本发明中的肽段，化合物及其模拟物或药用组合物可以通过冠状动脉支架的形式植入患者体内，用上述物质对支架进行浸洗，然后用现在所常用的技术制备并将其植入体内(例如Woods等(2004)Annu.Rev.Med.55169-78；al-Lamce等(2003)Med.DeviceTechnol.2003 1412-141 Lewis等2002 J.Long TermEff.Med.Implants 12231-50；Tsuji等2003Int.J.Cardiovasc.Intervent.513-6)。
本发明中的药用组合物可用于改变胆固醇代谢酶的活性，特别是胆固醇酯水解酶和/或酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶的活性性。在优选的实施方案中，主要针对改变巨噬细胞内的酶的活性，而在哺乳动物尤其是人类中实施则效果更佳。
本发明中的药用组合物可以促进位于动脉硬化斑块部位或炎症部位蓄积的胆固醇的代谢和释放，在优选的实施方案中，用来促进体内位于动脉硬化斑块部位或炎症部位蓄积的胆固醇的代谢和释放，而适用于哺乳动物中尤其是人类效果更佳。
相应的，本发明中用来治疗和/或预防动脉硬化所针对的患者，优选是哺乳动物，最好是人。该组合物可以以多种方式给药，其中包括但不限于口服，静脉，舌下，内颊，鼻内或经吸收给药，至少对于口服来说，所给药物所含肽段含有1个或多个D-氨基酸，给药的剂量、途径、频率要由本领域技术人员根据病人的个体差异如年龄、体重等因素决定，以本实验中合成肽段在促进胆固醇的从巨噬细胞中流出方面的长效性，使我们有可能以每日，每隔一日，或半周的方式给药。
除了上述体内和体外的实验外，本发明的组合物对于动物模型ApoE敲除的小鼠模型中动脉硬化的治疗和预防也是有效的(Davis等Arterioscler Thromb Vasc Bio.2001 212031-2038)。给小鼠喂以高脂饮食，使脂质迅速在主动脉沉积，ApoE敲除的小鼠是动脉硬化的可靠模型，并被用来证明Ezetimibe(ZreiaTM，Merk)在减缓动脉硬化方面的疗效。本发明中的组合物如那些含有序列1，4或6及其模拟物中一个或多个肽段的成份在治疗和预防动脉硬化方面的功效也可用这种方式证明。
本发明中组合物在体内的效果，如含有的1，4，6，7，8，9，10，11，12，13，14，24，25，26，29所对应的肽段组合物，在预防和缓解动脉硬化方面的效果，可以用上面的啮齿动物动脉硬化模型来证实。为了证实本发明的组合物在减缓动脉硬化方面的能力，可以用如实施例11中所述的方法，给啮齿动物施以高脂饮食2周的时间，将动物分成两组，一组继续喂上述饮食2周，另一组继续上述饮食2周的同时，施以本发明中的成份，在实验结束时将动物的主动脉取出并纵剖，可以用主动脉硬化的程度来估测这种成份的功效，另外还可以制备组织切片用来进行显微分析，分离总脂质以测量单位重量组织中胆固醇的量。
此啮齿动物模型可以用来检测SAA2.1肽段在体内对抗动脉硬化的活性。用SAA2.1肽段处理过的小鼠的肝组织表现出正常的淡红色，而未经SAA2.1肽段(序列1和序列4以及上述两种的组合物)处理的小鼠脂肪肝组织则呈现白色，这些数据表明，SAA2.1不仅能够调整巨噬细胞的胆固醇代谢，还能够调整肝细胞的胆固醇。
进一步，我们还检测了含有本发明中肽段的在预防动脉硬化以及恢复主动脉损伤方面的能力。
在主动脉损伤的恢复实验中，给ApoE敲除的小鼠喂以如实施例11中的高脂饮食，四周之后，将其分为2组，一组继续喂以上述饮食2周，另一组在喂以上述饮食的同时，还每4天施以一次含有鼠源SAA2.1 1-20氨基酸所对应的肽段(序列1，图7A中B组和图7B中的hf+p1组)的脂质体或含有鼠源SAA2.1 74-13氨基酸所对应的肽段(序列4，图7A中的D组和图7B中的hf+p4组)的脂质体。对照组只喂以高脂饮食而不施以脂质体(图7A中的A组和图7B中的高脂组)。另外一组施以正常鼠饲料(图7A中的C组和图7B中的低脂组)。还有一组同时施以含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1)氨基酸对应肽段的脂质体以及含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4)对应肽段的脂质体，在图7B中用hf+p1+p4来表示。图7B中的数据同时包含了图7A中的数据以及之后在同样条件下进行的实验得到的数据。两周后，将小鼠处死经，将其主动脉解剖并用油红染色。图7A中的数据描述的是被油红染色的代表着脂类的区域与总的主动脉面积之比。图7B中的数据描述的是相对于高脂组(100％)其它组被油红染色的面积与高脂组的比例。如图中所示，用含有本发明肽段的脂质体处理过的小鼠与单纯的高脂饮食组相比，主动脉损伤得到恢复。
在动脉硬化的预防性实验中，给ApoE敲除的小鼠喂以高脂饮食，同时每4天施以一次含有鼠源SAA2.1 1-20(序列1；图8A中的2组和图8B中的hf+p1组)氨基酸对应肽段的脂质体，含有鼠源SAA2.1 74-103(序列4；图8A中的4组和图8B中的hf+p4组)对应肽段的脂质体或含有上述两种肽段的脂质体(序列1+序列4；图8A中的5组和图8B中的hf+(1+4)组)。对照组只喂以高脂饮食而不施以脂质体。(图8A中的1组和图8B中的高脂组)。另一组喂以正常鼠饲料。(图8A中的3组和图8B中的低脂组)。在图8B中还有另一个实验组即“空白脂质体组”，该组中的小鼠只喂以与上述实验中相同的脂质体，但其中不含蛋白肽。该实验组与高脂组和低脂组的不同之处在于该组小鼠未施以脂质体。图8B中的数据同时包含了图7A中的数据以及之后在同样条件下进行的实验得到的数据。如图所示，用含有本发明肽段的脂质体处理过的小鼠与对照组小鼠相比其主动脉损伤有所减少。
这些易于被接受的啮齿动物模型，进一步证实了本发明中含有SAA肽段或其模拟物的药用组合物在不同的组织和/或细胞中调整胆固醇新陈代谢的途径。利用药代动力学缩放技术，根据对啮齿动物的研究可以预测药物的分布、定义药代动力学等式以及设计该药物在其他物种包括人类中适用的剂量和配方。(Mordenti，J.(1986)J.Pharmaceutical Science 75(11)1028-1040)我们同样可以期待通过施以本发明中的药用组合物去治疗冠心病和心血管疾病以及预防和治疗炎症。
下面用一些实施例来描述本发明，但它们都不是对本发明的任何限制。在本申请中涉及到的参考文献，待审查专利申请以及已公开的专利的内容，都通过在此引述而合并于本文。
实施例实施例1动物从魁北克省蒙特利尔的Charles河取得6-8周大的雌性SD大鼠，将其置于恒温的12小时明-12小时明暗交替的环境中。喂以Purina实验室鼠食片剂以及含有氯氮卓的水。
ApoE基因敲除的大鼠取自美国缅因州的Jackson实验室。
实施例2化学试剂所有的化学试剂都是试剂级的，购于Fisher Scientific(Nepean，Ont.)，Sigma(St.Louis，MO)，ICN(Aurora，OH)，或BioRad(Hercules，CA)。DMEM和FBS购于(Burlinton，Ont.)放射性物质标记过的[1-14C]-油酸(52mCi/ml)，[1，2，6，7-3H(N)]-胆固醇(82mCi/ml)取自DuPont NEN(Boston，MA)。
实施例3肽段下面的肽段是以FMOC作为氨基酸的保护基团，在PEApplied Biosystems 433A肽段合成仪中以固相肽段合成方式合成的。
GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)TDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGG(SEQ ID NO2)VWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQE(SEQ ID NO3)DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)GFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO5)RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)肽段的分离纯化是由分析用HPLC和离子喷雾质谱完成的，在使用之前，将肽段用蒸馏水透析并冷冻脱水。
实施例4制备红细胞膜作为胆固醇的来源为了模拟组织损伤部位巨噬细胞摄取细胞膜碎片的过程，利用Ely等(Amyloid 2001 8169-181)中的方法制备红细胞膜作为胆固醇的来源，所有实验中所用的胆固醇(红细胞膜碎片)的量是相同的。胆固醇在红细胞膜中的浓度根据Allianey及其助手在(Clin.Chem.1974 20470-475)所述的方法利用sigma胆固醇20试剂盒测定的。
实施例5HDL，AP-HDL的制备以及apoA-1和SAA异构体的分离纯化用Ansin和Kisilevsky(Amyloid 1999 637-47；J.Biol.Chem.1999 274 7172-7181)中所述方式运用密度漂移的方法分别从正常小鼠和致炎小鼠中分离HDL和AP-HDL。在这个过程里面，在大鼠的脊背上皮肤松垂的地方皮下注射5％的AgNO3致炎。24小时后，将其用CO2麻醉，心脏穿刺放血，采集血液置于5％(最终浓度)的EDTA中，用离心方式将血浆从红细胞中分离出去。致炎的过程，SAA的合成以及从急性炎症阶段的血浆中分离SAA1.1和SAA2.1都是根据Ansin和Kisilevsky(Amyloid 1999 6 37-47；J.Biol.Chem.1999 274 7172-7181)中所述方法完成的。蛋白的分离纯化采取Ancsin和KisileVSky(Amyloid1999 6 37-47)中的方法用反向HPLC完成。分离蛋白的纯度的测定是用质谱和Anscin和Kisilevsky(Amyloid 1999 637-47和J.Biol.Chem.1999 2747172-7181)中的N-端序列分析方法完成的。
实施例6载脂蛋白-脂质复合体的制备和鉴定ApoA-1，SAA1.1，SAA2.1以及分别对应于鼠源SAA1.1和SAA2.1 1-20氨基酸残基的合成肽段以及对应于鼠源SAA2.121-50，51-80，74-103氨基酸残基的合成肽段与脂类融合形成脂质体。根据Jones等(J.Biol.Chem.1989 2644818-4825)中描述的方法，用摩尔比率为100/25/1/250的1-棕榈酰-2-油酰基磷酯酰胆碱/胆固醇/载脂蛋白/胆酸钠制备脂质体。其中胆固醇在这里的作用是使脂质体结构更稳定，并给脂质体加入一种类似在HDL中具备的成份。制备是在0.5mL含有10mM Tris-HCL，PH7.4，0.15M NaCl和0.005％EDTA的缓冲溶液中完成的。彻底搅拌反应的混合物，在4摄氏度下孵育12-16个小时，于平衡期末期在4摄氏度下将样品在磷酸盐缓冲溶液中充分透析。在15000×g，15摄氏度的条件下，离心1个小时以除去未反应的或沉积的脂质体，然后将脂质体用1.5×50cm的CL-4B琼脂糖凝胶柱过滤。浓缩后，将脂质体用0.45μM的Millipore滤器过滤除菌，并与不同浓度的组织培养基混合。各种含蛋白的脂质体中成份的测定利用Lowry等在(J.Biol.Chem.1951 193265-275)中的蛋白测定方法对蛋白进行测定，利用colorimetric kit(Wako Chemicals USA，Richmond VA)试剂盒进行对磷脂进行测定和利用酶测定方法对游离胆固醇进行测定(Sigma cholesterol reagent kit，SigmaChemical Co.St.Louis，MO)。
实施例7细胞培养将J774巨噬细胞(from American Type CultureCollection，Manassas，VA；ATCC#T1B-67)于每孔1百万细胞的条件下保存，在2mL添加10％FBS的DMEM中培养。培养基每周更换3次。在一些实验中接近融合的单层细胞置于存在氯喹(100μM)或8-Br-cAMP(0.3mM)的培养基中进行培养。
实施例8胆固醇的负载和细胞内胆固醇酯化的测定为了使细胞能够负载胆固醇将融合成片的单层细胞用含有2mg/ml的无脂肪酸BSA的PBS冲洗3次，并用含有5％LPDS(d＞1.25g/ml)和175kg的红血球细胞膜的DMEM孵育5个小时，为了使负载的胆固醇能够达到库平衡，要用PBS-BAA对组织培养物冲洗两次，并在含有5％LPPS的DMEM中孵育过夜，酰基辅酶A胆固醇的酰基转移酶的相对活性是在胆固醇的负载的细胞中测定的，细胞所在环境分别为不含脂质体的培养基，只含有脂质体2培养基，分别含有鼠源SAA2.1，1-20，21-50，51-80，74-103的残基的残基所对抗肽段脂质体的培养基，用上述培养基孵育3个小时之后，加入[14C]-油酸，再孵育3小时(Mendaz et al.j.Clin.Iuvest.1994 941698-1705；Oram et al.AvtevToscIev.Thromb 199111403-414)，将细胞冷冻，并用PBS-BSA和PBS分别洗2次，在加入[3H]-胆固醇油酸作为内标后，从标记的细胞中提取脂质并用Mendez等(J.Clin.Iuvest.1994 941698-1705)和Oram等(AvtevToscIev.Thromb 1991 11403-414)中描述薄层色谱法进行分析，测定放射性物质的量以确定进入胆固醇油酸中的放射性物质的含量从而作为衡量酰基辅酶A胆固醇的酰基转移酶活性的尺度。
实施例9胆固醇酯在J774中的水解率在用上述方法将胆固醇的负载于红细胞膜的同时，将新融合的细胞用[14C]-油酸标记，然后将细胞置于2ml含有5％的LPDS的DMEM中孵育24个小时，DMEM中可分离含有50μg/ml的天然HDL，SAA-HDL，含有2μM的apoA-1，SAA1.1或2.1的脂质体或含有0.5μmol鼠源SAA2.1 1-20，21-50，51-80，74-103对应合成肽段的脂质体。为了测定胆固醇油酸的水解率，在同脂蛋白质或脂质体进行孵育时应加入2μg/ml的酰基辅酶A胆固醇的酰基转移酶抑制剂Sandoz 58-035(丙酰亚胺，3-癸基二甲硅烷基-N-(2-(4-甲苯基)-1-苯乙基-9-氯) 以防止[14C]-油酸和胆固醇的再酯化。上述孵育过程的目的是为了测定胆固醇的水解情况，为了检查胆固醇的水解率是否与溶酶体胆固醇酯水解酶有关，将细胞在存在50μg/ml天然HDL和氯喹或SAA-HDL和氯喹(100μm)的环境下对细胞进行培养，氯喹是一种能够中和溶酶体质子梯度的物质。在不同的时间点，提取细胞中的脂类成份，以上面描述的方法分析胆固醇酯的放射性。
实施例10组织培养和体内胆固醇的流出经过一夜的平衡周期，将细胞负载胆固醇并用0.5μCi/ml[3H]-胆固醇孵育3个小时。在进行流出研究之前，用PBS/BSA将细胞洗4次，然后将细胞在37摄氏度条件下置于DMEM/BSA中进行孵育，DMEM/BSA中含有5％LPDS并且还分别含有50ug/ml的天然HDL，SAA-HDL，含有鼠源SAA2.1 1-20，21-50，51-80或74-103氯喹的残基对应肽段的脂质体和2μg/ml的酰基辅酶A胆固醇的酰基转移酶抑制剂Sandoz 58-035，分别于0，1，2，4，8，16，24小时的时候采集渗出物培养基，离心除去细胞碎片，然后测算流出物物质的量。将成片细胞用PBS/BSA和PBS各冲洗两次，将一部分细胞溶解于0.1N NaOH，一方面估测存留的放射性物质，另一方面估测细胞蛋白内容物。从剩余的细胞中提取脂类，并用Mendez等人在(J.Clin.Invest.1994.941698-1705)和Oram等(AvtevToscIev.Thromb 199111403-414)中描述的薄层色谱法对其进行分析，测量相应点上的放射性以得出细胞总胆固醇的含量，释放剂培养基中的放射性标记物也被计算在每孔中总量(细胞+培养基中的量)的百分比内。
为了检测从J774细胞释放到含有2μm鼠源apoA-1SAA1.1或SAA2.1的脂质体培养基这一过程是否依赖于cAMP，应在加入培养基前，对放射性物质标记过的胆固醇负载细胞同8-Br-cAMP一同孵育过夜。
在上述所示时间点，测定胆固醇的流入到培养基中的量，流入到培养基中的放射性物质标记物也被计算在每孔中总量的百分比内。
为了测定体内胆固醇的排出情况，用上述红细胞膜和[3H]-胆固醇对J774细胞进行负载处理。将细胞用PBS/BSA冲洗四次，然后将其从培养皿中取出。通过尾静脉分别给对照组小鼠和致炎小鼠注射浓度为5,000,000个J774细胞/200μl DMEM的物质。在不同的时间点，用涂有肝素的毛细管从小鼠的尾静脉取血，每次25μl，然后用Adam自动离心机将血浆和血细胞分离。用闪烁分光光度计测量出现于血浆中的[3H]-胆固醇的量，从而测得胆固醇的流出情况。
为了研究胆固醇从J774细胞中排出到血浆中是否由ABCA1转运途径所介导，或是由所注射细胞的内源性解体所引起，将放射性物质标记过的胆固醇负载细胞在400μm(最终浓度)的DIDS中孵育过夜，后将DIDS洗净，注射给致炎和未致炎的小鼠。和Kisilevsky等在(Nat.Med.1995 1143-148)中描述的方法，通过给小鼠背部皮下注射2％AgNO3溶液，使其形成一小块无菌性脓疡。
实施例11通过测定对动脉硬化的恢复情况测定肽段的功效检测SAA2.1肽段在动脉硬化恢复方面的功效。用来检测的肽段包括序列1和序列4。在诱导动脉硬化的2周内，每4天静脉注射一次上述肽段(即6mg/kg*4次)。
为了测定上述肽段是否具有恢复动脉硬化的作用，给小鼠喂以2周高脂饮食，然后将小鼠分成2组，每组5只，一组继续喂以上述饮食2周，另一组在继续上述饮食的同时施以含有上述肽段的脂质体。
为了测定肽段对于主动脉硬化的恢复效果，在实验的结尾，将小鼠的主动脉取出并纵剖，用油红将内皮染色，用图像分析的方法测量脂类存在的面积，进一步准备主动脉组织切片供显微分析，分离总脂质以测量湿重的组织中胆固醇的量，收集血液以测量胆固醇的总量。
分别采集用SAA2.1肽段处理过的小鼠的肝脏和未用SAA2.1肽段处理过的小鼠的肝脏。分析肝组织中总胆固醇水平和总LDL水平，通过对用SAA2.1处理过的小鼠的肝脏的初步检测，发现这些小鼠的肝脏表面表现出正常的红色，而未经SAA2.1肽段处理过的小鼠的肝脏则呈现白色，这些数据初步证明SAA2.1肽段既能调整巨噬细胞胆固醇的代谢，也能调整肝内胆固醇的代谢，这进一步说明SAA肽段还有可能调整其它组织、细胞中的胆固醇的代谢途径。
实施例12通过测定对动脉硬化的预防情况测定肽段的功效检测SAA2.1肽段在预防动脉硬化方面的功效。用来检测的肽段包括序列1和序列4以及等摩尔浓度上述肽段的混合物。在诱导动脉硬化的2-3周内，给8-12周大的ApoE敲除的小鼠静脉注射上述肽段，每4天一次(在预防性实验中为6mg/kg*5次)。
将小鼠分成5组(每组5只)，阴性对照组喂以正常的鼠饲料，其它四组喂以高脂饮食(实施例11中所述的Paigen’s啮齿动物动脉硬化饲料)。在这些组中，一组继续喂以高脂饮食3周。另一组在喂以高脂饮食的同时，施以含有序列1对应肽段，序列4对应肽段，等摩尔浓度的上述两种肽段的脂质体(上一段落中所述剂量的5倍)。
为了测定肽段对于主动脉硬化预防的效果，在实验的结尾，将小鼠主动脉取出并纵剖，将内皮组织用油红染色，并用图像分析的方法分析脂质分布的区域，进一步准备组织切片用来进行显微分析。分离总脂质以测定单位组织重量中胆固醇的量，分离血液以测定血浆总胆固醇的量。
实施例13鼠源SAA1.1 77-103残基所对应的L-和D-氨基酸肽段所介导的组织培养中胆固醇的流出对用[3H]胆固醇负载的巨噬细胞进行孵育，孵育环境中分别存在用CNBr作用后释放出的鼠源SAA1.1 77-103(序列9)氨基酸残基所对应的肽段的脂质体；序列10所对应的合成的D型氨基酸肽段的脂质体；鼠源SAA2.1 77-103(序列7)天然L-氨基酸残基所对应的合成肽段的脂质体；及不含任何上述肽段的脂质体。孵育后，用含有0.2％BSA的DMEM对细胞进行洗涤，以除去放射性物质和预孵育培养基中的脂质体。追踪灌注培养基中只含有DMEM/BSA或还含有HDL(50μg/ml)。见图2。这些结果显示了细胞经过不同脂质体预处理后，胆固醇向受体HDL流出的情况。分别在1，2，4，8，16和24小时时采集灌注培养基，并对[3H]-胆固醇进行分析。每毫克细胞蛋白中含有的总胆固醇为(1.8-2.1)×10E6dpm./mg实施例14人源单细胞THP-1中胆固醇的流出研究鼠源SAA2.1是否会促进人源单细胞系THP-1(取自American Type Culture Collection，Manassas，VA；ATCC#TIB-202)中胆固醇的排出。将人源单细胞置于T-75培养盒中进行培养，培养盒中为RPMI1640培养基，培养基中含有2mM L-谷氨酰胺，4.5g/L葡萄糖，10mM HEPES，1.0mM专用钠并添加0.05mM的2-硫氢基乙醇和10％的胎牛血清，接下来，将细胞置于一个6孔的组织培养板上，使每孔有5,000,000个细胞，经PMA(100nM)处理，单细胞分化成巨噬细胞。经过一夜的平衡周期，用0.5μCi/ml的[3H]-胆固醇标记过的红细胞膜碎片(胆固醇175μg)，在37摄氏度下，在含有2％的BSA的条件下孵育6小时，使THP-1巨噬细胞富集胆固醇。在进行胆固醇的排出研究之前，用PBS/BSA将细胞冲洗4次，然后将细胞置于37摄氏度2ml RPMI-BSA中进行孵育，其中RPMI-BSA中含有5％的LPDS并含有天然HDL或SAA-HDL或含有2μMapoA-I，SAA1.1或2.1的脂质体，或含有0.5μM鼠源SAA2.1 1-20(序列1)，21-50(序列2)，51-80(序列3)，74-103(序列4)氨基酸残基所对应的合成肽段的脂质体。分别在0，1，2，4，8，16和24小时采集追踪培养基，离心除支细胞碎片，用以测定排出物的量，分别用冷冻的PBS/BSA和PBS对细胞层各清洗2次，用0.1N NaOH溶解部分细胞估测放射性物质和细胞蛋白内容物。剩余的细胞用来提取总脂质，根据Mendoz等和Oram等描述薄层色谱法对其进行分析，测定对应点上的放射性，以计算细胞内总胆固醇的量，每孔中，被排出到培养基中的放射性物质也被计算在总量的百分比中。
实施例16统计分析用单个同学的实验样本比较组间的平均值，当P＜0.05时认为在统计学上差异显著。主动脉组织切片部分用ANOVA(变异数分析法)进行比较。
序列表<110>金斯顿女王大学罗伯特·奇斯维斯奇谭遂鹏约翰·B·安西贾宗超<120>具有CEH活性增强作用和ACAT活性抑制作用的肽段，含有这些肽段的药用组合物及其在治疗动脉硬化方面的使用<130>2001-284PCT<150>US 60/478,131<151>2003-06-12<150>US 60/544,565<151>2004-02-13<160>29<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>20<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>1Gly Phe Phe Ser Phe Val His Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15Trp Agr Ala Tyr20<210>2<211>30<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>Synthetic<400>2Thr Asp Met Lys Glu Ala Asn Trp Lys Asn Ser Asp Lys Tyr Phe His15 10 15Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Gln Arg Gly Pro Gly Gly20 25 30<210>3<211>30<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>3Val Trp Ala Ala Glu Lys Ile Ser Asp Gly Arg Glu Ala Phe Gln Glu15 10 15Phe Phe Gly Arg Gly His Glu Asp Thr Ile Ala Asp Gln Glu20 25 30<210>4<211>30<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>4Asp Thr Ile Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys15 10 15Asp Pro Asn Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Asp Lys Tyr20 25 30
<210>5<211>20<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>5Gly Phe Phe Ser Phe Ile Gly Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15Trp Arg Ala Tyr20<210>6<211>23<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>6Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp1 5 10 15Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp20<210>7<211>21<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>7Arg Gly Phe Phe Ser Phe Ile Gly Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp15 10 15
Met Trp Arg Ala Tyr20<210>8<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>8Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Asp Lys Tyr20 25<210>9<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>9Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Ala Lys Tyr20 25<210>10<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>10
Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Ala Lys Tyr20 25<210>11<211>19<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>11Ala Asp Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn15 10 15His Phe Arg<210>12<211>19<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>12Ala Asp Gln Ala Ala Asn Glu Trp Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15His Phe Arg<210>13<211>11<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>X＝any amino acid<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(4)<223>X＝any amino acid<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(7)..(7)<223>X＝histidine or conservative substitution thereof<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(11)..(11)<223>X＝any amino acid<400>13Xaa Phe Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa15 10<210>14<211>12<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>Synthetic<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>X＝any amino acid<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(7)..(10)<223>X＝any amino acid<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<400>14Xaa Xaa Phe Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa15 10<210>15<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>15
Gly Phe Phe Ser Phe Val His Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15<210>16<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>16Gly Phe Phe Ser Phe Ile Gly Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15<210>17<211>18<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>17Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp15 10 15Met Trp<210>18<211>103<212>PRT<213>Mus musculis<400>18Gly Phe Phe Ser Phe Ile Gly Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15Trp Arg Ala Tyr Thr Asp Met Lys Glu Ala Gly Trp Lys Asp Gly Asp20 25 30
Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Gln Arg Gly Pro35 40 45Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu Lys Ile Ser Asp Ala Arg Glu Ser Phe50 55 60Gln Glu Phe Phe Gly Arg Gly His Glu Asp Thr Met Ala Asp Gln Glu65 70 75 80Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn Tyr Tyr Arg Pro85 90 95Pro Gly Leu Pro Ala Lys Tyr100<210>19<211>103<212>PRT<213>Mus musculis<400>19Gly Phe Phe Ser Phe Val His Glu Ala Phe Gln Gly Ala Gly Asp Met15 10 15Trp Arg Ala Tyr Thr Asp Met Lys Glu Ala Asn Trp Lys Asn Ser Asp20 25 30Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Gln Arg Gly Pro35 40 45Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu Lys Ile Ser Asp Gly Arg Glu Ala Phe50 55 60Gln Glu Phe Phe Gly Arg Gly His Glu Asp Thr Ile Ala Asp Gln Glu65 70 75 80Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn Tyr Tyr Arg Pro85 90 95Pro Gly Leu Pro Asp Lys Tyr100<210>20
<211>104<212>PRT<213>Homo sapien<400>20Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp1 5 10 15Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile Gly Ser20 25 30Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys Arg Gly35 40 45Pro Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu Ala Ile Ser Asp Ala Arg Glu Asn50 55 60Ile Gln Arg Phe Phe Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala Asp Gln65 70 75 80Ala Ala Asn Glu Trp Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn His Phe Arg85 90 95Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr100<210>21<211>104<212>PRT<213>Homo sapien<400>21Arg Ser Phe Phe Ser Phe Leu Gly Glu Ala Phe Asp Gly Ala Arg Asp15 10 15Met Trp Arg Ala Tyr Ser Asp Met Arg Glu Ala Asn Tyr Ile Gly Ser20 25 30Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly Asn Tyr Asp Ala Ala Lys Arg Gly35 40 45
Pro Gly Gly Ala Trp Ala Ala Glu Val Ile Ser Asn Ala Arg Glu Asn50 55 60Ile Gln Arg Leu Thr Gly His Gly Ala Glu Asp Ser Leu Ala Asp Gln65 70 75 80Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His Phe Arg85 90 95Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr100<210>22<211>80<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>22Lys Glu Ala Gly Trp Lys Asp Gly Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly15 10 15Asn Tyr Asp Ala Ala Gln Arg Gly Pro Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu20 25 30Lys Ile Ser Asp Ala Arg Glu Ser Phe Gln Glu Phe Phe Gly Arg Gly35 40 45His Glu Asp Thr Met Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser50 55 60Gly Lys Asp Pro Asn Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Ala Lys Tyr65 70 75 80<210>23<211>80<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic
<400>23Lys Glu Ala Asn Trp Lys Asn Ser Asp Lys Tyr Phe His Ala Arg Gly1 5 10 15Asn Tyr Asp Ala Ala Gln Arg Gly Pro Gly Gly Val Trp Ala Ala Glu20 25 30Lys Ile Ser Asp Gly Arg Glu Ala Phe Gln Glu Phe Phe Gly Arg Gly35 40 45His Glu Asp Thr Met Ile Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser50 55 60Gly Lys Asp Pro Asn Tyr Tyr Arg Pro Pro Gly Leu Pro Asp Lys Tyr65 70 75 80<210>24<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>24Ala Asp Gln Ala Ala Asn Glu Trp Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15His Phe Arg Pro Ala Gly Leu Pro Glu Lys Tyr20 25<210>25<211>19<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>25
Ala Asp Gln Glu Ala Asn Arg His Gly Arg Ser Gly Lys Asp Pro Asn15 10 15Tyr Tyr Arg<210>26<211>18<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>26Asp Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His15 10 15Phe Arg<210>27<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>27Gln Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His Phe15 10 15Arg<210>28<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<400>28
Ala Ala Asn Lys Trp Gly Arg Ser Gly Arg Asp Pro Asn His Phe Arg15 10 15<210>29<211>18<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>Synthetic<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(9)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(12)..(12)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(18)..(18)<223>X＝amino acid capable of forming salt bridge<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(6)..(6)<223>X＝glutamic acid or lysine or conservative substitution thereof<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(2)..(5)<223>X＝any amino acid<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(7)..(8)
<223>X＝any amino acid<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(10)..(11)<223>X＝any amino acid<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(13)..(17)<223>X＝any amino acid<400>29Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa15 10 15Xaa Xaa
权利要求
1.一种具有增强胆固醇水解酶活性的作用的分离肽段或其模拟物，所述分离肽段具有以下结构X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)或其中部分结构其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸；X6是谷氨酸或赖氨酸或其保守替换氨基酸；当所述肽段不含有下列序列时GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ IDNO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ IDNO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO20)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO21)；KEAGWKDGDKYFHARGNYAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO22)；KEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTMIDQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO23)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；orADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)。X2，X3，X4，X5，X7，X8，X10，X11，X13，X14，X15，X16和X17各自可为任何的氨基酸。
2.根据权利要求1的分离肽段或其模拟物，其中，X2是谷氨酸或其保守替换氨基酸；X3和X4各自是丙氨酸或其保守替换氨基酸；X5和X15各自是天冬氨酸或其保守替换氨基酸；X7是色氨酸或其保守替换氨基酸；X8和X11各自是甘氨酸或其保守替换氨基酸；X10是丝氨酸或是被其保守替换氨基酸；X13是天冬氨酸或其保守替换氨基酸；X14是脯氨酸或其保守替换氨基酸；X16是组氨酸或其保守替换氨基酸；X17是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸。
3.根据权利要求1所述的分离肽段或其模拟物，其少于80个氨基酸残基。
4.根据权利要求1的分离肽段或其模拟物，其含有18到79个氨基酸残基。
5.根据权利要求1的分离肽段或其模拟物，其包括DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或这些肽段中任何一个的突变体或其中部分肽段。
6.根据权利要求5的分离肽段或其模拟物，其与下列序列至少有80％的序列相同性DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或其中一部分。
7.根据权利要求5的分离肽段或其模拟物，其与下列序列至少有90％的序列相同性DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或其中一部分。
8.根据权利要求5的分离肽段或其模拟物，其与下列序列至少有95％的序列相同性DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或其中一部分。
9.根据权利要求5的分离肽段或其模拟物，其与下列序列至少有99％的序列相同性DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或其中一部分。
10.根据权利要求5的分离肽段或其模拟物，其中含有一个或更多个保守氨基酸替换的氨基酸序列肽段中包括DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADOEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ ID NO9)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ ID NO24)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或其中一部分。
11.根据权利要求1的分离肽段或其模拟物，其中的模拟物是小分子有机物。
12.根据权利要求1-10中任何一个所述的肽段或其模拟物，其是由人工合成或重组方式制备的。
13.一种化合物，其具有下列结构Y-Z其中Y包括能够增强胆固醇水解酶活性的肽段或其模拟物；并且Z包括连接在Y上且能够增强Y的功能的化合物；上述结构成立的条件是Y-Z不包含GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ IDNO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ IDNO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO20)；orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO21)。序列。
14.根据权利要求13的化合物，其中Y包括血浆淀粉样蛋白A中有胆固醇酯水解酶增强活性的肽结构域。
15.根据权利要求13的化合物，其中Y包括能够增强胆固醇水解酶活性的肽段或其模拟物，所述肽段包括X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)或其中的一部分其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸；X6是谷氨酸或赖氨酸或是其保守替换氨基酸；X2、X3、X4、X5、X7、X8、X10、X11、X13、X14、X15、X16和X17各自可为任何的氨基酸。
16.根据权利要求13的化合物，其中Z包括靶向试剂，能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强水解性，吸收性，分散性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/功效的试剂，或能够降低化合物毒性或副作用的试剂。
17.根据权利要求13的化合物，进一步包括连接在Y-Z上的Q，其中Q与Z相同或不同，Q包括靶向试剂，能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强水解性，吸收性，分散性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/性功效的试剂，或能够降低化合物毒性或副作用的试剂。
18.一种药用组合物，其包括权利要求1至12中任何一项所述的肽段或其模拟物，或包括权利要求13至17中的任何一项所述的化合物以及一种药物上可以接受的赋型剂。
19.根据权利要求18的药用组合物，进一步包括能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂。
20.根据权利要求18的药用组合物，其中的分离肽段或其模拟物或化合物是与脂复合的。
21.根据权利要求17的药用组合物，其中的分离肽段或其模拟物或化合物是被包裹于磷脂囊泡中的。
22.一种调整患者体内胆固醇代谢酶活性的方法，该方法包括给患者施以权利要求18-21中的任何一项所述的药用组合物。
23.根据权利要求22的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被增强的胆固醇酯水解酶。
24.根据权利要求22的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被抑制的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶。
25.根据权利要求22的方法，其中的胆固醇代谢酶位于巨噬细胞内。
26.根据权利要求22中的方法，进一步包括给患者施以能够治疗治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
27.根据权利要求26的方法，其中所述的第二试剂是酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
28.根据权利要求27的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
29.根据权利要求26的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被增强的胆固醇酯水解酶。
30.根据权利要求26的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被抑制的酰基辅酶A胆固醇酯水解酶。
31.根据权利要求26的方法，其中的胆固醇代谢酶位于巨噬细胞内。
32.一种治疗或预防患者动脉硬化的方法，该方法包括给患者施以权利要求18到21中任何一项所述的药用组合物。
33.根据权利要求32的方法，进一步包括给患者施以治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
34.根据权利要求33的方法，其中的第二试剂是酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
35.根据权利要求34的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
36.一种治疗冠心病或心血管疾病的方法，该方法包括给患者施以权利要求18到21中的任何一项所述的药用组合物。
37.根据权利要求36的方法，进一步包括给患者施以治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
38.根据权利要求37的方法，其中的第二试剂是酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
39.根据权利要求38的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
40.一种预防和抑制炎症的方法，该方法包括给患者施以权利要求18，20或21中的任何一项所述的药用组合物。
41.一种能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物，其中所述肽段包括(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6或其中一部分，其中F是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；并且n为1或2，其中，当n为1时所述分离肽段包括XFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13)其中F是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；并且X，X1，X4，X5，X6各自可为任何的氨基酸；X2为疏水性或非极性氨基酸；并且X3为组氨酸或其保守替换氨基酸；当n为2时，所述分离肽段包括XaXbFFX1FX2X3X4X5FX6(序列14)其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；Xa和X6是能够形成盐桥的氨基酸；并且当所述肽段不包含以下序列时GFFSFVHEAFQGAGDM(SEQ ID NO15)；GFFSFIGEAFQGAGDM(SEQ ID NO16)；RSFFSFLGEAFDGARDMW(SEQ ID NO17)；GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ IDNO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ IDNO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO20)；orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO21)。Xb，X，X1，X2，X3，X4，X5各自可为任何的氨基酸。
42.根据权利要求41的分离肽段或其模拟物，其包括GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或这些肽段中任何一个的突变体或其中一部分。
43.根据权利要求42的分离肽段或其模拟物，其至少与下列序列或其中一部分有80％的序列相同性GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或其中一部分。
44.根据权利要求42的分离肽段或其模拟物，其至少与下列序列或其中一部分有90％的序列相同性GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或其中一部分。
45.根据权利要求42的分离肽段或其模拟物，其至少与下列序列或其中一部分有95％的序列相同性GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或其中一部分。
46.根据权利要求42中的分离肽段或其模拟物，其至少与下列序列或其中一部分有99％的序列相同性GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或其中一部分。
47.根据权利要求42中的分离肽段或其模拟物，其序列中含有一个或更多个保守氨基酸替换的肽段包括GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或其中一部分。
48.根据权利要求47的分离肽段或其模拟物，其中至少有一个保守替换的氨基酸是芳香性氨基酸。
49.根据权利要求41的分离肽段或其模拟物，其中的模拟物是小分子有机物。
50.根据权利要求41到49中任何一项所述的分离肽段或其模拟物，其是由人工合成或重组方式制备的。
51.一种化合物，其包括下列结构Y-Z其中Y包括能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物，并且当Y-Z不包含如下序列时GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ IDNO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ IDNO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO20)；orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO21)。其中的Z包括连接到Y上的能够增强Y的功能的化合物。
52.根据权利要求51中的化合物，其中的Y包括血浆淀粉样蛋白A上具有酰基辅酶A胆固醇酰基酰酶抑制活性的肽结构域。
53.根据权利要求51的化合物，其中的Y包括能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物，所述肽段包括下列结构或其中一部分(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6其中F是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；并且n为1或2，其中，当n为1时所述分离肽段包括XFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13)其中F是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；并且X，X1，X4，X5，X6各自可为任何的氨基酸；X2为疏水性或非极性氨基酸；并且X3为组氨酸或其保守替换氨基酸；当n为2时，所述分离肽段包括XaXbFFX1FX2X3X4X5FX6(序列14)其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；Xa和X6是能够形成盐桥的氨基酸；并且Xb，X，X1，X2，X3，X4，X5各自可为任何的氨基酸。
54.根据权利要求51的化合物，其中Z包括靶向试剂，够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强水解性，吸收性，分散性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/功效的试剂，或能够降低化合物毒性或副作用的试剂。
55.根据权利要求51中的化合物，进一步包括连接在Y-Z上的Q，其中Q与Z相同或不同并且Q包括靶向试剂，能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强水解性，吸收性，分散性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/功效的试剂，或能够降低化合物毒性或副作用的试剂。
56.一种药用组合物，其包括权利要求41-50中任何一项所述的分离肽段或其模拟物，或权利要求51-55中任何一项所述的化合物和药物上可以接受的赋型剂。
57.根据权利要求56的药用组合物，进一步包括能够治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
58.根据权利要求56中的药用组合物，其中的分离肽段或其模拟物或化合物是与脂复合的。
59.根据权利要求56的药用组合物，其中的分离肽段或其模拟物或化合物包裹于磷脂囊泡中。
60.一种调整患者体内胆固醇代谢酶活性的方法，该方法包括给患者施以权利要求56-59中的任何一项所述的药用组合物。
61.根据权利要求60的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被增强的胆固醇水解酶。
62.根据权利要求60的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被抑制的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶。
63.根据权利要求60中的方法，其中的胆固醇代谢酶位于巨噬细胞内。
64.根据权利要求60中的方法，进一步包括给患者施以能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂。
65.根据权利要求64的方法，其中的第二试剂是酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
66.根据权利要求65的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
67.根据权利要求64的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被增强的胆固醇酯水解酶。
68.根据权利要求64的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被抑制的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂。
69.根据权利要求64中的方法，其中的胆固醇代谢酶位于巨噬细胞内。
70.一种治疗或预防动脉硬化的方法，该方法包括给患者施以权利要求56到59中的任何一项所述的药用组合物。
71.根据权利要求70的方法，进一步包括给患者施以能够治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
72.根据权利要求71的方法，其中的第二试剂是胆固醇酯水解酶增强剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
73.根据权利要求72的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
74.一种治疗冠心病或心血管疾病的方法，该方法包括给患者施以权利要求56-59中任何一项所述的药用组合物。
75.根据权利要求74的方法，进一步包括给患者施以能够治疗动脉硬化，心血管疾病或冠心病的第二试剂。
76.根据权利要求75的方法，其中的第二试剂是酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂，无载脂蛋白受体，抑制素，树脂或胆汁酸多价鳌合物，烟碱酸，肝X受体激动剂，Ca2+拮抗剂，或过氧化物酶体增殖因子活化受体调节剂。
77.根据权利要求76的方法，其中的无载脂蛋白受体是环糊精。
78.一种预防和抑制患者炎症的方法，该方法包括给患者施以权利要求56、58或59中任何一项所述的药用组合物。
79.一种药用组合物，其中包括能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段或其模拟物，以及能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段或其模拟物。
80.根据权利要求79的药用组合物，其中能够增强胆固醇酯水解酶活性的肽段在不包含以下结构时候会GFFSFIGEAFQGAGDMWRAYTDMKEAGWKDGDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDARESFQEFFGRGHEDTMADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(SEQ IDNO18)；GFFSFVHEAFQGAGDMWRAYTDMKEANWKNSDKYFHARGNYDAAQRGPGGVWAAEKISDGREAFQEFFGRGHEDTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ IDNO19)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGVWAAEAISDARENIQRFFGHGAEDSLADQAANEWGRSGKDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO20)；orRSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSDMREANYIGSDKYFHARGNYDAAKRGPGGAWAAEVISNARENIQRLTGHGAEDSLADQAANKWGRSGRDPNHFRPAGLPEKY(SEQ IDNO21)。连接在一个能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的肽段或其模拟物上。
81.根据权利要求79的药用组合物，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物包括X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18(序列29)或其中一部分其中X1和X9，X12或X18是能够形成盐桥的氨基酸；X6是谷氨酸或赖氨酸，或其保守替换氨基酸；并且X2，X3，X4，X5，X7，X8，X10，X11，X13，X14，X15，X16和X17各自可为任何的氨基酸。
82.根据权利要求80的药用组合物，其中X2是谷氨酸或其保守替换氨基酸；X3和X4各自丙氨酸或其保守替换氨基酸；X5和X15各自是天冬氨酸或其保守替换氨基酸；X7是色氨酸或其保守替换氨基酸；X8和X11各自是甘氨酸或其保守替换氨基酸；X13是天冬氨酸或其保守替换氨基酸；X14是脯氨酸或其保守替换氨基酸；X16是组氨酸或其保守替换氨基酸；X17是苯丙氨酸或其保守替换氨基酸。
83.根据权利要求79的药用组合物，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或模拟物包括DTIADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO4)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPDKY(SEQ ID NO8)；ADQEANRHGRSGKDPNYYRPPGLPAKY(D-form；SEQ ID NO10)；ADQEANRHGRSGKDPNYYR(SEQ ID NO25)；ADQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO11)；ADQAANEWGRSGKDPNHFR(SEQ ID NO12)；orDQAANKWGRSGRDPNHFR(SEQ ID NO26)，或上述肽段中任何一个的突变体或其中一部分。
84.根据权利要求79的药用组合物，其中能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物或化合物包括下列结构(X)nFFX1FX2X3X4X5FX6其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；并且n为1或2，其中当n为1时，所述分离肽段包括XFFX1FX2X3X4X5FX6(序列13)其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；X，X1，X4X5和X6各自可为任何的氨基酸；X2是疏水性或非极性氨基酸；并且X3是组氨酸或其保守替换氨基酸；当n为2时，所述分离肽段包括XaXbFFX1FX4X3X4X5FX6(序列14)，其中F为苯丙氨酸或其保守替换氨基酸；Xa和X6是能够形成盐桥的氨基酸；Xb，X，X1，X2，X3，X4，X5各自可为任何的氨基酸。
85.根据权利要求79的药用组合物，其中能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物或化合物包括GFFSFVHEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO1)；RSFFSFLGEAFDGARDMWRAYSD(SEQ ID NO6)；orRGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)，或上述肽段中任何一个的肽突变体或其中一部分。
86.根据权利要求78药用组合物，其中能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物和能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段及其模拟物，可以混合后制成脂复合体，或分别制成脂复合体然后在给药前将其混合。
87.根据权利要求79的药用组合物，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物和/或能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物连接于Z上，其中的Z是靶向试剂，能够治疗动脉硬化、心血管疾病或冠心病的第二试剂，能够增强化合物水解性，吸收性，分散性，半衰期，生物利用度，稳定性，活性和/功效的试剂。
88.一种药用组合物，其包括权利要求13的化合物Y-Z和权利要求51的化合物Y-Z。
89.一种调整患者体内胆固醇代谢酶活性的方法，该方法包括给患者施以权利要求79-88中任何一项所述的药用组合物。
90.根据权利要求89的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被增强的胆固醇酯水解酶。
91.根据权利要求89的方法，其中的胆固醇代谢酶是活性被抑制的酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶。
92.根据权利要求89的方法，其中的胆固醇代谢酶位于巨噬细胞中。
93.根据权利要求89中的方法，其中的给药方法为每日给药或每隔一日给药或每半周给药。
94.一种治疗和预防患者动脉硬化的方法，该方法包括给患者施以权利要求79-88中任何一项所述的药用组合物。
95.根据权利要求94的方法，其中药用组合物的给药方法为每天给药或每隔一日给药或每半周给药。
96.一种治疗患者冠心病或心血管疾病的方法，该方法包括给患者施以权利要求79-88中任何一项所述的药用组合物。
97.根据权利要求96的方法，其中的药用组合物的给药方式为每天给药、每隔一天给药或每半周给药。
98.一种增加胆固醇从巨噬细胞中流出的方法，该方法包括给巨噬细胞施以能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物或施以能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物。
99.根据权利要求98的方法，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物或能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物采取体内给药方式。
100.根据权利要求98的方法，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物或能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物采取对人类进行体内给药方式。
101.根据权利要求98的方法，其中给巨噬细胞施以能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物和能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物。
102.根据权利要求101的方法，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物和能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物采取体内给药方式。
103.根据权利要求101的方法，其中的能够增强胆固醇酯水解酶活性的分离肽段或其模拟物和能够抑制酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶活性的分离肽段或其模拟物采取对人类进行体内给药方式。
104.一种增加胆固醇从巨噬细胞中流出的方法，该方法包括给巨噬细胞施以权利要求13的化合物Y-Z和权利要求51的化合物Y-Z。
105.根据权利要求104的方法，其中给巨噬细胞施以权利要求13的化合物Y-Z和权利要求51的化合物Y-Z。
106.一种分离肽段，其包括RGFFSFIGEAFQGAGDMWRAY(SEQ ID NO7)。
全文摘要
本发明提供了经过筛选的能够增强巨噬细胞胆固醇酯水解酶活性和/或抑制酰基辅酶A胆固醇转移酶活性的源于哺乳动物血清淀粉样蛋白A2.1的肽段及其模拟物，化合物或组合物，并提供了使用这些成分治疗冠心病，心血管疾病和动脉硬化的方法。
文档编号C07K7/00GK1835970SQ200480023040
公开日2006年9月20日 申请日期2004年6月11日 优先权日2003年6月12日
发明者罗伯特·奇斯维斯奇, 谭遂鹏, 约翰·B·安西, 贾宗超 申请人:金斯顿女王大学