专利名称：一种雷莫拉宁三种单组分的分离方法
技术领域：
本发明涉及一种抗生素雷莫拉宁三种单组分A1，A2，A3的分离方法。
背景技术：
雷莫拉宁(Ramoplanin，A/16686)提纯的传统方法是美国专利(USP4427656)中所述的用制备型的高效液相色谱(反相HPLC，柱μ-BondapackC18、直径7.8mm×300mm，流动相甲酸铵和乙腈混合液)分离其A1，A2，A3三个单组分，该方法所需要的设备昂贵，单次进样量小，而且制备液相由于需要固定的制备柱子，通常这些柱子都是厂家直接生产好的，所以大小固定，不可以更改。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术中的缺陷，提供一种单次进样量大、无需昂贵设备、分离效果相当的雷莫拉宁三种单组分的分离方法。
本发明人为此对能增大进样量的诸多分离柱进行了筛选，发现可通过下列技术方案来解决上述问题。本发明雷莫拉宁三种单组分的分离方法，包括将含有雷莫拉宁三种组分A1，A2，A3的混合物用甲醇水溶液溶解，于C18反相硅胶柱的上端湿法或者干法上样，用甲醇水溶液作为流动相过柱，进行柱层析分离。
其中，本发明所说的“含有雷莫拉宁三种组分的混合物”可以根据现有技术制备，例如可参照上述美国专利文献公开的方法，特别是例1～例3的步骤来制备。
较佳地，溶解该含有雷莫拉宁三种组分的混合物的甲醇水溶液浓度为10％～40％(v/v)，加入甲醇是为了增大溶解性，甲醇浓度太高会影响后续的洗脱流动相中的甲醇浓度，从而导致纯化效率下降。
而该作为流动相的甲醇水溶液浓度优选50～70％(v/v)，因为甲醇浓度太低无法洗脱下雷莫拉宁，或者洗脱速度过慢，浓度太高则影响分离分辨率。
本发明所说的干法上样较佳地是先将所述含有雷莫拉宁三种组分的混合物用甲醇水溶液溶解后的溶解物干燥，然后再上样。
本发明采用上述C18反相硅胶柱层析的流速优选0.5～2m1/min，在常规HPLC方法监测下收集含有A1、A2、A3各组分90％以上的流出液，分离得到雷莫拉宁的三种单组分。
本发明分离方法与现有制备型HPLC分离方法相比，在分离等量的三个组分时单次进样量大，价格便宜，且分离效果相当；而且，使用C18反相硅胶柱层析，可以根据需要自行用C18反相硅胶填料装柱子，填料和柱子的体积，高径都可以自行调整。
具体实施例方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。
下面实施例中含有雷莫拉宁三种组分A1、A2、A3的混合物是参照上述美国专利文献中例1～例3的步骤来制备。
实施例1将含有雷莫拉宁三种组分A1、A2、A3的混合物用10％的甲醇水溶液溶解，于C18反相硅胶柱(柱高×直径20cm×1cm)的上端上样，用50％的甲醇水溶液作为流动相过柱，流速0.5ml/min。常规HPLC监测下收集含有各组分90％以上的流出液。收率为83％。
实施例2将含有雷莫拉宁三种组分的混合物用40％的甲醇水溶液溶解，于C18反相硅胶柱(柱高×直径20cm×1cm)的上端上样，用70％的甲醇水溶液作为流动相过柱，流速2ml/min。常规HPLC监测下收集含有各组分90％以上的流出液。收率为85％。
实施例3将含有雷莫拉宁三种组分的混合物用20％的甲醇水溶液溶解，将溶解物真空干燥，于C18反相硅胶柱(柱高×直径20cm×1cm)的上端上样，用60％的甲醇水溶液作为流动相过柱，流速1ml/min。常规HPLC监测下收集含有各组分90％以上的流出液。收率为82％。
上述实施例中所用的C18反相硅胶柱填料是北京慧德易科技有限责任公司20μm-50μm球型C18反相硅胶柱填料；余试剂为常规市售色谱纯。
权利要求
1.一种雷莫拉宁三种单组分的分离方法，其包括将含有雷莫拉宁三种组分A1，A2，A3的混合物用甲醇水溶液溶解，于C18反相硅胶柱的上端湿法或者干法上样，用甲醇水溶液作为流动相过柱，进行柱层析分离。
2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于溶解该含有雷莫拉宁三种组分的混合物的甲醇水溶液浓度为10％～40％。
3.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于该作为流动相的甲醇水溶液浓度为50～70％。
4.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于所说的干法上样包括先将所述含有雷莫拉宁三种组分的混合物用甲醇水溶液溶解后的溶解物干燥，然后再上样。
5.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述柱层析的流速为0.5～2ml/min。
全文摘要
本发明公开了一种雷莫拉宁三种单组分的分离方法，其包括将含有雷莫拉宁三种组分A1，A2，A3的混合物用甲醇水溶液溶解，于C
文档编号C07G11/00GK101024661SQ20061002415
公开日2007年8月29日 申请日期2006年2月24日 优先权日2006年2月24日
发明者李继安, 徐斌 申请人:上海医药工业研究院