硬化素结合剂的制作方法

专利名称：：硬化素结合剂的制作方法
技术领域：
：一般而言，本发明涉及硬化素(sclerostin)蛋白质包括人硬化素蛋白质的表位，以及能够与硬化素或其片段结合的结合刑(例如抗体)。
背景技术：
：在个体一生中存在骨量变化的2或3个不同阶段(参见Riggs，/.154:63-77(1991))。笫一个阶段在男性和女性中都发生且进展至获得骨峰值。笫一个阶段通过由于骨膜附着率的軟骨内生长板的线性生长和辐射生长达到。第二个阶段对于松质骨(扁骨例如推骨和骨盆)约30岁开始且对于骨皮质(例如四肢中发现的长骨)约40岁开始且持续至老年。这个阶段的特征在于慢性骨丢失且在男性和女性中都发生。在女性中，还存在第三个阶段的骨丢失，最可能是由于绝经后的雌激素缺乏。单独在这个阶段时，女性可能丢失来自骨皮质和来自小梁室的另外骨量(参见Riggs，同上)。骨矿物质含量的丢失可以由广泛多样的条件引起，且可以导致严重的医学问题。例如，骨质疏松症是人中的衰弱性疾病，并且特征在于骨骼骨量和矿物质密度的显著减少，骨结构恶化，包括骨微结构恶化以及受侵袭个体中骨脆性(即，骨强度减少)和对骨折的敏感性的相应增加。在人中的骨质疏松症之前一般为临床骨量减少(骨矿物质密度以大于1个标准差但小于2.5个标准差的程度低于年轻人骨的平均值),所迷临床骨量减少是在美国大约25,000,000人中发现的病症，在美闺还有7,000,000-8，000，000名患者已诊断患有临床骨质疏松症(定义为骨矿物质含量以大于2.5个标准差的程度低于成熟年轻人骨)。在人群中的骨质疏松症的频率随着年龄增加。在高加索人中，骨质疏松症在女性中居多，在美国，女性占80%的骨质疏松症患者群。在老年人中增加的脆性和对骨骼骨的骨折的敏感性经由这个群体中更大的意外跌倒危险而加重。髋、腕和推骨骨折是与骨质疏松症相关的最常见损伤。尤其是髖骨折对于患者是极端不舒服和昂贵的，而且对于女性与髙死亡率和发病率相关。尽管骨质疏松症已视为由于骨量减少的骨折危险增加，但用于骨骼病症的目前可用治疗几乎都不能增加成人的骨密度，并且大多数目前可用治疗主要通过抑制进一步的骨再吸收而不是刺激新骨生成来起作用。雌激素目前被开处方以延緩骨丢失。然而，关于患者是否获得任何长期利益和雌激素对超过75岁的患者是否具有任何影响存在某些争论。此外，雌激素的使用被认为増加乳腺癌和子宫内獲癌的危险，降钙素、骨钙蛋白与维生素K、或高刑量饮食钙连同或不连同维生素D也已建议用于绝经后女性。然而，高剂量的钙通常具有不希望的胃肠副作用，且必须连续监控血清和尿钩水平(例如Khosla和Riggs，他yo户舰70:978982，1995)。关于骨质疏松症的其他目前治疗方法包括二膦酸盐(例如，FosamaxTM、ActonelTM、Bonviva、Zoineta、奥帕膦酸盐、奈立膦酸钠、替鲁膦酸钠片、骨磷)、甲状旁腺激素、钙受体拮抗刑(calcilytics)、拟铜刑(calcimimetics)(例如cinacalcet)、他汀类药物、促蛋白合成类固醇、镧和锶盐，以及氣化钠。然而此类治疗通常伴随不希望有的副作用(参见Khosla和Riggs，同上)。S0ST基因的产物硬化素在硬化性骨化病(sclerosteosis)中不存在，所迷硬化性骨化病是特征在于骨过度生长和强致密骨的骨骼疾病(Brunkow等人，Am.J.Hum.Genet.，68:577-589，2001;Balemans等人，Hum,Mol.Genet,，10:537-543，2001)。人硬化素的M酸序列由Brunkow等人(同上)报告且在本文中公开为SEQIDNO:la发明简述本文公开的是可以用于增加骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨重(bone迈ass)、骨质重(bonequality)和骨强度中的至少一种，且因此可以用于治疗广泛多样病症的组合物和方法，在所述病症中骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度中的至少一种的增加是希望的。本发明还提供了本文所述的其他相关优点。本发明涉及由本文公开的结合剂识别的人硬化素的区域(表位)，使用这些表位的方法，以及制备此类表位的方法。本发明还涉及对鉴别为Loop2的硬化素区域特异的表位，以及与那个区域特异性结合的结合剂。本发明还涉及对硬化素的胱氨酸结区域特异的表位，以及与那个区域特异性结合的结合剂例如抗体。本发明涉及与硬化素特异性结合的结合剂例如抗体。结合剂可以通过其交叉阻断本文公开的至少一种抗体与硬化素的结合和/或被本文公开的至少一种抗体交叉阻断结合硬化素的能力来表征。抗体及其他结合刑还可以通过在如本文公开的"人硬化素肽表位竟争结合测定法，，中其与人硬化素肽的结合模式来表征。本发明涉及可以增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度中的至少一种的结合剂，例如抗体。本发明涉及在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应的结合剂，例如抗体。本发明进一步涉及包含通过至少一个二硫鍵连接的2、3或4个多肽片段并且代表硬化素的胱氨酸结(cystine-knot)的核心区的多肽构建体，以及能够与其特异性结合的抗体。本发明涉及获得适合于用作免疫原用于在哺乳动物中产生能够与硬化素特异性结合的结合刑例如抗体的表位的方法；在某些实施方案中产生的结合刑能够在体内中和硬化素活性.本发明涉及当組合物施用于动物时用于诱发对硬化素特异的抗体的组合物，所迷组合物包舍具有SEQIDNO:6、SEQIDNO:63、SBQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:67、SEQIDNO:68或SBQIDN0:69的4U^酸序列的多肽，本发明还涉及当组合物施用于动物时用于诱发对硬化素特异的抗体的组合物，所述组合物包含基本上由SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4或SEQIDNO:5的氨基酸序列组成的至少一种多肽；所述组合物可以包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDN0:5的氨基酸序列中的至少2种或至少3种；并且所述组合物可以包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SBQIDN0:5中的所有4种氨基酸序列，本发明进一步涉及当组合物施用于动物时用于诱发对硬化素特异的抗体的组合物，所述组合物包含具有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的氨基酸序列的多肽，其中SEQIDNO:2和4通过在第57和111位的氨基酸处(参考SEQIDNO:1)的二疏鍵连接，并且SEQIDNO:3和5通过(a)在笫82和142位的氨基酸处(参考SEQIDNO:1)的二硫鍵、和(b)在笫86和144位的氨基酸处(参考SEQIDN0:1)的二疏鍵中的至少一个来连接；所述多肽可以保留SEQIDN0:1的人硬化素的相应多肽区域的三级结构。本发明还涉及基本上由SEQIDN0:1的多重截短的人硬化素蛋白质组成的多肽T20.6，其中SEQIDNO:1的氨基酸1-50、65-72、91-100、118-137和150-190在所述多肽中不存在；这种多肽可以通过人硬化素的胰蛋白酶消化来获得，并且蛋白质可以通过HPLC分级分离法来分离。本发明进一步涉及包含SEQIDN0:1的氨基酸51-64、73-90、101-117和138-149的人硬化素的免疫原性部分T20.6，其中所迷免疫原性部分包含至少下列一个(a)氨基酸57和lll之间的二疏鍵；(b)氛基酸82和142之间的二碟鍵；和(c)氨基酸86和144之间的二确^鍵；所迷免疫原性部分可以具有这些二碟鍵中的至少2个；并且所迷免疫原性部分可以具有所有3个二硫鍵。本发明进一步涉及包含SEQIDNO:l的氨基酸57-64、73-86、111-117和138-144的人硬化素的免疫原性部分T20.6衍生物，其中所述免疫原性部分包含至少下列一个U)氨基酸57和111之间的二硫键；(b)氨基酸82和142之间的二硫键；和(c)氨基酸86和144之间的二硫鍵；所述免疫原性部分可以具有这些二硫键中的至少2个；并且所述免疫原性部分可以具有所有3个二硫键。本发明再进一步涉及基本上由在C末端和N末端截短的SEQIDNO:1的人硬化素蛋白质组成的多肽，其中SEQIDNO:1的氨基酸1-85和112-190在所述多肽中不存在。本发明还涉及包含SEQIDNO:1的氨基酸86-111的人硬化素的免疫原性部分；所述免疫原性部分可以基本上由连续氨基酸CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC(SEQIDNO:6)组成。本发明进一步涉及包含SEQIDNO:98的氣基酸92-109的大鼠硬化素的免疫原性部分；所述免疫原性部分可以基本上由连续氨基酸PMIGRVKWWRPNGPDFR(SEQIDNO:96)组成。本发明再进一步涉及包含SBQIDNO:98的氨基酸99-120的大鼠硬化素的免疫原性部分；所述免疫原性部分可以基本上由连续氨基酸KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV(SEQIDNO:97)组成。本发明涉及生产人硬化素的免疫原性部分的方法，其包括下列步骤(a)处理人硬化素以达到完全胰蛋白酶消化；(b)收集如通过以0.2迈1/分钟的流速使用0.05%三氣乙酸-溶于0.05%TFA的90%乙猜的线性梯度从反相HPLC柱中洗脱测定的，平均分子量为7，122.0道尔頓(理论质量7121.5的道尔顿)或保留时间为约20.6分钟的狭蛋白醉消化样品；和(c)纯化免疫原性部分。本发明涉及产生能够与硬化素特异性结合的抗体的方法，其包括(a)用包含SBQIDN0:6、SBQIDNO:63、SEQIDNO:64、SBQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:67、SEQIDNO:68、SEQIDNO:69、SEQIDNO:96或SEQIDNO:97的多肽的組合物免疫动物；(b)从动物中收集血清；和(c)从血清中分离能够与硬化素特异性结合的抗体。本发明还涉及产生能够与硬化素特异性结合的抗体的方法，所述方法包括(a)用包含多肽T20.6或T20.6衍生物的組合物免疫动物；(b)从动物中收集血清；和(c)从血清中分离能够与硬化素特异性结合的抗体。本发明进一步涉及检测生物样品中的抗硬化素抗体的方法，其包括下列步骤(a)使生物样品与基本上由SEQIDN0:6、SEQIDNO:63、SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:67、SEQIDNO:68、SEQIDNO:69、SEQIDNO:96或SEQIDNO:97组成的多肽在允许抗体和所述多肽之间形成复合物的条件下接触；和(b)检测复合物的存在或缺乏，其中复合物的存在表明生物样品包含抗硬化素抗体。本发明还涉及检测生物样品中的抗硬化素抗体的方法，其包括下列步骤(a)使生物样品与多肽T20.6或T20.6衍生物在允许抗体和所述多肽之间形成复合物的条件下接触；和(b)检测复合物的存在或缺乏，其中复合物的存在表明生物样品包含抗硬化素抗体。本发明进一步涉及交叉阻断抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C或Ab-D中至少一种与硬化素蛋白质的结合的硬化素结合剂，例如抗体，硬化素结合刑也可以被抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C或Ab-D中至少一种交又阻断与硬化素的结合.分离的抗体或其抗原结合片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体等。本发明进一步涉及被抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C或Ab-D中至少一种交叉阻断与硬化素的结合的硬化素结合剂，例如抗体。分离的抗体或其抗原结合片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体等。本发明进一步涉及交叉阻断抗体1-24(Ab-l至Ab-24)中至少一种与硬化素蛋白质的结合的硬化素结合剂，例如分离的抗体。硬化素结合剂也可以被抗体1-24(Ab-1至Ab-24)中至少一种交叉阻断与硬化素的结合。分离的抗体或其抗原结合片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体或嵌合抗体。本发明进一步涉及被抗体1-24(Ab-l至Ab-24)中至少一种交叉阻断与硬化素的结合的硬化素结合剂，例如分离的抗体；分离的抗体或其抗原结合片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体或嵌合抗体。本发明进一步涉及在"人硬化素肽表位竟争结合测定法"中显示与人硬化素肽的结合模式类似于抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C或Ab-D中至少一种显示的那种的结合剂，例如分离的抗体；分离的抗体或其抗原结合片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体或嵌合抗体，本发明进一步涉及用于治疗哺乳动物受试者中的低骨形成、低骨矿物质密度、低骨矿物质含量、低骨量、低骨质重和低骨强度中的至少一种的方法，其包括给需要此类治疗的受试者提供抗硬化素结合刑，其量足以增加骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质童和骨强度中的至少一种，其中所述抗硬化素结合刑包含抗体或其硬化素结合片段。本发明还涉及分离的硬化素多肽或其片段，其中所迷多肽包含6个保守的半胱氨酸残基并且其片段包含SEQIDN0:2的7-14个4U^酸；SEQIDNO:3的8-17个氨基酸；SEQIDNO:4的8-18个残基；和SBQIDNO:5的6-12个残基，并且所述多肽或其片段通过SEQIDNO:2和4之间，以及SEQIDNO:3和5之间的二疏鍵来穗定；所迷多肽或片歡可以包含SBQIDNO:2的10-14个絲酸；SEQIDNO:3的14-17个氨基酸；SEQIDNO:4的13-18个残基；和SEQIDNO:5的8-12个残基；并且所述多肽或片段可以包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5。本文提供了与人硬化素特异性结合的抗体。抗体的特征在于其交叉阻断本文公开的至少一种抗体与人硬化素的结合和/或被本文公开的至少一种抗体交叉阻断与人硬化素的结合的能力。还提供了可以增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度中的至少一种的分离的抗体，或其抗原结合片段。还提供了在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应的分离的抗体，或其抗原结合片段。还提供了与人硬化素特异性结合，且具有选自下列SEQIDNOs的至少一个CDR序列的结合剂例如抗体39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、78、79、80、81、99、100、,101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、351、352、353、358、359和360，及其变体，其中所述抗体或其抗原结合片段中和硬化素。还提供了与人硬化素特异性结合，且具有选自下列犯QIDNOs的至少一个CDR序列的结合剂例如抗体39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、78、79、80、81、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、351、352、353、358、359和360，及其变体。还提供了对蛋白质的体内活性重要的人硬化素区域。本发明的这些以及其他方面在参考下列详细描述和附图后将变得显而易见。本文公开的所有参考文献在此整体引入作为参考，如同每个参考文献单独引入一样。附困简述图l描述了关于成熟形式(信号肽被切除)的抗人硬化素和抗小鼠硬化素抗体Ab-A的轻链(困1A)(SEQIDNO:23)和重链(困IB)(SEQIDNO:27)的氨基酸序列。图2描述了关于成熟形式(信号肽被切除)的抗人硬化素和抗小鼠硬化素抗体Ab-B的轻链(图2A)(SEQIDNO:31)和重链(图2B)(SEQIDNO:35)的氨基酸序列。图3描述了关于成熟形式(信号肽被切除)的抗人硬化素和抗小鼠硬化素抗体Ab-C的轻链(图3A)(SEQIDNO:15)和重链(图3B)(SEQIDNO:19)的氨基酸序列。图4描述了关于成熟形式(信号肽被切除)的抗人硬化素和抗小鼠硬化素抗体Ab-D的轻链(图4A)(SEQIDNO:7)和重链(困4B)(SEQIDNO:11)的氨基酸序列。困5描述了用媒介物、PTH(l-34)、A卜A或Ab-B处理3周后在小鼠的2个骨骼部位(腰推和胜骨干骺端)测量的骨矿物质密度，困6描迷了用媒介物、PTH(1-34)或Ab-d处理2周后在小鼠的2个骨骼部位(腰堆和胫骨干銜端)测量的骨矿物质密度，围7描迷了用媒介物或Ab-D处理3周后在小鼠的2个骨格部位(腰推和胫骨干骺端)測量的骨矿物质密度.困8描迷了成熟形式(倌号肽被切除)的人硬化素(SEQIDNO:1)的氨基酸序列。还描述了编码成熟形式的人硬化素的人硬化素编码区的核苷酸序列。8个半胱氨酸被编号Cl到C8。胱氨酸结由3个二疏键(C1-C5;C3-C7;C4-C8)形成。C2和C6也形成二硫鍵，然而这个二硫键不是胱氨酸结的部分。图9描迷了人硬化素的基本结构的示意图。存在N末端臂(从笫一个Q到Cl)和C末端臂(从C8到末端Y)。在这些臂之间存在胱氨酸结结构(由3个二硫鍵形成Cl-C5;C3-C7;C4-C8)和称为Loopl、Loop2和Loop3的3个环。Loopl和Loop3的远侧区通过C2-C6二硫鍵连接。指出了可能的胰蛋白酶切割位点(精氨酸eR和赖氨酸"K)。指出了某些可能的AspN切割位点(只显示了天冬氨酸(D)残基)。图IO描述了用胰蛋白酶或AspN消化后人硬化素的HPLC肽困。指出了通过胰蛋白酶消化产生的人硬化素肽(T19.2、T20、T20.6和T21-22)，同样指出了通过AspN消化后产生的人硬化素肽(AspN14.6、AspN18,6和AspN22.7-23.5)。图11描述了通过胰蛋白酶消化产生的分离的人硬化素二硫鍵合肽的序列和质量信息。Seq.pos.-序列位置。0bs.-观察到的。观察到的质量通过BSI-LC-MS分析测定。图12描述了通过AspN消化产生的分离的人硬化素肽的序列和质量信息，AspN22.7-23.5肽包含4个二硫鍵。Seq.pos.-序列位置。Obs.=观察到的。观察到的质量通过ESI-LC-MS分析测定。图13显示了通过狭蛋白酶消化产生的4种人硬化素肽(T19.2、T20、T20.6和T21-22)的线性示意困。图14显示了通过AspN消化产生的5种人硬化素肽(AspN14.6、Asp亂6和Asp亂7-23.5)的线性示意困。Asp亂6HPLC峰由不通过任何二疏鍵连接的3种肽組成，困15显示了来自基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合測定法"的共振单位Uu)倌号.测定了与各种人硬化素肽(在溶液中)结合的Mab以及与完整成熟形式的人硬化素(固定在Biacore芯片上)结合的Mab。显示了关于Ab-A的数据。使用的人硬化素肽是T19.2、T20、T20.6、T21-22、AspN14.6、AspN18.6和AspN22.7-23.5。图16显示了来自基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"的共振单位(Ru)信号。测定了与各种人硬化素肽(在溶液中)结合的Mab以及与完整成熟形式的人硬化素(固定在Biacore芯片上)结合的Mab。显示了关于Ab-B的数据。使用的人硬化素肽是T19.2、T20、T20.6、T21-22、AspN14.6、AspN18.6和AspN22.7-23.5。图17显示了来自基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"的共振单位(Ru)信号。测定了与各种人硬化素肽(在溶液中)结合的Mab以及与完整成熟形式的人硬化素(固定在Biacore芯片上)结合的Mab。显示了关于Ab-C的数据。使用的人硬化素肽是T19.2、T20、T20.6、T21-22、AspN14.6、AspN18.6和AspN22.7-23.5。图18显示了来自基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"的共振单位(Ru)信号。测定了与各种人硬化素肽(在溶液中)结合的Mab以及与完整成熟形式的人硬化素(固定在Biacore芯片上)结合的Mab。显示了关于Ab-D的数据。使用的人硬化素肽是T19.2、T20、T20.6、T21-22、AspN14.6、AspN18.6和AspN22.7-23.5。图19显示了人硬化素的2种Mab结合表位。图19A显示了关于Ab-A和Ab-B与人硬化素结合的Loop2表位的序列(SEQIDNO:6)。图19B显示了关于Ab-C和Ab-D与人硬化素结合的T20.6表位的序列、二硫鍵合和示意图(SEQIDNO:2-5)。困20描述了用狭蛋白酶消化后的人硬化素的HPLC肽困。图20A显示了人硬化素Ab-D复合物的消化。困20B显示了单独的人硬化素的消化，指出了T19.2、T20、T20.6和T21-22肽的峰。图21显示了关于Ab-D与人硬化素结合的"T20.6衍生物l(胱氨酸结+4臂)"表位的序列、二疏鍵合和示意困(SEQIDNO:70-73)。困22显示来自用于審定抗硬化素中和Mab的MC3T3-E1-BF成骨细胞系矿化测定法的錄果。使用1Mg/ml的小鼠硬化素(Scl)。使用10和5pg/ml的羊克隆抗体。通过测量钙来定量矿化(各种类型的不溶性鱗酸钾)程度.图23显示来自用于鉴定抗硬化素中和Mab的MC3T3-E1-BF成骨细胞系矿化测定法的结果。使用1pg/ml的人硬化素(Scl)。使用8和4jig/ml的单克隆抗体。通过测量钧来定量矿化(各种类型的不溶性磷酸妈)程度。围24显示来自用于鲞定抗硬化素中和Mab的MC3T3-B1-BF成骨细胞系矿化测定法的结果。使用1Mg/ml的人硬化素(Scl)。使用10pg/mi的单克隆抗体。通过测量钙来定量矿化(各种类型的不溶性裤酸钙)程度。图25描述了来自炎症诱导的骨丢失SCID小鼠模型的结杲，Ab-A的处理保护小鼠不受与结肠炎有关的炎症相关性骨丢失，当测量为总骨矿物质密度(图25A)、推骨密度(图25B)和股骨密度(图25C)时。发明详述本发明涉及包含由与全长硬化素结合的抗体识别的表位的人硬化素蛋白质区域，以及制备和使用这些表位的方法。本发明还提供了与硬化素或硬化素的部分特异性结合的结合剂(例如抗体)，以及使用此类结合剂的方法。结合刑用于阻断或削弱人硬化素与一种或多种配体的结合。重組人硬化素/SOST从MDSystems(Minneapolis,MN,USA;2006目录"406-ST-025)商购可得。此外，重组小鼠硬化素/SOST从R&DSystems(Minneapolis,MN，USA;2006目录M589—ST-025)商购可得。研究级硬化素结合单克隆抗体从R&DSystems(Minneapolis,MN，USA;小鼠单克隆2006目录fMAB1406;大鼠单克隆2006目录#MAB1589)商购可得，美国专利号6,395,511和6，803,453以及美国专利公开20040009535和20050106683—般性涉及抗硬化素抗体.如本文使用的，术语人硬化素意欲包括SEQIDN0:1的蛋白质及其等位基因变体，硬化素可以通过使用肝素HP柱、使用盐梯度洗脱宿主细胞蜂养液的过滤上清液从293T宿主细胞純化，所迷293T宿主细胞已被编码硬化素的基因转染。制备和使用阳离子交换色嫌法的进一步纯化在实施例1和2中描述。如本文定义的，本发明的结合剂优选是抗体。术语"抗体"指完整抗体或其结合片段。抗体可以包含完整的抗体分子(包括具有全长重链和/或轻链的多克隆、单克隆、嵌合、人源化、或人抗体)，或包含其抗原结合片段。抗体片段包括F(ab')2、Fab、Fab，、Fv、Fc和Fd片段，且可以掺入单结构域抗体、单链抗体、特大型抗体(maxibodies)、微型抗体(minibody)、胞内抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、v-NAR和双-scFv内(参见例如Hoilinger和Hudson,2005，NatureBiotechnology,23，9,1126-1136)。抗体多肽还在美国专利号6,703,199中公开，包括纤连蛋白多肽单体(迈onobody)。其他抗体多肽在美国专利公开2005/0238646中公开，它们是单链多肽。来源于抗体的抗原结合片段可以例如根据常规方法通过抗体的蛋白水解作用获得，例如完整抗体的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化。例如，抗体片段可以通过用胃蛋白酶酶促切割抗体来产生，以提供称为F(ab')2的5S片段。这种片段可以使用疏醇还原剂进一步切割以产生3.5SFab，单价片段。任选地，切割反应可以使用适合于巯基的封闭基来进行，所述巯基由二硫鍵切割产生。作为可替代方法，使用木瓜蛋白酶的酶促切割直接产生2个单价Fab片段和Fc片段。这些方法例如由Goldenberg，美国专利号4,331,647，Nisonoff等人，^/oc力e边.5/0p/iys.89:230，1960;Porter,5/oc力e迈，/.73:119，1959;Edelman等人,在Afef力(7AJiLz7鹏/0^7l:422(AcademicPress1967)中；以及由Andrews,S,M.和Titus,J.A.在Curreflf户rc^O(o/si//鹏咖o2o^7中(ColiganJ,E，,等人，eds)，JohnWiley&Sons,NewYork(2003)第2.8.1-2.8.10页和笫2.10A.1-2.10A.5页描述，也可以使用用于切割抗体的其他方法，例如分开重链以形成单价轻-重链片段(Fd)，片段的进一步切割，或其他酶促、化学或遣传技术，条件是片段能与由完整抗体识別的抗原结合.抗体片段也可以是任何合成或遣传工程化的蛋白质，例如，抗体片段包括由轻链可变区组成的分离的片段，由重和轻链可变区组成的"Fv，，片段，其中轻和重可变区通过肽连接子连接的重组单链多肽分子(scFv蛋白质)。另一种形式的抗体片段是包含抗体的一个或多个互补决定区(CDR)的肽。CDR(也称为"最小识别单位，，、或"高变区")可以通过构建编码目的CDR的多核苷酸来获得。此类多核苷酸例如通过使用聚合酶链式反应使用产生抗体的细胞的mRNA作为模板合成可变区来制备(参见，例如，Larrick等人，AfeMc^,'J(7卿a/z/'o"fo#eM油//2J^7边"Ojg/2:106，1991;Courtenay-Luck，"GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies,，，在M加c/o/2fl/.'尸ro^c〃on,f/7^7/eer//^a/7tf67///cfl/J"//c"/o/7中，Ritter等人，(eds.)，第166页(CambridgeUniversityPress1995);以及Ward等人，"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies,"在￥o/zoc/o/7fl/,.iWj3c/;/esJ/V7//'c"/o;^中，Birch等人，(eds.)，第137页(Wiley-Liss，Inc.1995))。因此，在一个实施方案中，结合剂包含如本文所迷的至少一个CDR。结合剂可以包含如本文所述的至少2、3、4、5或6个CDR。结合剂可以进一步包含本文所述抗体的至少一种可变区结构域。可变区结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，且一般将包含负责与人硬化素结合的至少一个CDR序列，例如本文具体描述的CDR-Hl、CDR-H2、CDR-H3和/或轻链CDRs且与一个或多个构架序列相邻或在其框内(inframe)。一般而言，可变(V)区结构域可以是免疫球蛋白重(VH)和/或轻(Vl)链可变结构城的任何合适排列，因此，例如，V区结构域可以是单体且可以是V-或VL结构域，其能够如下所迷以至少等于1xIO一'M或更低的亲和力独立地结合人硬化素.可替代地，V区結构城可以是二聚体且包含Va-VB、Vh-Vl或Vl-Vl二聚体.V区二聚体包含可以非共价结合的至少一条VH和至少一条l链(下文称为Fv)。必要时，链可以直接共价偶联，例如经由2个可变结构城之间的二碟键，或通过连接子例如肽连接子偶联，以形成单链Fv(scFv)。可变区结构域可以是任何天然存在的可变结构域或其改造形式。改造形式意指已使用重組DM改造技术制备的可变区结构域。此类改造形式包括例如通过特异性抗体的氨基酸序列中的插入、删除或变化由特异性抗体可变区制备的那些。具体例子包括包含至少一个CDR和任选地一个或多个构架氨基酸来自笫一种抗体以及可变区结构域的其余部分来自第二种抗体的改造的可变区结构域。可变区结构域可以在C末端氨基酸处与至少一种其他抗体结构域或其片段共价附着。因此，例如，可变区结构域中存在的VH结构域可以与免疫球蛋白CH1结构域或其片段连接。类似地，VL结构域可以与Q结构域或其片段连接。以这种方式，例如，抗体可以是Fab片段，其中抗原结合结构域包含在其C末端处分别与CH1和CK结构域共价连接的结合的Vh和Vt结构域。CH1结构域可以用更多的氨基酸延伸，例如以提供如Fab，片段中发现的铰链区或铰链区结构域的部分，或提供更多的结构域，例如抗体CH2和CH3结构域。如本文描述的，结合刑包含这些CDR中的至少一个。例如，一个或多个CDR可以掺入已知抗体构架区内(IgGl，IgG2等)，或与合适媒介物繳合以增加其半衰期。合适媒介物包括但不限于Fc、聚乙二醇(PEG)、白蛋白、转铁蛋白等。这些和其他合适媒介物是本领域已知的。此类缀合的CDR肽可以是单体、二聚体、四聚体或其他形式。在一个实施方案中，一种或多种水溶性聚合物在结合刑的一个或多个特定位置处例如在氨基末端处结合。在某些优选实施方案中，结合刑包含一种或多种水溶性聚合物附着物，包括但不限于，聚乙二醉、聚氣乙烯二醇、或聚丙二醉。参见，例如，美国专利号4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4，791，192和4，179,337,在某些实施方案中，结合桐衍生物包含一种或多种羊甲氣基-聚乙二醉、葡聚糖、纤维素、或其他基于破水化合物的聚合物、聚(N-乙烯吡咯烷嗣)聚乙二醇、丙二醉同聚物、聚氣化丙蜂/氣化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如丙三醇)和聚乙烯醇，以及此类聚合物的混合物。在某些实施方案中，一种或多种水溶性聚合物随机附着至一条或多条侧链。在某些实施方案中，PEG可以用于改善结合剂例如抗体的治疗能力。某些此类方法例如在美国专利号6，133,426中讨论，所述专利为了任何目的在此引入作为参考。应当理解本发明的结合刑可以具有至少一个氨基酸置换，条件是结合刑保留结合特异性。因此，关于结合刑结构的修饰包含在本发明的范围内。这些可以包括不破坏结合剂的硬化素结合能力的保守或非保守性氨基酸置换，保守性氦基酸置换可以包含非天然存在的氨基酸残基，这一般通过化学肽合成而不是通过在生物系统中合成而掺入。这些包括肽模拟物(peptidomimetics)和其他反向或倒转形式的氨基酸部分。保守性氨基酸里换还可以涉及用标准化残基置换天然氨基酸残基，从而使得对那个位置处的氨基酸残基的极性或电荷只有很小的影响或没有影响。非保守性置换可以涉及一类氨基酸或氨基酸模拟物的成员交换成具有不同物理性质(例如大小、极性、疏水性、电荷)的另一类的成员。此类置换的残基可以引入与非人抗体同源的人抗体区域内，或分子的非同源区域内。此外，本领域技术人员可以产生在每个所需氨基酸残基处包含单个氨基酸置换的测试变体。变体随后可以使用本领域技术人员已知的活性测定法来筛选。此类变体可以用于收集关于合适变体的信息，例如，如果发现特定氨基酸残基的变化导致破坏、不希望地减少、或不合适的活性，那么具有此类变化的变体可以被避免。换言之，基于由此类常规实验收集的信息，本领域技术人员可以容易地确定其中应当遊免单独的或与其他突变組合的置換的氨基酸。本领域技术人员将能够使用众所周知的技术确定如本文所述的多肽的合逸变体.在某些实施方案中，本领域技术人员可以鉴定通过靶向被认为对活性不重要的区域可以进行改变而不破坏活性的分子的合适区域。在某些实施方案中，可以鉴定在类似多舦中是保守的分子残基和部分。在某些实施方案中，甚至可以在对生物活性或结构可能重肽结构。另外，本领域技术人员可以检查鉴定类似多舦中对活性或结构重要的残基的结构-功能研究。鉴于此类比较，可以预测蛋白质中氨基酸残基的重要性，所述氨基酸残基对应在类似蛋白质中对活性或结构重要的氨基酸残基。本领域技术人员可以选择对于此类预测重要的氦基酸残基的化学类似的氦基酸置换。本领域技术人员还可以分析3维结构以及与类似多肽中的那种结构相关的氨基酸序列。鉴于此类信息，本领域技术人员可以预测关于其3维結构的抗体的氨基酸残基比对。在某些实施方案中，本领域技术人员可以选择不对预测在蛋白质表面上的氨基酸残基进行基团变化，因为此类残基可能涉及与其他分子的重要相互作用。众多科学出版物已致力于二级结构的预测。参见MoultJ.，Curr.Op.inBiotech.，7(4):422-427(1996)，Chou等人，Biochemistry,13(2):222-245(1974);Chou等人，Biochemistry,113(2):211-222(1974);Chou等人，Adv.Enzymol.Relat.AreasMol.Biol.,47:45-148(1978);Chou等人，Ann.Rev.Biochem.,47:251-276和Chou等人，Biophys,J.,26:367-384(1979)。此外，计算机程序目前可用于帮助预测二级结构。预测二级结构的一种方法基于同源性建模.例如，具有大于30%的序列同一性，或大于40%的相似性的2种多肽或蛋白质通常具有类似的结构拓朴学.近来发展的蛋白质结构数据库(PDB)已提供增强的二級结构可预测性，包括多肽或蛋白质结构内可能的折叠数目。参见Holm等人，Nucl.Acid.Res.，27(1):244-247(1999),已建议(Brenner等人，Curr.Op.Struct.Biol.,7(3):369-376(1997))在给定多肽或蛋白质中存在有限数目的折叠，并且一旦关鍵数目的结构已确定，那么结构预测将明显变得更精确.预測二级结构的另外方法包括"穿线(threading)"(Jones,D.，Curr.Opin.Struct.Biol.，7(3):377-87(1997);Sippl等人，Structure,4(1):15-19(1996))，"特征分析(profileanalysis)"(Bowie等人，Science,253:164-170(1991);Gribskov等人，Meth.Enzym.，183:146-159(1990);Gribskov等人，Pro"Nat.Acad.Sci.，84(13):4355-4358(1987)),和"进化连锁(evolutionarylinkage"(参见Holm，同上(199"，和Bre鹏r，同上(1997))。在某些实施方案中，结合剂的变体包括其中与亲本多肽的氨基酸序列相比糖基化位点的数目和/或类型已改变的糖基化变体。在某些实施方案中，变体包含比天然蛋白质数目更多或更少的N连接糖基化位点。N连接糖基化位点的特征在于下列序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中指定为X的氨基酸残基可以是除脯氨酸以外的任何氨基酸残基。创造这种序列的氨基酸残基置换提供了用于添加N连接糖链的潜在新位点。可替代地，消除这种序列的置换将去除现有的N连接糖链。还提供了N连接糖链的重排，其中一个或多个N连接糖基化位点(一般是天然存在的那些)被消除并且一个或多个新N连接位点被创造。另外优选的抗体变体包括半胱氨酸变体，其中与亲本氨基酸序列比较一个或多个半胱氨酸残基被删除或以另一种氨基酸(例如丝氨酸)置换。当抗体必须重折叠成生物学活性构象时，例如分离不溶性包含体后，半胱氨酸变体可能是有用的，半胱氨酸变体一般具有比天然蛋白质更少的半胱氡酸残基，并且一般具有偶数数目以最小化由不成对的半胱氨酸引起的相互作用.所需氨基酸置换(无论是保守的还是不保守的)可以由本领城技术人员在此类置換需要时进行确定。在某些实施方案中，氨基酸置换可以用于鉴定针对硬化素的抗体的重要残基，或増加或减少如本文所述的针对硬化素的抗体的亲和,力.根振某些实施方案，优选的氨基酸置换是下列那些(l)减少对蛋白水解的敏感性，(2)减少对氣化的敏感性，(3)改变用于形成蛋白质复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和/或(4)给予或修饰关于此类多肽的其他生理化学或功能特性.根据某些实施方案，单个或多个氨基酸置换(在某些实施方案中，保守性氛基酸置换)可以在天然存在的序列中(在某些实施方案中，在形成分子间接触的结构域外的多肽部分中)进行。在某些实施方案中，保守性氨基酸置换一般基本上不改变亲本序列的结构特征(例如，替换氣基酸不应趁向破坏亲本序列中存在的螺旋，或破裂亲本序列特有的其他类型的二级结构)。本领域公认的多肽二级和三级结构的例子在Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton，Ed.，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.Branden和J.Tooze，eds.，GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991));以及Thornton等人，Nature354:105(1991)中得到描述，所述参考文献各自引入本文作为参考。在某些实施方案中，本发明的结合剂可以与聚合物、脂质或其他部分化学结合。结合剂可以包舍掺入生物相容性构架结构内的本文所述的至少一个CDR。在一个例子中，生物相容性构架结构包含足以形成构象稳定的结构支撑、或构架、或支架的多肽或其部分，其能够显示在局部表面区域中与抗原结合的一种或多种氨基酸序列(例如，CDR、可变区等)。此类结构可以是天然存在的多肽或多肽"折叠"(结构基序)，或可以具有相对于天然存在的多肽或折叠的一种或多种修饰，例如氨基酸添加、删除或置换。这些支架可以来源于任何物种(或超过一种的物种)的多肽，例如人、其他哺乳动物、其他脊推动物、无脊推动物、植物、细菌或病毒。生物相容性构架结构一般基于除免疫球蛋白结构域以外的蛋白质支架或骨架。例如，可以使用基于纤连蛋白、锚蛋白、lipocalin、新制癌菌素(neocarzinostain)、细胞色素b、CP1锌指、PST1、巻曲螺旋、LACI-Dl、Z錄构域和tendramisat结构域的那些(参见例如，Nygren和Uhlen，1997，CurrentOpinioninStructuralBiology,7，463-46"。在优选实施方案中，应当理解本发明的结合刑包括本文所迷的人源化抗体。人源化抗体例如本文所述的那些可以使用本领域技术人员已知的技术产生(Zhang,￥.，等人，#o/,/flr/鹏,/柳，"〃"1445-1451，2005;HwangW.等人，釘"35-42，2005;Dail'AcquaWF，等人，V"tof""":43-60，2005;和Clark，M.，1咖,/。#7W",:397-402，2000)。另外，本领域技术人员将认识到合适的结合剂包括这些抗体的部分，例如如本文具体公开的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个。CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-U区域中的至少一个可以具有至少一个氨基酸置换，条件是结合剂保留未置换CDR的结合特异性.结合剂的非CDR部分可以是非蛋白质分子，其中结合剂交叉阻断本文公开的抗体与硬化素的结合和/或中和硬化素。结合剂的非CDR部分可以是非蛋白质分子，其中结合刑在"人硬化素肽表位竟争结合测定法"中显示与人硬化素肽的结合模式类似于至少一种下列抗体显示的那种Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab—18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24，和/或中和硬化素。结合刑的非CDR部分可以由氨基酸组成，其中结合刑是重组结合蛋白或合成肽，并且所迷重組结合蛋白交叉阻断本文公开抗体与硬化素的结合和/或中和硬化素。结合剂的非CDR部分可以由氨基酸組成，其中结合刑是重组结合蛋白，并且所述重组结合蛋白在"人硬化素肽表位竟争结合测定法"(下文描述)中显示与人硬化素肽的结合模式类似于至少一种下列抗体显示的那种Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、AIKL5、Ab，16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24，和/或中和硬化素。当抗体包含如上所迷的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个时，它可以通过由包含编码这些序列的DNA的宿主细胞表达来获得，编码每个CDR序列的DNA可以在CDR氨基酸序列的基础上测定，且适当时使用寡核苷酸合成技术、定点诱变和聚合酶链式反应(PCR)技术与任何所需的抗体可变区构架和恒定区DNA序列一起合成。编码可变区构架和恒定区的DNA对于本领域技术人员由遗传序列数据库例如GenBank⑧可广泛获得。上述每个CDR—般将位于可变区构架中根据Kabat编号系统在重链的位置31-35(CDR-H1)、50-65(CDR-H2)和95-102(CDR-H3)和轻链的位置24-34(CDR-L1)、50-56(CDR-L2)和89-97(CDR-L3)处(Kabat等人，1987在Se^/e/2C"o/PrWei/Jsof/咖w30/og/cfl/Inhere"中，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH，USA)。一旦被合成，编码本发明抗体或其片段的DM就可以使用许多已知表达栽体根据用于核酸切除、连接、转化和转染的各种众所周知搮作中的任何一种进行增殖和表达。因此，在某些实施方案中抗体片段的表达在原核细胞例如大肠杆菌(&cAer/c力/flCo")中可能是优选的(参见例如，Pluckthun等人，1989V"力^178:497-515)。在某些其他实施方案中，抗体或其片段的表达在真核宿主细胞中可能是优选的，包括酵母(例如S良酒酵母(Sacc力flro边7cescere^iae)、粟酒裂殖酵母(Sc力2'z0sarcwyces/7o边6e)和巴斯德毕赤酵母(尸ic力/aw^or/s))、动物细胞(包括哺乳动物细胞)或植物细胞。合适的动物细胞的例子包括但不限于骨lt瘤(例如小鼠NS0系)、C0S、CH0、或杂交瘤细胞。植物细胞的例子包括烟草、玉米、大豆和水稻细胞。包舍编码抗体可变和/或恒定区的DNA的一种或多种可复制的表达栽体可以被制备并用于转化合适的细胞系，例如非生产性骨徵癧细胞系，例如小鼠NS0系，或其中抗体生产将发生的细菌例如大肠杆菌(五.,为了获得有效转录和翻译，每种栽体中的DNA序列应当包括与可变结构域序列可操作地连接的合适的调节序列，特别是启动子和前导序列。用于以这种方式生产抗体的具体方法一般是众所周知和常规使用的，例如，基本分子生物学操作由Maniatis等人，(紛/ec"/arC7ou/絲,"由r"017股卿/,笫二版，ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,1989;还参见Maniatis等人，笫三版，ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,(2001))描述。DNA测序可以如Sanger等人，(PNAS74:5463，(1977))和Amersh詣Internationalpic测序手册中描述的进行，并且定点诱变可以根据本领域已知方法来进行(Kramer等人，A^c/e/c^c/^Aes.12:9441，(1984);Kunkel#"人JcsASc/,82:488-92(1985);Kunkel等人，154:367-82(1987);theAnglianBiotechnologyLtdhandbook)。另外，众多出版物描述了适合于通过DNA搮作、表达栽体制备以及合适细胞的转化和培养来制备抗体的才支术(MountainA和Adair,JRin^/ofec/wo/c^FSi3dfe/zef/c^7g//7eer//^("ed.Tombs,MP，10，Chapter1，1992，Intercept,Andover，UK);"CurrentProtocolsinMolecularBiology"，1999，F.M.Ausubel(ed.)，WileyInterscience，NewYork),当希望改善包含一个或多个上述CDR的根据本发明的抗体的亲和力时，可以通过众多亲和力成熟方案来获得，包括维持CDR(Yang等人，/.M/.254，392-403，1995)、链改组(Marks等人，Sio/recAi20^^F，10，779-783，1992)、使用大肠杆菌的突变菌林(Low等人，/.#。/.，250，350-368，1996)、DNA改组(Patten等人，Cwrr.丑/o"cA/o/.，8，724-733，1997)、吸菌体展示(Thompson等人，/.A/o/.，256，7-88，1996)和性别PCR(Crameri，等人，391，288-291，1998)。所有这些亲和力成熟方法由Vaughan等人(A^^re"2'o&c/wo/o^^，16，535—539，1998)讨论。根振本发明的其他抗体可以通过如本文所迷和本领域已知的常规免疫接种和细胞融合操作来获得.本发明的单克隆抗体可以使用各种已知技术来产生。一般而言，与特定抗原结合的单克隆抗体可以通过本领域技术人员已知的方法来获得(参见，例如，Kohler等人，；Van/re256:495，1975;Coligan等人，(eds.)，(7wr加f户rof歸"/边迈"/o/og/，1:2.5.12.6.7(JohnWiley&Sons1991);美国专利号RE32,011，4,902,614，4，543，439和4,411,993;Ple謹Press,Kennett，McKearn，和Bechtol(eds.)(1980);以及1n"'6ocfies.'j丄s^Taf0r7#<9/7f/fl/，Harlow和Lane(eds.)，ColdSpringHarborLaboratoryPress(1988);Picksley等人，"Productionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedinco"，"在C/o//i^么'^r/7re^io/25y"咖s中，#二成，Glover等人，(eds.)，笫93页(OxfordUniversityPress1995))。抗体片段可以使用任何合适的标准技术例如蛋白水解消化，或任选地通过蛋白水解消化(例如使用木瓜蛋白睐或胃蛋白酶)随后为二硫鍵的轻度还原和烷化由此衍生。可替代地，此类片段还可以通过如本文所述的重组遣传工程技术来产生。单克隆抗体可以根据本领域已知和本文描述的方法通过用包含SEQIDN0:1的人硬化素或其片段的免疫原注射动物，例如大鼠、仓鼠、兔、或优选地小鼠，包括例如转基因或敲除的动物来获得。特异性抗体产生的存在可以在最初注射后和/或在加强注射后，通过获得血清样品且使用本领城已知和本文描述的几种免疫检测方法中的任何一种检测与人硬化素或肽结合的抗体的存在进行监控。从产生所需抗体的动物中取出淋巴样细胞，最通常地来自脾或淋巴结的细胞，以获得B淋巴细胞。B淋巴细胞随后与药物致敏的骨瓶病细胞融合配偶体融合，优逸与被免疫动物是同基因的且任选地具有其他所需特性(例如，不能表达内源性Ig基闳产物的任何配偶体，例如P3X63—Ag8.653(ATCCNo.CRL1580);NS0，SP20)，以产生杂交痛，这是永生的真核细胞系.淋巴样(例如脾)细胞和骨徵病细胞可以与膜融合促进刑例如聚乙二醇或非离子型去污刑組合数分钟，随后以低密度在支持杂交痏细胞但不支持未融合的骨徵瘤细胞生长的选择性培养基上铺板。优选的选择性培养碁是HAT(次黄噪呤、氨基蝶呤、胸苷)，在足够时间通常为约l至2周后，現察到细胞集落。分离单个集落，且可以使用本领域已知和本文描述的各种免疫测定法中的任何一种测试由细胞产生的抗体与人硬化素的结合活性。克隆杂交瘤(例如通过有限稀释克隆法或通过软琼脂斑分离)，且选择并培养产生对硬化素特异的抗体的阳性克隆。来自杂交瘸培养的单克隆抗体可以从杂交瘤培养物的上清液中分离。用于生产鼠类单克隆抗体的可替代方法是将杂交瘤细胞注射到同基因小鼠的腹膜腔内，例如已处理(例如姥鲛烷预处理的)以促进包含单克隆抗体的腹水形成的小鼠。单克隆抗体可以通过各种良好建立的技术进行分离和纯化。此类分离技术包括用A蛋白琼脂糖的亲和色谦法、大小排阻色谦法和离子交换色谱法(参见例如Coligan在笫2.7.1-2.7.12页和笫2.9.1-2.9.3页；Baines等人，"PurificationofImmunoglobulinG(IgG)，"在iffef力otfsi'"#o/ew/flr及/o/o^7中，#^表笫79-104页(TheH鹏naPress,Inc.1992))。单克隆抗体可以通过亲和色谦法使用基于抗体的具体特性(例如重或轻链同种型、结合特异性等)选择的合适配体进行纯化。固定在固体栽体上的合适配体的例子包括A蛋白、G蛋白、抗恒定区(轻链或重链)抗体、抗独特型抗体、和TGF-P结合蛋白、或其片段或变体。本发明的抗体还可以是人单克隆抗体。人单克隆抗体可以通过本领域普通技术人员熟悉的许多技术来产生。此类方法包括但不限于，人外周血细胞(例如包含B淋巴细胞)的EB病毒(EBV)转化、人B细胞的体外免疫接种、構带插入的人免疫球蛋白基因的来自免疫转基因小鼠的脾细胞融合、从人免疫球蛋白V区噬菌体文库中分离、或如本领域已知和基于本文公开内容的其他採作。例如，人单克隆抗体可以由转基因小鼠获得，所迷转基因小鼠已进行改造以响应抗原攻击而产生特异性人抗体.用于由转基罔小鼠获得人抗体的方法例如由Green等人，胎wed7:13，1994;Umberg等人，W"we368:856，1994;Taylor等人，//zf./鹏肌6:579，1994;美国专利号5,877,397;Brugge咖nn等人，1997CWr.。;7//7.A/0&c力/20/.8:455—58;Jakobovits等人，1995J朋.XKha(/.764:525-35描述。通过这种技术将人重和轻链基因座的元件引入来源于胚胎干细胞系的小鼠品系内，所述胚胎干细胞系包含靶向断裂的内源性重链和轻链基因座(同样参见Bruggemann等人，丑/o"c力/o/.8:455-58(1997))。例如，人免疫球蛋白转基因可以是小基因构建体、或在酵母人工染色体上的转基因座(transloci)，其在小鼠淋巴样细胞中经历B细胞特异性DNA重排和高突变。人单克隆抗体可以通过免疫转基因小鼠来获得，所述转基因小鼠随后可以产生对硬化素特异的人抗体.免疫转基因小鼠的淋巴样细胞可以根据本文所述方法用于产生分泌人抗体的杂交瘤。包含人抗体的多克隆血清还可以从免疫动物的血液中获得。用于产生本发明的人抗体的另一种方法包括通过EBV转化使人外周血细胞永生。参见例如美国专利号4,464,456。产生与硬化素特异性结合的单克隆抗体的此类永生化B细胞系(或类淋巴母细胞系)可以通过如本文提供的免疫检测方法例如ELISA进行鉴定，随后通过标准克隆技术进行分离。产生抗硬化素抗体的类淋巴母细胞系的穗定性可以根椐本领域已知方法(参见，例如，Glasky等人，8:377-89(1989))通过使转化的细胞系与鼠类淋巴瘤融合以产生小鼠-人杂交细胞系得到改善。产生人单克隆抗体的另一种方法是体外免疫接种，这包括用人硬化素预处理人脾B细胞，随后使预处理的B细胞与异杂交(heterohybrid)融合配偶体融合。参见，例如，Boerner等人，1991/./鹏wzo/.147:86-95。在某些实施方案中，产生抗人硬化素抗体的B细胞被选择，且轻链和重链可变区根椐本领域已知(WO92/02551;美国专利5,627,052;Babcook等人，Wft493:7843-48(1996))和本文描迷的分子生物学技术由B细胞进行克隆。来自免疫动物的B细胞可以通过选择产生与硬化素特异性结合的抗体的细胞从脾、淋巴结或外周血样品中分离.B细胞还可以M^A中例如从外周血样品中分离。用于检测产生具有所需特异性的抗体的单一B细胞的方法是本领域众所周知的，例如通过空斑形成、荧光激活细胞分选、体外刺激随后检测特异性抗体等.用于选择产生特异性抗体的B细胞的方法包括，例如在包含人硬化素的软琼脂中制备B细胞的单细胞悬浮液。通过B细胞产生的特异性抗体与抗原结合导致形成复合物，所述复合物作为免疫沉淀物可能是看得见的。选择产生所需抗体的B细胞后，特异性mRNA进行克隆。用于获得本发明抗体的另外方法是经由噬菌体展示。参见，例如，Winter等人，199"篇.板/咖咖7,12:433-55;Burton等人，1994/迈咖"o厶57:191-280.人或鼠类免疫球蛋白可变区基因组合文库可以在噬菌体栽体中制备，所迷噬菌体栽体可以进行筛选以选择与TGF-P结合蛋白或其变体或片段特异性结合的Ig片段(Fab、Fv、sPv、或其多聚体)。参见，例如，美国专利号5,223,409;Huse等人，1989Sc/加ce246:1275-81;Sastry等人，AW/.Jcaf/.〃W86:5728-32(1989);Alting-Mees等人，5^"e^'esh聖ecii/arWo7柳3:1-9(1990)'，Kang等人，1991户清，化〃，hif.ScA鹏88:4363-66;Hoogenboom等人，1992/.A/o人227:381-388;Schlebusch等人，1997i^6r/^Mfl16:47-52以及其中引用的参考文献。例如，包含编码Ig可变区片段的多个多核苷酸序列的文库可以插入丝状噬菌体例如M13或其变体的基因组内，与编码噬菌体外壳蛋白的序列按读码框融合。融合蛋白可以是外壳蛋白与轻链可变区结构域和/或重链可变区结构城的融合。根据某些实施方案，免疫球蛋白Fab片段还可以在噬菌体顆粒上展示(参见，例如，美国专利号5,698,426)。免疫球蛋白重和轻链cDM表达文库还可以在入噬菌体中制备，例如使用入l咖咖Zap"1(H)和入I鲫咖Zap"1(L)栽体(Stratagene,LaJolla,California),简言之，mRM从B细胞群中分离，并用于在XI咖wioZap(H)和XI咖unoZap(L)栽体中制备免疫球蛋白重和轻链cDNA表达文库.这些栽体可以单独筛选或共表达以形成Fab片段或抗体(参见Huse等人，同上；还参见Sastry等人，同上)。阳性空斑随后可以转变成允许从大肠杆菌高水平表达单克隆抗体片段的非裂解性质粒。在一个实施方案中，在杂交瘤中，表达目的单克隆抗体的基因的可变区使用核苷酸引物进行扩增。这些引物可以由本领域普通技术人员合成，或可以由商购可得来源购买。(参见，例如，Stratagene(LaJolla，California),它出售用于小鼠和人可变区的引物，包括用于VHa，VHb、VHe、VHd、CH1、Vl和G区的引物)。这些引物可以用于扩增重或轻链可变区，所述重或轻链可变区随后可以分别插入栽体例如ImmunoZAPTMH或ImmunoZAPTML(Stratagene)内。这些栽体随后可以引入大炀杆菌、酵母、或基于哺乳动物的系统内用于表达。包含融合的VH和、结构域的大量单链蛋白质可以使用这些方法产生(参见Bird等人，242:423-426，1988)。一旦产生根据本发明的抗体的细胞已使用任何上述免疫接种和其他技术获得，特异性抗体基因就可以根据如本文所述的标准搮作通过由此分离和扩增DNA或mRNA进行克隆。由此产生的抗体可以进行测序并且鉴定的CDR和编码CDR的DM可以如先前所迷进行处理以产生根据本发明的其他抗体。优选地结合剂与硬化素特异性结合。如同所有结合剂和结合测定法一样，本领域技术人员应当理解结合剂不应与其可检测地结合以便在治疗上有效且合适的各种部分对于列举将是无穷尽和不实际的。因此，对于本文公开的结合刑，术语"特异性结合"指结合刑以比它与无关的对照蛋白质的结合更大的亲和力与硬化素优选人硬化素结合的能力。优选地对照蛋白质是鸡蛋蛋白溶菌酶。优选地结合剂与硬化素结合的亲和力是与对照蛋白质的亲和力的至少50、100、250、500、1000或10，000倍，结合刑对于人硬化素的亲和力可以小于或等于lx107M、小于或等于lx10gM、小于或等于lxl(TM、小于或等于lx10—10M、小于或等于lx10—UM、或小于或等于lx10—12M,亲和力可以通过亲和力BLISA测定法进行测定.在某些实施方案中，亲和力可以通过BIAcore测定法进行测定。在某些实施方案中，亲和力可以通过动力学方法进行测定。在某些实施方案中，亲和力可以通过平衡/溶解法进行测定。此类方法在本文中进一步详细描述或是本领域已知的。本发明的硬化素结合刑优选在本文描迷的基于细胞的测定法和/或本文描迷的体内测定法中调节硬化素功能，和/或与本文描述的一种或多种表位结合，和/或交叉阻断本申请中描述的抗体之一的结合，和/或被本申请中描述的抗体之一交叉阻断与硬化素的结合。因此此类结合剂可以使用本文描述的测定法进行鉴定。在某些实施方案中，结合剂通过首先鉴定抗体来产生，所述抗体在本文描述的基于细胞和/或体内测定法中与本文提供的一种或多种表位结合和/或中和，和/或交叉阻断本申请中描述的抗体，和/或被本申请中描述的抗体之一交叉阻断与硬化素的结合。来自这些抗体的CDR区随后用于插入合适的生物相容性构架内以产生硬化素结合剂.结合剂的非CDR部分可以由氨基酸组成，或可以是非蛋白质分子。本文描述的测定法允许表征结合剂。优选地本发明的结合剂是如本文定义的抗体。本领域技术人员应当理解某些蛋白质例如抗体可以经历各种翻译后修饰，这些修饰的类型和程度通常取决于用于表达蛋白质的宿主细胞系以及培养条件。此类修饰可以包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪(diketopiperizine)形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺的变化。常见的修饰是由于羧肽酶的作用失去羧基末端碱性残基(例如赖氨酸或精氨酸)(如Harris,RJ./ow/tw/(/*C力ro边afc^ra;7/^705:129-134，1995中描迷的)，称为Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D和Ab-l的抗体在下文描述'"HC"指重链和"LC"指轻链.对于下文的某些抗体，CDR是带方框阴影的和恒定(C)区以粗体斜体显示.Ab-D抗体D(在本文中也称为Ab-D和Mab-D)是显示与硬化素高亲和力结合的小鼠抗体。Ab-D的BIAcore结合棋式显示于困18中。成熟形式(信号肽被去除)的Ab-D轻链的氨基酸序列1DVQMIQSPSSLSASLGDIVTMTC;Q^，吸P^LL,.513丽Sf加VPSRFSGSRYGTDFTLTIS—SLEfiEDIATYFCSi—li^XH^tFGG2W咖WTXSpyV2UVEC^SBQIDNO:7)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-DLC的核酸序列如下:1GATGTCCAGATGATTCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTTTGGGAGA51CATAGTCACCATGACTTGCCAGGCAAGTCAGGGCACTAGCATTAATTTAA101ACTGGTTTCAGCAAAAACCAGGGAAGGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCGT151TCAAGCAACTTGGAAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTAGATA201TGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGGATGAAGATCTGG251CAACTTATTTCTGTCTACAACATAGTTATCTCCCGTACACGTTCGGAGGG301GGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAT351CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGT401GCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATT451GATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGG551ACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:8)包括信号肽的Ab-DLC的氨基酸序列如下1M3NTRAPAEFLGFLLLWFLGARCDVQMQSPSSLSASLGDIVTMTCQASQG51TSINLNWFQQKPGKAPKLLIYGSSNLEDGVPSRFSGSRYGTOFTLTISSL101EDEDLATYFCLQHSYLPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSG151GASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSST201LTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SBQIDNO:9)包括信号肽编码序列的Ab-DLC的核酸序列:1ATGAACACGAGGGCCCCTGCTGAGTTCCTTGGGTTCCTGTTGCTCTGGTT51TTTAQGTGCCAGATGTGATOTCCAGATGATTCAGTCTCCATCCTCCCTGT101CTGCATCTTTOGGAGACATAGTCACCATGACTTGCCAGGCAAGTCAGGGC151ACTAGCATTAATrTAAACTGGTTTCAGCAAAAACCAGQOAAGQCTCCTAA201GCTCCTGATCTATOQTTCAAGCAAC1TOGAAGATQGGOTCCCATCAAGGT251TCAGTOGCAGTAQATATGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAQCAGCCTG301GAGOATGAAGATCTGGCAACTTATTTCTGTCTACAACATAGTTATCTCCC351GTACACGTTCOGAGGGGGOACCAAGCTQGAAATAAAACGOQCTGATOCTG柳CACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTOAGCAGTTAACATCTGGA451GGTQCCTCAGTCGTGTQCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAA501TGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACA551651GGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGA701ATGAGTGTTAG(SEQIDNO:10)成熟形式(信号肽被去除)的Ab-DHC重链的氨基酸序列如下:1EVQ说QSGPELV亚GASVKISCKASGYTFTpSS^WVKQSHGKSLEWI疲51,诉Gi^fV.^pKQTATLTVDKSSSIAYMEIRGLTSEDSAVYYCARJ^说iEEQMi4jawrraircMnDFFP幼JTfwg柳邻i!4丑iVHDvrewMDiDttsr術iTKSKLiWeiT5WE4(72VrFrGSPX服GXflJV朋:TBASiW!aSPd(SEQIDNO:11)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-DHC的核酸序列是1GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAACTGGTGACGCCTGGGGCTTC51AGTGAAGATATCTTGTAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACCACTACA101TGAGCTGGGTGAAGCAGAGTCATGGAAAAAGCCTTGAGTGGATTGGAGAT151ATTAATCCCTATTCTGGTGAAACTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAC201GGCCACATTGACTGTAGACAAGTCTTCCAGTATAGCCTACATGGAGATCC251GCGOCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGATGAT301TACGACGCCTCTCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGT351CTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGAT.401CTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGQGC451TATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTOTCCAG501CGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGA551GCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACC601TGCAACGTTGCCCACCCGQCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGT651GCCCAGGGATTGTGGTTGTAAQCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTAT701CATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACT751CTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCC801CGAGOTCCAGTTCAGCTOGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACAdAGCTC851AGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGT卯lGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATG951CAGGGTCAACAGTCCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCA腿AAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTOTACACCATTCCACCTCOC1051AAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATOATAACAGA1101CTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTOGAGTGGCAGTOGAATQQGCAGCCAG1151CGGAGAACTAGAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATOQCIXrTTAC1201TTCATCTACAGCAAGCTCAATOTGCAGAAGAQCAACTCGQAGGCAGGAAA1251TACTTTCACCTQCTCTGTGTTACATOAGOGCCTQCACAACCACCATACTG1301AGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTQGTAAATGA(SEQIDNO:12)包括信号肽的Ab-DHC的氨基酸序列是:1MRCRWIFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELVTPG八SVKISCKASGYTFTD51HYMSWVKQSHGKSLEWK3DINTPYSGETTYNQKFKGTATLTVDKSSSIAYM101EIRGLTSEDSAVYYCARDDYDASPFAYWGQGTHLVTVSAAKTTPPSVYPLA151PGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLY201TLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVP251EVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVD1SKDDPEVQFSWFVDDVEVH301TAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSPAFPAPIEKT351ISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMTTDFFPEDITVEWWNG401QPAENYKNTQPIMDTOGSYPIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNH451HTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:13)包括信号肽编码序列的Ab-DHC的核酸序列是1ATGAGATGCAGGTGGATCTTTCTCTTTCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAACTGGTGACGCCTG101GGGCTTCAGTCJAAGATATCTTGTAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGAC151CACTACATGAGCTGGGTGAAGCAGAGTCATGGAAAAAGCCTTGAGTGGAT201TGGAGATATTAATCCCTATTCTGGTGAAACTACCTACAACCAGAAGTTCA251AGGGCACGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCTTCCAGTATAGCCTACATG301GAGATCCGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAG351AGATGATTACGACGCCTCTCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGG401TCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCC451CCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGT501CAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCC551TGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTAC601ACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGAC651CGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGA701AAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCA751GAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCAC则CATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGG851ATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCAC卯lACAGCTCAGACGCAACCCCGGQAOGAGCAGTTCAACAQCACTTTCCGCTC951AGTCAGTOAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGQCTCAATGGCAAGGAGT1001TCAAATGCAGGGTCAACAGTCCAGCTTTCCCTOCCCCCATCGAGAAAACC1051ATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCC1101ACCTCCGAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTCACCTGCATOA1151TAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGG1201CAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATOG1251CTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGG1301CAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATOAGQGCCTGCACAACCAC1351CATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQIDNO:14)Ab-D重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下:CDR-H1:DHYMS(SEQIDNO:39)CDR-H2:DINPYSGBTTYNQKFKG(SEQIDNO:40)CDR-H3:DDYDASPFAY(SEQIDNO:41)Ab-D轻链可变区中的CDR序列是CDR-L1:QASQGTSINLN(SEQIDNO:42)CDR-L2:GSSNLED(SEQIDNO:43)CDR-L3:LQHSYLPYT(SEQIDNO:44)Ab-C抗体C(在本文中也称为Ab-C和Mab-C)是显示与硬化素高亲和力结合的小鼠抗体。A卜C的BIAcore结合模式显示于困17中。成熟形式(信号肽被去除)的Ab-C轻链的氨基酸序列如下1雨LTpSPASLTVSLGLRATIS(51LIYte^SGIPARFSGNGSGTDFTLNIHP，jnfXZDGiSE及gM^XiVS^72)gIMXZWrESWS雄THXTOTSWFJCSPVWVEC(SEQIDNO:15)PPKL;逸眾编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-CLC的核酸序列是:1GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGACTGTGTCTCTAGGCCT51GAGGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTGTTGATTATC3ATGGTG101ATAGTTATATGAACTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTC151CTCATCTATGCTGCATCCAATCTAGAATCTGGGATCCCAGCCAGG1TTAG201TGGCAATGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGG251AGGAQGATGCTOTAACCTATTACTGTCAACAAAGTAATGAGGATCCOTGG301ACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGATGCTGCACC351AACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTG401CCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATOTC451AAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTG501GACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCA551CGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCC601ACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGA651GTGTTAG(SEQIDNO:16)包括倌号肽的Ab-CLC的氨基酸序列是:lMETOTILLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLTVSLGLRATISCKASQSVD51YDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGDPARFSGNGSGTDFTLNIH101PVEEEDAVTYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLT151SGGASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGS欧QNGVLNSWTDQDSKDSTYSMS201STLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNKNEC(SBQIDNO:17)包括信号肽编码序列的Ab-CLC的核酸序列是1ATGGAGACAGACACAATCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGGTTCCAGG51CTCCACTGGTGACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGACTGTGT101CTCTAGGCCTGAGGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTGTTGAT151TATGATGGTGATAGTTATATGAACTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCC201ACCCAAACTCCTCATCTATGCTGCATCCAATCTAGAATCTGGGATCCCAG251CCAGGTTTAGTGGCAATGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCAT301CCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGTAACCTATTACTGTCAACAAAGTAATGA351GGATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTG柳ATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACA451TCTQGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGA501CATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCC551TGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGC柳AGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATAC651CTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCA701ACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:18)Ab-C重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-CHC的氨基酸序列是1EVQLQQSGPELVKPpTSVKMSCKASGYTFTbCi^||WVKQSHGKSLEW|9P51辨FN紀fW的KJtldKATLTVDKSSSTAYivlQ琉LTSDDSAVYYCAR^f101^|JTP^,WDAMli)YWGQGTSVTVSS^iQTPlWl^PL4PGS"e5VSfl^Ti雄iw五2TTOv^1朋/4幼rjrrairjaT^p朋CGorpc/crFP五FSJW7FPKKwr柳"rDG5TjKIYSjKUVFQK5iV)ra爿GV7!FTGSW:朋GLfflVHH3TJCSLSHSPG8T(SEQIDNO:19)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-CHC的核酸序列如下:1GAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGACnt51AGTGAAGATGTCCTGTAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTGCTACA101TGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGQGAAGAGCCTTGAATGGATTQGAGAT151ATTAATCCTTTCAACQGTGGTACTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA201GGCCACATTGACTQTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCA251ACAGCCTGACATCTGACOACTCTQCAGTCTATTACTQTGCAAGATCCCAT301TATTACTTCGATGGTAGAGTCCCTTGGGATQCTATGGACTACTGGGGTCA351AGGAACCTCAGTCACCQTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCT401ATCCACTGGCCCCTOOATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTG451GGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAA501CTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGT551CTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGG601CCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAA651GGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTOTGGTTGTAAGCCTTGCATAT701GTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAG751GATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTCGTAGA801CATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATG851TGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGC卯lACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAA951TGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCA麵TCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTG1051TACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCT1101GACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGC151AGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATG1201GACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAG1251CAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCC1301TGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQEDNO:20)包括倌号肽的AbCHC的氨基酸序列是1MGWNWIFLFLLSGTAGVYSEVQLQQSGRBLVKPGTSVKMSCKASGYTFTD51CYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPFNGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYM101QLNSLTSDDSAVYYCARSHYYFDGRVPWDAMDYWGQGTSVTVSSAKTTPP51SVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPBPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAV201LQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKP251CICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCYWDISKDDPEVQFSWFV301DDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFP351APIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITV邻lEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLH451EGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:21)包括信号肽编码序列的Ab-CHC的核酸序列是1ATGGGATGGAACTQGATCTTTCTCTTCCTCTTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CTACTCTGAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGACCTOAGCTGGTGAAGCCTG01OGACTTCAGTGAAGATGTCCTGTAAGOCTTCTGGATACACATTCACTGAC151TGCTACATGAACTOGGTGAAGCAGAGCCATGGGAAGAGCCTTGAATOGAT201TGGAGATATTAATCCTTTCAACGGTGGTACTACCTACAACCAGAAQTTCA251AGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATG301CAGCTCAACAQCCTGACATCTGACGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAG351ATCCCATTATTACTTCGATGGTAGAGTCCCTTGGGATOCTATGGACTACT柳QQGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACOCCCA451TCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTOCCCAAACTAACTCCATGGTSOIGACCCTQGGATGCCTQGTCAAGGQCTATTTCCCTOAGCCAGTGACAGTGAS51CCTGGAACTCTOGATCCCTGTCCAGCGGTGTQCACACCTTCCCAGCTQTC601CTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTCTCCCCTCCAG651CACCTOQCCCAGCGAQACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAOCA701GCACCAAGQTGGACAAGAAAATTOTCCCCAGQQATTQTGGTTGTAAGCCT751TGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAA抑lGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTG851TGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTA卯lGATGATGTCGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTT1001GGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCT1051GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCC1151TCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTG1201GAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCC1251CATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGC1301AGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACAT1351GAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGG1401TAAATGA(SEQidNO:22)Ab-C重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下CDR-H1:DCYMN(SEQIDNO:45)CDR-H2:DINPFNGGTTYNQKFKG(SEQIDNO:46)CDR-H3:SHYYFDGRVPWDAMDY(SEQIDNO:47)Ab-C轻链可变区的CDR序列是CDR-Ll:KASQSVDYDGDSYMN(SEQIDNO:48)CDR-L2:AASNLES(SEQIDNO:49)CDR-L3:QQSNEDPWT(SEQIDNO:50)Ab一A抗体A(在本文中也称为Ab-A和Mab-A)是显示与硬化素高亲和力结合的兔-小鼠嵌合抗体。Ab-A的BIAcore结合模式显示于图15中。Ab-A轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-ALC的氨基酸序列1AQVL1^JPASVSAAVGGTVTrN凝^^^^p^SWF吸KPqqPPKLLI51YJ^A添iA每GVPSRFSGSGSGTQFfLflSC^^fcADAXTVYC谅A^b麼《101FGGG玩VVVK盧I2M^m/FP柳鄉ISGGACTTC2WiVi^P西i^ir淑fflnnsraprwrsifwiwvEC(SEQidNo邻编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-ALC的核酸序列:101GGTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATT151TATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCAG201TGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGCCG251ATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCGCTTATAATGATGTTATTTATGCT301TTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGATGCTGCACCAAC351TGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCT401CAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAG451TGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGAC551TGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACT601CACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTG651TTAG(SEQIDNO:24)包括信号肽的Ab-ALC的氨基酸序列是1MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPASVSAAVGGTVTINCQSSQS51VYDNNWLAWFQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTTS101GVQCADAATYYCQGAYNDVIYAFGGGTEWVKRTDAAPTVSEFPPSSEQL151TSGGASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSM201SSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQIDNO:25)包括信号肽编码序列的Ab-ALC的核酸序列是1ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCT51CCCAGGTGCCACATTTGCGCAAGTGCTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGT101CTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGT151GTTTATGATAACAACTGGTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCC201TCCCAAGCTCCTGATTTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCAT251CGCGGTTCAGTGGCAGTGQATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGC301GGCGTGCAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCGCTTATAA351TGATGTTATTTATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTA401CGGATGCTGCACCAACTOTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTA451ACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTQCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAA501AGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCG551TCCTGAACAGTTOGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATG601AGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTA651TACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCT701TCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:26)成熟形式(信号肽被去除)的Ab-AHC的氨基酸序列是1潔4^g^y^PGWLTLTCTASGFSL^y^^WVRQAPGEGLEWI節51^3PRFnSRTSTTMDLKMf^LTTGDTARYFCAR^^jWG101QdTTLVTV!S&45JW2^CTTPi:^PGS44g27NWMFTL(CC汉GZKPE^ff^膽GSLSS&附7TPiiFL0SOJLJILSSSPTKP5SIWSSETFTC3VK4KR45ST25JJMSKD"iWj2柯^PraDKE^^HK4柳P朋五ePAKTFKyjKS^LWMHfiD孤说iJOOmF冲幼iTWWB贈邻i^iaVli3VrfiWMA73VGSrPTT3KLArF0a:柳^S3V)Wa4(aV7TTGCTXHEG!LfflVflirrEKSLS朋PGff(SEQIDNO:27)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-AHC的核酸序列1CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCT51GACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGTTATTGGATOA101ACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGGAACCATT151GATTCTGGTGGTAGGACGGACTACGCGAGCTGGGCAAAAGGCCGATTCAC201CATCTCCAGAACCTCGACTACGATGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACGA251CCGGGGACACGGCCCGTTATTTCTGTGCCAGAAATTGGAACTTGTGGGGC301CAAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCTTCTACAAAGGGCCCATCTGT351CTATCCACTGOCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCC401TGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGG451AACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCA501GTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCT551GGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAQCAGCACC601AAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGQTTGTAAQCCTTGCAT651ATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCA701AGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTA751QACATCAGCAAGQATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGA801TGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACA851QCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTC901AATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCC951CATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGG賜lTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGT1051CTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTG1101GCAGTGGAATQGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCA1151TGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAG1201AGCAACTC3GGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTCTGTTACATGAGGG1251CCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAAT1301GA(SEQIDNO:28)包括信号肽的Ab-AHC的氨基酸序列是1METGLRWLIXVAVLKGVHCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSY51WMNWVRQAPOEQI￡WIGTIDSGGRTOYASWAKGRFTISRTSTTMDLKMTS101LTTGDTARYFCARNWNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVYPLAPGSAAQTNSM151VTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTTLSSSVTVPS201STWPSETVTCNVAHPAS孤VDKKTVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPP251KPKDVLTTTLTPKVTCVWDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQ301PNSTFRSVSEGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISK汰GRPKA351PQVmPP战EQMAKDKVSLTCMTTOFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQ401MMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAONIFTCSVLHBGLHNHHIEKSLSHSP451GK(犯QIDNO:29)包括信号肽编码序列的Ab-AHC的核酸序列:1ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGT151TGGATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGG201AACCATTGATTCTGGTGGTAGGACGGACTACGCGAGCTGGGCAAAAGGCC251GATTCACCATCTCCAGAACCTCGACTACGATGGATCTGAAAATGACCAGT301CTGACGACCGGGGACACGGCCCGTTATTTCTGTGCCAGAAATTGGAACTT351GTGGGGCCAAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCTTCTACAAAGGGCC401CATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATG451GTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTOAGCCAGTGACAGT501GACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTG551TCCTGCAGTCTOACCTCTACACTCTOAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCC601AGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAG651CAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGC701CTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCA751AAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGT柳TGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTG851TAGATGATGTGGAGGTCCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAG卯lTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGA951CTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCC1001CTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCT1051CCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAA1101AGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTG1151TGGAGTGGCAGTQGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAG1201CCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGT1251GCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTAC1301ATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCT1351GGTAAATGA(SEQIDNO:30)Ab-A重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下CDR-H1:SYWMN(SEQIDNO:51)CDR-H2:TIDSGGRTDYASWAKG(SEQIDNO:52)CDR-H3:NWNL(SEQIDNO:53)Ab-A轻链可变区的CDR序列是CDR-L1:QSSQSVYDNNWLA(SEQIDNO:54)CDR-L2:DASDLAS(SBQIDNO:55)CDR-L3:QGAY丽IYA(SEQIDNO:56)Ab-A是人源化的，且称为抗体l(在本文中也称为Ab-1)具有下列序列包括信号肽编码序列的Ab-1LC可变区的核酸序列是。CGTGGTACCAGCAAAAACCGGGCAAAGCCCCGAAGCTGCTCATCTATGACGCGTCCGATCTGGCTAGCGGTGTGCCAAGCCGTTTCAOTGGCAGTGGCAQCGGTACTGACTTTACCCTCACAATTTCGTCTCTCCAGCCGGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAAGGTGCTTACAACGATGTGATTTATGCCTTCGGTCAGGGCACTAAAGTAGAAATCAAACGT(SEQIDNO:74)包括信号肽的Ab-1LC可变区的氨基酸序列是:MDTRAPTOLLGLLLLWLPGATFAOVLTOSPSSLSASVGDRVTTTT伊—vS^fKnyTlWYQQKPGKAPKLLIY^AS^p^GVPSRFSGSGSGTDFTUnSSLQ紐f)FA—tYVd.QGAYN^ViV^GQGTKVEIKR廊QlD&0:75)'包括信号肽编码序列的Ab-1HC可变区的核酸序列是ATGGAGACTGQGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCACTGTGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGCGGGCTTGTCCAGCCTGGAGGGAGCCTGCGTCTCTCTTGTGCAGCAAGCGGCTTCAGCTTATCCTCTTACTGGATGAATTGGGTGCGGCAGGCACCTGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCACCATTGATTCCGGAGGCCGTACAGACTACGCGTC1TGGGCAAAGGGCCGTTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAAAATACCATGTACCTCCAGATGAACTCTCTCCGCGCAGAGGACACAGCACGTTATTACTGTGCACGCAACTGGAATCTGTGGGGTCAAGGTACTCTTGTAACAGTCTCGAGC(SEQIDNO:76)包括信号肽的Ab-lHC可变区的氨基酸序列METGLRWLLLVAV^G一YgqF週,GTrTTT.VC|PrTrTST.RTAAS图TskJ^^KTWVRQAPGgGLEWVai95顿鄉锡f遂^RFnSRDNSKNTMYLQMNSLRA^DTAkYYCAb-l重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下:CDR-H1:SY麵(SEQIDNO:51)CDR-H2:TIDSGGRTDYASWAKG(SEQIDNO:52)CDR-H3:NWNL(SEQIDNO:53)Ab-l轻链可变区的CDR序列是CDR-L1:QSSQSVYDNNWLA(SEQIDNO:54)CDR-L2:DASDLAS(SEQIDNO:55)CDR-U:QGAY仰VIYA(SEQIDNO:56)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>抗体B(在本文中也称为Ab-B和Mab-B)是显示与硬化素高亲和力结合的小鼠抗体。Ab-B的BIAcore结合模式显示于图16中。Ab-B轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-BLC的氨基酸序列是:1QiyLTQSPTIVSASPGEKVTLIC^S—S^O^gWFQQKP^^SPK，IY鄉51^sn5^gvparfsgggsgtshSLTi—si^Ki"i5ASmc效S""i^pl^FGkG'皿Tk￡-EiiKRanaaptvs2:fppssEQirsGGaswctxn^pxan^KiwaD151GSERGWGV2iWSWTDQDSKDSrrSMSSriirLTKDErKERHNSSTrCEAIHKrS201rSP工VKSJ5TR鄉c(seqidno:31)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-BLC的核酸序列是:151101151201251301351401451501551601CAAATTGTTCGAAGGTCACCGGTTCCAGCATCCAACCTGGGACCTCTCACCTTATTACTGaccaagctggCCCACCATCCTCTTGAACAAGGCAGTGAACCAAAGACAGCagtatgaacgACTTCACCCATCACCCAGTCCTAATCTGCAGAAGCCAGGCGTTTTGGAGTTCTCTCACAACCAGCAAAGGaactgaaacgAGTGAGCAGTCTTCTACCCCGACAAAATGGACCTACAGCAACATAACAGCttgtcaagagTCCAACAATCGTGCCAGTTCACTTCTCC'CACCCTGCTCGCTCAGCCGAATagtacttaccGGCTGATGCTTAACATCTGGAAAGACATCACGTCCTGAACtgagcagcactatacctgtgcttcaacaggGTGTCTGCATAAGTGTAAGTarcgctggatTTCAGTGGCGGGAGGCTGAACACCCACGTTGCACCAACTGAGGTGCCTCAatgtcaagtgagttggactgCCTCACGTTGaggccactcaAATGAGTGTTCTCCAGGGGATTCGTGGACTttacagaacaGTGGATCTGGGATGCTGCCACGGTGCTGGGTATCCATCTTGTCGTGTGCTGAAGATTGATATCAGGACAGACCAAGGACGCAAGACATCAag(seqidno:32)包括信号肽的Ab-BLC的氨基酸序列是1MHFQVQIFSFIiMSASVIVS卿IVI/TQSPTIVSASPG欣VTLICSASSS51VSF7DWFQQKPGTSPKRWIYRTSNLGPGVPARFS6GGSGTSHSLTISRME101AEDAATYYCQQRSTYPPTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQI/TSGG■151ASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQ恥VLNSWTDQDSKDSTYSMSSTL201TLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFN鹏C(SEQIDNO:33)包括信号肽编码序列的Ab-BLC的核酸序列是:1atgcattttc51cmagtgtcc101ctgcatctcc151GTAAGTTTCG201ctggmttac251GTGGCGGTGG301GCTGAAGATG351CACGTTCGGT祖CAACTGTATC451GCCTCAGTCG501CAAGTGGAAG551GGACTGATCA601ACGTTGACCA651CACTCACAAGaagtgcagatagagggcaaaaggggagaagTGGACTGGTTagaacatccaATCTGGGACCCTGCCACTTAGCTGGGACCACATCTTCCCATGTGCTTCTTATTGATGGCAGGACAGCAAAAGGACGAGTAACATCAACTTtttcagcttcttg"ttctcacgtcaccctaaccagcagaagacctgggttttctcactctcTTACTGCCAGAGCTGGAACTCCATCCAGTGGAACAACTTCGTGAACGACAGACAGCACCTTGAACGACATCACCCATTGTctgctaatcaCCAGTCTCCAtctgcagtgcCCAGGCACTTtggagtccctTCACAATCAGCAAAGGAGTAGAAACGGGCTAGCAGTTAACTACCCCAAAGAAATGGCGTCACAGCATGAGAACAGCTATACAAGAGCTTCGTGCCTCAGTACAATCGTGTCAGTTCAAGTCTCCCAAACGgctcgcttcaCCGAATGGAGCTTACCCACCGATGCTGCACATCTGGAGGTACATCAATGTCTGAACAGTTCAGCACCCTCCCTGTGAGGCAACAGGAATG701AGTGTTAG(seqidno:34)Ab-B重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-BHC的氣基酸序列1QVTIiKESGPG51雄IW"f)一DVKR工51'GbivK5^^'DDNO:35)i:lqpsqt:ls:l1"VTVTWNSGSHPASSJPKVBKVTCVWDISKTCSFSGFSLSISKDTSNSQVVIVSSAKT2!PKJVKRDCGCKEKCRVNSflAFHPSGKNLEWLDTATYYCARI编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-BHC的核酸序列1CAGGTTACTC51CCTCAGTCTG101TGGGTGTAGG151GCACACATTT201CCGACTGACT251TCGCCAMGT301GAGGACTTTG351AGGAACCTCA401ATCCACTGGC451GGATGCCTGG501CTCTGGATCC551CTGACCTCTA601CCCAGCGAGA651GGTGGACAAGTGAAAGAGTCACTTGTTCTTCTGGJVTTCGTG6TGGGATGAMCTCCAAGGGGACACTGCAattac幼cgaGTCATCGTCT.ccctggatctTCAAGGGCTACTGTCCAGCGCACTCTGAGCCCGTCACCTGAAAATTGTGCTGGCCCTGGGTCTCTGGGTTCACCCATCAGTGTCAAGCGCatacctccaagatactgccaggagta;ptatcctcagccaagctgcccaaaTTTCCCTGAGGTGTGCACACAGCTCAGTGACAACGTTGCCCCAGGGATTGATATTGCAGCTTCACTGAGCGGAAGAATCTTATAACCCAGgagccaggtaCATACTACTGGCTATGGACTAACGACACCCCTAACTCCATCCAGTGACAGCTTCCCAGCTCTGTCCCCTCCACCCGGCCATGGTTGTAAGCCTCCCAGACACTTCTGGTAGGAGTGGCTGTCCTGAAGAGTTCCTCAAGATGCTCGAATAACTGGGGTCACCATCTGTCTGGTGACCCTGT幼CCTGGAAGTCCTGCAGTCAGCACCTGGgcagcaccaaCqTTGCATAT7017518018519019511001105111011151120112511301GTACAGTCCCGATGTGCTCACATCAGCAAGTGGAGGTGCAACTTTCCGCTTGGCAAGGAGTCGAGAAAACtacaccattcGACCTGCATGAGTGGAATGGgacacagmgCAACTGGGAGTGCACAACCAAGAAGTATCACCATTACTCTGATGATCCCGCACAGCTCAGCAGTCAGTGATTCAAATGCACATCTCCAAACACCTCCCAAATAACAGACTGCAGCCAGCGGCTCTTACTTGCAGGAAATACCATACTGAGTCTGTCTTCAGACTCCTAAGAGGTCCAGTTACGCAACCCCACTTCCCATCGGGTCAACAGACCAAAGGCAGGAGCAGATGTCTTCCCTGAGAGAACTACACGTCTACAGCCTTTCACCTGAAGAGCCTCTTCTTCCCCCCGTCACGTGTGCAGCTGGTTTGGGAGGAGCAATGCACCAGGTGCAGCTTTCGACCGAAGGCGCCAAGGATAAGACATTACTAGAACACTCAaagctcaatgCTCTGTGTTACCCACTCTCCAAAGCCCAAGTTGTGGTAGAGTAGATGATGGTTCAACAGCACTGGCTCAACCTGCCCCCATCCACAGGTGAAGTCAGTCTGTGGAGTGGCGCCC^TCATGTGCAGAAGAGCATGAGGGCCTGGTAAATGA(SEQIDNO:36)包括信号肽的Ab-BHC的氨基酸序列1MGRLTSSFKL51SGMGVGWIRHioi:lkianvdtad151SVYPLAPGSA201LQSDLyELSS251CICTVPEVSS301DDVEVHTAQT351APIEKTISKT401EWQWNGQPAE451EGUiNHHTEKliIVPAYVIiSQVTIiKESGPGIPSGKNLEWIAHIWWDDVKRYTATYYCARIEAQTNSMVTIiGSVTVPSSTWPvfifppkpkdQPRBEQFNSTKGRPKAPQVYNYK,PIMDDFDYDEEYYACIiVKGYFPEPSETVTCNVAHVLTITLTPKVFRSVSEIjPIMTIPPPKEQMATDGSYFVYSKNPVLKSRLTIMDYWGGGTSVVTVTWNSGSIipasstkvdkktcvwdiskdhqdw:lngkefkdkvsitcmilnvqksnweaCSFSGFSIiSTSKDTSNSQVFIVSSAKTTPPSSGVHTFPAVIVPRDCGCKPDPEVQFSWFVKCRVNSAAFPTDFFPEDITVGNTFTCSVBHSLSHSPGK(SEQIDNO:37)包括信号肽编码序列的Ab-BHC的核酸序列1ATGGGCAGGCTTACTTCTTCATTCCTGCTACTGATTGTCCCTGCATATGT51CCTGTCCCAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCT101CCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACT151TCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATTCGTCACCCATCAGGGAAGAATCTGGA201GTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGTCAAGCGCTATAACCCAGTCC251TGAAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAACAGCCAGGTATTC301CTCAAGATCGCCAATGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGC351TCGAATAGAGGACTTTGATTACGACGAGGAGTATTATGCTATGGACTACT401GGGGTCAAGGAACCTCAGTCATCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCA451TCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCfGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTSOIGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAQTGA551CCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTC601ctgcagtctgacco"ctacactctgagcagctcagtgactgtcccctccag651cacctggcccagcgagaccgtcacctgcaacgttgcccacccggccagca701gcaccaaggtggacaagaaamtgtgcccagggmtgtggttgtaagcct751tgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttccccccaaa801gcccaaggatgtgctcrccattactct6actcctaaggtcacctgtgttg851tggtagacatcagcrrggrtgatcccgaggtccagttcagctggtttgta901GATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGftGGAGCAGTT951caacagcactttccgctcagtcagtgarcttcccatcatgcaccaggact1001ggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaacagtgcagctttccct1051GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCC1101acaggtotacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaag1151TCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTG1201GAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCC1251CATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGC1301AGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACAT1351GAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGG1401TAAATGA(SEQIDNO:38)Ab-B重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下CDR-H1:TSGMGVG(SEQIDNO:57)CDR-H2:HIWWDDVKRYNPVLKS(SEQIDNO:58)CDR-H3:EDFDYDBEYYAMDY(SEQIDNO:59)Ab-B轻链可变区的CDR序列是CDR-Ll:SASSSVSFVD(SEQIDNO:60)CDR-L2:RTSNLGF(SBQIDNO:61)CDR-L3:QQRSTYPPT(SEQIDNO:62)本文公开的抗体与对蛋白质的体内活性重要的人硬化素区域结合。抗体与硬化素的结合可以例如与通过在体内使用例如实施例5和9(小鼠)以及实施例12(猴)中所述的抗体达到的骨矿物质密度中的增加相关。骨形成、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度中的至少一种的增加也可以通过在体内使用例如实施例5和9(小鼠)以及实施例12(猴)中所述的抗体来达到。因为抗体与硬化素的结合主要由其cim序列来决定，所以用于实践本发明的抗体可以在合适构架中具有所有或某些公开的CDR序列来产生，其中所述抗体保留与硬化素特异性结合的能力，且能够预期达到例如骨矿物质密度中的増加。此类抗体在人或动物病症的治疗中有用，所述病症由低骨形成、低骨矿物质密度、低骨矿物质含量、低骨量、低骨质量和低骨强度中的至少一种引起，与这些关联，或导致这些。构建和表达包含本发明的CDR的抗体及其片段的方法是本领域技术人员已知的，因此在一个实施方案中本发明涉及分离的抗体包括Ab-A或其抗原结合片段，其与硬化素特异性结合且其中重链可变结构域包含至少一个CDR，所迷CDR具有SBQIDNO:51中给出的关于CDR-H1的序列、关于CDR-H_2的SEQIDNO:52或关于CDR-H3的SEQIDNO:53。抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变结构域，其中CDR由关于CDR-H1的SEQIDNO:51、关于CDR-H2的SEQIDNO:52和关于CDR-H3的SEQIDNO:53中的至少一种肽组成。当在本发明的抗体中存在轻链时，轻链可以是任何合适的互补链且可以特别选自其中可变结构域包含至少一个CDR的轻链，所述CDR具有SEQIDNO:54中给出的关于CDR-L1的序列、关于CDR-L2的SEQIDNO:55或关于CDR-L3的SEQIDNO:56。抗体或其抗原结合片段可以包含轻链可变结构域，其中CDR由关于CDR-L1的SEQIDNO:54、关于CDR-L2的SEQIDNO:55和关于CDR-L3的SEQIDNO:56中的至少一种肽组成。本发明进一步涉及分离的抗体包括Ab-B或其抗原结合片段，其与硬化素特异性结合且其中重链可变结构域包含至少一个CDR，该CDR具有SBQIDNO:57中给出的关于CDR-H1的序列、关于CDR-H2的SEQIDNO:58或关于CDR-H3的SBQIDNO:59。抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变结构域，其中CDR由关于CDR-H1的SEQIDNO:57、关于CDR-H2的SEQIDNO:58和关于CDR-H3的SEQIDNO:59中的至少一种舦组成。当在本发明的抗体中存在轻链时，轻链可以是任何合适的互补链且可以特别选自其中可变结构域包含至少一个CDR的轻链，所述CDR具有SEQIDNO:60中给出的关于CDR-L1的序列、关于CDR-L2的SEQIDNO:61或关于CDR-L3的SEQIDNO:62,抗体或其抗原结合片段可以包含轻链可变结构城，其中CDR由关于CDR-L1的SEQIDNO:60、关于CDR-L2的SEQIDNO:61和关于CDR-L3的SEQIDNO:62中的至少一种肽组成。本发明再进一步涉及分离的抗体包括Ab-C或其抗原结合片段，其与硬化素特异性结合且其中重链可变结构域包含至少一个CDR，该CDR具有SEQIDNO:45中给出的关于CDR-HI的序列、关于CDR-H2的SEQIDNO:46或关于CDR-H3的SEQIDNO:47。抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变结构域，其中CDR由关于CDR-H1的SEQIDNO:45、关于CDR-H2的SEQIDNO:46和关于CDR-H3的SEQIDNO:47中的至少一种肽组成。当在本发明的抗体中存在轻链时，轻链可以是任何合适的互补链且可以特别选自其中可变结构域包含至少一个CDR的轻链，所述CDR具有SEQIDNO:48中给出的关于CDR-Ll的序列、关于CDR-L2的SEQIDNO:49或关于CDR-L3的SEQIDNO:50。抗体或其抗原结合片段可以包含轻链可变结构域，其中CDR由关于CDR-Ll的SEQIDNO:48、关于CDR-L2的SEQIDNO:49和关于CDR-L3的SEQIDNO:50中的至少一种肽组成。本发明还涉及分离的抗体包括Ab-D或其抗原结合片段，其与硬化素特异性结合且其中重链可变结构域包含至少一个CDR，该CDR具有SEQIDNO:39中给出的关于CDR-Hl的序列、关于CDR-H2的SEQIDNO:40或关于CDR-H3的SBQIDNO:41。抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变结构域，其中CDR由关于CDR-Hl的SEQIDNO:39、关于CDR-H2的SEQIDNO:40和关于CDR-H3的SEQIDNO:41中的至少一种肽组成。当在本发明的抗体中存在轻链时，轻链可以是任何合适的互补链且可以特别选自其中可变结构域包含至少一个CDR的轻链，所述CDR具有SEQIDNO:42中给出的关于CDR-Ll的序列、关于CDR-L2的SEQIDN0:43或关于CDR-L3的SEQIDNO:44,抗体或其抗原结合片段可以包含轻链可变结构城，其中CDR由关于CDR-Ll的SEQIDNO:42、关于CDR-L2的SEQIDNO:43和关于CDR-L3的SEQIDNO:44中的至少一种舦组成。另外的抗硬化素抗体在下文描述。对于某些氨基酸序列，互补决定区(CDR)是带方框阴影的和恒定区是粗体斜体，Ab-2抗体2(也称为Ab-2)的LC和HC序列如下轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-2LC的氨基酸序列1QiyjL^SPAILSTSPGEKVTMTC隨站買P^WYQQpGSSPK^VlV暨51,召GVPVRFSGSGSGTSYSLT成VEA^DAATYYQQQ，敏P敬GXdJ5/G從ig;V(7I^V5"lfTDeZ)5KZWrKSMSOTXTT;rJED丑EBiSflAWPTCE4mKT51谢ra尸/FKWWJ潛C(SEQIDNO:117)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-2LC的核酸序列:1CAAATTGTTCTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTGTCTACATCTCCAGGGGA51GAAGGTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCAAGTGTATATTACATGCACT101GGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATGCCACA151TCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGTTCQCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGG201GACCTCTTACTCTCTCACAATCACCAGAGTGGAGGCTGAAGATCCTGCCA251CTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTGACCCACTCACGTTCGGTGCTGGG301ACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTT351CCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCT401TCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGAT451GGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTOAACAGTTGGACTGATCAGQACAG501CAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACG551AGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCA601ACTTCACCCATTOTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:118)包括信号肽的Ab-2LC的氨基酸序列1MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQIVLSQSPAILSTSPGEKVTMTCRASSS51VYYMHWYQQKPQSSPKPWIYATSNLASGWVRFSGSGSGTSYSLTTTRVE101AEDAATYYCQQWSSDPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGG2011LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNKNEC,!DNO:119)包括信号肽编码序列的Ab-2LC的核酸序列1ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCTTCAGT51CATTATGTCCAGGGGACAAATTGTTCTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTQT1<HCTACATCTCCAGGGGAGAAGOTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCAAGT151GTATATTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGQATCCTCCCCCAAACC201CTGGATTTATGCCACATCCAACCTGGCTTCTGQAGTCCCTGTTCGCTTCA251GTGGCAGTGGGTCTGQQACCTCTTACTCTCTCACAATCACCAGAGTGGAG301GCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGOAGTAGTOACCCACT351CACGTTCGGTGCTGQGACCAAGCTGGAQCTGAAACGGGCTGATGCTGCAC401CAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGT451GCCTCAGTCGTOTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGT501CAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTT^CGTGACCAAOGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGC651CACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATG701AGTGTTAG(SBQIDNO:120)Ab-2重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-2HC的氨基酸序列1EVgVQQSpPELV^PC^SVKLSCTASGFNIK!B^fiWVKQRPEQGLEWI雄51面E胸画A叙(pKAIMTADTSSNTA"^LQlliSLTSEDTAIYYCE顿.鄉ra说户/柳砂WXiVGXEiJyCRWV&4/iFZiPJJSmsmCSPiL4PgnT/P柳OT/KSfiXiVK卿ATO4(7NTmm朋GLfflVHHT五mSHSPGJT(SEQIDNO:121)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-2HC的核酸序列:1GAGGTTCAGGTGCAGCAGTCTGGGCCAGAACTTGTGAAGCCAGGGGCCTC51AGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTTTA101TACACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGG151CTTGATCCTGAGGATGGTGAAAGTGATTATGCCCCGAAGTTCCAGGACAA201GGCCATTATGACAGCAGACACATCATCCAACACAGCCTATC1TCAGCTCA251GAAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCATCTATTATTGTOAGAGAGAGGAC301TACGATGGTACCTACACCTTTTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGT351CACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCC401CTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTC451AAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTOACCTGGAACTCTGGATCCCT501GTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACA551CTCTGAGCAGCTCA(3TGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACC601GTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAA651AATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAG701MGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACC751ATTACTCTOACTOCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGA801TGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTITGTAGATGATOTGGAGGTGCACA851CAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCA卯lGTCAGTGAACTTCCCATCATQCACCAGGACTOGCTCAATQQCAAGQAQTT951CAAATGCAGGGTCAACAGTCCAGCTTTCCCTOCCCCCATCGAGAAAACCA諫TCTCCAAAACCAAAOGCAGACCGAAGGCTCCACAGQTOTACACCATTCCA1051CCTCCCAAGGAGCAGATQGCCAAGQATMAGTCAGTCTGACCTGCATGAT1101AACAGACTTCTTCCCTOAAGACATTACTGTGGAGTGQCAGTQGAATGGGC1151AGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGC■TCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGC1251AGGAAATACTTTCAOCTGCTCTGTGTTACATGAGGQCCTOCACAACCACC1301ATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGOTAAATGA(SEQIDNO:122)包括信号肽的Ab-2HC的氨基酸序列1MKCSWVIFFLMAWTGVNSEVQVQQSGPELVKPGASVKLSCTASGFNKD51YFIHWVKQRPEQGLEWIGRLDPEDGESDYAPKFQDKAIMTADTSSNTAYL101QLRSLTSEDTAIYYCEREDYDGTYTFFPYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYP151LAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSD201LYTLSSSVTVPSSTWP犯TVTCNVAHPASS1KVDKKIVPRDCGCKPCICT251VPEVSSWIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDDVE351KTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQW401N<3QPAENTYKNTQP訓TDGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLH451NHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:123)包括信号肽编码序列的Ab-2HC的核酸序列1ATGAAAtGCAGCTGGGTCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGT51CAATTCAGAGGTTCAGGTGCAGCAGTCTGGGCCAGAACTTGTGAAGCCAG101GGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGAC151TACTTTATACACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGAT201TGGAAGGCTTGATCCTGAGGATGGTGAAAGTGATTATGCCCCGAAOTTCC251AGGACAAGGCCATTATGACAGCAGACACATCATCCAACACAGCCTATCTT301CAGCTCAGAAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCATCTATTATTGTGAGAG351AGAGGACTACGATGGTACCTACACCTTTTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGA401CTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCA451CTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATG501cctggtcAagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactctg551GATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGAC601CTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAG651CGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGG701ACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACA751QTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGT801GCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCA851GCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATOTGGAG卯lQTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGQAGCAGTTCAACAGCACTTT951CCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATQGCAl簡AGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAG1051AAAACCATCTCCAAAACCAAAQGCAGACCGAAGGCTCCACAQGTGTACAC1101CATTCCACCTCCCAAGOAGCAGATQGCCAAGGATAAAGTCAOTCTOACCT1151QCATOATAACAQACTrcTrcCCTOAAGACATTACTOTQGAGTOGCAOTGG1201AATGOGCAGCCAGCQGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATQGACAC1251AGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTQCACJAAGAGCAACT1301QQGAGGCAGGAAATACTTTCACCTQCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCAC1351AACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQIDNO:124)Ab-3抗体3(在本文中也称为Ab-3)的LC和HC序列如下:Ab-3轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-3LC的氨基酸序列1EIVLTQSPALMAASPGEKVTITCS河Stlg^lHSilWFQQK^)TS[KP曹51G^^GVPVRFSGSGSGTSYS[T^SMiAEDAATYYC^滩^i^tFG2WmS"iWKW7AWiVEC(SEQEDNO:125)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-3LC的核酸序列:1GAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGGCTGCATCTCCGGGGGA51GAAGGTCACCATCACCTGCAGTGTCAGTTCAACTATAAGTTCCAACCACT101TGCACTGGTTCCAGCAGAAGTCAGACACCTCCCCCAAACCCTGGATTTAT151GGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGTTCGCTTCAGTGGCAGTGG201ATCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAGGATG251CTGCCACTTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCACTCACGTTCGGC301GCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAGACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATC351CATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCG401TGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAG451ATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTOATCA501GGACAGCAAAGACAQCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCA551AGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGIDNO:126)包括信号肽的Ab-3LC的氨基酸序列,MV鹏FMJSVTVILSSGEIVLTQSPALMAASPGEKTOTCSVSST51ISSNHLHWFQQ咖TSPKPWIYGTSNLASGVPVRFSGSGSQTSYSL加S101MEAHDAATYYCQQWSSYPLTFGAGTKLELRRADAAPTVSIFPPSSEQLTS;151GOASWCFLNNFyPKDINVKWKIDO舰QNGVLNSWlT)QDSKDSTYSMSS201TLTLTKDEYERHNSYTCEAT孤TSTSMVKSFNRNEC(SEQIDNO:127)包括倌号肽编码序列的Ab-3LC的核酸序列:1ATGGATTTTCATGTGCAGATTTTCAGCTTCATGCTAATCAGTGTCACAGT51CATTTTGTCCAGTGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGG101CTGCATCTCCGGGGGAGAAGGTCACCATCACCTGCAGTGTCAGTTCAACT151ATAAGTTCCAACCACTTGCACTGGTTCCAGCAGAAGTCAGACACCTCCCC201CAAACCCTGGATTTATGGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGTTC251GCTTCAGTGGCAGTOGATCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGC301ATGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTA351CCCACTCACGTTCGGCGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAGACGGGCTGATG401CTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTOAGCAGTTAACATCT451GGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACAT501CAATOTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGA551ACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGC601ACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTG651TGAQGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACA701GGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:128)Ab-3重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-3HC的氨基酸序列1EVQLQQSGAELVRPG.3W3TASF孤W細QZ,VKLSCTASDFNIKt)喊fi(WMRQRPEQGLD、TLTTDTSSNTAY'LQLSGLTSETTAVYYCSIGAGTTITVSS/4JriTPi^fTWL/tPGSrGKEOTCXmSXlFA4P/EmSJT2XGft/K4PgrIDNO:129)编瑪成熟形式(信号肽被去除)的Ab-3HC的核酸序列1QAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAACTTGTGAGGCCAGGGGCCTT51AGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGACTTCAACATTAAAGACTTCTATC101TACACTGGATGAGGCAGCGGCCTGAACAQGGCCTGGACTGGATTGOAAGG151ATTGATCCTGAGAATGGTGATACTTTATATGACCCQAAGTTCCAGGACAA加QGCCACTCTTACAACAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTOCAGCTCA251GCGGCCTGACATCTGAGACCACTGCCGTCTATTACTGTTCTAQAGAGQCG301OATTATTTCCACGATGGTACCTCCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGC351AGGGACCACAATCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCT401ATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTG451QGATQCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTCACAGTGACCTQGAA501CTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTCCAGT551CTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGG601C亡CAGCGAGACCCTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAA651GGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATAT701GTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAG751GATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGA801CATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATG851TGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGC卯lACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAA951TGGCAAGQAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCA■TCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTG1051TACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCT1101GACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGT(SGAGTGGC1151AGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATG1201GACACAGATOGCTCTTACTTCATCTACAQCAAGCTCAATGTGCAGAAGAG1251CAACTQGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTOCTCTGTGTTACATGAGGGCC1301TGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SBQIDNO:130)包括信号肽的Ab-3HC的氨基酸序列1MKCSWVIFFLMAVVTGVNSEVQLQQSGAELVRPGALVKLSCTASDFNIKD51FYLHWMRQRPEQGLDWIGRIDPENGDTLYDPKFQDKATLTTDTSSNTAYL101QLSGLTSETTAVYYCSREADYFHDGTSYWYFDVWGAGTTITVSSAKTTPP151SVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHEFPAV201LQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKP251CICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFV301DDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFP351AP正KHSKTKGRPKAPQVYUPPPKEQMAKDKVSLTCMTDFFPEDITV401EWQWNGQPAENYKNTQP歸TOGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLH451EGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:131)包括信号肽编码序列的Ab-3HC的核酸序列1ATGAAATGCAGCTGGGTCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGQGT51CAATTCAGAGCTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAACTTGTOAGGCCAG101GGGCCTTAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGACTTCAACATTAAAGAC151TTCTATCTACACTGGATGAGGCAGCGGCCTGAACAGGGCCTQGACTGGAT201TGGAAGGATTGATCCTGAGAATGGTGATACTTTATATGACCCGAAGTTCC251AGGACAAGGCCACTCTTACAACAGACACATCCTCCAACACAQCCTACCTG301CAGCTCAGCGGCCTGACATCTGAGACCACTGCCGTCTATTACTOTTCTAG351AGAGGCGGATTATTTCCACGATGGTACCTCCTACTGGTACTTCGATGTCT401GGGGCGCAGGQACCACAATCACCGTCTCCTGAGCCAAAACGACACCCCCA451TCTGTCTATCCACTGGCCCCTQGATCTOCTQCCCAAACTAACTCCATGGT501GACCCTQGGATQCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTQAGCCAGTQACAQTGA551CCTGGAACTCTOGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTOTC601CTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAG651CACCTGGCCCAQCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCQGCCAGCA701GCACCAAQGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTOTAAGCCT751TGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAA加l(KXXAAGGATGTQCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTOTOTTG851TGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTA卯lGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTT951CAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACT1加TGG—CTCAATGG'CAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCT1051GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCC1101ACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAG1151TCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTO1201GAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAQCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCC1251CATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGC1301AGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACAT1351GAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGG1401TAAATGA(SEQIDNO:132)Ab-4抗体4(在本文中也称为Ab-4)的LC和HC序列如下Ab-4轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-4LC的氨基酸序列1吸MTgiTSSLSASLGDKVSIS嫩S邻feW^WYQQ^D(^KLL喊；51^^§GVPSRFSGSGSGTDYSl)ftV^LEQEDFATYFdQ^(J6環"VtlF(iG15/D咖及fiMPXiWI2)giWKD5TKSM5mrWXD五鹏ffiVOTCE4riHT2W《rap/FKS/wiyvEC(SEQEDNO:m)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-4LC的核酸序列1GATATCCAGATGACACAGATTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA51CAGGGTCTCCATdAGTTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAATTATTTAA101ACTGGTATCAGCAGAAACCA(3ATGQAACTTTTAAACTCCTTATCTTCTAC151ACATCAAGATTACTCTCAGGAQTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTC201TGGAACAGATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAAGAAGATTTTG251OCACTTACTTTTGCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACACTTTCGGAGGG301QGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAT351CrrCCCACCATCCAGTQAOCAGTTAACATCTQGAGGTGCCTCAGtCGTOT柳GCITCTraAACAACTTCIACCCCAAAQACATCAATQTCAAOTGOAAQATT451OATGOCAQTGAACGACAAAATGGCOTCCTGAACAGTTQGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAOCACCTACAGCATGAGGAGCACCCTCACGTTGACCAAQG551ACGAGTATOAACQACATAACAGCTATACCTGTQAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATOAGTGTTAG(SEQIDNO:134)包括信号肽的Ab-4LC的氨基酸序列1画SSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQITSSLSASLGDRVSISCRASQDIS51NYLNWYQQKPDGTFKLLIFYTSRLLSGVPSRFSGSGSGTDYSLTTYNLEQ101EDFATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGA151SWCFLNNFYPKDINVK額DGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLT201LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQIDNO:135)包括信号肽编码序列的Ab-4LC的核酸序列:1ATGATGTCCTCTGCTCAOTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGG51TAgCAGATOTGATATCCAGATGACACAGATTACATCCTCCCTGTCTGCCT101etetGJSeAdAldXGGGTCTCCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGC151AATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTTTTAAACTCCT201TATCTTCTACACATCAAGATTACTCTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAA301GAAGATTTTGCCAOTACTTTTGCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACAC351TTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501GTGGAAGATTGATGGCAGTCAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG柳TTGACCAAGGACGAGTATOAACGACATAACAGCTATACCTGTCAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701GTTAG(SEQIDNO:136)Ab-4重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-4HC的氨基酸序列IEVQ鄉S鹏LMKPGASVKMSCKASGYTFT^SS^WVKQNQGKTLEWI战51Sf^kS脇询N0^K(^CA1LTVDKSSTTAYMJ3LRSLTSEDSAVYYCAR^ioiIdiH^pw^dv^6Agttvtvss^jnr鹏ffpl4P(^gi3amz^c祝jtimiyjKTcmowsKW)战Ffirawpw)鹏wro4卿w^fimsrF鄉赵ra燈iMsr砂fn^鹏ivotFmi4iTJwfflmsanx卿x^0TT编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-4HC的核酸序列:1GAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTOGGGCTTC51AGTGAAGATGTCCTCCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGGTGAAGCAGAACCAAGGAAAGACCCTAGAGTGGATAGGAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA201GGCCACATTCACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTCAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGATTGGOC301TACGATGATATCTACGACGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGAC351CACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCAC邻lTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGC451CTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGG501ATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACC551TCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC601GAGACCOTCACCTGCAACOTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGA651CAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTCTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTG751CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAG801CAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGG851TGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTC邻]CGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAA951GGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGA，AAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACC逾—ATTCCTCC^AAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTG1101CATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGA1151ATOGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACA1201GATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATOTGCAGAAGAGCAACTG1251GGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTOTGTTACATGAGGGCCTGCACA1301ACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQIDNO:138)包括信号肽的Ab-4HC的氨基酸序列:iMGWSW1TFLFLLSGTAGVLSBVQLQQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTD51YNMHWVKQNQGKTLEWIGEINPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCARLGYDDIYDDWYEDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSV151YPLAPGSAAQWSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVmiFPAVLQ201SDLYTLSSSVTVPSSTWP犯TVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCI251CTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTTILTPKVTCVWDISKDDPEVQFSWFVDD301VEVHTAQTQPREEQFNSTTFRSV犯LPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAP351IEKTISKIKGRPKAPQVYTtPPPKEQMAKDKYSLTCMTTOFFPEDHVEW柳QWNGQPAENYKNTQPIMDTOGSYHYSKLNVQKSNWBAGNTFTCSVLHEG451LHNHHIEKSLS磁PGK(SEQIDNO:139)包括信号肽编码序列的Ab-4HC的核酸序列:1ATGGGATGGAGCTGGACCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTG101GGGCTTCAGTGAAGATOTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGAC151TACAACATGCACTGGGTGAAGCAGAACCAAGGAAAGACCCTAGAGTGGAT201AGGAGAAATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCA251AGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATG301GAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAG351ATTGGGCTACGATGATATCTACGACGACTGGTACTTCGATGTCTOGGGCG401CAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTC451TATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCT501GGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTCAGCCAGTGACAGTGACCTGGA551ACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAG601TCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTG651GCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCA701AGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATA751TGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAA801GGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAG851ACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCA(5TTCAGCTGGTTT(JTAGATGAT卯lGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCA(5TTCAACAG951CACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCA1001ATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCC1051ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGT1101GTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTC1151TGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGG1201CAGTGGAATGGGCAGCCAGCQGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCAT1251GGACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGA1301GCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGC1351CTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATG1401A(SEQIDNO:i勒)Ab-4被人源化以产生Ab-5。Ab一5抗体5(在本文中也称为Ab-5)的LC和HC序列如下Ab-5轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-5LC的氨基酸序列1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC^4^g一l^i^WY99KPGKAPKLLIY^51lRti^GVPSRFSGSGSGTDFIL涵LQ》k5FATYY敏.GDl[lpFGdJWX5SmXSRV柳C(SEQIDNO:l")编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-5LC的核酸序列:1GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCTCCGCATCCGTAGGCGA51CCGCGTAACCATAACATGTAGAGCATCTCAAGATATTTCCAACTATTTGA101ATTGGTACCAACAAAAACCCGGCAAAGCACCTAAACTCCTCATTTACTAT151ACATCAAGACTCCTCTCCGGCGTTCCATCACGATTCTCAGGCTCCGGCTC201CGGCACAGATTTCACACTCACTATTTCCTCCCTCCAACCAGAAGATTTTG251CAACCTATTACTGTCAACAAGGCGATACACTCCCATACACATTCGGCGGC301GGCACAAAAGTTGAAATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCAT351CTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTCT401GCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTG451GATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGA501CAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG551CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCOAAGTCACCCATCAGGGC601CTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQID1MDMRWAQLLGLLLLWLRGARGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD51ISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLLSGVP卿SGSGSGTDFTLT1SSL101QPEDFATYYCQQGDTLPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG151TASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST201LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:143)包括信号肽编码序列的Ab-5LC的核酸序列:1ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCT51CCGAGGTGCCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCT101CCGCATCCGTAGGCGACCGCGTAACCATAACATGTAGAGCATCTCAAGAT151ATTTCCAACTATTTGAATTGGTACCAACAAAAACCCGGCAAAGCACCTAA201ACTCCTCATTTACTATACATCAAGACTCCTCTCCGGCGTTCCATCACGAT251TCTCAGGCTCCGGCTCCGGCACAGATTTCACACTCACTATTTCCTCCCTC301CAACCAGAAGATTTTGCAACCTATTACTGTCAACAAGGCGATACACTCCC351ATACACATTCGGCGGCGGCACAAAAGTTGAAATTAAACGTACGGTGGCTG401CACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGA451ACTGCCTCTGTTOTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAA5加"AGTAe做GGSAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGA551(3TGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACC柳CTCACGCTGAOCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACQCCTQCGA651AGTCACCCATCA<3GGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGG701(JAGAGTGT卿IDNO:144)Ab-5重链成熟形式(倌号舦被去除)的Ab-5HC的氨基酸序列:NO:142)包括信号肽的Ab-5LC的氨基酸序列:1EV^LVQSgAEVKKPpASVKVSCKASGYTFT)3^^WVRQAPGQGLE丽竭51购版欲VTMTTDTSTSTAYI^Q^LRSDDTAVYYCARlglOl.yDDIYDDWYFD省一TTVTVSS/4OT鹏WP"PGSItS215咖流^:25J"IZM/朋鹏朋i^gFWFW)(7F五ra7VHXP朋Jgf7Vy柳D幼GUjF/m虹mwcss『ggGwwscywflE4LflWffrrgmw^sp(ir(seqEDNO:145)不舍羧基末端賴氨酸的成熟形式(信号肽被去除)的Ab-5HC的氨基酸序列1SGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTbf^ffl(WVRQAPGQGLEWI^51,N^^GAGY缀嫩赠RVTMTTDTSTSTAYN&fjRSLRSDDTAVYYCAMp10辆DIYDDWV^I^Q^GTTVTVS&4ST恥然KFPJUPCSASIS肪r^4L^C25;BHJifzsR;rpeF7orraraff幼祝F2PMPrWK^EW33yuKP朋五0Rvs卯irfXFraFLiyj^砂肌MaceirarraAowai^孤r舰rar邻鹏攀祝FT￡mKE￡AfIX7VeratltX汉(7FFP幼X4ra附S/NTG0PEMVHnTPP肌柳D幼GSFFlES"虹ITmSXW(eg(A^RyCiy附im4Ifl7VfflTgJSyLSLSP((SEQIDNO:392)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-5HC的核酸序列1QAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTAAAAAAACCAGGAGCAAG51CGTTAAAGTTTCTTGTAAAGCAAGCGGATATACATTTACAGATTACAACA101TGCATTGGGTAAGACAAGCGCCAGGACAAGGATTGGAATGGATGGGCGAA151ATTAACCCTAATAGTQGAGGAGCAGGCTACAATCAAAAATTCAAAGGGAG201AGTTACAATGACAACAGACACAAGCACTTCAACAGCATATATGGAACTGC251GATCACTTAGAAGCGACGATACAGCTOTATACTATTGCGCACGACTTGGG301TATGATGATATATATGATGACTGGTATTTCGATGTTTGGGGCCAGGGAAC351AACAGTTACCOTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCC401TGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGC451CTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGG501CGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAG551GACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGC601ACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGT651GGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTQTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAG701CACCACCTGTQGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG々51QACACCCTCTATOATCTCCCGGACCCCTOAGGTCACGTOCGTOGTOGTGGA咖OGTGAGCCACGAAGACCCCGAGQTCCAQTTCAACTQGTACQTQOACOGCO851TQGAGGTQCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGQAGGAGCAGTTCAACAGC卯lACGTTCCGTGTOGTCAQCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTQGCTGAA951CGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCA醒TCGAQAAAACCATCTCCAAAACCAAAGOGCAGCCCCQAGAACCACAGGTG1051TACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCT1101GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGG1151AGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTG1201GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAG1251CAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTC1301TGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGOGTAAA(犯QIDNO:146)包括信号肽的Ab-5HC的氨基酸序列1MDWTWWLFLVAAATGAHSEVQLVQSG鍵KKPGASVKVSCKASGYEFTD51YNMHWVRQAPGQGLEWMGEINPNSGGAGYNQKFKGRVTMTTDTSTSTAYM101ELRSLRSDDTAVYYCARLGYDDIYDDWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSV151FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ201SSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP251CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYV301DGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP351APIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV邻lEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMH451EALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:147)包括信号肽编码序列的Ab-5HC的核酸序列1ATGGACTGGACCTGGAGGATCCTCTTCTTGGTGGCAGCAGCCACAGGAGC51CCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTAAAAAAACCAG101GAGCAAGCGTTAAAGTTTCTTGTAAAGCAAGCGGATATACATTTACAGAT151TACAACATGCATTGGGTAAGACAAGCGCCAGGACAAGGATTQGAATQGAT201GGGCGAAATTAACCCTAATAGTGGAGGAGCAGGCTACAATCAAAAATTCA251AAGGGAQAGTTACAATGACAACAGACACAAGCACTTCAACAGCATATATG301GAACTGCGATCACTTAGAAGCGACGATACAGCTGTATACTATTGCGCAC(J351ACTTGGGTATGATGATATATATGATGACTGGTATTTCGATGTTTGGGOCC柳AGGGAACAACAGTTACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTC451TTCCCCCTGGCQCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCT501GGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGA551ACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAG则TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAA651CTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAQCAACA701CCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTFGTGTCOfAGTGCCCACCG751TGCCCAGCACCACCTGTGGCAGQACCGTCAOTCTTCCTCTTCCCCCCAAA抑lACCCAAGGACACCCTCATOATCTCCCGGACCCCTGAQQTCAOGTGCGTGG851TGGTGQACGTGAGCCACGAAGACCCCGAQGTCCAGTTCAACTGOTACGTG901GACGGCGTGGAGGTOCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAQCAGTT951CAACAGCACOTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTQTGCACCAGGACT簡GGCTGAACQGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCA1051GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAQGGCAGCCCCGAGAACCmrxcAGGTGmeaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccagg1151TCAGCCTGACCTGCCTOGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTG1201GAGTOGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCC1251CATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGG1301ACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTOATGCAT1351GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGG1401TAAA(SBQIDNO:148)Ab-5可变结构城Ab-5轻链可变结构域的氣基酸序列(不含信号序列)1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC^^頃fe—TpL^WYqQKPGKAPKLLIY^i51^^lCLE§GVPSRFSGSGSGTDFTl^fSSLC^Sfi^^TYYqQ^G^TlLiPlhriFGd101玩kV^IK(SBQEDNO:376)Ab-5轻链可变结构域的DM序列(不含信号序列)1GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCTCCGCATCCGTAGGCGA51CCGCGTAACCATAACATGTAGAGCATCTCAAGATATTTCCAACTATTTGA101ATTGGTACCAACAAAAACCCGGCAAAGCACCTAAACTCCTCATTTACTAT151ACATCAAGACTCCTCTCCGGCGTTCCATCACGATTCTCAGGCTCCGGCTC201CGGCACAGATTTCACACTCACTATTTCCTCCCTCCAACCAGAAGATTTTG251CAACCTATTACTGTCAACAAGGCGATACACTCCCATACACATTCGGCGGC301GGCACAAAAGTTGAAATTAAA(SEQIDNO:377)Ab-5重链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT|^ijlfiiWVRQAPGQGLEWMC^51pPN舰AGT两fej^RVTMTTDTSTSTAYiM^SlJRSDDTAVYYCARfg101jtatfyDDV^gyw6QGTTVTVSS(SEQIDNO:378)Ab-5重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)1OAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTAAAAAAACCAGGAGCAAG51CGTTAAAGTTTCTTGTAAAGCAAGCGGATATACATTTACAGATTACAACA101TGCATTGGGTAAGACAAGCGCCAGGACAAGGATTGOAATGGATGGGCGAA151ATTAACCCTAATAGTGGAGGAGCAGGCTACAATCAAAAATTCAAAGGGAG201AGTTACAATGACAACAGACAGAAGCACTTCAACAGCATATATGGAACTGC251GATCACTTAGAAGCGACGATACAGCTGTATACTATTGCGCACGACTTGGG301TATQATGATATATATQATGACTGGTATTTCGATGTTTGGGGCCAGGOAAC351AACAGTTACCGTCTCTAGT(SEQIDNO:379)Ab-5重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下CDR-H1:DYNMH(SEQIDNO:245)CDR-H2:EINPNSGGAGYNQKFKG(SBQIDNO:246)CDR-H3:LGYDDIY画YFDV(SEQIDNO:247)Ab-5轻链可变区的CDR序列是CDR-L1:RASQDISNYLN(SEQIDNO:78)CDR-L2:YTSRLLS(SEQIDNO:79)CDR-L3:QQGDTLPYT(SBQIDNO:80)Ab-6抗体6(在本文中也称为Ab-6)的LC和HC序列如下Ab-6轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-6LC的氨基酸序列1DiQMTQTTSSLSASLGDRVTISC^X,招1^^WFQ卿DGTL虹L赠51!^L與GVPSKFSGSGSGTOYSlS^M^QE5iATYFC^(5D他lffFGG101^StElRiMDAiP2WFi>i幼卿raWJ5KFCFX層FFi^iA^WKr5W/WEWWiWVEC(SEQIDNO:149)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-6LC的核酸序列1QATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA51CAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAA101ACTGGTTTCAGCAGAAACCAGATGGAACTCTTAAACTCCTGATCTTCTAC151ACATCAAGATTACACTC八QGAGTTCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTC201TGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTG251CCACTTACTTTTGCCAACAGGGTGATACGCTTCCGTACACGTTCOGGGGG301GGGACCAAGCTGGAAATAAGACGGGCTGATGCTOGACCAACTGTATCCAT351CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGT401GCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAOATT451GATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAQCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTCACCAAGG551ACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTQAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:150)包括倌号肽的Ab-6LC的氨基酸序列1謝SSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIS51NYLNWFQQKPDGTTLKLLIFYTSRLHSGVPS鹏GSGSGTDYSLTISNLEQ101BDIATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEIRRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGA151SVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTOQDSKDSTYSMSSTLT201LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ]DNO:151)包括信号肽编码序列的Ab-6LC的核酸序列:1ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGG51TACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCT101CTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGC151AATTATTTAAACTGGTTTCAGCAGAAACCAGATGGAACTCTTAAACTCCT201GATCTTCTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTTCCATCAAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAA301GAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTGATACGCTTCCGTACAC351GTTCGGGGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAGACGGGCTGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTOCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501GTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG601TTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701GTTAG(SEQIDNO:152)Ab-6重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-6HC的氨基酸序列1EVQLQqsqfE—LMKPGASVKMSCKASGYTFTp^3^WVKQNQGKSLEWI竭51th^^OGSW^KFlt"iKATLTVDKSSSTAYKM5^LTSEDSAVYYCARLV:1Or齒0SY^^DVW(5AGTTVTVSS/tSTTiRW1emSWT7X(k:25jj:mxriwrcwwwskddPEKgiw^KDDKBrawgrgp朋jEOFvsrF柳JfcSraBjLPDMH砂WUVGKEFJi:C及WVi&^4i^jP/ElfTmTJrGitWt4PfiFITNO:153)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-6HC的核酸序列:1GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTQAACTAATGAAGCCTGGGGCTTC51AGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGQATACACATTCACTGACTACAACA101fGCACTOGGTOAAACAQAACCAAQGAAAGAGCCTAGAQTOGATAGOAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTOGTAGTQGCTACAACCAAAAOTTCAAAGOCAA201QGCCACATTGACTQTAQACAAOTCTTOCAGCACAGCCTACATGGAQCTCC251QCAGCCTGACATCTQAQGACTCTQCAOTCTATTACTOTGCAAGATTOOTC301TACGATGGCAGCTAOGAOOACTGGTACTTCGATGTCTOGGGOOCAGQGAC351CACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTQTCTATCCAC401TGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTQQGATGC451CTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAQTGACCTQGAACTCTGG501ATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACC551TCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC651CAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTG751CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAG801CAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGG851TGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTC邻rOKTrOtt5TCAQTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAA951GGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGA1001AAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACC1051ATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTG1101CATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTOTGGAGTGGCAGTGGA1151ATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACA認GATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTG1251OGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACA1301ACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SBQIDNO:154)包括信号肽的Ab-6HC的氨基酸序列1MGWSWTFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTD51YNMHWVKQNQGKSLBWIGEINPNSGGSGYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCARLVYDGSYEDWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSV151YPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQ201SDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCI251CTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVWDISKDDPEVQFSWFVDD301VEVHTAQTQPREEQFNSTFRSV犯LMMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAP351EEKTKKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMTTDFFPEDITVBW401QWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEG451LHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:155)包括信号肽编码序列的Ab-6HC的核酸序列1ATGGGATGGAQCTGGACCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGOAACTGCAGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTG101GGGCTTCAGTGAAGATGTCCTOCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGAC151TACAACATGCACTGGGTGAAACAGAACCAAGGAAAGAGCCTAGAGTGGAT201AGGAGAAATTAATCCTAACAGTGQTGGTAGTQGCTACAACCAAAAGTTCA251AAGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCTTCCAGCACAGCCTACATG301GAGCTCCQCAGCCTQACATCTGAGGACTCTGCAOTCTATTACTGTOCAAG351ATTGQTCTACOATQQCAGCTACGAGGACTGGTACTTCGATGTCTOOGGCG401CAGGQACCACQOTCACOGTCTcdrCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTC451TATCCACTQGOCCCTGQATCTQCTGCCCAAACTAACTCCATGGTOACCCT501GGGATGCCTOGTCAAGGGCTATTTOCCTQAGCCACrTGACAGTOACCrQGA551ACTCTOQATCCCTOTCCAGCGGTOTOCACACCTTCCCAGCTGTCCTQCAG601TCTOACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTG651OCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCA701AGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATA751TGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAA801GGATGTGCTCACCATTACTCTOACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAG851ACATCAGCAAGOATGATCCCGAQGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGAT<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>Ab-7抗体7(在本文中也称为Ab-7)的LC和HC序列如下Ab-7轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-7LC的^基酸序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-7LC的核酸序列:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>包括倌号肽的Ab-7LC的4Mt酸序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>包括信号肽编码序列的Ab-7LC的核酸序列1ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGG51TACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCT101CTCTGGGAGACAGAGTCACCATCTGTTGCAGGGCAAGTCAGGTCATTACC151AATTATTTATACTCGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTTTTAAACTCCT201GATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTOGAACAG301GAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTGATACGCTTCCGTACAC'然T省D3mOOT^5GGACCAAQCTGGAAATAAAACGGG6TGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501QTGGAAGATTGAT(K3CAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTC5ATCAGQACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG601TTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTCTCAAGAGCTTCAACACK3AATGAGT701OT(SEQIDNO:阔Ab-7重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-7HC的氨基酸序列1EVqLQQS鹏LMKPGASVKMSCKASGYTFTAVpiMWMKQNQGKSLEWI凍51脉Ni^"A欲W^Q疼^ATLTVDKSSRTAYJviEl^LTSEDSAVYYCARf^101YVGNY^)WYPDVjWGAGTTVTVS&4itrOT^nKRL4PGS^e^WS/imXGC说i2m71PKFrCFFWMSKW)/五F(gi^)tPFW)DFEWE4柳尸郎JSfiFVSTFNO:161)编碣成熟形式(倌号肽被去除)的Ab-7HC的核酸序列1GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTGGGGCTTC51AGTGAAGATGTCCTCCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGATGAAGCAGAACCAAGGAAAGAGCCTAGAATGGATAGGAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGCAGTTCAAAGGCAA201OGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCAGGACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGATTGQGC301TACGTTGGTAATTACOAQQACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGAC351GACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCT0TCTATCCAC邻lTGGCCCCTGGATCTGCTQCCCAAACTAACTCCATOOTQACCCTGGGATGC451CTOOTCAAGGOCTATTTCCCTGAGCCAOTQACAQTQACCTOOAACTCTGG501ATC(XTGTCCAQCGOTQTGCACACCTTCCCAGCTOTGCTQCAQTCTGACC551TCTACACTCTGAOCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC601说GACCGTCACCTOCAACGTTGCCCACCOGGCCAQCAGCACCAAGGTQGA651CAAGAAAATTGTGCCCAOGGATTOTGGTTGTAAGCCTTOCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTCTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAQOATGTG751CTCACCATTACTCrTGACTCCTAAGOTCACGTGTGTTQTGGTAGACATCAC5抑lCAAGGATGATOCCGAGGTCCAGTTCAGCTGOTTTOTAGATGATGTGGAGG851TQCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAQTTCAACAGCACTTTC<formula>formulaseeoriginaldocumentpage80</formula>Ab-8抗体8(在本文中也称为Ab-8)的LC和HC序列如下Ab-8轻链成熟形式(信号舦被去除)的Ab-8LC的氨基酸序列1DIQM^qfTSSLSASLGDRVSISC幽脚SjM]gWYQQKPDGTFKLL鹏51JfSRlgGVPSRFSGSGSGTDYSLTlVM^QE玩ATYFCl^銜Tp愤GG加J5TOjP/WCSJRViUYEC(SEQIDNO:165)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-8LC的核酸序列1GATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA51CAGGGTCTCCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAATTATTTAA101ACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTTTTAAACTCCTTATCTTCTAC151ACATCAAGATTACTCTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTC201TGGAACAGATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAAGAAGATTTTG251CCACTTACTTTTGCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACACTTTCGGAGGG301GGGACCAAACTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAT351CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGT401GCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATT451GATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGG551ACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:166)包括信号肽的Ab-8LC的氨基酸序列1MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVSISCRASQDIS51NYLNWYQQKPDGIPKLLIFYTSRLLSGVPSRFSGSGSGTOYSLTIYNLEQ101咖ATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEDCRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGA151SWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLT201LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSWVKSFNRNEC(SEQIDNQ:167)包括倌号舦编碼序列的LC的核酸序列1ATGATGTCCTCTOCTCAaTTCCTTQGTCTCCTGTTGCTCTQTTTTCAAGG51TACCAGATQTGATATCCAGATOACACAGACTACATCCTCCCTQTCTGCCT101CTCTQGQAGACAGGGTCTCCATCAGTTGCAGOGCAAGTCAAGACATTAGC151AATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAQATGGAACTTTTAAACTCCT201TATCTTCTACACATCAAGATTACTCTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAA301GAAGATTTTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACAC351TTTCGGAGGGGGGACCAAAC.TGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501GTGQAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGGACAOCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG601TTGACCAAGGACGAGTATOAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701GTTAG(SEQIDNO:168)Ab-8重链成熟形式(信号舦被去除)的HC的氨基酸序列1EVQLQQSGPELl^pCPGASVKMSCKASGYTFT^^||WVKQNQGKTLDWIG葛51!^NSG6A玩购炒jpKATLTVDKSSTTAYKMlSLTSEDSAVYYCAR)LG一101jYDDm^WYPDJ^WdA。TTVTVSS/imPiWFKW^PG5&i4j2而MWX—6fc術肪卿JLWMBT砂lfXiVGKKFS:CKWV&4/LKM尸/EXmffnTG!RHLiPfiFIT柳DGKF/KS8XJVF卿MWS^GiVrFTCSJ^朋GLBDVHHT孤Si5H5!PCar(SEQIDNO:!69)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-8HC的核酸序列1GAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTGGGGCTTC51AGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGGTGAAGCAGAACCAAGQAAAGACCCTAGACTGGATAGGAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA201GGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGATTQQGC301TACGATGATATCTACGACGACTGGTACTTCGATOTCTGGGGCGCAGGGAC351CACGGTCACCGTCTOCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCAC401TGGCCCCTGGATCTQCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGC451CTGGTCAAGGOCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGG501ATCCCTGTCCAGCGOTGTGCACACCTTCCCAGCTGTC^TGCAGTCTGACC551TCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC601GAGACCGTCACCTGCAACOTTGCCCACCCGGCCAQCAOCACCAAGGTQGA651CAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTOTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTG751CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTQTGGTAC3ACATCAG801CAAGGATOATCCCQAXK3TCCAGTTCAOCTOQTTTQTAGATGATGTGGAGG851TGCACACAGCTCAGACOCAACCCCQGGAOGAOCAGTTCAACAGCACITTC卯103CTCAQTCAOTQAACTTCCCATCATQCACCAGOACTOGCTCAATGGCAA951QQAGTTCAAATQCAGQQTCAAdAGTGCAGCTTTCOCTGCCCCCATOOAGA讓AAAdCATCTCCAAAACCAAAOOCAGACCOAAGGCTCCACAQQfTQTACACC1051ATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTG1101CATOATAACAOACTTCTTCCCTGAAGACATTACTOTOGAGTGQCAGTQGA1151ATGQQCAQCCAGCOQAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACA1201QATGGcrcrracttcatctacagcaagctcaatgtgcagaagagcaactg1251QGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTQTGTTACATOAC5GGCCTGCACA13(HACCACCATACTGAGAAGAQCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQID包括信号肽的Ab-8HC的氨基酸序列1MGWSWTFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTD51YNMHWVKQNQGKTLDWIGEINPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCARLGYDDIYDDWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSV151YPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQ邻rstJtyf!^s3vYVPSSTWPSEtvtcnvahpasstkvdkkivPRDCGCKPCI251CTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDD301VEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAP351IEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMTTDFFPEDITVEW柳Q丽GQPAENYKNTQKMDTOGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEG451LHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:171)包括信号肽编码序列的Ab-8HC的核酸序列1ATGGGATGGAGCTGGACCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTG101GGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGAC151TACAACATGCACTGGGTGAAGCAGAACCAAGGAAAGACCCTAGACTGGAT201AGGAGAAATTAATCCTAACAGTGGTGOTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCA251AGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATG301GAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAG351ATTGGGCTACGATGATATCTACGACGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCG401CAGGGACCACGOTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTC451TATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCT501GGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGA551ACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAG601TCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTG651GCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCA701AGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATA751TGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAA801GGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAG85iACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGAT901GTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAG951CACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCA1001ATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCC10S1ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGOCTCCACAGGT1101GTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTC1151TGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTOTGQAGTGG1201CAGTGGAATGQQCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCAT1251GGACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGA1301GCAACTGGGAGOCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGC1331CTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGl柳A(SEQlDNO:m〉Ab一9抗体9(在本文中也称为Ab-9)的LC和HC序列如下:Ab-9轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-9LC的氨基酸序列1DIQMTQITSSLSASLGDRVSISCS^,I一S诉Llsl群QQKPDGgKLLI蹄51,弥崎gGVPSRFSGSGSGTDYSLflYNt可MDFATYFC^妬玩fy弥G^JraP/PKS/WiyVEC(seqidno:173)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-9LC的核酸序列1gatatccagatgacacagattacatcctccctgtctgcctctctgggaga51cagggtctccatcagttgcagggcaagtcaagacattagcaattatttaa101attggtatcagcagaaaccagatggaacttttaaactccttatcttctac151acatcaagattattttcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtc201tggaacagattattctctcaccatttacaacctggagcaagaagattttg251ccacttacttttgccaacagggagatacgcttccgtacactttcggaggg301gggaccaag。tggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccat351cttcccaccatccagtgagcagttaacatctogaggtgcctcagtcgtgt401gcttcttgaacaacttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaagatt451gatggcagtgaacgacaaaatggcgtcctgaacagttggactgatcagga501cagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacgttgaccaagg551acgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggccactcacaagaca601tcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt(seqidno:174)包括信号肽的Ab-9LC的氨基酸序列1mmssaqflgliXlCFQGTRCdiqmtqitsslsaslgdrvsiscrasqdis51nylnwyqqkpdgtfkllifytsrlfsgvpsrfsgsgsgtdysltiynleq101edfatyfcqqgdtlpytfgggtkveikradaaptvsifppsseqltsgga151svvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstlt201ltkdeyerhnsytceathktstspivksfnknec(seqidno:175)包括信号肽编码序列的Ab-9LC的核酸序列1atgatgtcctctgctcagttccttggtctcctgttgctctgttttcaagg51taccagatgtgatatccagatgacacagattacatcctccctotctgcct101ctctgggagacagggtctccatcagttgcagggcaagtcaagacattagc151AATTATTTAAATTOGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACITTTAAACTCCT201TATCTTCTACACATCAAGATTATTTTCAGGAGTCCCATCAAQGTTCAGTG251GCAGTGGCrrcTOGAACAQATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAA301QAAGATTTTGCCACTTACTTTTOCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACAC351TTTCGQAGGGGGQACCAAGGTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTOCCACCATCCAGTGAQCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTQCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501GTGGAAGATTGATQGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGOACAOCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG601TTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTOAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701GT(SEQIDNO:r76)Ab-9重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-9HC的氨基酸序列1EVQLQQSGPELMKPGTSVKMSCKASGYTFT￡>Y^fliWVKQTQGKTLE可Gg51,NS節XtiO,超KATLTVDKSSTTAYMi汉sLTSEDSAVYYCAKp(101jYD&YbDWY^:DV喻GAGTTVTVSS/1K7X1RS1^TP"斤a7"7TGSWnrZ(J^2W/rC7VK4丑/MSS7YFDKX3EP及GSP7HKPCP户CR4iWLZ((/WK尸/FPPKT组及Fra4JtP/傲沙,恥iT五FiraOWVK4iiM舰及咖JOyTGiPPX4Pg柳z^幼GariaiT《虹i)^EKzwwsRiv卿csrikhegmdvhht7xs舰rp做(SEQIDNO:m)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-9HC的核酸序列1GAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTGGGACTTC51AGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGGTGAAGCAGACCCAAGGAAAGACCCTAGAGTGGATAGGAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA201GGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTGAGQACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAAATTOGGC301TACGATGATATCTACGACGACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGAC351CACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCAC401TGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGC451CTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGG501ATCCCTGTCCAGTGATGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCC551TCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCACCTGGCCCAQCCAGACC601ATCACCTGCAATOTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAA651AATTGAGCCCAGAGGGTCCCCAACACATAAACCCTGTCCTCCATGCCCAG701CTCCTAACCTCTTGGGTQGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATC751AAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACGTGTGTGGTGGT801GGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCATQTCAGCTGGTTCGTGAACA851ACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAAC卯lAGTACTATCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGAT951GAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGCCCTCCCAGCGC1001CCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGQQCCAGTAAGAGCTCCACAG1051GTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAGATOACTAAGAAACAGGTCAC1101TCTGACCTGCATQATCACAGACTItlATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGT1151GGACCAACAACGGGCAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTC1201CTGGACTCTGATCGTTCTTACTTCATOTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAA1251GAAGAACTGGGTGGAAAQAAATAQCTACTCCTGTTCAOTGGTCCACGAGG1301GTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGTAAA(SEQIDNO:n8)包括信号肽的Ab-9HC的氨基酸序列:1MGWSWTFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELMKPGTSVKMSCKASGYTFTD51YNMHWVKQTQGKTLEWIGEINPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCAKLGYDDIYDDWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTAPSV151YPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLT聰SGSLSSDVHTFPALLQ201SGLYTLSSSVTVTTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKK正PRGSPTHKPCPP251CPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCWVDVSEDDPDVHVSWF301VNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRWSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKAL351PAPffiRTISKPKGPVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMITDFMPEDIY401VEWTNNGQTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKN群ERNSYSCSVV451HEGLHNHHTTKSFSRTPGK(SEQIDNO:179)包括信号肽编码序列的Ab-9HC的核酸序列1ATGGGATGGAGCTGGACCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTGM说X(5fttAGlr—GAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGAC151TACAACATGCACTGGGTGAAGCAGACCCAAGGAAAGACCCTAGAGTGGAT201AGGAGAAATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCA251AGGGCAAGGCCACATTOACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATG301GAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAA351ATTGGGCTACGATGATATCTACGACGACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCG401CAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACAACAGCCCCATCOGTC451TATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCT501AGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTCACCTGGA551ACTCTGGATCCCTGTCCAGTGATGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAG601TCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCACCTGGCCCAG651CCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGG701ACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGTCCCCAACACATAAACCCTGTCCTCCA751TGCCCAGCTCCTAACCTCTTGOGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCC801AAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACGTGTG851TGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCATGTCAGCTGGTTC901GTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGA951TTACAACAGTACTATCCGGGTGGTCAGTQCCCTCCCCATCCAGCACCAGG腿ACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGCCCTC1051CCAGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGGGCCAGTAAGAGC1101TCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAAC1151AGGTCACTCTGACCTGCATGATCACAGACTTCATGCCTGAAGACATTTAC1201GTGGAGTGGACCAACAACGGGCAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGA1251ACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAG1301TGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTC1351CACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCC1401GGGTAAA(SEQIDNO:,AHO抗体10(在本文中也称为AtKlO)的LC和HC序列如下:Ab-lQ轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-lOLC的氨基酸序列1DiqMTQTTSSLSASLGDRVSISC涵胸1^IJIWYQQKPDGTFKLL顿5tSRLL彰VPSRFSGSGSGTDYSi^T^tEQED^TYFC圾Q^微ffFGGioi—6t^Leik/l4d^iPrra/f尸z;幼卿7iwa4sm:iz/v^FF^iK2)ivVjrFKKr2fl2!STO尸/WES/WjRiVEC(SEQIDNO:181)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-lOLC的核酸序列1GATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA51CAGGGTCTCCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAATTATTTAA101ACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTTTTAAACTCCTTATCTTCTAC151ACATCAAGATTACTCTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTC201TGGAACAGATTATTCTCTCACCATTTACAACCTGGAGCAAGAAGATTTTG251CCACTTACTTTTGCCAACAGGGAGATACGCTTCCGTACACTTTCGGAGGG301GGGACCAAACTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAT351CTTCCCACTATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGT401GCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTuaiuvjwvuiuAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGG551ACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:182)包括信号肽的Ab-10LC的氦基酸序列1MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCD華TQTTSSLSASLGDRVSISCRASQDIS51NYLNWYQQKPDGTFKLLIFYTSRLLSGVPSRFSGSGSGTOYSLTIYNLEQ101EDFATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPLS犯QLTSGGA151SVVCFLNNFYPKDMVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLT201LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNKNBC(SEQIDNO:183)包括信号肽编码序列的Ab-10LC的核酸序列1ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGG51TACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCT101CTCTGGGAGACAGGGTCTCCATCAGTTGCAGGGCAAOTCAAGAGATTAGC151AATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACITTTAAACTCCT201TATCTTCTACACATCAAGATTACTCTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAQATTATTCTCTCACCATTTACAACCTQQAGCAA301OAAGATTTTOCCACTTACTTTTOCCAACAGGGAGATACQCTTCCQTACAC351TTTCGQAGGGGQGACCAAACTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTOCACCAA401CTQTATCCATCTTCCCACTATCCAGTOAOCAGTTAACATCTGQAGGTQCC451TCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATOTCAA501GTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATOAGCAGCACCCTCACG601TTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCAC651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701GTTAG(SEQIDNO:184)Ab-lO重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-10HC的氨基酸序列1EV逸QQSGPEL^PGASVKMSCKASGYTFTgg^^WVKQNQGKTLEWIG妇51,!^G饭街—H^^KATLTVDKSSTTAY5^§SlTSEDSAVYYCAR^'—101咏DIYPD^Y^DVjWG入GTTVTVSSL4iOTPftSra"PGS4L4e77V5Mrat(^C￡mxrPiCTT(WWWSKODi^PBFSHfTTD"raraX4grgP肪五fiFAWrF卯/朋raexiwffeo紅Mjaf/rcrw5^/^WEffr/isoyGRW5^pefTT柳1>GSKF7ESKXAHKfiKS7V附y4(atftcspx服g!LfflVHEmEK9i5HSPGBr(seqidNO:185)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-10HC的核酸序列1GAGGTCCAACTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTGGGGCTTC51AGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATATACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGGTGAAGCAGAACCAAGGAAAGACCCTAGAATGGATAGGAGAA151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTGCTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA201OGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGATTGGGC301TACGATGATATCTACGACGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGAC351CACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCAC401TGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGC451CTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGG501ATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACC551TCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC601GAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGA651CAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATOTG751CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAG801CAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATOTGGAGG851TGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTC901CGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAA95iGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGA薩AAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACC1051ATTCCACCTCGCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTG1101GATQATAACAGACTTCTrcCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGQCAGTGGA1151ATGOGCAOCCAGCGQAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATQGACACAl加lOATQGCTCTTACTTCATCTACAGCAAQCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTG1251OGAQQCAOGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATOAGGGCCTOCACA1301ACCACCATACTCJAGAAGAGCCTCTCCCACTCTOCTGGTAAATQA(SEQIDNO:186)包括信号肽的Ab-10HC的氨基酸序列1MGWSWTFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTD51YNMHWVKQNQGKTLEWIGEINPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCARLGYDDIYDDWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSV151YPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQ201SDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCI251CTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDD301V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GCCAAGQATAAAGTCAGTCTGACCTQCATGAT1101AACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTQOAATQGGC1151AGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGC1201TCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAQGC1251AGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACC1301ATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SBQIDNO:194)包括信号肽的Ab-11HC的^基酸序列1MKCS而FFLMAVVTGVNSEVQLQQSGADLVQPGASVKVSCTASGFDIKD51YYffl画KQRPDQGLEWIGRVDPDNGETEFAPKFPGKATFTTDTSSNTAYL151LAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSD201LYTLSSSVTVPSSTV/PSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICT251VPEVSSWIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDDVE301VHTAQTQPREEQFNSTFRSVSBLPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIE351KTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQW451NHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:195)包括信号肽编码序列的Ab-llHC的核酸序列1ATGAAATGCAGCTGGGTCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGT51CAATTCAGAAGTTCAGCTGCAACAGTCTGGGGCAGACCTTGTGCAGCCAG101GGGCCTCAGTCAAGGTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCGACATTAAGGAC151TACTATATACACTGGATGAAACAGAG(3CCTGACCAGGGCCTGGAGTGGA丁201TGGAAGGGTTGATCCTGACAATGGTGAGACTGAATTTGCCCCGAAGTTCC301CAACTCAGAGGCCTGACATCTGAGGACACTGCCATCTATTACTGTGGGAG351AGAAGACTACGATGGTACCTACACCTGGTTTCCTTATTGGGGCCAAGGGA401CTCTGOTCACTOTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCA451CTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATG501CCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGK3AACTCTG551GATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGAC柳CTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAG651CGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGG701ACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACA751GTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATOT801QCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTOTTGTGGTAGACATCA851GCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTK3TAGATQATGTGGAG901GTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTT951CCGCTCAOTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATOGCA1001JM3GAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAG105jfXAAiGXATcrcCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACAC110!CATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGOCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCT1151GCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAA(3ACATTACTGTQGAGTOGCAGTGG1201AATOQGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACAC1251AGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATOTOCAGAAGAGCAACT1301GGG^QGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTOTOTTACATOAOQGCCTQCAC1351AAQ^ACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTQOTAAATOA(SEQIDAb-12抗体12(在本文中也称为Ab-12)的LC和HC序列如下Ab-12轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-12LC的氨基酸序列iDLQMTgrrsslsaslgdrvtisq^&跑—l^NVL^WYQQKPDGTVK^LI赠51傲LQS]GVPSRFSGSGSGTNYSLTI流的DDAXtYFC^:CJE)1^標FG^101GT红EIK/L4D^4打ra/FJPi^犯gi:iSGG/45TFCPXAWFYi^J^^Kr咖户/KKS/W/UV五C(SEQIDNO:197)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-12LC的核酸序列1GATCTCCAGATGACACAGACTACTTCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGA51CAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAA101ACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAGCTCCTGATCTTCTAC151ACATCAACATTACAGTCAGGAGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTC201TGGAACAAATTATTCTCTCACCATTACCAACCTGGAGCAAGATGATGCTG251CCACTTACTTTTGCCAACAGGQTGATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGG301GGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAT351CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGT401GCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATT451GATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGA501CAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGG551ACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACA601TCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:198)包括信号肽的LC的氨基酸序列1MMSSAQFLGLLLLCFQGSRCDLQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIS51NYLNWYQQKPDGTVKLLIFYTSTLQSGVPSRFSGSGSGTNYSLTITNLEQ101DDAATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGA151SWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLT201LTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNKNEC(SBQIDNO:199)包括信号肽编码序列的Ab-12LC的核酸序列:51101151AATTATXTAA歡GGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAGCTCCT201GATCTTCTACACATCAACATTACAGTCAGGAGTCCCATCGAGGTTCAGTG251GCAGTGGGTCTGGAACAAATTATTCTCTCACCATTACCAACCTGGAGCAA301GATGATGCTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTGATACGCTTCCGTACAC351GTTCGGAGGGOGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAA401CTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCC451TCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAA501GTGGAAGATTQATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGA551CTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACG651TCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGT701gttag(sbqIDno:200)Ab-12重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-12HC的氨基酸序列1EVQ^QQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTgi^MWMKQNQGKSLEWIGi51秘承0衙侨補,短{^孔TVDKSSSTAYK^IJiSLYSEDSAVYYCARp:ioi^j^e6wbd*5agttvtvss/impra)^"PGyii44Q鹏MKrf(cimx:rpfir盯ciwaKKW)/wg/swiKDdiKBraT4grgwuee^jRvstfjwAyraex/wiycxw《A4侧w孤rasimrGRP2LCPgnrno:201)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-12HC的核酸序列:1gaggtccagttgcaacagtctggacctgaactaatgaagcctggggcttc51AGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACA101TGCACTGGATGAAGCAGAACCAAGGAAAGAGCCTAGAGTGGATAGGAGAG151ATTAATCCTAACAGTGGTGGTTCTGGTTACAACCAGAAGTTCAAAGGCAA201GGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCC251GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTOTGCAAGATTGGGC301TACTATGGTAACTACGAGGACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGAC351CACGGTCACCGTCTCCTCTGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCAC401TGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGC451CTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTOACAGTGACCTGGAACTCTGG501ATCCCTCTCCAGCGOTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACC551TCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGC601GAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGA651CAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAG701TCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTG751CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTOTGTTGTGGTAGACATCAG咖CAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATOTGGAGG851TGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGQGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTC卯lCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAA951GGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGA1001AAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACC1051ATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTG1101C/lTGATAXCA'GACTTCTTCCCTGMGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGA1201GATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTG1251GGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCA^A1301NO:202)包括信号肽的Ab-12HC的氨基酸序列1MGWSWTFLFLLSGTSGVLSEVQLQQSGPELMKPGASVKMSCKASGYTFTD51YNMHWMKQNQGKSLEWIGEINPNSGGSGYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYM101ELRSLTSEDSAVYYCARLGYYGNYEDWYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSV151YPLAPGSAAQ，MVTLGCLVKGYFPEPVTVT丽SGSLSSGVHTFPAVLQ201SDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCI251CTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWVDD301VEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCR稱AAFPAP351ffiKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPED1TVEW401QWNGQPAENYKNTQPIMDTOGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEG451LHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:203)包括信号肽编码序列的Ab-12HC的核酸序列:1ATGGGATGGAGCTGGACCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTTCGGGTGT51CCTCTCTGAGGTCCAGTTGCAACAGTCTGGACCTGAACTAATGAAGCCTG201AGGAGAGATTAATCCTAACAGTGGTGGTTCTGGTTACAACCAGAAGTTCA351ATTGGGCTACTATGGTAACTACGAGGACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCG401CAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCTGCCAAAACGACACCCCCATCTGTC451TATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCT501GGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGA551ACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAG601TCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTG651GCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCA701AGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATA751TGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAA801GGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAG851ACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGAT卯lGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAG951CACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCA1001ATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCC1051ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGT1101GTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAQTCAGTC1151TGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGG1201CAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCAT1251GGACACAGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGA1301GCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGC1351CTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATG1401A(SEQEDNO:204)Ab—13抗体13(在本文中也称为Ab-13)的LC和HC序列如下:Ab-13轻链成熟形式(信号肽被去除)的LC的氨基酸序列1^LipSPAIMSASPGEKVTMTCplA纽SVfp^I^WYQQKPgSSPKLWIY51§ppC4§gvparfsgsgsgtsysltissveAMdaAtYY逸g^^p,g101d5fkf!JKR4"A4PTOIFy柳卿mGz4SFFCFXMVFEP丽i^BOT7Wm>iTSFiVKiVEC(SEQIDNO:205)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-13LC的核酸序列:1cagattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggqga101tgaactggtaccagcagaagccaggatcttcccccaaactctggatttat151agcacatccaacctggcttcaggagtcccagctcgcttcagtggcagtgg201gtctgggacctcttactctctcacaatcagcagtgtggaggctgaggatg251ctgccacttattactgccagcagtatgattttttcccatcgacgttcggt301ggaggcaccaagctggaaatcaagcggqctgatgctgcaccaactgtatc351catcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcg401tgtccttcttgaacaacttctaccccaaagacatcaatgtcaagtggaag501ggacagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacgttgacca551aggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggccactcacaag柳acatcaacttcacccatcgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt(seqidno:206)1mdsqvqifsfixisalvkmsrgqivltqsfaimsaspgekvtmtcrasss51vtssylnwyqqkpgsspklwiystsnlasgwakfsgsgsgtsysltiss101veaedaatyycqqydffpstfgggtkleikradaaptvsifppsseqlts151ggaswcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmss201tltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec(seqidno:207)包括信号肽的Ab-13LC的氨基酸序列:包括信号肽编码序列的Ab-13LC的核酸序列:101CTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGGGCCAGCTCAAGT151GTAACTTCCAGTTACTTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCTTCCCC201CAAACTCTGGATTTATAGCACATCCAACCTGGCTTCAGGAGTCCCAGCTC251GCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGT301GTGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTATGATTTTTT351CCCATCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAGCGGGCTGATG401CTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCT451GGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACAT501CAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGA551AeAG预G"AeTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGC601ACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTG651TGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACA701GGAATGAGTGT(SEQIDNO:208)Ab-13重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-13HC的氨基酸序列1EVQ^QQgGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTbY^ii群KQSHGESLE窗g511NFYMt)5tiVi^fi^KATLTVDKSSNTAYy:,SLTSEDSAVYYCA她T旭fTGVK4朋^SrJTWJHDTT朋OCKPCrC，五顺附FPWCMDPXr■25/肌2T!fiTTCrmWSKDZ)jP五P0FSFPFraDK五raiMgreP及jEEgP5VSimj柳5Yf7TSIO:iVFgX55VWE/1GWTFTCSFL朋GLffiVHim5KSi5及iSPG8T(SEQIDNO:209)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-13HC的核酸序列:1GAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTC51AOTGAAGATGTCCTGTAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACTACA101TGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAGAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGAT151ATTAATCCTTACAACGATGATACTACCTACAACCACAAGTTCAAGGGCAA201GGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAACACAGCCTACATGCAGCTCA251ACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGAGACG301GCCGTTATTACTACGAATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGT351CACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCC柳CTGGATCTGCTQCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTC451AAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCT501GTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACA551CTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACC601GTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGOCCAGCAGCACCAAGGTGQACAAGAA651AATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTOTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAG701AAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACC751ATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGQA801TGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACA851CAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCA卯lGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTT951CAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCA薩TCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTAC八CCATTCCA1051CCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGAT1101AACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGC1151AGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGC1201TCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGC1251AGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACC1301ATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA(SEQIDNO:210)包括信号肽的Ab-13HC的氨基酸序列1MG丽窗LFLLSOTAGVYSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTD51YYMNWVKQSHGESLEWIGDINPYNDDTTYNHKFKGKATLTVDKSSNTAYM101QLNSLTSEDSAVYYCARETAVITTNAMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYP151LAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSD201LYTLSSSVTVPSSTWP犯TVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCX3CKPC1CT251VPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDDVE301VHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIE351KTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQW401NGQPAENYKNTQPIMDTOGSYFTYSKLNVQKS而EAG丽TCSVLHEGLH451NHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:211)包括信号肽编码序列的Ab-13HC的核酸序列1ATGGGATGGAACTGGATCTTTCTCTTCCTCTTGTCAGGAACTGCAGGTGT51CTACTCTGAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTG151TACTACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAGAGAGCCTTGAGTGGAT201TGGAGATATTAATCCTTACAACGATGATACTACCTACAACCACAAGTTCA251AGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAACACAGCCTACATG301CAGCTCAACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAG351AGAGACGGCCGTTATTACTACGAATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAA401CCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCA451CTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATG501CCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTG551GATCCCTCTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGAC601CTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAG651CGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGG701ACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACA751GTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGT801GCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCA851GCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAG901GTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTT931CCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCA腕AGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAG1051AAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACAC1101CATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCT1"1GCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGG1201AATGCX3CAGCCAGCOGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACAC1251AGATGGCTCTTACTTCATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACT1301GGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCAC1351AACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA(SEQIDNO:212)Ab-13被人源化以产生Ab-14。抗体14(在本文中也称为Ab-l4)的LC和HC序列如下Ab-14轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-14LC的氨基酸序列1DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC^^^SVf;p^^WYQQ^^GK/^I^LIY51STS饥站GVPSRFSGSGSGTEFll丽r6》E玩XTYYC^ylD顿饰G75/)^)A^丄砂G/VWj2ESfT五fittar加:rKSLSSTL2X5K4Dy^KMraC五PTfle加GLSSPraS^7/RGEC(SEQIDNO:213)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-14LC的核酸序列1GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCCAGCTTCCTTTCCGCATCCGTTGGTGA51CCGAGTAACAATCACATGCCQCGCCTCATCTTCAGTTACATCTTCTTATC101TTAATTQGTATCAACAAAAACCAGGAAAAGCACCTAAACTTCTTATATAC151TCTACATCTAATCTCGCATCAGGAGTTCCCTCTCGATTTTCAGGATCTGG201ATCAGGCACAGAATTTACACTTACTATATCATCACTCCAACCAGAAGACT301GGAGGTACAAAAGTAGAAATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTT401TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAG451GTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCA501GGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA551AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAG601GGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQIDNO:214)包括信号肽的Ab-14LC的氨基酸序列:1MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARCDIQLTQSPSFLSASVGDRVTTTCRASSS51VTSSYLNWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS101LQPEDFATYYCQQYDFFPSTFGGOTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKS151GTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS卿VTEQDSKDSTYSLSS201TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:215〉包括信号肽编码序列的Ab-14LC的核酸序列:1ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCT51CCCAGGTGCCAGATGTGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCCAGCTTCCTTT101CCGCATCCGTTGGTGACCGAGTAACAATCACATGCCGCGCCTCATCTTCA151GTTACATCTTCTTATCTTAATTGGTATCAACAAAAACCAGGAAAAGCACC201TAAACTTCTTATATACTCTACATCTAATCTCGCATCAGGAGTTCCCTCTC251GATTTTCAGGATCTGGATCAGGCACAGAATTTACACTTACTATATCATCA301CTCCAACCAGAAGACTTCGCCACTTATTACTGCCAACAATACGATTTTTT35iTCCAAGCACATTCGGAGGAGGTACAAAAGTAGAAATCAAGCGTACGGTGG401CTGCACCATCTGTCITCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT451GGAACTGCCTCTGTTOTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC501CAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGG551AGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGC601ACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTG65iCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACA701GGGGAGAGTGT(SEQIDNO:216)Ab-14重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-14HC的氨基酸序列1EVQL，GAEVK^^SVKVSCKASGYTFT^yR^WVRQAPGQRLEWMGg51胁^E)fiiTtYl^FKSRVTITRDTSASTAY1V^E^LRSEDTAVYYCARfe力一101iAVTTTNAMDjYA^3QGTTVTVSS/4OTG/WPT^"尸GaR咖孤L4/4L(ciP/5J^DI"/^Pm^lTO(/lLra(FHTF1MI^SSGi肌&SWIT柳iVF(7rg25/丄MBXiy五PTCmW舰"P五l^3NWm)GWraA^BTMC^2TF5W及PF51砂fFZMZKETBTOrraVBTGti^舰jmSKTiTC7giREPgKIT35JjLP/W肪五JWTffiygraLrCLKBT(FEP幼Z4M附SWGg户五層yK7TWWLfty柳"GSFFLK紅7TmSRFFgeGiV,CSWJfHEALH7VHTr卿Z^SPd(SEQIDNO:217)不含羧基末端赖氨酸的成熟形式(信号肽被去除)的Ab-14HC的氨基酸序列1BVQ;VqSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTlTtXi^WVRQAPGQRLE丽G暨51p^Spii^^pK级VTITRDTSASTAYN&I^s￡rSEDTAVYYCARfeTi101,JXN^[p;^WdQdTTVTVSS/45TZGZW"L/lPGSasra五iSrA4rG^1^JFraH7TW砂WXWGKBHTC2TraW2T(i:A4舰JTr/SJmTCfiPiLEPgrar柳JJGSFFLESKLTKMS及fFge(iVT7SGSFMHEv4i:j5r7VEnTfiKSiHSLSPG(SEQIDNO:393)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-14HC的核酸序列1GAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTCAAGAAACCTGGAGCAAG101TGAATTGGGTACGACAAGCCCCTGGACAAAGACTTGAATGGATGGGAGAC151ATTAACCCTTATAACGACGACACTACATACAATCATAAATTTAAAGGAAG201AGTTACAATTACAAGAGATACATCCGCATCAACCGCCTATATGGAACTTT251CCTCATTGAGATCTGAAGACACTGCTGTTTATTACTGTGCAAGAGAAACT301GCCGTTATTACTACTAACGCTATGGATTACTGGGGTCAAGGAACCACTGT351TACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGC401CCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTC451AAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCT501GACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT551ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAQCAACTTCGGCACCCAG601ACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAA651GACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCAC701CTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC751CTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAG801CCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTQGACGGCGTGGAGG851TGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTC卯1CGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAA951GGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGA1001AAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACC1051CTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTG1101CCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA1151ATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCC1201GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTG1251GCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA1301ACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(SEQIDNO:218)包括信号肽的Ab-14HC的氨基酸序列IMDWTWRILFLVAAATGAHSEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTD51YYMNWVRQAPGQRLE窗GDINPYNDDTTYNHKFKGRVTITRDTSASTAYM101ELSSLRSEDTAVYYCARETAVTTTNAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP151LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS201GLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP251APPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDG301VEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKYSNKGLPAP351孤TISKTKGQPREP^VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW柳ESNOQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNWSCSVMHEA451LHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:219)包括信号肽编码序列的Ab-14HC的核酸序列1ATGGACTGGACCTGGAGGATCCTCTTCTTGGTGGCAGCAGCCACAGGAGC51CCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCQCCGAGGTCAAGAAACCTG101GAGCAAGCGTAAAGGTTAGTTGCAAAGCATCTGGATACACATTTACCGAC151TACTACATGAATTGGGTACGACAAGCCCCTGGACAAAGACTTGAATOGAT201GGGAGACATTAACCCTTATAACGACGACACTACATACAATCATAAATTTA251AAGGAAGAGTTACAATTACAAGAGATACATCCGCATCAACCGCCTATATG301GAACTTTCCTCATTGAGATCTGAAGACACTGCTGTTTATTACTGTGCAAG351AGAAACTGCCGTTATTACTACTAACGCTATGGATTACTGGGGTCAAGGAA401CCACTGTTACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCC451CTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTG501CCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAG551GCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCA601GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGG651CACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGG701TGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTdTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCA751GCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAA801GGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGG851ACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGC卯lGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAG951CACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGA1001ACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCC1051ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGT1101GTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCC1151TGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGG1201GAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCT1251GGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA1301GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT1351CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(SEQID紙幼)Ab-14重链可变区中的CDR序列是CDR-H1:DYYMN(SEQIDNO:296)CDR-H2:DINPYNDDTTYNHKFKG(SBQIDNO:297)CDR-H3:ETAVITTNAMD(SEQIDNO:298)Ab-l4轻链可变区的CDR序列是CDR-L1:RASSSVTSSYLN(SEQIDNO:284)CDR-L2:STSNLAS(SEQIDNO:285)CDR-L3:QQYDFFPST(SEQIDNO:286)Ab-14可变结构域Ab-14轻链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC^S"^W^^WYQqKPGi^PKLLIY51敬J^如VPSRFSGSGSGTEFTtilSSL^P^DXTYYCJQ豆微辦处G101GGTKV^IK(SEQIDNO:38(J)Ab-14轻链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)51CCGAGTAACAATCACATGCCGCGCCTCATCTTCAGTTACATCTTCTTATC101TTAATTGGTATCAACAAAAACCAGGAAAAGCACCTAAACTTCTTATATAC151TCTACATCTAATCTCGCATCAGGAGTTCCCTCTCGATTTTCAGGATCTGG201ATCAGGCACAGAATTTACACTTACTATATCATCACTCCAACCAGAAGACT251TCGCCACTTATTACTGCCAACAATACGATTTTTTTCCAAGCACATTCGGA301GGAGGTACAAAAGTAGAAATCAAG(SEQIDNO:381)Ab-14重链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1EV股QSGAEyKKPq_ASVKVSCKASGYTFT|^iiS(WVRQAPGQRLEWMGg51p^StJ6TTt1^FlSSRVTITRDTSASTAYM^LSSLRSEDTAVYYCA赠101AyiTfN^MbjY^GQbiTVTVSS(SEQIDNO:382)Ab-14重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)1gaggtgcagctggtgcagagcggcgccgagGTCAAGAaACctggagcaag51CGTAAAGGTTAGTTGCAAAGCATCTGGATACACATTTACCGACTACTACA101TGAATTGGGTACGACAAGCCCCTGGACAAAGACTTGAATGGATGGGAGAC201AGTTACAATTACAAGAGATACATCCGCATCAACCGCCTATATGGAACTTT251CCTCATTGAGATCTGAAGACACTGCTGTTTATTACTGTGCAAGAGAAACT301GCCGTTA竹ACTACTAACGCTATGGATTACTGGGGTCAAGGAACCACTGT351TACCGTCTCTAGT(SEQIDNO:383)Ab-3被人源化以产生Ab-15。Ab—15抗体15(在本文中也称为Ab-15)的LC和HC序列如下:Ab-15轻链:成熟形式(信号肽被去除)的Ab-15LC的氨基酸序列1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSV^tlS^HLSiWFQQKPGKAPKSLIY51饰NJASjGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYq^WSSYPl^FG2WGLSaPFTKJ尸iVSG丑C(SEQIDNO:22"编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-15LC的核酸序列:1GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCTCAGCATCCGTAGGCGA51TAGAGTTACAATAACATGCAGCGTATCATCAACTATATCATCAAATCATC101TTCATTGGTTCCAACAGAAACCCGGCAAAGCACCTAAATCACTTATATAC151GGCACATCAAATCTCGCATCAGGCGTTCCTTCAAGATTTTCAGGCTCTGG201CTCAGGCACCGACTTTACTCTTACAATATCCTCCCTCCAACCCGAAGACT251TCGCAACCTATTACTGTCAACAATGGTCCTCATATCCACTCACATTTGGC301GGCGGCACAAAAGTAGAAATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTT351CATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTG401TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAG45iGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCA501GGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA551AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAG601GGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQEDNO:222)包括信号肽的Ab-15LC的氨基酸序列1MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSST51ISSNHLHWFQQKPGKAPKSLIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS101LQKEDFATYYCQQWSSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSWIFPPSDEQLKS151GTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS201TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:223)包括信号肽编码序列的Ab-15LC的核酸序列:1ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCT51CCGAGGTGCCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCT101CAGCATCCGTAGGCGATAGAGTTACAATAACATGCAGCGTATCATCAACT131ATATCATCAAATCATCTTCATTGGTTCCAACAGAAACCCGGCAAAGCACC201TAAATCACTTATATACGGCACATCAAATCTCGCATCAGGCGTTCCTTCAA251GATTTTCAGGCTCTGGCTCAGGCACCGACTTTACTCTTACAATATCCTCC301CTCCAACCCGAAGACTTCGCAACCTATTACTGTCAACAATGGTCCTCATA351TCCACTCACATTTGGCGGCGGCACAAAAGTAGAAATTAAACGTACGGTGG401CTGCACCATCTOTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT451GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC501CAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGG551AGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGC601ACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTG651CGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACA701GGGGAGAGTGT(SEQIDNO:224)Ab-15重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-15HC的氨基酸序列。1EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASDFNIKB輒jfWYRQAPGQGLEWIGS^51jf蹄節il^扱通Q取VTMTTDTSTSTAYMELiSLRSDDTAVYYCAR^101RYF#)gTS^^V^b\^W<3RGTLVTVSS/4SriTG/WrFPL/lPGS丑Sr犯5X4il^:fra^F/^卞)^SWV5G4￡7^<1^27^FL卿GL孤肪FmTSB2V柳W5TF及7WffgZ)WXiVC/TBKi:Cfi:raVJ:<￡iAWEJOTS/mTGg尸JiEP柳肌D幼GSFFiyfixirrajcy及^ggG/vPTS"csra/HE4ijy7VHTrgxsx^w^PG"JiT(SEQIDNO:225)不含羧基末端赖氦酸的成熟形式(信号肽被去除)的Ab-15HC的氨基酸序列1BVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASDFNIKS&械fiWVRQAPGQGLEWI承51fl3PE丽f)il^6丽^KVTMTTDTSTSTAY^Ei^SLRSDDTAVYYCARpA！101E)VFriD^丝W'YFI]^GRGTLVTVSS/45TfiTG/WKFP"PCyJ5加5T^i:mGCXWO)伊户iE1JPF7TSW犯/4LrS(raT/^KL0SK7i;孤S^n^TWSSTV加FGrgnrcw服jawivnrw)joterjtccwscppcpxp刑gw肌/w/t柳肌jaSDGSFFXKS/iX7TRKSRW^gCKSCSFMHE4iJKV肌rgiESLSLS"P(45/(SEQIDNO:394)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-15HC的核酸序列'.1GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTC51AGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGACTTCAACATTAAAGACTTCTATC101TACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATTGGAAGG151ATTGATCCTGAGAATGGTGATACTTTATATGACCCGAAGTTCCAGGACAA201GGTCACCATGACCACAGACACGTCCACCAGCACAGCCTACATGGAGCTGA251GGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGCG301GATTATTTCCACGATOGTACCTCCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCG351TGGCACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCT401TCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTG451QGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAA501CTCAGGCGCTCTOACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGT551cctcaogactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaac601TTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACAC651CAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGT701GCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCITCCCCCCAAAA751CCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGT801GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGG851ACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTC卯lAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTG951GCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAG1051CAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGT1101CAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGG1151AGTGGGAGAGCAATGGQCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCC1201ATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGA1251CAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG1301AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT1351AAA(SEQIDNO:226)包括信号肽的Ab-15HC的氨基酸序列1MDWTWRILFLVAAATGAHSEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASDFNIKD51FYLHWVRQAPGQGLEWIGRIDPENGDTLYDPKFQDKVTMTTDTSTSTAYM101ELRSLRSDDTAVYYCAREADYFHDGTSYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGP151SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSOALTSGVHTFPAV201LQSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC251PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNW301YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKG351LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI401AVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV451MHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SBQIDNO:227)包括信号肽编码序列的Ab-15HC的核酸序列IATGGACTGGACCTGGAGGATCCTCTTCTTGGTGGCAGCAGCCACAGGAGC51CCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTG101GGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGACTTCAACATTAAAGAC201TGGAAGGATTGATCCTGAGAATGGTGATACTTTATATGACCCGAAGTTCC301GAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAG351AGAGGCGGAtTATTTCCACGATGGTACCTCCTACTGGTACTTCGATGTCT401GGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCA451TCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGC501GGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGT551CGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTC601CTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTC651CAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCA701GCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGC751CCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCC801CCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGOTCACGT851GCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGG卯lTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGA951GCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACC1001AGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGC1051CTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGQCAGCCCCG1101AGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGA1151ACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATC1201GCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCAC1251ACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCA1301CCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTG1351ATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTC1401TCCGGGTAAA(SEQIDNO:228)Ab-15重链可变区中的CDR序列是CDR-H1:DFYLH(SEQIDNO:290)CDR-H2:RIDPENGDTLYDPKFQD(SEQIDNO:291)CDR-H3:EADYFHDGTSYWYFDV(SEQIDNO:292)Ab-15轻链可变区的CDR序列是CDR-L1:SVSSTISSNHLH(SEQIDNO:278)CDR-L2:GTSNLAS(SEQIDNO:279)CDR-L3:QQWSSYPLT(SEQIDNO:280)Ab-15可变结构域Ab-15轻链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1DIQMTQSPSSLSASVGDRVTrrC'一丽g:MJffijWQQKPGKAPKS^Y51G瑕t^GWSRFSGSGSGTDFTLTIS》LQP6DFATYYC,極徵;]0FG10rdcfTkV6iK(SEQIDNO:384)Ab-15轻链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)1GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTCTCAGCATCCGTAGGCGA101TTCATTGGTTC亡AACAGAAACCCGGCAAAGCACCTAAATCACTTATATAC151GGCACATCAAATCTCGCATCAGGCGTTCCTTCAAGATTTTCAGGCTCTGG201CTCAGGCACCGACTTTACTCTTACAATATCCTCCCTCCAACCCGAAGACT251TCGCAACCTATTACTCTCAACAATGGTCCTCATATCCACTCACATTTGGC301GGCGGCACAAAAGTAGAAATTAAA(SEQIDNO:385)Ab-15重链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1EVQLVQSG^EVKKPpASVKVSCKASDFNIK陋I^WVRQAPGQGLEWI,51p)丽。DltCi船(^)KVTMTTDTSTSTAY疏LkSLRSDDTAVYYCAR^A101fiYFHDGTSYWYFDV^GROTLVTVSS(SBQBDNO:386)Ab-15重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)1GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTC51AGTGAAGGTCTCCTOCAAGGCTTCTGACTTCAACATTAAAGACTTCTATC101151201251GGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGCG301GATTATTTCCACGATGGTACCTCCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCG351TGGCACCCTGGTCACCGTCTCTAGT(SEQEDNO:387)Ab-11被人源化以产生Ab-16,Ab-16抗体16(在本文中也称为Ab-16)的LC和HC序列如下:Ab-16轻链:成熟形式(信号肽被去除)的Ab-16LC的氨基酸序列1DIQLTgSPSFLSASVGDRVTITC^g^l^SiHWYQQK^K^^XI，Y厶T101充ViiKRrK4arskfirppsffcluvnfkpJtaisygyw>iNMLasGTWgf:SFiEgftSKD;yirsi:&!ixri:se4DFExhitfE4CEprflect5SPn^iW及GEC(SBQIDNO:229)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-16LC的核酸序列1GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGA31CAGAGTCACCATCACTTGCAGGQCCAGCTCAAGTATAAGTTACATACACT101GGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCCACA151TCCAACCTGGCTTCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGG201GACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAA251CTTATTACTGTCAGCAGTGGAGTAGTGACCCACTCACGTTCGGCGGAGGG301ACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTT351CCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCC柳TGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGAT451AACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAQGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAG501CAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTOAGCAAAGCAG551ACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTG601AGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQIDNO:230)包括信号肽的Ab-16LC的氨基酸序列1MDMRVPAQIXGLLLLWLPGARCDIQLTQSPSFLSASVGDRVTTTCRASSS51ISYIHWYQQKPGKAPKLLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTEFTL/nsSLQ101PEDFATYYCQQWSSDPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSWIFPPSDEQLKSGT151ASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST^SLSSTL201TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:231)包括信号肽编码序列的Ab-16LC的核酸序列1ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCT101CTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGGGCCAGCTCAAGT201CCTGATCTATGCCACATCCAACCTGGCTTCTGGGGTCCCATCAAGGTTCA251GCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAG301CCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTCTCAGCAGTGGAGTAGTGACCCACT351CACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCAC401CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACT451GCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGT551TCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTG601ACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT651CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG701AGTGT(SEQIDNO:232)Ab-16重链:成熟形式(信号肽被去除)的Ab-16HC的氨基酸序列101賴^TYJWPyWGQGTLVTVSS^rirG/>1SKF/>"iGSR<ST1SJES2^4iLGCXP加nravra孤iPswrsTZ)im^纽a:FEcypcjr^irpmgps^Fa^ftRKP/o)r55/LJPimEEftfTJTiVerat7rXWTGFiy幼"WWPES/VG0P1SAQVHHTRPAttftS1柳卿咖,(W卿GSW朋JIflMnT卿LSLSJWSEQIDNO:233)不含羧基末端赖氨酸的成熟形式(信号肽被去除)的Ab-16HC的氨基酸序列1EVQLygi^pVKKPGASVKVSCKASGFDIK^Vl^WVRQ八PGQGLEWI承51!Vt)P涼GETEF—APKP称VTMTTDTSISTAYMHLSRLRSDDTAVYYCAI^'101!5^IXIFFPYi^JQ^TLVTVSS^OTK7/WW^"尸GSaS7SJ5S7^LiLCa^2JriTCWDi3KP<HVTiTWWrrKB孤CC)^CP尸C/^JW^GPSK凡卿JCRK2)rWZAflSX2y五FTCTWDKSffiED/￡^gjRNWm>G^raV^JmJTiP肪五fii2ViSrF術及PTSKLITKff妙机WGKBFBTC8TraMTGiA4PMKTKXTiTGQPitBPgm1柳JK^jPFXys虹7"FDjK5R伊egG;VFFiyCSW朋y4U3ABTTefiSLSLSPG(SEQIDNO:395)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-16HC的核酸序列1GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTC51AGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATTCGACATTAAGGACTACTATA151GTTGATCCTGACAATGGTGAGACTGAATTTGCCCCGAAGTTCCCGGGCAA201GGTCACCATGACCACAGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGA251GCAGGCTGAGATGTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTOCGAQAGAAQAC301TACGATGGTACCTACACCTGGTTTCCTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGT351401551ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAG651GACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCAC701CTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC祝《TGATOATGTGGGGGACCGCTGAGOTCACG—TOCGTGmmTGGACSiaAQ801CCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG851TGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTC901CGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAA1051CTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTG1101CCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA1201GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTG12511301NO:234)包括信号肽的Ab-16HC的氨基酸序列1MDWTWRBLFLVAAATGAHSEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFDKD51YYIHWVRQAPGQGLEWIGRVDPDNGETEFAPKFPGKVTMTTDTSISTAYM101ELSRLRSDDTAVYYCAREDYDGTYTWFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP151LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS201GLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP251APPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPBVQFNWYVDG301VEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAP351伍KTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW401ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA451LHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:235)包括信号肽编码序列的Ab-16HC的核酸序列:401CTCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCC451CTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTG501CCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAG551GCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCA601GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGG701TGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCA751GCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAA801GGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGG851ACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGC卯lGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAG951CACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGA柳lACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCC1051ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGT1101GTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATQACCAAGAACCAGGTCAGCC1151TGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGG1201GAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCT1251GGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA1301GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTIDNO:236)Ab-16重链可变区中的CDR序列是CDR-H1CDR-H2CDR-H3DYYIH(SEQIDNO:293)RVDPDNGETEFAPKFPG(SEQIDNO:294)EDYDGTYTWFPY(SEQIDNO:295)Ab-16轻链可变区的CDR序列是:CDR-L1CDR-L2CDR-L3RASSSISYIH(SEQIDNO:281)ATSNLAS(SEQIDNO:282)QQWSSDPLT(SEQIDNO:283)Ab-16可变结构域Ab-16轻链可变结构域的氦基酸序列(不含信号序列)1DI%TQSPSFLSASVGDRVTITC^AS—SWVTrfWYQQKPGKAPKLLIY銷51,鄉VPSRFSGSGSGTEFTLtlS—S巧沐话ATYYC^TS她微dOG101TkV^IK(SEQIDNO阔Ab-16轻链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)101GGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCCACA151TCCAACCTGGCTTCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGG201GACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAA251CTTATTACTGTCAGCAGTGGAGTAGTGACCCACTCACGTTCGGCGGAGGG-301agcaaggtggagatcaaa(seqIDno:389)Ab-16重链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)1EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFDIKbWT^WVRQAPGQGLEWIGS51^t)PDi^ffiF"AJ,巧KVTMTTDTSISTAYK^tskLRSDDTAVYYCA卿，10l!^DGT攻^H^5^G化VTVSS(SEQIDNO:3卯)Ab-16重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)51AGTGAAGGTCTCCTCCAAGGCTTCTGGATTCGACATTAAGGACTACTATA101TACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAAGG151GTTGATCCTGACAATGGTGAGACTGAATTTGCCCCGAAGTTCCCGGGCAA201GGTCACCATGACCACAGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGA301TACGATGGTACCTACACCTGGTTTCCTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGT351CACCGTCTCTAGT(SEQIDNO:391)另外的抗体在本文中称为抗体17-22(在本文中也称为Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21和Ab-22)。关于Ab-17、Ab-19和Ab-21的所有VK区的k恒定区如下关于Ab-17、Ab-19和Ab-21的所有VH区的重链恒定区如下DLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTTTLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREBQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDONTFTCSVLHEGLHNHHTnE&LsSGK^^1SSSC)(3SYFVYSKLNVQKSNWBA在下列抗体氨基酸序列中，带方框阴影的氨基酸表示互补决定区(CDR)，有下划线的氨基酸表示倌号肽。Ab-17包括信号肽的Ab-17LC的氨基酸序列MDFOVOIFSFMLIgViyiLSSGEIVLTQSPALMAASPGEKVTITC^r絲jg^SS^gtJWSQQKS(^skIwr^^f§￥^&SGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYSre^Q_WT7T^PGSGTKLELKR'(鄉.i6No:299)包括信号肽的Ab-17LC的核酸序列ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCATGCTAATCAGTGTCACAGTCATATTGTCCAGTGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGGCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATCACCTGCAGTGTCAGCTCGAGTATAAGTTCCAGCAACTTACACTGGTCCCAGCAGAAGTCAGGAACCTCCCCCAAACTCTGGATTTATGGCACATCCAACCTTGCTTCTGGAGTCCCTGTTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGTCAACAGTGGACTACTACGTATACGTTCGGATCGGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGT(SEQID包括信号肽的Ab-17HC的氨基酸序列MGWNWIIFFLMAVVTGVNSEVQLRQSGADLVKPGASVKLSCTASGFNIKJi>t^pfWVKQ|LPE9GL§yiG^pNG￥^WK，,KATITADTSSNTAYLQLRSLTSEbTAifYCGR節05Y節T^Cvfe1fiW^Q6TSVfvsS(siQIDNO:301)包括信号肽的Ab-17HC的核酸序列:TTA怖TGJQ说(SA欲OGGGCTCGACTATGGTGACTACTATGCTGTGGACrACTGGGGTCAAGGAACCTCGGTCACAGTCTCGAGC(SEQIDNO:302)Ab-17被人源化以产生Ab-18。Ab-18包括信号肽的Ab-18LC的氨基酸序列包括信号肽的Ab-18LC的核酸序列ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCGGGCGCGCGCTGCGATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGC。CGAGCGTGGCAACCTGGCGAGCGGCGTGCCGAGCCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAATTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTGGACCACCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT(SBQIDNO:304)包括信号肽的Ab-18HC的氨基酸序列CAR^GpaYG)Ci^^柳YWd(^TLVTVSS(SEQIDNO:305)包括信号肽的Ab-18HC的核酸序列ATGGATTGGACCTCK3AGCATTCTGTTTCTGGTGGCCK3CGCCGACCGGCGCGCATAGCGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGGCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC(SEQIDNO:306)Ab-18轻链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)pQLTQSPSFLSASVGDRVTITC^V姆IS,]FtWYQQKPGKAPKLUYtj1^i^SGVPSRFSGSGSGraFTLTISSLQPBDFATYYC股WrrmKJQGTKLEIKR(S顿N6;368)Ab-18轻链可变结构域的DNA序列(不舍信号序列)GATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGTGACCATTACCTGCAGCGTGAOCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTGCATTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAGCAACCTGGCGAQCGGCGTGCCGAGCCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAATTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATnTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTGGACCACCACCTATACCnTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT(SEQIDNO阔Ab-18重链可变結构域的氨基酸序列(不含信号序列)Ey^V卿AEVKKPGASYKVSCKASGFNttdb^nlWVRQAPg9GLEWMG敏,碎pV^PgFQ^RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRiDbTXVYYCARte5一I^Ci^tAV5M1^^流VWS》(SEQ1DNO:370)Ab-18重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACGGGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC(SEQIDNO:371)Ab-19包括信号肽的Ab-19LC的氨基酸序列MMSSAOFLGL叫CFOGTRCDIOMTOTTSSLSASLGDRVNISCfeXS鹏S離N群QQKPDGTVKLLIYgf敏祸GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLAQEDI人T^FC'的pj^H^FGGG包括信号肽的Ab-19LC的核酸序列ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCT<3TTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCAACATCAGCTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTCCACATCAAGATTAAACTCTAGCAACCTGGCACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGATATTAAGCATCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGTTGGAGCTGAAACGT(SEQIDNO:308)包括信号肽的Ab-19HC的氨基酸序列MBWIWIFLFiXsGTAgVHSEVOLgOSGPELVKPGASVKMSCKASGPTFT^^JWVKOKI5KXLEWIGyfi^YND她Yl^Pfe^KA1LTSDKSSSTAYMDLSSLTSEi^XVVYCAR^YYdA^FAy^(^TLVTVSS(seqidno:309)包括信号肽的Ab-19HC的核酸序列ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTOTCCACTCTGAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAOGCTTCTGGGTTCACATTCACTGACTACATTATGCACTGGGTGAA(3CAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATA1TAATCCTTACAATGATGATACTGAATACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGATCTCAGCAGTCTGACCTCTGAGGGCTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACAGTCTCGAGC(SEQIDNO:310)Ab-19被人源化以产生抗体20(在本文中也称为Ab-20)和抗体23(在本文中也称为Ab-23)。Ab-20IgG4形式包括信号肽的Ab-20LC的氨基酸序列画SSAOFLGLI丄LCFOGTRCD,TQSPSSLSASVGDRVTITC^S—^y/QQKiGKAPliLIY舒S卿lGVPSRFSGSGSGTDFTUnSSLQP咖ATYYC,IK^FGQGTKVEIKR(SEQIDNO:311)包括信号肽的Ab-20LC的核酸序列:ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT^JTGATATCCA5Af^CCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGACCGTGTCACCATCACTTGCCGCGCAAGTCAGGATATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGQGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTACTTCCCGTTTGAATAGTGGQGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGATATTAAACACCCTACGTTCQGTCAAGGCACCAAGGTGGAGATCAAACGT(SEQIDNO:312)包括信号肽的Ab-20HC的氨基酸序列MEWIWIFLFLLSGT4GVHSgyQjLyQgg^EVKKFGSSVKVSCKASGFT怖:tl^WVRQAPG^ggLEWMG^丽^D6TfeWfi!F^RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEl3TAVYYCARS^WfJ鹏A^3^TLVTVSS(S^QIDNO:313)'包括信号肽的Ab-20HC的核酸序列ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT"OSGGTGCTGCTG飾CAGTCTGGGGCTGAGGTGAA(3AAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTnTACCTTCACCGACTATATTATGCACTGGGTGCGTTACTGTGCGCGTTCGATTTATTACTACGATGCCCCGnTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACAGTCTCGAGC(SBQIDNO:349)IgG2形式轻链:成熟形式(信号肽被去除)的Ab-23LC的氨基酸序列1D,TQSPSSLSASVGDRVTTC]^p敏^^^WYQQ^1GK^PKLLIY^51fS疲裙GVPSRFSGSGSGTDFTL亍i'^QP"Mii)FATYYC(^iJ)蹄附GQGJT5JiV^砂(7iVS^SKTEeftSKDSITSX5SIX7X5iC4Dy五fiHKyZ4GBfTiieaL5SPJ^KS"iWKGEC(SEQIDNO:34"编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-23LC的核酸序列IGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGA51CCGTGTCACCATCACTTGCCGCGCAAGTCAGGATATTAGCAGCTATTTAA101ATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCT151ACTTCCCGTTTGAATAGTGGGGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTC201TGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTG251CAACTTACTACTGTCAACAGGATATTAAACACCCTACGTTCGGTCAAGGC301ACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTT351CCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCC401TGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGAT451AACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAQ^GAGTGJ"CAC^GAGCAGGACAG50iCAAGGACAGCACCTACAGCC:fSdA^XSffiT^PgXS^SKF^GifiAAMGAG551ACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAOGGCCTG601AGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQIDNO:342)包括信号肽的Ab-23LC的氨基酸序列1MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDI(^MTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD51ISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYSTSRLNSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL101QPEDFATYYCQQDIKHPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGT151ASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL201TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:343)包括信号肽编码序列的Ab-23LC的核酸序列1ATGGACATGAGGGTGCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTGCTGTGGCT51GAGAGGTGCCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGT101Cf(jcsirl5T&r'化otgaccgtgtcaccatcacttgccgcgcaagtcaggat151ATTAGCAGCTATTTAAATTCGTATCAGCAGAAACCAGOGAAAGCCCCTAA201GCTCCTGATCTATTCTACTTCCCGTTTGAATAOTGOQGTCCCATCACQCT251tcagtggcagtggctctqggacagatttcactctcaccatcagcagtctg301caacctgaagattttgcaacttactactgtcaacaggatattaaacaccc351tacgttcggtcaaogcaccaaggtggagatcaaacgtacggtogctgcac401CATCTGTCTTCATCTTCCC。CCATCTGATOAGCAGTTGAAATCTGQAACT451gcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagt501ACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTG551TCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTG601ACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT651CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG701AGTGT(SEQIDNO:344)雄成熟形式(信号肽被去除)的Ab-23HC的氡基酸序列:1EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTfcpv^WVRQAPGQGLEWMG,Vj51,VM)她Yi^p《取VTITADKSTSTAY滅&LRSEDTAVYYCARSf101yYYD^PfA咖G^llVTVSS^ST7i:(7iWFFPLAPCSAST肪5T/14i:(7Ci^i)i^i^》^s瞎^iL;rs(KflTFft4w^卿gi肌幼kftwss/vrorer柳GSFPtESKLrIKMSRH^GGWFFSCSKAfHE4丄J37YHTTeKSX^SZ5"尸Gyr(SEQEDNO:345)不含羧基末端赖氨酸的成熟形式(信号肽被去除)的Ab-23HC的氨基酸序列1EVQLVQSGAEVK^GSSVKVSCKASGFTFT^f^gWVRQAPGQGLEWM銜51H^^)她yM&X3RVTITADKSTSTAYKSLSsLRSEDTAVYYCARJSIlQr^YkEtoay;wjQ^1ivTys一sjOTK!Sfisr^x4^SM2:鉱-《r4^&縱巡柳GSFiFXTiSfiirwweskJT股GWf7!ISCy附iE4ifl7VH!TgiCSXSZJP((SEQID编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-23LC的核酸序列:1GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTC51GGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTTTACCTTCACCGACTATATTA101TGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGGCTTGAGTGGATGGOCTAT151ATCAACCCTTATAATGATGACACCGAATACAACGAGAAGTTCAAGGGCCG201TGtCA^5A竹XCCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTQA251GCAQCCTQCGCTCTGAGQACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTTCQATT301TATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAOGGACTCTGGTCAC351CGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGQCGCCCT401GCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAG451GACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGAC501CAGCGGCOTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACT551CCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACC601TACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAC651AGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGNO:3邻)751ATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA801CGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGC851ATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGT901GTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGA951GTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAA,CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCT1101GGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATG1151GGCAGCCGQAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGAC讓GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCA1251GCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACC1301ACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(SEQIDNO:346)包括信号肽的Ab-23HC的氨基酸序列:1MDWTWRILFLVAAATGAHSEVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTD51YIMHWVRQAPGQGLEWMGY1NPYNDDTEYNEKFKGRVTITADKSTSTAYM101ELSSLRSEDTAVYYCARSIYYYDAPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL151APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG201LYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPA251PPVAGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGV301EVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPI351EKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE401SNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL451IdHYTQKSi;SLSP成(SEQIDNO:347)包括信号肽编码序列的Ab-23HC的核酸序列:1ATGGACTGGACCTGGAGGATCCTCTTCTTGGTGGCAGCAGCCACAGGAGCsio:actccgaggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctg101ggtcctcggtgaagqtctcctgcaaggcttctcgttttaccttcaccgac151tatattatgcactgggtgcgtcaggcccctggtcaagggcttgagtggat201qggctatatcaacccttataatgatgacaccgaatacaacgagaagttca251AGGGCCGTGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATG301GAGCTGAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTQCGCG351TTCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTC401TGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG451GCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCT501GK3TCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCG551CTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGA601CTCTAClTiCeCtcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcac651ccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaqgtgg701acaagacaqttgagcgcaaatgttgtgtcgaqtccccaccgtgcccagca751ocacctotggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagga801caccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacg851tgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtg卯lGAGGTGCATAATQCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCAC951GTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACG1001gcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatc1051gagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaqgtgta1101caccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctga1151cctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggag1251ctccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagca1301ggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctg1351cacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(seqidno:348)Ab-23重链可变区中的CDR(互补决定区)序列如下:CDR-H1:DYIMH(SEQIDNO:269)CDR-H2:YINPYNDDTEYNEKFKG(SEQIDNO:270)CDR-H3:SIYYYDAPFAY(SEQIDNO:271)Ab-23轻链可变区的CDR序列是CDR-LI:RASQDISSYLN(SEQIDNO:239)CDR-L2:STSRLNS(SEQIDNO:240)CDR-L3:QQDKHPT(SEQIDNO:241)Ab-23可变结构域:Ab-23轻链可变结构域的氨基酸序列(不含信号序列)mqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdissylnwyqqkpgkapkluystsrlnsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqdikhptfgqgtkveik(seqidno:364)Ab-23轻链可变结构城的DNA序列(不含信号序列)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggtgaccgtgtcaccatcacttgccgcgcaagtcaggatattagcagctatttaaattggtatcack:agaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctattctacttcccgtttgaatagtggggtcccatcacgcttcagtggcagtggctctgggacagatTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTActgtcaacaggatattaaacaccctacgttcggtcaaggcaccaaggtggAGATCAAA(SBQidno:365)Ab-23重链可变结构城的氨基酸序列(不含信号序列)EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTDY應WVRQAPGQGLE丽GYINPYNDDTEYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYYYDAPFAYWGQGTTLVTVSS(SEQIDNO:366)Ab-23重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGOTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTTTACCTTCACCGACTATATTATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGGCTTGAGTGGATGGGCTATATCAACCCTTATAATGATGACACCGAATACAACGAGAAGTTCAAGGGCCGTGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTTCGATTTATTACTACGATGCCC^bTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACCGTCTCTAGT(SEQIDNO:367)Ab-21包括信号肽的Ab-21LC的氨基酸序列:MKSOTOVFVYMLD^LSGVRGDTVMTOSHKFMSTSVfinRVTrrrg^^if^FfAVA^VrjQKPGQSPKLLI愤AgtipTGVPDRFrGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFeQgYSS视T:FGAGTKLELKR(纽QIDi^):315)'一一包括信号肽的Ab-21LC的核酸序列:ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTTGTATACATGTTGCTGTGGTTGTCTGGTGTTGAAGGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACGTCAGTAGGAGACAGGGTCACCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTCTTTACTGCTGTAQCCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTQGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGATTATTTCTGTCAACAATATAGCAGCTATCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGTrGGAGCTGAAACGT(SEQEDNO:316)包括信号肽的Ab-21HC的氦基酸序列MGWNWnFFLM^yYXGVNggygLO^ggAELVRPGALVKLSCKASrTFNTKfi^VT^WVKgRPE^qLEWI^CTi^fli^lS^KASnTDTSSNTAYLQLSSLTSEDfAVfYCA谅XC^服WlFf^WCJQ^TLVrV'Sg(敏IDNO:317)包括倌号肽的Ab-21HC的核酸序列ATGGGATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGTCAATTCAGAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGCK3CTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTTAGTCAAGTTGTCCTGCAAAGCTTCTGGCTTCAATATTAAAGACTACTATATGCACTOGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGAATGGTGCTGGTCACCGTCTCGAGC(SEQIDNO:318)Ab-21被人源化以产生Ab-23。Ab-22包括信号肽的Ab-22LC的氨基酸序列MDMRVPAOLLGLLLLWLRGARCDIOMTOSPSSLSASVGDRVTrmp^^f^:wYQQKPGKAPKLLIYlWASTRtffGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFA亍YY^QySS祸tfFGGGTKVEDCR(SEQID&0:319)一包括信号肽的Ab-22LC的核酸序列ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCGCGGGCGATCGCGTGACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCACCCGCCATACCGGCGTGCCGAGTCGCnTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTATAGCAGCTATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT(SEQIDNO:320)包括信号肽的Ab-22HC的氨基酸序列MPWTWSILFLV^^HSEyC^YggqAEVKKi>GASVKVSCKASfiFNndV^^WVRQAPGQGLEWIA裙入々改^'—!GDHYp鹏收IlVTMTrDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCGQ(itV^S(SEQIDNO:321)包括信号肽的Ab-22HC的核酸序列ATGGATTOGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAGCGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGf^AGTCAGCt^Xi^lCGAGCGOCnTAACA'lTAAAGAri'An'ATATCiCA'n'CKiGT—復tojA^jmjOj(jGajAiJUuauGUAAiuiiA化uuujuuin'"A'itxiyMAAiee^GGCGATATTATTTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACkXiATACCMiCACCAQCACCGCGTATATGGAACTQCGCAGCCTGCGCAGCGATOATACCGCGGTGrATTATTGCGCGTATQATGCGGGCGATCCOGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTOACCGTCTCGAGC(SEQIDNO:322)Ab-22轻链可变结构城的氨基酸序列(不含信号序列)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVFTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPS鹏GSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:336)「1a2.AGAiGMcAGwCAWAcwcGGAGT芸cAt!GGSGyaA认ceyeyA芸GA5GhccXGcwTcAAGRc;<crTyAARTAb-22轻链可变结构城的DM序列(不含信号序列)GATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGTGACCATTACCTGC嵐GCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCACCCGCCATACCGGCGTOCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAQCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTATAGCAGCTATCCGCTGACCTTTOGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT(SEQIDNO:337)Ab-22重链可变结构域的氛基酸序列(不含信号序列)EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYYMHWVRQAPGOGLEWIGRIDPENGDHYDPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAYDAGDPAWFTYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:338)Ab-22重链可变结构域的DNA序列(不含信号序列)GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATGCATTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAACGOCGATATTAnTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTGACCCTGGTOACCGTCTCGAGC(SEQIDNO:339).对于Ab-18、Ab-20和Ab-22，轻链人K恒定区如下TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLWIFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTXSFNRGEC*(SEQIDNO:325)并且重链人Y-4恒定区如下FLPPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDQVEVHNAKTXPRBEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYrLPPSQEEM1KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQgGNVFSCSVMHEALHNHYTOKSLSLSLGK*(SEQIDNO:326)铗链区包含Ser-:Ml-Pro突变以改^链穗定性(AngalS等人,(1993),MolImmunol,30(1)，105-108)。Ab-24抗体24(在本文中也称为Ab-24)的LC和HC序列如下:轻链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-24LC的氨基酸序列1DrVLTQSPASLAVSLGQRATIAC^SC^VStfi(ff§^N^WYQ^pQPPKL51UY，砲SEIPARFSGTGSGT5TLNmP德敏TTSfY顿,鹏101肺GGGtSiKA4脇iTraj卿咖砂rSGG45WCFXiVVFTPJaM7VF"JMKLWSffTDgZMraOTY5"MSS7Z7ZnfMT朋fflVSITCE^20/:r孤misw^jE5P7V2yv丑c(seqidno:35q)编码成熟形式(倌号肽被去除)的Ab-24LC的核酸序列1GACATTGTGTTGACCCAGTCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCA51GAGGGCCACCATCGCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTGTTGATTATGATGGTA101CTAGTTATATGAATTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTC151CTCATCTATGCTGCATCCAATCTAGAATCTGAGATCCCAGCCAGGTTTAG201TGGCACTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGG251AGGAGGATATCACAACCTATTACTGTCAGCAAAGTAATGAGGATCCGTTC301ACGTTCGGAGGGGGGACCAAGTTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTOCACC351AACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTOAGCAGTTAACATCTGGAGGTG401CCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTC551CGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCC601ACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGA651GTGTTAG(SEQIDNO:354)包括信号肽的Ab-24LC的氨基酸序列1MBTDTELLWVLIXWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATIACKASQSVD51YDGTSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESEIPARFSGTGSGTDFTLNIH101PVEEEDITTYYCQQSNEDPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLT151SGGASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMS201STLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNKNEC(SEQIDNO:355)包括信号肽编码序列的Ab-24LC的核酸序列51CTCCACTGGTGACATTGTGTTGACCCAQTCTCCAGCTTCTTTCK3CTQT0T101CTCTAGGGCAGAGGGCCACCATCGCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTGTTGAT151TATGATGGTACTAGTTATATGAATTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCC201ACCCAAACTCdrCAiXTTATGCTGCATCCAATCTAGAATCTGAGATCCCAG251CCAGGTTTAGTGGCACTGGQTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCAT301CCTGTGGAGGAGGAGGATATCACAACCTATTACTGTCAGCAAAGTAATGA351GGATCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGTTOGAAATAAAACGGGCTG401ATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACA451TCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGA50iCATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCC551TGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGC601AGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATAC701ACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO:356)Ab-24重链成熟形式(信号肽被去除)的Ab-24HC的氨基酸序列'.1qVQL效PGTELVRPGTSVKLSCKASGYIFTTY^Iv^WYKQRPGQGLEW,:51逸SA纽IRL效妙J5JKATLTLDKSSSTAY'NfSL丽TSVDSAVYYCAR頸加jvK4HR4幼rirwwocrKpRDCGCKPC/cnrjsrasraFPPw^mx3<WiiWHQDffX/VG!KE孤CXFA/S^L4FiMWE灯iSra:(jRPiC4尸gKTTiPmr柳/ESKZiVF卿AWEL4G/VTFTCSI^L服GX/riVffflTEKSXmSPG/T(SEQIDNO:357)编码成熟形式(信号肽被去除)的Ab-24HC的核酸序列:1CAGGTCCAACTACAGCAGCCTGGGACTGAGCTGGTGAGGCCTGGAACTTC101TGAACTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGCATG151ATTCATCCTTCCGCAAGTGAAATTAGGTTGGATCAGAAATTCAAGGACAA201GGCCACATTGACTCTTGACAAATCCTCCAGCACAGCCTATATGCACCTCA251GCGGCCCGACATCTGTGGATTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATCAGGG301GAATGGGGGTCTATGQACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTC351CTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTG邻lCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTAT451TTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGG501TGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCA551GCTCAGTGACTOTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGC601AACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCC651CAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCAT701CTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTG751ACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGA咖GGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGA951ggtcaacaotgcaqcttSc:ctc3Ccx:c<5atc:gagaAAA沈A1iei^AXAA諫CCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAG1051GAGCAGATGGCCAAGOATAAACTCAGTCTGACCTGCATOATAACAGACTT1101CTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAOCCAGCGG1151AGAACTAdAAGAACACTCAGCCCATCATQGACACAGATGGCTCTTACTTC1201ATCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATAC1231TTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGA1301AGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQIDNO:361)包括信号肽的Ab-24HC的氨基酸序列1MGWSSIILFLVATATGVHSQVQLQQPGTELVRPGTSVKLSCKASGYIFTT51YWMNWVKQRPGQGLEWIGMIHPSASEIRLDQKFKDKATLTLDKSSSTAYM101HLSGPTSVDSAVYYCARSGEWGSMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAP151GSAA(JT^SAiVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYT201LSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPE251VSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVWDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHT301AQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTI351SKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMTTDFFPEDITVEWQWNGQ邻lPAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHH451TEKSLSHSPGK(犯QIDNO:362)包括信号肽编码序列的Ab-24HC的核酸序列1ATGGGATGGAGCTCTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGT51CCACTCCCAGGTCCAACTACAGCAGCCTGGGACTGAGCTGGTGAGGCCTG101GAACTTCAGTGAAGTTGTCCTGTAAGGCTTCTGGCTACATCTTCACCACC151TACTGGATGAACTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGAT201TGGCATGATTCATCCTTCCGCAAGTGAAATTAGGTTGGATCAGAAATTCA251AGGACAAGGCCACATTGACTCTTGACAAATCCTCCAGCACAGCCTATATG301CACCTCAGCGGCCCGACATCTGTGGATtCTGCGGTCTATTACTGTGCAAG351ATCAGGGGAATGGGGGTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCA401CCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCT451GGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAA501GGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGT551CCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACT601CTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGT651CACCTQCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAA701TTC3TGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAA751GTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCAT801TACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATG851ATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATOTGGAGGTGCACACA901GCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGT951CAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCA1001AATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATC1051TCCAAAACCAAAGGCAGACCQAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACC1101TCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATCATAA1151CAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAG加CGA(5C加AGAACtACAAOAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATCK3CTC1301GAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAOGGCCTGCACAACCACCAT1351ACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTQGTAAATGA(SEQIDNO:363)Ab-24轻链可变区中的CDR序列如下CDR-L1:KASQSVDYDGTSYMN(SEQIDNO:351)CDR-L2:AASNLES(SEQIDNO:352)CDR-L3:QQSNEDPFT(SEQIDNO:353)Ab-24重链可变区中的CDR序列如下CDR-H1:TYWMN(SEQIDNO:358)CDR-H2:MIHPSASBIRLDQKFKD(SEQIDNO:359)CDR-H3:SGEWGSMDY(SEQIDNO:360)下表1提供了Ab-A、Ab-B、Ab曙C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24的CDR的SEQIDNo和氨基酸序列。根据Kabat编号系统(Kabat等人，1987在^e《we腳so"r"e//7so尸J咖ujH7/c^/ca/InfeTe"中，U.S.DepartmentofHealthandHu迈anServices,訓，USA),Ll、L2和L3指轻链CDR1、2和3，并且Hl、H2和H3指重链CDR1、2和3。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table>表l<table>tableseeoriginaldocumentpage130</column></row><table>表l<table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table>表l<table>tableseeoriginaldocumentpage132</column></row><table>如果寡肽或多肽具有的氨基酸序列与上表1的CDR中的至少一种和/或下列硬化素结合刑的CDR至少75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一，那么它在本发明的范围内所述硬化素结合刑交叉阻断抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-"、Ab-15、Ab-16、Ab曙17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种与硬化素的结合，和/或被抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种交叉阻断与硬化素的结合；和/或其中所述结合剂在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应(即硬化素中和结合剂)；和/或与Loop2表位结合的硬化素结合剂；和/或与T20.6表位结合的硬化素结合剂；和/或与"T20.6衍生物(胱氨酸结+4臂)"表位结合的硬化素结合刑。如果硬化素结合刑多肽和抗体具有的氨基酸序列与抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种的可变区至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一，且交叉阻断抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种与硬化素的结合，和/或被抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-ll、Ab-l2、Ab-l3、Ab-l4、Ab-l5、Ab-16、Ab-l7、Ab-l8、Ab-l9、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种交叉阻断与硬化素的结合；和/或在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应(即硬化素中和结合刑)；和/或与Loop2表位结合；和/或与T20.6表位结合；和/或与"T20.6衍生物(胱氦酸结+4臂)"表位结合，那么它们在本发明的范围内。如果编码硬化素结合刑的多核苷酸具有的多核苷酸序列与编码抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种的可变区的多核苷酸至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、.91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一，且其中所编码的硬化素结合剂交叉阻断抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种与硬化素的结合，和/或被抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24中的至少一种交叉阻断与硬化素的结合；和/或在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应(即硬化素中和结合剂);和/或与Loop2表位结合；和/或与T20.6表位结合;和/或与"T20.6衍生物(胱氨酸结+4臂)"表位结合，那么它们在本发明的范围内。根据本发明的抗体对人硬化素的结合亲和力可以小于或等于1xl(TM、小于或等于lxl(TM、小于或等于lx1(T9M、小于或等于lx101、小于或等于Tx10—UM、或小于或等于lx10—12M。结合刑例如抗体或结合配偶体的亲和力以及结合剂(例如抗体)抑制结合的程度可以由本领域普通技术人员使用常规技术，例如Scatchard等人，(J/m.MK5W.51:660-672(1949))描述的那些或通过表面等离子共振(SPR;BIAcore，Biosensor,Piscataway,NJ)进行测定。对于表面等离子共振，把分子被固定在固相上且暴露于沿着流动室流动的移动相中的配体。如果发生配体与固定靶的结合，那么局部折射率改变，导致SPR角度的变化，这可以通过检测反射光强度中的变化来实时监控。SPR信号变化速率可以进行分析以得到关于结合反应的结合和解离相的表观速率常数。这些值的比率产生表观平衡常数(亲和力)(参见，例如，Wolff等人，"加"M53:2560-65(1993))。根据本发明的抗体可以属于任何免疫球蛋白种类，例如IgG、IgE、IgM、IgD或IgA。它可以从动物获得或来源于动物，例如禽(例如，鸡)和哺乳动物，这包括但不限于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或其他啮齿类动物、牛、马、绵羊、山羊、骆驼、人或其他灵长类动物。抗体可以是内在化抗体。抗体生产一般在美国专利公开号2004/0146888Al中公开。表征测定法在产生根据本发明的抗体的上述方法中，包括将特异性Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、和抗体1-24(Ab-l至Ab-24)CDR操纵到新构架和/或恒定区内，合适的测定法可用于选择所需抗体或结合剂(即用于测定与硬化素的结合亲和力的测定法；交叉阻断测定法；基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"；基于MC3T3-E1细胞的测定法；体内测定法)。表位结合测定法成熟形式的人硬化素是具有胱氨酸结结构(图8和9)的190个氡基酸的糖蛋白。除胱氨酸结结构之外，蛋白质的特征为具有命名为Loopl、Loop2和Loop3的3个环。对人硬化素实施蛋白水解消化以产生片段。简言之，使用不同蛋白酶，包括胰蛋白酶、aspN和lysC，产生具有各种切割位点和大小的片段。测定关于各种人硬化素肽的序列和质量。评估抗体保护以确定对蛋白水解作用的易接受性的影响，包括修剪位点掩蔽和肽替换。最后，进行基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"。硬化素暴露于胰蛋白睐切割产生如围13中概括的肽片段模式，片段称为T19.2、T20、T20.6和T21-22。如困19B中示意性所示，T20.6表位是通过胱氨酸结区域的3个二疏鍵连接的4种分开的肽序列的复合物.2种肽通过2个二疏鍵连接。另外2种肽通过与前2种多肽示意性相交的1个二碗鍵连接。通过胰蛋白醃消化产生的T20.6表位保留了天然多肽的胱氨酸结结构且由抗体Ab-C和Ab-D识别。表位T20.6的衍生物由耽氨酸结区域以及参考SEQIDN0:1的序列位置中的氨基酸58-64、73-81、112-117和138-141组成。这种衍生表位显示于困21中。包含胱氨酸结区域的表位可以具有H0.6表位(图19B)中存在而T20.6衍生表位(图21)中不存在的一个或多个氨基酸。另一种包含表位的区域在人硬化素的Loop2区域(图19A)中鉴定，且由抗体Ab-A和Ab-B识别。Loop2表位包含SEQIDNO:1的氦基酸86-111(C4GPARLLPNAIGRGKWRPSGPDFRC5，SEQIDNO:6)。在空间上，参考SEQIDNO:1的全长硬化素，包含Loop2的结构在一个末端由笫86位的半胱氨酸(C4)和第144位的半胱氡酸(C8)之间的二硫鍵限定，且在另一个末端由笫111位的半胱氨酸(C5)和笫57位的半胱氨酸(Cl)之间的二硫鍵限定。通过aspN切割人硬化素产生的肽显示于图12中。在该图中，这些肽命名为AspN14.6、AspN18.6和AspN22.7-23.5，且在本文中分别称为N14.6、N18.6和N22.7-23.5。如通过基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法，，证明的，一组抗体显示与某些表位的特异性结合模式。简言之，抗体与待测试的表位一起预孵育，其浓度将使抗体上的表位结合位点饱和。抗体随后暴露于与芯片表面结合的硬化素。合适的孵育和洗涤操作后，建立了竟争结合模式。如图18中所示，示例性抗体Ab-D与附着至芯片表面的硬化素分子结合。抗体Ab-D与硬化素的预孵育使抗体与芯片上的硬化素的结合减少至接近于零。与由表位T19.2组成的肽一起预孵育显示T19.2不与硬化素竟争结合抗体。然而，与命名为T20、T20.6、T21-22或N22.7-23.5的任何一种表位一起预孵育消除了抗体与芯片上的硬化素的大部分结合，相反，抗体与命名为T19.2、N14.6或N18.6的任何一种表位一起预孵育并不消除抗体与硬化素结合的能力，具有这种结合特征(困17)的第二种示例性抗体是Ab-C。抗体Ab-D因此是与表位T20、T20.6、T21-22和N22.7-23.5结合的抗体组的示例和代表，且如通过阻断抗体与硬化素结合的能力测量的，所述抗体组具有与表位T19.2、N14.6和N18.6的最低限度可检测的结合。具有这种特征性结合棋式的抗体可以在抗体分子的一个或多个区域中共有或不共有氨基酸序列。抗体相似性例如通过与上迷每种表位一起预孵育随后与硬化素结合的能力在功能上测定。显示的结合模式类似于或等同于抗体Ab-D的那种的抗体包括在本发明中。"类似于，，意指例如抗体将显示与多肽T20、T20.6、T21-22和N22.7-23.5中的每一种结合，由此这种结合将特异性竟争掉至少50%的抗体与硬化素的结合，百分比是相对于结合将在不存在与硬化素或硬化素肽一起预辨育的情况下发生的结合而言。抗体还将显示与多肽T19.2、N14.6和N18.6很少或无法检测的结合，导致结合减少30°/。或更少，所述百分比是相对于在不存在与硬化素或硬化素肽一起预孵育的情况下发生的结合而言。例如，不被具体机制束蟀，困18的抗体结合模式暗示抗体Ab-D和具有Ab-D的表位结合模式的其他抗体与之结合的表位空间由包舍硬化素的胱氨酸结区域的多肽组成。因此，如本文公开的和参考图19B,示例性T20.6表位包含经由3个分开的二硫鍵附着的4条肽链。肽链SAKPVTELVC3SGQC4GPAR(SEQIDNO:3)通过从C3到C7以及从C4到C8的二硫键与肽链LVASC7KC8KRLTR(SEQIDNO:5)附着。肽链DVSEYSC1RELHFTR(SEQIDNO:2)通过从CI到C5的二疏键与肽链WWRPSGPDFRC5IPDRYR(SEQIDNO:4)附着。如图19B中举例说明的，SEQIDNO:3和5的多肽通过立体构造保持与SEQIDN0:2和4的多肽结合，其中Cl-C5鍵与C4-C8和C3-C7鍵的平面相交且位于其间。如本文公开的和参考困21，T20.6的示例性衍生表位包含经由3个分开的二疏鍵附着的4条肽链。肽链SAKPVTELVC3SGQC4(SEQIDNO:70腿过从C3到C7以及从C4到C8的二硫鍵与肽链LVASC7KC8(SEQIDNO:71)附着。肽链C1RELHFTR(SEQIDNO:72)通过从CI到C5的二M与肽链C5IPDRYR(SEQIDNO:73)附着，如困21中举例说明的，SEQIDNO:70和71的多肽通过立体构造保持与SEQIDNO:72和73的多肽结合，其中C1-C5键与C4-C8和C3-C7鍵的平面相交且位于其间，抗体Ab-A是笫二种抗体组的示例和代表，所迷抗体组具有的与人硬化素肽的特征性结合模式不同于抗体Ab-C和Ab-D获得的那种。如通过阻断抗体与硬化素结合的能力测量的(图15)，Ab-A以及它代表的抗体组与N22.7-23.5表位结合，且具有与表位T19.2、T20、T20.6、T21-22、N14.6或N18.6的最低限度可检测的结合。具有这种结合特征(闺16)的第二种示例性抗体是Ab-B。具有这种特征性结合模式的抗体可以在抗体分子的一个或多个区域中共有或不共有氨基酸序列。抗体相似性例如通过与上述每种表位一起预孵育随后与硬化素结合的能力在功能上测定。显示的结合模式类似于或等同于抗体Ab-A的那种的抗体包括在本发明中。"类似于"意指例如抗体将显示与N22.7-23.5多肽结合，由此这种结合将特异性竟争出至少50%的抗体与硬化素的结合，所述50%是相对于在不存在与硬化素或硬化素肽一起预孵育的情况下发生的结合而言。抗体还将显示与多肽T19.2、T20、T20.6、T21-22、N14.6和N18.6很少或无法检测的结合，导致结合减少30%或更少，所述百分比是相对于在不存在与硬化素或硬化素肽一起预孵育的情况下发生的结合而言。例如，不被具体机制束绰，困15的抗体结合模式暗示抗体Ab-A和具有Ab-A的表位结合模式的其他抗体与之结合的表位空间由包含硬化素的Loop2区域的多肽组成。因此，如本文公开的和参考图19A，Loop2区域可以描迷为线性肽，但当它存在于天然硬化素或其中天然二硫鍵结构被维持的硬化素的包含胱氨酸结的部分中时，它获得三级结构.如实施例中讨论的，Loop2表位的线性或三級结构可以影响抗体与其的结合。Loop2区域可以包含下列氨基酸序列C4GPARLLPNAIGRGKWRPSGPDFRC5(SEQIDNO:6)。"C4"指位于参考SEQIDNO:1的笫86位的半胱氨酸残基。"C5"指位于参考SEQIDN0:1的第lll位的半胱氦酸残基。在天然硬化素蛋白质中，C4通过二硫鍵与第144位(C8)的半胱氨酸连接，且C5通过二疏鍵与笫57位(Cl)的半胱氨酸连接.来源于Loop2区域的表位包括CGPARLLPMIGRGKWRPS(SBQIDN0:63);GPARLLPNAIGRGKWRPSG(SBQIDNO:64);PARLLPNAIGRGKWWRPSGP(SEQIDNO:65);ARLLPMIGRGKWWRPSGPD(SBQIDNO:66);RLLPNAIGRGKWWRPSGPDF(SEQIDNO:67);LLPMIGRGKWWRPSGPDFR(SEQIDNO:68);和LP謹GRG丽RPSGPDFRC(SEQIDNO:69)。交叉阻断测定法术语"交叉阻断"在本文中用于指抗体或其他结合刑干扰其他抗体或結合刑与硬化素结合的能力。抗体或其他结合刑能够干扰另一种抗体与硬化素的结合，且因此它是否可以说成根据本发明的交叉阻断的程度可以使用竟争结合测定法来测定。一种特别合适的定量测定法使用Biacore机器，所迷Biacore机器可以使用表面等离子共振技术测量相互作用的程度。另一种合适的定量交叉阻断测定法使用基于ELISA的方法以测量抗体或其他結合剂之间就其与硬化素结合而言的竟争。BIACORE交叉阻断测定法下文一般描述了用于测定抗体或其他结合剂是否根据本发明交叉阻断或能够交叉阻断的合适Biacore测定法。为了方便起见对2种抗体进行了描述，但应当理解该测定法可以使用本文描述的任何硬化素结合剂。Biacore机器(例如Biacore3000)按照制造商的建i义进行操作。因此在一种交叉阻断测定法中，硬化素使用标准胺偶联化学与CM5Biacore芯片偶联以产生硬化素包被表面。一般地200-800共振单位的硬化素将与芯片偶联(将产生可容易检测水平的结合但通过使用的測试试刑浓度可容易饱和的量)。待评估其互相交叉阻断能力的2种抗体(称为A,和B*)以1比1摩尔比的结合位点在合适缓沖液中混合以制备测试混合物。当在结合位点的基础上计算浓度时，抗体的分子量假定为抗体的总分子量除以那种抗体上的硬化素结合位点数目，测试混合物中每种抗体的浓度应当足够高以容易地饱和Biacore芯片上捕获的硬化素分子的那种抗体的结合位点。混合物中的抗体为相同的摩尔浓度(在结合的基础上)且那种浓度一般将为1.00-1.5微摩尔(在结合位点的基础上)。同时制备包含单独的抗体A,和单独的抗体B，的分开溶液。这些溶液中的抗体A,和抗体B傘应当在相同緩沖液中且应当是与测试混合物中一样的浓度。测试混合物流经硬化素包被的Biacore芯片且记录结合的总量，芯片随后以这样的方式处理以便去除结合的抗体而不损害芯片结合的硬化素。一般地这通过用30mMHC1处理芯片60秒来完成，单独的抗体A，溶液随后流经硬化素包被的表面且记录结合的总量。芯片再次进行处理以去除所有结合的抗体而不损害芯片结合的硬化素。单独的抗体B^溶液随后流经硬化素包被的表面且记录结合的总量。接下来计算抗体A,和抗体B,的混合物的最大理论结合，且是每种抗体单独流经硬化素表面时的结合的总和。如果实际记录的混合物的结合小于这个理论最大值，那么2种抗体互相交叉阻断。园此，一般而言，根据本发明的交叉阻断抗体或其他结合剂在上述Biacore交叉阻断测定法中将与硬化素结合，从而使得在测定法过程中以及本发明的第二种抗体或其他结合剂的存在下，记录的结合为最大理论结合的80%-0.1%(例如80%-4%)，特别是最大理论结合的75%—0.1%(例如75%-4%)，且更特别是2种抗体或结合刑组合的最大理论结合(正如上文定义的)的70%-0.1%(例如70%-4%)。上述Biacore测定法是用于确定抗体或其他结合剂是否根据本发明互相交叉阻断的主要测定法。在罕见的情况下，特定抗体或其他结合刑可以不与经由胺化学与CM5Biacore芯片偶联的硬化素结合(这通常在硬化素上的相关结合位点经由与芯片的偶联被掩蔽或破坏时发生).在此类情况下交叉阻断可以使用标记形式的硬化素测定，例如N末端His标记的硬化素(R&DSystems,Minneapolis,MN，USA;2005目录M406-ST-025)。在这种特殊形式下，抗His抗体将与Biacore芯片偶联，随后His标记的硬化素将流经芯片表面且被抗His抗体捕获。交叉阻断分析将基本上如上所述进行，除了每个芯片再生循环后，新的His标记的硬化素将装载回抗His抗体包被的表面上之外。除了给出的使用N末端His标记的硬化素例子之外，可替代地可以使用C末端His标记的硬化素。此外，本领域已知的各种其他标记和标记结合蛋白組合可以用于此类交叉阻断分析(例如HA标记与抗HA抗体；FLAG标记与抗FLAG抗体；生物素标记与链霉亲和素)。基于ELISA的交叉阻断测定法下文一般描述了用于测定抗硬化素抗体或其他硬化素结合剂是否根据本发明交叉阻断或能够交叉阻断的ELISA测定法。为了方便起见，对2种抗体进行描述(Ab-X和Ab-Y)，但应当理解该测定法可以使用本文描述的任何硬化素结合刑。该测定法的一般原理是使抗硬化素抗体包被在ELISA板的孔上。在溶液中加入(即，不与ELISA板结合)过量的第二种可能交叉阻断的抗硬化素抗体。随后向孔中加入有限量的硬化素。包被的抗体和溶液中的抗体竟争结合有限量的硬化素分子。板随后进行洗涤以去除未被包被抗体结合的硬化素，且同时去除第二种溶液相抗体以及第二种溶液相抗体和硬化素之间形成的任何复合物。结合的硬化素的量随后使用合适的硬化素检测试刑进行测量。能够交叉阻断包被抗体的溶液中抗体将能够引起包被抗体可以结合的硬化素分子的数目相对于在不存在第二种溶液相抗体的情况下包被抗体可以结合的硬化素分子数目减少。这种测定法在下文对于Ab-X和Ab-Y更进一步地详细描述。在其中Ab-X选择为固定抗体的情况下，它包被在ELISA板的孔上，这之后板用合适的封闭溶液封闭以最小化随后加入的试剂的非特异性结合。随后向ELISA板中加入过量Ab-Y，从而使得每孔的Ab-X硬化素结合位点摩尔量比BLISA板包被过程中每孔使用的Ab-X硬化素结合位点摩尔量至少高10倍。随后加入硬化素从而使得每孔加入的硬化素摩尔量比用于包被每个孔的Ab-X硬化素结合位点的摩尔量低至少25倍。合适的孵育期后，ELISA板进行洗涤且加入硬化素检测试剂，以测量经由包被的抗硬化素抗体(在这种情况下是Ab-X)特异性结合的硬化素量。关于该测定法的背景信号定义为在含包被抗体(在这种情况下是Ab-X)、第二种溶液相抗体(在这种情况下是Ab-Y)、只有硬化素緩冲液(即没有硬化素)和硬化素检测试刑的孔中获得的信号。关于该测定法的阳性对照信号定义为在含包被抗体(在这种情况下是Ab-X)、只有笫二种溶液相抗体缓冲液(即没有笫二种溶液相抗体)、硬化素和硬化素检测试刑的孔中获得的信号。BLISA测定法必须以这样的方式进行，以便使阳性对照信号是背景信号的至少6倍。为了避免由何种抗体用作包被抗体和何种用作第二种(竟争者)抗体的选择产生的任何假象(例如，Ab-X和Ab-Y之间对于硬化素的显著不同的亲和力)，交叉阻断测定法必须以2种形式进行l)形式l是其中Ab-X是包被在EILSA板上的抗体并且Ab-Y是在溶液中的竟争者抗体和2)形式2是其中Ab-Y是包被在EILSA板上的抗体并且Ab-X是在溶液中的竟争者抗体。如果在形式1或形式2中，与在不存在溶液相抗硬化素抗体的情况下(即阳性对照孔)获得的硬化素检测信号比较，溶液相抗硬化素抗体能够引起硬化素检测信号(即由包被抗体结合的硬化素量)减少60°/。-100%、特别是70%-100%、且更特別是80%-100%,那么Ab-X和Ab-Y被定义为交叉阻断的。此类基于ELISA的交叉阻断测定法的例子可以在实施例7("基于ELISA的交叉阻断测定法")中找到。基于细胞的中和测定法培养的成骨细胞谱系细胞(原代细胞或细胞系)的矿化用作骨形成的体外模型.从经由一种或多种分化试剂诱导的成骨细胞*系细胞分化开始，矿化需要约1至6周的时间发生.整个系列事件涉及细胞增殖、分化、细胞外基质产生、基质成熟和最终矿物质沉积，所述矿物质沉积指礴酸钾结晶化和/或沉积。以细胞增殖和分化开始、且以矿物质沉积结束的这种系列亊件在本文中称为矿化。钩(矿物质)的测量是测定法的结果。MC3T3-E1细胞(SudoH，KodamaH-A，AmagaiY，YamamotoS，KasaiS.1983./力k/"o^r7Tere/7〃a〃0/7ca/ci/7ca〃o/2'""7町/a,J.CellBiol.96:191-198)和原始细胞系的亚克隆在分化试剂的存在下生长后可以在培养中形成矿物质。此类亚克隆包括MC3T3-E1-BF(SmithE，RedmanR，LoggC，CoetzeeG，KasaharaN,FrenkelB,2000.67wcocor〃co油//2力/6/deFe/o，e/^fl/"age-spec/Z7co"eoWa"ce//cyc/e.J.Biol.Che迈.275:19992-20001)。对于MC3T3-E1-BF亚克隆以及原始MC3T3-E1细胞，硬化素可以抑制逐渐导致且包括矿物质沉积的系列事件中的一个或多个(即硬化素抑制矿化)。能够中和硬化素抑制活性的抗硬化素抗体允许培养物在硬化素的存在下矿化，从而使得与只有硬化素(即无抗体)的处理组中测量的钙量比较，礴酸钩(作为钾测量)沉积中存在统计上显著的增加。在显示于图22、23和24中的基于细胞的矿化测定法实验中使用的抗体具有约145Kd的分子量且每个抗体分子具有2个硬化素结合位点。当为了测定特定抗硬化素抗体或抗硬化素结合剂是否可以中和硬化素(即，是硬化素中和抗体或其衍生物，或是硬化素中和结合刑)的目的进行该测定法时，该测定法中使用的硬化素量必须是与没有硬化素組中测量的钙量比较，引起只有硬化素组中的磷酸钙(作为钙测量)沉积至少70%、统计上显著减少的硬化素最小量。抗硬化素中和抗体或抗硬化素中和结合刑定义为与只有硬化素(即没有抗体、没有结合刑)的处理组中测量的钾量比较，引起礴酸钾(作为钾测量)沉积中统计上显著的增加的那些。为了确定抗硬化素抗体或抗硬化素结合剂是否是中和性的，测定法中使用的抗硬化素抗体或抗硬化素结合刑的量必须是这样的，使得与每孔的硬化素摩尔数目比较，存在过量的每孔的硬化素結合位点摩尔量。取决于抗体效力，可能需要的过量倍数可以是24、18、12、6、3或1.5，并且本领域技术人员熟悉测试超过一种结合剂浓度的常规实践。例如非常有效的抗硬化素中和抗体或抗硬化素中和结合剂将能够中和硬化素，即使当与每孔的硬化素摩尔数目比较，每孔存在少于6倍过量的硬化素结合位点摩尔量时。效力较少的抗硬化素中和抗体或抗硬化素中和结合刑将只在12、18或24倍过量时才能够中和硬化素。这种效力全范围内的硬化素结合刑适合作为中和性硬化素结合剂。示例性基于细胞的矿化测定法在实施例8中详细描述。可以中和人硬化素的抗硬化素抗体及其衍生物，以及可以中和人硬化素的硬化素结合剂可能在人病症/病症治疗中有用，所述病症/病症由低骨形成、低骨矿物质密度、低骨矿物质含量、低骨量、低骨质量和低骨强度中的至少一种引起，与这些关联，或导致这些。体内中和测定法与刺激新骨形成关联、或由刺激新骨形成产生的各种参数中的增加可以作为来自硬化素结合剂体内测试的输出结果进行测量，以便鉴类参数包括骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度的各种血清合成代谢标记[例如，骨钙蛋白、P1NP(1型前胶原的n末端前肽)]，組织形态学标记(例如成骨细胞表面/骨表面；成骨速度/骨表面；小乘厚度)。硬化素中和结合刑定义为与媒介物处理的动物比较，能够引起与刺激新骨形成关联、或由刺激新骨形成产生的任何参数中的统计上显著增加。此类体内测试可以在任何合适的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、猴)中进行。此类体内测试的例子可以在实施例5("抗硬化素单克隆抗体的体内测试")中找到。尽管硬化素的4^酸序列在哺乳动物种类中并非100%等同(例如小鼠硬化素与人硬化素并非100%等同)，但本领域技术人员应当理解可以在体内中和某一物种(例如小鼠)的硬化素且还能够在体外结合人硬化素的硬化素结合刑非常可能在体内中和人硬化素。因此，此类人硬化素结合刑(例如抗人硬化素抗体)可能在人病症/病症治疗中有用，所述病症/病症由低骨形成、低骨矿物质密度、低骨矿物质含量、低骨量、低骨质量和低骨强度中的至少一种引起，与这些关联，或导致这些。其中同源重组已用于删除小鼠硬化素基因且在其位置中插入人硬化素基因的小鼠(即人硬化素基因敲入(knock-in)小鼠或人S0ST敲入小鼠)可以是另外的体内系统的例子。提供了包含上述结合刑之一连同药学或生理学可接受栽体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，所述结合刑例如为针对人硬化素的抗体Ab-A，Ab-B、Ab-C、Ab-D和Ab-1至Ab-24中的至少一种。药物组合物和治疗方法在于2004年6月16日提交的共同未决的申请序列号10/868,497中公开，所述申请要求序列号60/478,977的优先权，所述2个申请引入本文作为参考。用于在各种治疗方案中使用本文所述药物组合物的合适剂量和治疗方案的开发是本领域众所周知的，所述治疗方案包括例如皮下、口服、肠胃外、静脉内、鼻内和肌内施用和配制，为了举例说明的一般目的其中一些在下文简要讨论。在某些应用中，本文公开的药物组合物可以经由口部施用递送给动物.像这样，这些组合物可以与惰性稀释剂或与可同化的可食用载体一起配制，或它们可以封装在硬或软壳明胶胶嚢中，或它们可以压制成片剂，或它们可以直接掺入饮食的食物中。在某些情况下，将希望皮下、肠胃外、静脉内、肌内或甚至腹膜内递送本文公开的药物组合物。此类方法是本领域技术人员众所周知的，其中一些在例如美国专利号5,543,158;美国专利号5,641,515和美国专利号5，399，363中进一步描述。在某些实施方案中，作为游离碱或药理学可接受盐的活性化合物溶液可以在水中适当地与表面活性剂例如羟丙基纤維素混合进行制备。分散系也可以在丙三醇、液体聚乙二醇、及其混合物中以及在油中进行制备。在普通的贮存和使用条件下，这些制剂一般将包含防席刑以预防微生物生长。适合于注射用途的举例说明性药物形式包括无菌水溶液或分散系和用于临时制备无菌注射液或分散系的无菌粉末(例如，参见美国专利号5,466,468)。在所有情况下刑型必须是无菌的且必须流动至容易注射的程度。它在制备和贮存条件下必须是稳定的且必须针对微生物例如细菌和真菌的污染活动进行保护。栽体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适混合物和/或植物油的溶刑或分散介质。合适的流动性可以例如通过使用包衣例如卵礴脂、在分散系的情况下通过维持所需颗粒大小和/或通过使用表面活性剂来维持。微生物活动的预防可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂得到促进，例如对羟苯曱酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，将优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可注射组在一个实施方案中，对于在水溶液中的肠胃外施用，必要时溶液应当是适当緩冲的且液体稀释剂首先用足够的盐或葡萄糖变得等渗。这些特别的水溶液特别适合于静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用。在这方面，可以使用的无菌水介质按照本公开内容对于本领域技术人员将是已知的。例如，一个剂量可以溶解于l迈l等渗NaCl溶液中且加入1000ml皮下输液中或在计划的输注位点处进行注射，(参见例如We边i/^on's户Aflr咖cez/〃c"S".e/2ces，第15版，第1035-1038和1570-1580页)。取决于待治疗受试者的病症，剂重中的某些变化将必然发生。此外，对于人施用，制刑当然将优选满足如FDA生物制品标准办公室(FDAOfficeofBiologiesstandards)要求的无菌、致热原性以及一般的安全性和纯度标准。在本发明的另一实施方案中，本文公开的组合物可以以中性或盐形式进行配制。举例说明性药学可接受的盐包括酸加成盐(由蛋白质的游离氨基形成)以及由无机酸例如盐酸或磷酸形成的盐，或由此类有机睃如乙酸、革酸、酒石酸、扁桃酸等形成的盐.由游离羧基形成的盐还可以来源于无机碱，例如氣氣化钠、钟、铵、钩、或铁，以及此类有机碱如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普香卡因等。配制后，溶液将以与刑量制刑相容的方式和治疗有效的量进行施用。栽体可以进一步包含任何和所有溶刑、分散介质、媒介物、包衣、稀释剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂、緩冲液、栽体溶液、悬浮液、胶体等。用于药学活性物质的此类介质和试刑的使用是本领域众所周知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物中的使用。其它活性成分也可以掺入组合物中。短语"药学可接受的"指当给人施用时不会产生过敏或类似不利反应的分子实体和组合物。在某些实施方案中，脂质体、纳米胶囊、微粒、脂质颗粒、囊泡等用于将本发明的组合物引入合适的宿主细胞/生物内。特别地，本发明的组合物可以封装在脂质颗粒、脂质体、囊泡、纳米球体、或纳米颗粒等中配制用于递送。可替代地，本发明的组合物可以与此类栽体媒介物的表面共价或非共价地结合。作为有效药物栽体的脂质体和脂质体样制剂的形成和使用是本领域l支术人员普遍知道的(参见例如Lasic，7>加&"2'o&cAno/.(7):307-21，1998;Takakura,及2'/^力oJ"6(3):691-95，1998;Chandran等人，/"^//,加j/o/."(8):801-09，1997;Margalit，紐.r力er."，Carr/er"(2-3):233-61，1995;美国专利号5，567，434;美国专利号5,552,157;美国专利号5，565，213;美国专利号5，738，868和美国专利号5，795，587，所述参考文献各自特别整体引入本文作为参考)。脂质体的使用在全身递送后似乎不会产生自身免疫应答或无法接受的毒性。在某些实施方案中，脂质体由磷脂形成，所述裤脂分散在水介质中且自发形成多层同心双层嚢泡(也称为多层嚢泡(MLV))。可替代地，在其他实施方案中，本发明提供了本发明组合物的药学可接受的納米胶囊制剂。纳米胶囊一般以穗定和可重复的方式封装化合物(参见,例如QuinUnar-Guerrero等人，/r叫/ey.户力ar瓜W(12):1113-28，1998)。为了遊免由于细胞内聚合超栽的副作用，此类超微粒(大小约0.1ym)可以使用能够在体内降解的聚合物进行设计。此类颗粒可以如例如Couvreur等人，Cr".Car/7eri"(l):l-20，1988;zurMuhlen等人，胁，/.户力a復J/.o;/wr瓜"(2):149-55，1998;Zambaux等人，/.Co/7"o"edie7e，i7(l-3):31-40，1998;和美国专利号5,145,684所述进行制备。另外，本发明的药物組合物可以连同包装材料一起置于容器内，所述包装材料提供关于此类药物组合物使用的说明书。一般地，此类说明书将包括描述试剂浓度，以及在某些实施方案内对重构药物組合物可能必需的赋形剂成分或稀释剂(例如，水、盐水或PBS)的相对量的实体表达。施用的剂量可以是O.Olmg/kg-100mg/kg体重。如对于本领域技术人员将是显而易见的，施用的量和频率当然将取决于此类因素如待治疗适应症的性质和严重度、所需应答、患者条件等。一般地，组合物可以通过如上所述的各种技术来施用。骨矿物质含量和/或骨矿物质密度中的增加可以通过使用X射线(例如双食feX射线骨吸收测量仪(DualEnergyX-rayAbsorptometry)或"DBXA")来直接测定，或通过测量下列来推断1)骨形成和/或成骨细胞活性标记，例如但不限于成骨细胞特异性碱性磷酸酶、骨钧蛋白、1型前胶原羧基端前肽(PICP)、总碱性裤酸酶(参见Cornier,^i/.//7:243(1995))和血清前胶原1N末端前肽(P1NP)和/或2)骨再吸收和/或破骨细胞活性标记，包括但不限于吡啶啉、脱氣吡啶啉、N端肽(N-telopeptide)、尿羟脯氨酸、血浆耐酒石酸盐酸性磷酸酶、和半乳糖基羟赖氨酸；(参见Cornier,同上)、血清TRAP5b(耐酒石酸盐酸性砩酸酶同型异构体5b)和血清交联C端肽(sCTXI)。骨量的量还可以由体重或通过使用其他方法来计算(参见Guinness—Hey,iWffl6.及e/a^177—181，1984)。动物和特定动物模型在本领域中用于测试本发明的组合物和方法对例如骨丢失、骨再吸收、骨形成、骨强度或骨矿化的参数的影响，这模拟人疾病例如骨质疏松症和骨重减少的病症。此类模型的例子包括卵巢切除的大鼠模型(Kalu，D.N.，r力eOMrie"咖义'zedrflUo^7ofio"迈加o/7ai/sa/6o/2e/o仏Ao/efli7f/#//2erfl/15:175-192(1991)，Frost,H.M.和Jee，W.S.S.。"f力eraf迈oc/e/A"zzza/7eo/7e/7/asa/cfosfeo/7oros/s.So/e<s/2(/yl///2era/18:227—236(1992);k乂及Jee，W.S.S.和Yao，W.，0rerr/eva/2/迈s/迈ode/sosfeo/7e//'aa/2dc"eo/7oro5"/51./.jl/"scu7osire7.jVewr肌//7fera".1:193—207(2001))。可以通过本发明的组合物治疗的具体病症包括其中骨生长或发育异常的发育不良，以及广泛多样病因的骨量减少、骨质疏松症和骨丢失。此类病症的代表性例子包括软骨发育不全，颅骨锁骨发育不良，内生软骨瘤病，纤维性结构不良，高歇病，低磷酸盐血症询偻病，马方综合征，多发性遗传性夕卜骨生疾(multiplehereditaryexotoses)，神经纤维瘤病，成骨不全，骨硬化症，全身脆弱性骨硬化，硬化损伤，假关节，化脓性骨髄炎，牙周病，抗癫痫药诱导的骨丢失，原发性和继发性甲状旁腺功能亢进症，家族性曱状旁腺功能亢进综合征，失重诱导的骨丟失，男性中的骨质疏松症，绝经后的骨丢失，骨关节炎，肾病性佝偻病，骨浸润性病症，口部骨丢失，颌骨坏死，青少年佩吉特病，肢骨紋状肥厚，代谢性骨病，肥大细胞增多症，镰状细胞性贫血/病，器官移植相关性骨丢失，肾移植相关性骨丢失，全身性红斑狼疮，强直性脊柱炎，癫痫，青少年关节炎，地中海贫血，粘多糖贮积病，法布里病，特纳综合征，唐氏综合征，克兰费尔特综合征，麻风病，佩特兹病，青少年特发性脊柱侧凸，嬰儿期发作性多系统炎性疾病，温彻斯特综合征(WinchesterSyndrome)，门克斯病，威尔逊病，局部缺血性骨病(例如累-卡-佩病、局限性游走性骨质疏松)，贫血状态，由类固醇引起的病症，糖皮质激素诱导的骨丢失，肝素诱导的骨丟失，骨髓病症，坏血病，营养不良，钩缺乏，特发性骨量减少或骨质疏松症，先天性骨量减少或骨质疏松，酒精中毒，慢性肝病，绝经后状态，慢性炎性病症，类风湿性关节炎，炎性肠病，溃病性结肠炎，炎性结肠炎，克罗恩病，月经过少，无月经，妊娠，糖尿病，甲状腺功能尤进，曱状腺病症，曱状旁腺病症，库欣病，肢端肥大症，性腺机能减退(hypogonadism)，制动或废用，反射交感性营养不良综合征，局限性骨质疏松，骨软化症，与关节置换术相关的骨丢失，HIV相关的骨丢失，与生长激素缺少相关的骨丢失，与囊性纤维化相关的骨丢失，纤維性结构不良，化学治疗相关性骨丢失，肿瘤诱导的骨丢失，癌症相关的骨丟失，激素消融性骨丟失，多发性骨il瘤，药物诱导的骨丢失，神经性厌食症，疾病相关的面骨丢失，疾病相关的颅骨丢失，疾病相关的颌骨丢失，疾病相关的头盖骨丢失，以及与太空旅行相关的骨丢失。进一步的病症涉及与衰老相关的骨丢失，包括与衰老相关的面骨丢失，与衰老相关的颅骨丢失，与衰老相关的颌骨丢失，以及与衰老相关的头盖骨丢失。本发明的组合物还可以用于改善矫形术，牙科手术，植入手术，关节置换术，骨移植术，骨美容手术和骨修复例如骨折愈合、骨不连愈合(nonunionhealing)、延迟的连接愈合和面部重建中的结果。一种或多种组合物可以在搮作、置换、移植、手术或修复之前、之时和/或之后施用。本发明还提供了包含根据本发明的至少一种抗硬化素结合剂的诊断试刑盒。结合剂可以是抗体。此外，此类试剂盒可以任选包含下列中的一种或多种(1)关于使用一种或多种结合剂用于筛选、诊断、预后、治疗监控或这些应用的任何組合的说明书；(2)针对抗硬化素结合刑的标记的结合配偶体；(3)在其上固定抗硬化素结合刑的固相(例如反应条带)；和(4)标明管理机构批准用于筛选、诊断、预后或治疗用途或其任何組合的标签或插页(insert)。如果没有提供针对结合刑的标记的结合配偶体，那么结合刑自身可以用一种或多种可检测标记物进行标记，所述可检测标记物例如化学发光、酶、荧光、或放射性部分。为了举例说明而不是为了限制提供下列实施例。实施例实施例1硬化素的重组表达重组人硬化素/S0ST从MDSystems(Minneapolis,MN，USA;2006目录#1406-ST-025)商购可得。另外，重組小鼠硬化素/S0ST从R&DSystems(Minneapolis,MN，USA;2006目录M589-ST-025)商购可得。可替代地，不同种类的硬化素可以在适应无血清悬浮培养的293T或293EBNA细胞中瞬时表达。转染可以作为500fflL或1L培养物进行。下列试刑和材料可从GibcoBRL(现在是Invitrogen,Carlsbad,CA)获得，目录号在括号中列出无血清DMBM(21068-028);DMBM/F12(3:1)(21068/11765);IX胰烏素-转铁蛋白-竭补充剂(51500-056);IXPenStrepGlut(10378-016);2mM1-谷氨耽胺(25030-081);20jdMHEPES(15630-080);0.01%PluronicF68(24040-032)。简言之，细胞接种物(5.0-10.0X105细胞/mLX培养物体积)在2，500RPM下于4*C离心IO分钟以去除条件化培养基。将细胞重悬浮于无血清DMEM中且再次在2，500RPM下于41离心IO分钟。吸出洗涤溶液后，将细胞重悬浮于1L或3L转瓶培养中的生长培养基[DMEM/F12(3:1)+IX胰岛素-转铁蛋白-竭补充刑+IXPenStrepGlut+2mML-谷氨酰胺+20mM服PES+0.01%PluronicF68]中。转瓶培养在磁搅动板上維持在125RPM，所述磁搅动板置于維持在37t:和5。/。C02的増湿孵1T箱中。包含硬化素的完整编码区(和终止密码子)与正好在起始位点ATG5，的Kozak—致序列(例如CCACC)的哺礼动物表达质粒DM(例如pcDNA3.1，pCEP4，InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)在50mL圃锥形管中与转染试剂混合,DM转染试剂复合物可以在无血清DMBM或OPTPMEM以5-10%最终培养物体积制备，可以用于这个用途的转染试刑包括X-tre迈eGeneRO-1539(RocheAppliedScience,Indianapolis,IN)，FuGene6(RocheAppliedScience,Indianapolis,IN)，Lipofectamine2000(Invitrogen,Carlsbad,CA)和293fectin(Invitrogen，Carlsbad,CA)。首先向无血清DMEM中加入1-5jig质粒DNA/mL培养物，随后为1-5Ml转染试剂/mL培养物。复合物于室温孵育大约10-30分钟且随后加入转瓶中的细胞。转染/表达可以进行4-7天，这之后通过在4,000RPM下于4C离心60分钟收获条件化培养基(CM)。实施例2重组硬化素的纯化重组硬化素如下从哺乳动物宿主细胞中纯化，所有纯化过程在室温下进行。一种纯化方案用于纯化各种种类的硬化素，包括鼠类和人硬化素。该纯化方案使用亲和色谦法随后为阳离子交换色谦法。肝素色谱法哺乳动物宿主细胞条件化培养基(CM)在BeckmanJ6-M1离心机中在4000rpm下于4t:离心1小时以去除细胞碎片。CM上清液随后通过无菌的O.2nin过滤器进行过滤。(在这点上无菌过滤的CM可以任选冷冻贮存直至纯化。)如果CM被冷冻，那么它在下列温度或其組合下解冻4t:、室温或温水。解冻后CM通过无菌的0.2nm过滤器进行过滤，且任选通过切向流超滤(TFF)使用lOkD分子量截止膜进行浓缩，CM浓缩物通过无菌的0.2pm过滤器进行过滤，且随后装栽到在PBS中平衡的肝素高性能(肝素HP)柱(GEHealthcare,前身为AmershamBiosciences)上。可替代地，过滤的CM上清液可以直接装栽到在PBS中平衡的肝素HP柱上，装栽后，肝素HP柱用PBS洗涤直至流出物(flow-through)在280咖处的吸光度回到基线(即在装栽CM上清液前测重的吸光度)。硬化素随后使用溶于PBS的150mM-2M氯化钠线性梯度从柱中洗脱。监控洗出液在280nm处的吸光度并收集包含蛋白质的级分，级分随后通过考马斯染色的SDS-PAGE测定，以鉴定包含以糖基化硬化素的大小移动的多肽的級分.来自柱的合适級分被合并以制备肝素HP库.阳离子交换色谱法从肝素HP柱中洗脱的硬化素通过阳离子交换色详法使用SP高性能(SPHP)层析介质(GEHealthcare,前身为AmershamBiosciences)进一步纯化。肝素HP库通过透析使用10，000匿CO膜(PierceSlide-A-Lyzer)緩沖液更换到PBS内。透析的肝素HP库随后装栽到在PBS中平衡的SPHP柱上。装栽后，柱随后用PBS洗涤直至流出物在280am处的吸光度回到基线。硬化素随后使用溶于PBS的150mM-lM氟化钠线性梯度从SPHP柱中洗脱。监控洗出液在280nm处的吸光度并收集在级分中的洗脱的硬化素。级分随后通过考马斯染色的SDS-PAGE测定，以鉴定包含以糖基化硬化素的大小移动的多肽的级分。来自柱的合适级分被合并以制备SPHP库。配制純化后，SPHP库通过透析使用10,000MWCO膜(PierceSlide-A-Lyzer)在PBS中进行配制。如果硬化素的浓缩是必需的，那么使用含10，000MWCO膜的离心装置(A迈iconCentricon或Centriprep)。配制后硬化素通过无菌的0.2pm过滤器进行过滤并贮存于4t:或冷冻。实施例3肽结合ELISA一系列重叠肽(每种肽长度为大约20-25个氨基酸)基于大鼠硬化素的已知氨基酸序列(SEQIDNO:98)合成。肽这样设计使得它们全都包含还原的半胱氨酸残基；在其序列中未包含半胱氨酸的每种肽的C末端包括附加的半胱氨酸.这使得肽能够通过共价偶联使用商购可得的巯基结合板(Costar)以1ng/迈l的浓度在包含1mMEDTA的磷酸盐緩冲盐水(PBS:pH6.5)中与测定板结合。于室温孵育1小时后，板用包含O.5y。吐温20的PBS洗涤3次。板通过与包含O.5%鱼皮明胶(Sigma)的PBS溶液一起孵育于室温封闭30分钟，且随后在包含0.5。/。吐温20的PBS中洗涤3次。待测试抗体在包含0.5%鱼皮明胶的PBS中稀释至1ng/ffll且与肽包被的板一起于室温醉育1小时。过量抗体通过用PBS和0.5%吐温20洗涤3次来去除。板随后与合适的二抗一起醉育，所述二抗与辣根过氧化物酶綴合(在包含0.5%吐温20的PBS中适当稀释)且能够与目的抗体结合。板随后洗涤3次一次用包含0.5%吐温20的PBS，2次用PBS。最后板与辣根过氧化物酶显色底物(TMB-StableStop,RDI)—起于室温孵育5分钟，用酸来终止显色，且在450nm处测量板的光密度。材料Costar的巯基结合板(爾#29442-278)包被緩沖液1XPBSPH6.5+lmMEDTA封闭緩沖液IXPBS+0.5%鱼皮明胶(PBS来自CS;FSG来自Sigma#G7765)洗涤緩冲液IXPBS+0,5%吐温20大鼠硬化素肽抗体样品瞬时Ab,纯化的重組Ab,兔血清等。合适的二抗山羊抗兔/小鼠-HRP(JacksonImm腦Research,115-036-072)TMB-StableStop(R固RDI-TMBSX-1L)0.5MHC1方法如下1.用100m1/孔、在1xpbsPH6.5+lmMEDTA中稀释为1ng/ml的大鼠硬化素肽包被板。使板于室温孵育1小时。(板应在打开后30分钟内使用)。2.用洗涤緩冲液将板洗涤3次。3.用200ul/孔封闭緩沖液将板封闭。使板于室温孵育30分钟。4.如(2)中所迷重复洗涤。5.使板与50ul/孔在封闭緩冲液中稀幹的样品一起孵育-血清滴度从1:100开始；使用純的瞬时重組的Ab;使用iMg/ml純化的重组Ab(所有样品一式两份地进行)。使板于室温孵育1小时，6.如(2)中所迷洗涤板。7.使板与50ul/孔在封闭緩冲液中1:1600稀释的合适二抗(HRP标记的)一起孵育。使板于室温孵育1小时，8.板用洗涂緩冲液洗涂1次，PBS洗涤2次。9.使板与50n1/孔TMB—起于室温孵育5分钟。10.用50pl/孔0.5MHC1终止反应。11.在450nm波长处读板。如上所述筛逸下列肽序列QGWQAFKNDATEIIPGLREYPEPP(SEQIDNO:82)TEIIPGLREYPEPfOEtMN御Qtt)NO:83)PEPPQELENNQTMNRAENGCUSEQIDMQ;多4)BNOGRPPHHPYDTKDVSEYS(SEQIDNO:85)CRELHYTRFVTDGP(SEQIDNO:86)CRELHYTRFVTDGPSRSAKPVTELV(SEQIDNO:87)CRSAKPVTELVSSGQSGPRARLL(SEQIDNO:88)CGPARLLP腕GRVKWWRPNGPDFR(SEQIDNO:89)RAQRVQLLCPGGAAPRSRKV(SEQIDNO:90)PQGAAPRSRKVRLVAS(SEQIDNO:91)KRLTRFHNQSELKDFGPETARPQ(SEQIDNO:92)IPDRYAQRVQLLSPGG(SEQIDNO:93)SELKDFGPETARPQKGRKPRPRAR(SEQIDNO:94)TOGRKPRPRXRGAKANQAELENAY(SEQ1DNO:95)PNAIGRVKWWRPN卿FR(SEQIDNO:96)KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV(SEQIDNO:97).高亲和力中和抗体(Ab-19)与2种重叠的肽序列结合PNAIGRVKWRPNGPDFR(SEQIDNO:96)和KWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV(SEQIDNO:97)。逸种搮作允许识别与表观线性表位反应的抗体的表位，包含所有或部分抗体结合位点的肽将结合抗体且因此被检测。实施例4人硬化素表位的鉴定硬化素结构成熟形式(信号肽被去除)的人硬化素是190个氨基酸的蛋白质(图8)。图9显示了具有N末端臂(从N末端Q到半胱氛酸1)和C末端臂(从半胱氨酸8到末端Y)的硬化素一般结构示意图。夹在这2个臂之间的是胱氨酸结结构和命名为Loopl、Loop2和Loop3的3个环。硬化素中的4个二疏鍵是序列第57位的Cysl与序列第111位的Cys5连接(称为Cl-C5)，序列笫71位的Cys2与序列第125位的Cys6连接(称为C2-C6)，序列笫82位的Cys3与序列第142位的Cys7连接(称为C3-C7),序列第86位的Cys4与序列第144位的Cys8连接(称为C4-C8)。8员的环结构经由C3-C7和C4-C8二硫鍵形成。这种环结构连同穿过环的Cl-C5二硫鍵一起形成一般的胱氨酸结。不是胱氨酸结部分的C2-C6使2个大环结构_Loopl(残基57-82)和Loop3(残基111-142)靠近。Loop2是从C4(残基86)到C5(残基111)。继用于表征由抗硬化素单克隆抗体结合的表位的一般方法涉及用不同蛋白酶使人硬化素变成肽片段，测定各种人硬化素肽的序列，分离这些肽，并使用基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"测试每种肽与特定单克隆抗体结合的能力。所得到的数据允许定位待测定的结合表位。对肽消化物实施HPLC肽作图；收集单个峰，且通过基质辅助激光解吸质谱法(MALDI-MS)和电喷射离子化LC-MS(ESI-LC-MS)分析和/或通过N末端测序鉴定肽并作图。关于这些研究的所有HPLC分析使用反相C8柱(直径2.l咖x长度15cm)进行。HPLC肽作困使用0.05%三氣乙酸(移动相A)-在O.05%三象乙酸中的90%乙猜的线性梯度进行.柱以O.2ml/分钟的流速经过50分钟运行。跌蛋白酶和AspN内切蛋白醃消化成熟形式的人硬化素用在精氨酸和赖氦酸后切割的胰蛋白酶或AspN消化.约200yg硬化素以0.5-1.0mg/ml与8ng胰蛋白醉或AspN—起在PBS(pH7.2)中于37TC孵貫20小时。肢蛋白睐消化胰蛋白酶消化物的HPLC色谦法产生几个主峰(围10A)。序列分析对胰蛋白酶消化后由HPLC回收的肽峰进行，同时进行肽消化物的在线ESILC-MS分析以确定由HPLC分开的肽的精确质量。肽峰中存在的肽的身份因此得到确定(图11)。图13显示各种肽序列(T19.2、T20、T20.6、T21-22)与硬化素序列的比对。每个T后的数字(例如T19.2)反映保留时间。T19.2包含通过C2-C6二硫鍵连接的2种肽(一种来自Loopl和一种来自Loop3)。T20包含通过胱氨酸结结构结合在一起的2种肽，其中完整的Loopl和3通过C2-C6二硫鍵结合在一起，而大部分Loop2不存在。T20.6包含通过胱氣酸结结构结合在一起的4种序列，但缺失部分Loopl和3(T19.2部分)且缺失大部分Loop2。T21-22几乎等同于T20但在Loop2区域中具有3个额外氨基酸。AspN消化AspN消化物的HPLC色谦法产生几个主峰(困10B)。序列分析对由HPLC回收的肽峰进行。同时进行肽消化物的在线ESILC-MS分析以确定由HPLC分开的肽的精确质量。来自AspN消化的肽峰中存在的肽的身份因此得到确定(图12)。困14显示各种肽序列(AspN14.6、Asp亂6、AspN22.7-23.5)与硬化素序列的比对。每个AspN后的数字(例如AspN18.6)反映保留时间。AspN14.6包含来自硬化素的N和C末端臂的3种短肽，而AspN18.6是来自硬化素的N末端臂的较大肽*AspN22.7-23.5包舍104个氨基酸的单一肽片段，其包含所有8个半胱氨酸(4个二疏键)、胱氨酸结以及所有Loopl、2和3。用于表征表位的策略是使用这些各种胰蛋白醉和AspN产生的人硬化素肽，且确定哪些肽仍能由各种抗体(Ab-A、Ab-B、Ab-C和Ab-D)结合。特别地这在基于Biacore的"人硬化素肽表位竟争结合测定法"中进行测试，其中特定单克隆抗体与固定在Biacore芯片上的人硬化素的結合在各种分离的胰蛋白酶和AspNHPLC肽级分中的每一种存在或不存在的情况下进行测定.在不存在任何竟争肽的情况下，特定单克隆桥昧能够结合在芯片上的人硬化素且产生共振羊位RU应答,特定单克隆抗体与溶液中的完整人硬化素一起预孵育，随后测试与芯片的结合，表明Mab与溶液中的人硬化素结合阻止Mab与芯片上的人硬化素结合，从而证实了这种竟争测定法的一般原理是可靠的。这种一般操作对于每种肽个体进行重复。获得的强RU应答表明测试的特定肽不能结合溶液中的Mab(从而Mab自由结合已固定在芯片上的人硬化素)。相反，强RU应答的缺失表明Mab能够结合溶液中的硬化素肽。这些结合模式与各种硬化素肽的已知身份结合，用于确定由抗硬化素抗体Ab-A、Ab-B、Ab-C和Ab-D结合的硬化素表位。基于Biacore的人硬化素肽表位竟争结合测定法人硬化素表面的制备成熟形式的人硬化素与BIAcore传感器芯片(CM5)表面的固定根据制造商的说明书进行。简言之，传感器芯片表面上的mut过注射60nL包含0.2MN-乙基-N，-(二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和0.05MN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合物被活化。人硬化素在10mM乙酸钠，pH4.0中稀释为20pg/mL的浓度，随后在活化的CM5表面上注射。表面上的过量反应基团通过注射60nLlM乙醇胺来灭活。最终固定水平对于人硬化素表面是~5000共振单位(RU)。同时在传慼器芯片上制备空白、模拟偶联的参考表面。結合特异性分析不含氯化钙或氯化镁的IX礴酸盐緩冲盐水来自Gibco/Invitrogen，Carlsbad,CA。无IgG的牛血清白蛋白级分V来自Sig鹏a-Aldrich，St,Louis，M0。每种Mab(2nM)在注射在固定的人硬化素表面上之前在样品緩冲液(IXPBS+0.005°/。P-20+0.1mg/mLBSA)中分別与20nM人硬化素或特定人硬化素肽(注在AspN14.6中有3种未连接的肽)一起孵育。关于注射进样的流速为5nL/分钟，随后为使用在8mM甘氨酸，pH2.0中的1MNaCl以30mL/分钟进行30秒的表面再生。数据使用BIAevaluation3.2进行分析，且呈现于困15Ub-A)、困16(Ab-B)、困17(Ab-C)和困18(Ab-D)中。Loop2和T20.6表位,.关于2种代表性抗体(Ab-A和Ab-B)的硬化素肽结合棋式基本上是相同的(图15和困16)且显示这2种抗体都只能结合AspN22.7-23.5肽。AspN22.7-23.5与所有其他硬化素肽之间的唯一差别是AspN22.7-23.5包含完整的Loop2,这显示Ab-A和Ab-B结合硬化素的Loop2区域从而定义了Loop2表位(困19A)。关于Ab-C和Ab-D的硬化素肽结合模式基本上是彼此相同的(图17和图18)，但完全不同于对于Ab-A和Ab-B发现的那种。在这个实施例中测试的舦中，Ab-C和Ab-D可以与之结合的最小型肽是T20.6肽。这个结果定义了T20.6表位(图19B)。蛋白酶保护测定法这个测定法的一般原理是Mab与硬化素的结合可以导致某些特异性蛋白酶切割位点的保护且这种信息可以用于确定Mab与之结合的硬化素区域。"T20.6衍生物1(胱氨酸结+4臂)"表位闺20显示关于人硬化素Ab-D复合物(图20A:人硬化素以1:1的摩尔比与Ab-D—起预孵育，然后如上所迷用胰蛋白酶消化)和单独的人硬化素的HPLC肽图(围20B:人硬化素如上所述用胰蛋白酶消化)。与图20B比较，图20A中的T19.2和T20.6肽峰显示其各自峰高中的明显减少。峰高中的这种减少伴随肽T20和T21-22峰高中的增加。这些数椐表明Loopl和Loop3中的碱性氨基酸残基(在不存在Ab-D的情况下经由胰蛋白酶切割产生肽T19.2和T20.6)当Ab-D与硬化素预结合时对经由胰蛋白酶的切割有抵抗力.T20、T20.6和T21-22的存在表明当Ab-D与硬化素预结合时Loop2仍被有效切割。这些数据表明Ab-D在T20.6表位的Loopl和Loop3侧结合，从而定义了困21中显示的较小的"T20.6衍生物1(胱氨酸结+4臂)"表位。实施例5抗硬化素单克隆抗体在小鼠中的体内测试4周大的BDF1雄性小鼠从CharlesRiverLaboratories(Raleigh，NC)获得且祠养在千净笼框中，每笼5只动物.室温维持在68-720F，且相对湿度维持在34-73%。实验室饲养笼具有12小时的光/暗循环且符合所有AAALAC规范。研究中的所有小鼠的临床观察每天进行一次。純化的抗硬化素单克隆抗体(Ab-A图1;Ab-B图2;Ab-C图3;Ab-D围4)在无菌Dulbecco氏礴酸盐緩冲盐水中进行稀释，小鼠用抗硬化素抗体或PBS媒介物以21m1/克体重进行皮下注射，以25mg/kg每周2次(星期一和星期四)。人PTH(l-34)在PTH緩冲液(0.001NHC1，0.15MNaCl，2%BSA)中稀释，且以21p1/克体重皮下给药，以100ng/kg每周5次(星期一、星期二、星期三、星期四、星期五)作为阳性对照(图5和6)。每组的小鼠数目在围5和6中是N=5，且在围7中是N"6。PIXImus体内骨密度测定骨矿物质密度(BMD)在胫骨上段和腰推通过外周双能X射线骨吸收领'J量仪(pDEXA)与来自GE/LunarMedicalSystems,Madison,WI的PlXImus2系统每周测定一次。设置25mW感兴趣区域(ROI)以包括近端关节面、骺和胫骨干骺端上的近端。设置感兴趣区域(ROI)以包括腰推(L1-L5),分析胫骨近端和腰区以测定总骨矿物质密度。报告组平均值土标准差并与媒介物治疗组比较用于统计分析。统计分析统计分析使用Dunnett，s和Tukey-Kramer进行(对于BMD数据使用MSExcel和JMPv.5.0.)。当户值小于0.05(户<0.05)时，关于每个数据集的組平均值视为显著不同。抗体的硬化素中和活性与媒介物比较，对于Ab-A(围5)、Ab-B(困5)、Ab-C(困6)和Ab-D(困7)中的每一种可见BMD中的统计上显著増加，证实这4种抗体是硬化素中和抗体。此外这种数据显示对于结合小鼠硬化素的抗硬化素抗体，如上所迷的小鼠处理和分析可以用于鉴定硬化素中和抗体。实施例6关于阻断抗体与人硬化素结合的抗体的筛选测定法人硬化素使用标准胺偶联化学与CM5Biacore芯片偶联以产生硬化素包被表面。300共振单位的硬化素与表面偶联。待测试抗体在HBS-EP緩冲液(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%(v/v)表面活性剂P20)中稀释至200ug/ml的浓度，并随后以1:l摩尔比(在结合位点的基础上)混合以产生测试混合物。这种测试混合物因此包含浓度为100ug/ml(在结合位点的基础上为1.3um)的每种抗体。同样制备了单独包含测试混合物中一种抗体的各种溶液。这些溶液包舍在HBS-EP緩沖液中浓度为100ug/迈l(在结合位点的基础上为1.3um)的抗体个体。20mL测试混合物以10pL/分钟的流速流经硬化素包被的Biacore芯片且记录结合的量。芯片随后用30mMHC12次60秒脉冲处理以便去除所有结合的抗体。只包含测试混合物的抗体之一的溶液(在与测试混合物相同的緩冲液中在结合位点的基础上为1.3mm)随后以与测试混合物相同的方式流经芯片并记录结合的量。芯片再次进行处理以去除所有结合的抗体，且最后包含来自测试混合物的单独另一种抗体的溶液(在与测试混合物相同的緩冲液中在结合位点的基础上为1.3|im)流经芯片并记录结合的量。下表显示了来自关于一系列不同抗体的交叉阻断测定法的结果.该表每个方格中的值表示当该表顶端行中标明的抗体(在结合位点的基础上为1.3pm)或緩冲液与该表第一列中标明的抗体(在结合位点的碁础上为1.3MflO或緩冲液混合时可见的结合量(单位为RU)。<table>tableseeoriginaldocumentpage161</column></row><table>使用上表中关于每种抗体组合的平均结合值(单位为RU)(因为每个组合出现2次)可以计算由每种抗体组合显示的理论结合的百分比。理论结合计算为关于每种测试混合物组分在单独测定时(即抗体和緩沖液)的平均值的总和。<table>tableseeoriginaldocumentpage162</column></row><table>由上述数据显而易见的是Ab-4、Ab-A和Ab-19互相交叉阻断。类似地Ab-13和Ab-3互相交叉阻断。实施例7基于ELISA的交叉阻断测定法在这个实施例中使用的液体体积将是在96孔板ELISA中一般使用的那些(例如50-200lil/孔)。Ab-X和Ab-y在这个实施例中假定具有约145Kd的分子量且每个抗体分子具有2个硬化素结合位点。抗硬化素抗体(Ab-X)在96孔ELISA板[例如Corning96WellEIA/RIAFlatBottomMicroplate(产品#3590)，CorningInc.,Acton，ma]上包被(例如50m1pg/ml)至少1小时。这个包被步骤后抗体溶液被去除，板用洗涤溶液(例如PBS和0.05%吐温20)洗涤1次或2次，并随后使用合适的封闭溶液(例如PBS，1%BSA，1%山羊血清和0.5%吐温20)和本领域已知操作进行封闭。封闭溶液随后从ELISA板中去除，且向ELISA板的合适孔中加入在封闭緩冲液中的过量(例如50m110Mg/ml)次级抗硬化素抗体(Ab-Y)，所迷次級抗硬化素抗体被测试其交叉阻断包被抗体的能力。这之后，随后向合适孔中加入在封闭緩冲液中的有限量(例如50|il10ng/ml)硬化素，且使板于室温在振荡时孵育至少1小时。板随后用洗涤溶液洗涤2-4次。向elisa板中加入在封闭緩冲液中的合适量的硬化素检测试剂[例如已与合适量的链霉亲和素-辣根过氣化物酶(HRP)缀合物预复合的生物素化的抗硬化素多克隆抗体],并于室温孵育至少l小时。板随后用洗涤溶液洗涂至少4次，且用合适试剂[例如HRP底物例如TMB(比色的)或各种HRP发光底物]显色。关于该测定法的背景信号定义为在含包被抗体(在这种情况下是Ab-X)、第二种溶液相抗体(在这种情况下是Ab-Y)、只有硬化素緩沖液(即没有硬化素)和硬化素检测试刑的孔中获得的信号，关于该测定法的阳性对照信号定义为在含包被抗体(在这种情况下是Ab-X)、只有第二种溶液相抗体緩沖液(即没有第二种溶液相抗体)、硬化素和硬化素检测试剂的孔中获得的信号。BLISA测定法必须以这样的方式进行，以便使阳性对照信号是背景信号的至少6倍。为了避免由何种抗体用作包被抗体和何种用作第二种(竟争者)抗体的选择产生的任何假象(例如，Ab-X和Ab-Y之间对于硬化素的显著不同的亲和力)，交叉阻断测定法必须以2种形式进行1)形式1是其中Ab-X是包被在EILSA板上的抗体并且Ab-Y是在溶液中的竟争者抗体和2)形式2是其中Ab-Y是包被在EILSA板上的抗体并且Ab-X是在溶液中的竟争者抗体。如果在形式1或形式2中，与在不存在溶液相抗硬化素抗体的情况下(即阳性对照孔)获得的硬化素检测信号比较，溶液相抗硬化素抗体能够引起硬化素检测信号(即由包被抗体结合的硬化素量)减少60%-100%、特别是70%-100%、且更特别是80%-100%，那么Ab-X和Ab-Y被定义为交叉阻断的。在ELISA中使用标记形式的硬化素的情况下，例如N末端His标记的硬化素(R&DSystems,Minneapolis,MN，USA;2005目录#1406-ST-025)，那么合适类型的硬化素检测试剂将包括HRP标记的抗His抗体。除使用N末端His标记的硬化素之外，还可以使用C末端His标记的硬化素。此外，本领域已知的各种其他标记和标记结合蛋白组合可以用于这种基于ELISA的交又阻断测定法中(例如HA标记与抗HA抗体；FLAG标记与抗FLAG抗体；生物素标记与链霉亲和素)。实施例8用于鉴定能够拮抗硬化素活性的试剂的基于细胞的矿化测定法引言将培养的成骨细胞谦系细胞(原代细胞或细胞系)的矿化用作骨形成的.体外模型。从经由一种或多种分化试剂诱导的成骨细胞谦系细胞分化开始，矿化需要约1至6周的时间发生。整个系列事件涉及细胞增殖、分化、细胞外基质产生、基质成熟和最终矿物质沉积，所述矿物质沉积指礴酸钙结晶化和/或沉积。以细胞增殖和分化开始、且以矿物质沉积结束的这种系列事件在本文中称为矿化。钩(矿物质)的测量是测定法的输出结果。矿物质沉积具有强生物物理学特征，因为一旦矿物质"种子"开始形成，将在整个培养中沉积的矿物质总量有时可以非常快速地沉积，例如在其后数天内。培养中的矿物质沉积的时间和程度部分受使用的具体成骨细胞谦系细胞/细胞系、生长条件、分化试剂的选择和细胞培养基中使用的特定血清批号的影响。对于成骨细胞谱系细胞/细胞系矿化培养，应当测试来自超过一个供应商的至少8到15种血清批次以便鉴定允许矿化发生的特定血清批次。MC3T3-E1细胞(SudoH等人，Inf/"od/尸/erei3〃"/o/zs/zdca7c/,/c"/加//a加『c/o加/o"e柳/2/cce//7i/7ef/er/>ed尸r咖刀er&or/2zzoi/seca7raris.J.CellBiol.96:191-198)和原始细胞系的亚克隆在分化试刑的存在下生长后可以在培养中形成矿物质。此类亚克隆包括MC3T3-E1-BF(SmithE，RedmanR，LoggC，CoetzeeG，KasaharaN，FrenkelB.2000.67wcocor〃co油(fere/o/7肺/2"/"flge-，"77cce/ic/c/e.J.Biol.Chem.275:19992-20001)。硬化素中和抗体的鉴定MC3T3-El-BF细胞用于矿化测定法。抗坏血酸和B-甘油磷酸用于诱导MC3T3-E1-BF细胞分化导致矿物质沉积。96孔形式的具体筛选方案涉及在星期三接种细胞，随后在12天内更换7次培养基(如下文进一步描述的)，而大部分矿物质沉积在最后大约18小时(例如星期天晚上到星期一)内发生。对于任何给定处理，使用3个孔(N=3)。矿物质沉积的具体时间和程度可以部分依使用的特定血清批号而变。如细胞培养实验领域一般众所周知的，对照实验将允许消除此类变数。在这种测定法系统中硬化素抑制逐渐导致且包括矿物质沉积的系列事件中的一个或多个(即硬化素抑制矿化)。能够中和硬化素抑制活性的抗硬化素抗体允许培养物在硬化素的存在下矿化，从而使得与只有硬化素(即无抗体)的处理組中测量的钙量比较，磷酸钾(作为钙测量)沉积中存在统计上显著的增加。对于统计分析(使用MSExcel和JMP)，单向ANOVA随后为Dumiett，s比较用于测定组间差异。当P值小于O.05(P<0.05)时，关于每个数据集的组平均值视为显著不同。来自这种测定法运行的代表性结果显示于图22中。在不存在重组小鼠硬化素的情况下，逐渐导致且包括矿物质沉积的系列事件正常进行。每个处理组中的钙水平显示为平均值士平均值的标准差(SEM)。在这个示例性实验中，来自钙测定法的钙水平是~31jug/ml。然而，重组小鼠硬化素的添加导致矿化抑制，且钙减少~85%。与只有硬化素的组比较，抗硬化素单克隆抗体Ab-19或Ab-4连同重组硬化素的添加导致矿物质沉积中统计上显著的增加，因为硬化素的抑制活性被任一抗体中和。来自这个实验的结果表明Ab-19和Ab-4是硬化素中和单克隆抗体(Mab)。困23显示使用重组人硬化素和2种人源化抗硬化素Mab的非常类似的结果。图24同样显示了使用如标明的重组人硬化素以及小鼠和人源化抗硬化素Mab的非常类似的结果。显示于困22、23和24中用于实验的抗体具有约145Kd的分子量且每个抗体分子具有2个硬化素结合位点。详细的MC3T3-E1-BF细胞培养方案在下文描述。试剂和培养基试剂公司目录#cc-MEMGibco-Invitrogen12571-048抗坏血酸SigmaA4544P-甘油磷酸SigmaG6376100XPenStrepGlutamineGibco-Invitrogen10378—016二甲基亚砜(DMSO)SigmaD5879或D2650胎牛血清(FBS)CanseraCS-C08-500(批次tSF50310)或胎牛血清(FBS)TerraCellInt.CS-C08-1000A(批次tSF-20308)制造的ot-MEM通常具有l年的有效期。对于细胞培养使用不超过制造日期后6个月的a-MBM。扩增培养基(cx-MEM/10%FBS/PenStrepGlu)如下制备500ml瓶的FBS进行解冻且通过0.22微米过滤器进行无菌过滤，向1升ot-MEM中加入100mis的这种FBS，随后加入10mlslOOxPenStrepGlutamine,未使用的FBS进行等分且再次冷冻用于以后使用。分化培养基(oc-MEM/10%FBS/PenStrepGlu，+50jug/ml抗坏血酸，+10mMp-甘油砩酸)如下制备100ml分化培养基通过用抗坏血酸和P-甘油砩酸补充100ml扩增培养基如下制备贮存液浓度体积最终浓度(参见下文)抗坏血酸10mg/迈lG.5ml100jag/ml(50ug/ml+50pg/迈l)p-甘油彿酸lM1.0mis10mM分化培养基仅在分化培养基将用于细胞培养的当天通过补充扩增培养基进行制备。分化培养基中抗坏血酸的最终浓度是IOOpg/ml，因为cx-MEM已包含50lig/ml抗坏血酸。抗坏血酸贮存液(10mg/ml)被制备和等分用于冷冻于-sox:。每个等分试样只使用一次(即不再次冷冻)。p-甘油裤酸贮存液(1M)被制备和等分用于冷冻于-20iC。每个等分试样在被丢弃前最多冷冻和解冻5次。用于扩增MC3T3-El-BF细胞的细胞培养。细胞培养在37"C和5%002下进行。为了筛选硬化素中和抗体的目的产生细胞库。细胞库如下制备1瓶冷冻MC3T3-B1-BF细胞通过在37X:水浴中搅动来解冻。解冻的细胞置于50ml管中的10ml扩増培养基(a-MEM/10%FBS/PenStrepGlu)内且轻轻旋转5分钟。细胞随后重悬浮于4mla-MEM/10%FBS/PenStrepGlu中。使用台盼蓝和血球计测定细胞数目后，1x106细胞在1个T175烧瓶中的50mla-MEM/10%FBS/PenStrepGlu培养基中铺板。当这次传代汇合时(大约7天时)，细胞用胰蛋白酶/EDTA(0.05%胰蛋白酵；0.53mMEDTA)进行胰蛋白酶处理，轻轻旋转5分钟且随后重悬浮于5mla-MEM/10%FBS/PenStr印Glu中。使用台盼蓝和血球计测定细胞数目后，细胞以1x1(^细胞在每个T175烧瓶中的50mla-MEM/10%FBS/PenStrepGlu培养基中铺板。在这个点上用于铺板的T175烧瓶的数目取决于下一传代的可用总细胞数目和所需烧瓶数目。过剩细胞在90%FBS/10%DMSO中以卜2xl06活细胞/ml冻结。当这次传代汇合时(约3-4天)，细胞用胰蛋白酶/EDTA(0.05%胰蛋白酶；0.53mMEDTA)进行胰蛋白酶处理，轻轻旋转5分钟且随后重悬浮于5mla-MEM/10%FBS/PenStrepGlu中。使用台盼蓝和血球计测定细胞数目后，细胞以1x10'细胞在每个T175烧瓶中的50mlot-MEM/10%FBS/PenStrepGlu培养基中铺板。在这个点上用于铺板的T175烧瓶的数目取决于下一传代的可用总细胞数目和所需烧瓶数目。过剩细胞在90%FBS/10%DMSO中以1-2x10'活细胞/ml冻结。当这次传代汇合时(约3-4天)，细胞用胰蛋白睐/EDTA(0.05%胰蛋白酶；0.53mMEDTA)进行狭蛋白酶处理，轻轻旋转5分钟且随后重悬浮于5迈1a-MEM/10%FBS/PenStrepGlu中，使用台盼蓝和血球计测定细胞数目后，细胞以1x106细胞在每个1175烧瓶中的50mla-MEM/10%FBS/PenStrepGlu培养基中铺板。在这个点上用于铺板的T175烧瓶的数目取决于下一传代的可用总细胞数目和所需烧瓶数目。过剩细胞在90%FBS/10%DMSO中以l-2xl06活细胞/迈l冻结。当这次传代汇合时(约3-4天)，细胞用胰蛋白酶/EDTA(0.05%胰蛋白酶；0.53mMEDTA)进行胰蛋白酶处理，轻轻旋转5分钟且随后重悬浮于5mloc-MEM/10%FBS/PeiiStrepGlu中。使用台盼蓝和血球计测定细胞数目后，细胞在90%FBS/10%DMSO中以l-2xl06活细胞/ml冻结。这个"最后传代"的冷冻细胞是用于筛选测定法的细胞代。用于MC3T3-E1-BF细胞矿化的细胞培养。细胞培养在37"C和5%(:02下进行。在细胞培养矿化操作时希望最小化温度和％C02波动。这可以通过最小化板在加液时在孵育箱外消耗的时间以及通过最小化细胞培养矿化操作时孵育箱门打开和关闭的次数来达到。在这点上具有专门用于细胞培养矿化的组织培养箱(且因此不会不必要的打开和关闭)可以是有帮助的。如上所述制备的合适数目的"最后传代"瓶通过在37X:水浴中搅动来解冻。解冻的细胞置于50ml管中的10ml扩增培养基(cc-MEM/10。/。FBS/PenStrepGlu)内且轻轻旋转5分钟。细胞随后重悬浮于4mloc-MEM/10%FBS/PenStrepGlu中。通过台盼蓝和血球计测定细胞数目后，2500个细胞在胶原I包被的96孑L板(BectonDickinsonUbware，目录#354407)的每孔200微升扩增培养基中铺板。为了避免矿化板边緣效应，细胞自始至终不在板周围最外面的行/列中铺板。改为向这些最外面的行/列的孔中加入200微升PBS。示例性细胞培养搡作在下列操作中，用于细胞铺板的起始日指定为星期三。如果一周的另一天用作用于细胞铺板的起始日，那么这一天将触发如下文指出的整个过程中去除和添加培养基的日时间表。例如，如果细胞在星期二铺板，那么培养基不应在笫一个星期五和星期六去除和添加，也不应在第二个星期五和星期六去除和添加。由星期二开始时，板将制备用于在最后星期日的钙测定。细胞在星期三以2500个细胞在200Ml扩增培养基中铺板。在星期四所有扩增培养基被去除且加入200Ml分化培养基，在星期五IOOp1培养基被去除且加入100nl新鲜的分化培养基。在星期一IOOn1培养基被去除且加入100pl新鲜的分化培养基。在星期二100jii培养基被去除且加入lOOnl新鲜的分化培养基。在星期三IOOjil培养基被去除且加入100jal新鲜的分化培养基。在星期四IOOnl培养基被去除且加入100jil新鲜的分化培养基。在星期五100M1培养基被去除且加入100pl新鲜的分化培养基。在接下来的星期一板如下制备用于钙测定板用10mMTris，HC1pH7-8洗涤1次。在通风橱中操作，每孔加入200pl0.5NHC1。板随后冷冻于-80X:。就在测量钙之前，板被冷冻-解冻2次，且随后用多通道吸液管吹打用于分散板内含物。随后允许板内含物于41C沉积30分钟，在这个点上取出合适量的上清液用于使用商购可得的钙试剂盒测量钙。示例性和非限制性试剂盒是Calciuffl(CPC)Liquicolor，目录号0150-250，StanbioLaboratory,Boerne，TX。在这种基于细胞的测定法中，硬化素抑制逐渐导致且包括矿物质沉积的系列事件中的一个或多个(即硬化素抑制矿化)。因此，在其中特定细胞培养实验包括硬化素的实验中，从笫一个星期四开始以及其后的每个加液日向培养基中加入重組硬化素，在其中抗硬化素单克隆抗体(Mab)被测试中和硬化素能力的情况下，即通过中和硬化素抑制矿化的能力允许矿化，从第一个星期四开始以及其后的每个加液日向培养基中加入Mab。根据该方案，这如下完成:Mab在分化培养基中与重组硬化素一起于371C预孵育45-60分钟，且随后这种培养基用于给细胞加液。上述是用于MC3T3-E1-BF细胞的12天矿化方案。使用相同试刑和加液方案，我们从RIKEN细胞库(RCB1126，RIKENBioResourceCenter3-1-1Koyadai，Tsukuba-shi,Ibaraki305-0074Japan)获得的原始MC3T3-E1细胞(SudoH，KodamaH-A，AmagaiY，YamamotoS,KasaiS.1983.F/frod//Y*ere/7f/sf/</7a/7dca7c//*/cst/oicfl/^r/fl.JCellBiol96:191-198)需要比MC3T3-E1-BF细胞更长的时间矿化(矿化需要总共20天)。原始MC3T3-E1细胞的矿化被重组硬化素抑制，且这种抑制使用硬化素中和抗体被阻断。实施例9抗硬化素抗体在SCID小鼠的CD4CD45RBHI结肠炎转移模型中保护不受炎症诱导的骨丢失模型概述将CD4+T细胞的CD45RB*亚群注射到C.B-17"/'d小鼠中导致慢性肠炎症，其特征类似于人炎性肠病(IBD)的那些。腹竭和衰弱性疾病在细胞转移后3-5周出现，结肠内有严重的白细胞浸润伴随上皮细胞增生和肉芽肿形成。接受CD4+细胞的相反亚群-表达CD45RB低的那些-的C.B-17sc/(f小鼠没有显示结肠炎，且具有与未注射的sc/i/小鼠不能区别的体重增加。除结肠炎症状之外，CD4+CD45RB*T细胞结肠炎转移模型伴随骨矿物质密度(BMD)减少，被认为主要是通过炎症机制而不是饮食吸收不良造成的(Byrne，F.R.等人，(W54:78-86，2005),结肠炎的诱导和炎症诱导的骨丢失从雌性balb/c小鼠获取脾且通过70Mm细胞过滤网破裂。CD4+群体随后通过4吏用针对B220、MAC-1、CD8和I-A。的抗体用Dynabeads负选择来富集。富集的群体随后用FITC缀合的抗CD4和PE缀合的抗CD45RB染色且通过在Moflo(Dakocytomation)上双色分选分成CD4+CD45RB*和CD4+CD45RB低群体。CD45RB*和CD45RB低群体分别定义为CD4+细胞最亮染色的40%和最暗染色的20%。随后在笫0天将5X105细胞腹膜内注射到C.B-17"W小鼠内，且通过软便或腹泻和体重减轻的出现监控结肠炎的发生。骨矿物质密度测量在研究结束时(第88天)进行。抗硬化素治疗对结肠炎症状和BMD的影响Ab-AIgG从CD4+CD45RB-细胞转移前一天起以10mg/kg皮下给药，且与接受阴性对照抗体101.4(同样以10mg/kg皮下给药)的小鼠比较。其后抗体每周给药一次。接受非病原性CD4+CD45RB低细胞且以10mg/kg101.4给药的小鼠組作为对照进行研究。在研究结束时(第88天)进行骨矿物质密度测量且获取结肠切片用于分析细胞漫润和评估组织学损害。a)对结肠炎症状没有影响一般的结肠炎症状例如体重减轻和炎症细胞浸润到结肠内不受Ab-A治疗的影响。类似地用Ab-A治疗后对结肠的组织学损害没有改善。b)抑制炎症诱导的骨矿物质密度损失。在细胞转移到C.B-17"/d小鼠内后第88天时，测量骨矿物质密度(总BMD、推骨BMD和股骨BMD)。如图25中所示，与接受CD4+CD45RB低非病原性细胞的对照小鼠相比，接受CD4+CD45RB*T细胞和阴性对照抗体101.4的小鼠具有减少的骨矿物质密度。相反，用Ab-A治疗后没有注意到BMD中的减少。总之，BMD的推骨和股骨测量结果在接受CD4+CD45RB*T细胞和用Ab-A治疗的小鼠中明显髙于接受CD4+CD45RB*T细胞和用101.4治疗的小鼠(通过Bonferroni多重比较检验的P<0.001)。实施例10针对人硬化素的抗硬化素抗体的基于KinExA的亲和力测定(KD)针对人硬化素的几种抗硬化素抗体的亲和力通过溶液平衡结合分析使用KinExA3000(SapidyneInstrumentsInc.,Boise，ID)进4亍评估，对于这些测量，Reacti-Gel6x珠(Pierce,Rockford，IL)在50mMNa2C03，pH9.6中用40pg/ml人硬化素于4X:进行预包被过夜。珠随后在1MTris-HCl，pH7.5中用1mg/mlBSA于4X:封闭2小时。10pM、30pM或100pM抗体与浓度为0.1pM-lnM的各种浓度人硬化素混合，且在PBS中用0.1mg/迈lBSA和0.005%P20于室温平衡超过8小时，混合物随后流经人硬化素包被的珠。珠结合的抗硬化素抗体的量使用分别对于小鼠或人抗体样品的荧光Cy5标记的山羊抗小鼠IgG或荧光Cy5标记的山羊抗人IgG抗体(JacksonImmunoResearch,WestGrove,PA)进行定量。测量的荧光信号的量与处于平衡的每种反应混合物中的游离抗硬化素抗体浓度成比例。解离平衡常数(KD)使用KinExAPro软件中提供的n曲线单位点同种结合模型由竟争曲线的非线性回归获得。关于所选抗体的KinExA测定法结果概括于下表中。<table>tableseeoriginaldocumentpage172</column></row><table>实施例11用于测定人源化抗硬化素抗体对于人硬化素的亲和力的Biacore方法BIAcore技术实时且无需标记地监控生物分子之间的结合，称为配体的相互作用物之一直接固定或捕获在固定表面上，而称为分析物的另一种相互作用物在溶液中流经捕获表面。当分析物与配体结合以在表面上形成复合物时，传感器检测传感器表面上的物质的变化。这对应结合过程。当务析物用緩冲液替换时监控解离过程。在亲和力BIAcore测定法中，配体是抗硬化素抗体并且分析物是硬化素。仪器Biacore3000，BiacoreAB,Uppsala,Sweden传感器芯片CM5(研究級)目录号BR—1001-14，BiacoreAB，Uppsala,Sweden。芯片ji&存于4匸。BIAnormalising溶液70%(w/w)丙三醇。PartofBIAmaintenanceKit目录号BR-1002-51，BiacoreAB，Uppsala，Sweden。BIAmaintenance试剂盒贮存于4匸。胺偶联试剂盒目录号BR-1000-50，BiacoreAB，Uppsala,Sweden.乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)。在蒸镏水中制备成75mg/mL且以200uL的等分试样贮存于-70*C。N-轻基琥珀酰亚胺(NHS)。在蒸馏水中制备成11.5mg/mL且以200的等分试样贮存于-70n。1M乙醇胺盐酸盐-NaOHpH8.5。以200pL的等分试样贮存于-70t:。緩沖液用于固定捕获抗体的运行緩沖液HBS-EP(0.01MHEPESpH7.4，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性剂P20).目录号BR-1001-88,BiacoreAB，Uppsala,Sweden。緩冲液贮存于4t:。固定緩冲液乙酸盐5.0(10mM乙酸钠pH5.0).目录号BR-1003-51,BiacoreAB，Uppsala,Sweden,緩冲液贮存于4TC。关于结合测定法的运行緩沖液含1mg/fflL的CM-葡聚糖(目录号27560，FlukaBioChemika,Buchs，Switzerland)的HBS-EP(0.01MHEPESpH7.4，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性刑P20,目录号BR-1001-88,BiacoreAB,Uppsala,Sweden)。緩冲液^存于4x:。配体捕获AffinipureF(ab，)2片段山羊抗人IgG，Fc片段特异性。JacksonImmunoResearchInc(Pennsylvania,USA)目录号'.109-006-098。试剂贮存于4C。配体人源化抗人硬化素抗体Ab5、Abl4和Ab20。分析物重组人硬化素。等分试样贮存于-70X:且对于每次测定法解冻1次。再生溶液40mMHC1通过用蒸镏水稀释由11.6Mj9i存液(BDH，Poole，England.目录号101254H)制备。5mMNaOH通过用蒸镭水稀释由50mM)3i存液制备。目录号BR-1003-58，BiacoreAB，Uppsala,Sweden。测定方法测定形式是通过固定的抗人IgG-Fc捕获抗硬化素抗体随后在捕获表面上滴定硬化素。操作的例子在下文给出BIA(BiamolecularInteractionAnalysis)使用BIAcore3000(BIAcoreAB)进行。AfHnipureF(ab，)2片段山羊抗人IgG(Fc片段特异性)(JacksonImmunoResearch)经由胺偶联化学在CM5传感器芯片上固定至《4000共振单位(RU)的捕获水平。包含1mg/mLCM-葡聚糖的HBS-EP緩冲液(10mMHEPESpH7.4，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性剂P20，BIAcoreAB)用作运行緩冲液，而流速为10Ml/分钟。以5pg/迈L注射的10iul抗硬化素抗体用于被固定的抗人IgG-Fc捕获。抗体捕获水平一般为100-200RU。各种浓度的硬化素以30ML/分钟的流速在捕获的抗硬化素抗体上滴定。表面通过以10yL/分钟的流速注射2次10jiL的40mMHCl，随后为注射5ML的5mMNaOH得到再生。扣除背景的结合曲线使用BIAevaluation软件(版本3.2)根据标准程序进行分析。动力学参数由拟合算法来测定。动力学数据和计算的解离常数在表2中给出。表2:抗硬化素抗体对于硬化素的亲和力<table>tableseeoriginaldocumentpage175</column></row><table>实施例12抗硬化素单克隆抗体在短尾猴(cynomolgusmonkey)中的体内测试33只大约3-5岁大的雌性短尾猴(食蟹猴(他cscs/fl"/c/ar/s))在这项2个月的研究中4吏用。该研究包含11个组組1:媒介物(N-4)组2:Ab-23(N=2，剂量3mg/kg)組3:Ab-23(N=3，剂量10mg/kg)组4:Ab-23(N-3，剂量30mg/kg)組5:Ab-5(N-3，剂量3mg/kg)組6:Ab-5(N3，剂量10迈g/kg)组7:Ab-5(N=3，剂量30mg/kg)组8:Ab-14(N-3，剂量3mg/kg)组9:Ab-14(N=3，剂量10mg/kg)组10:Ab-14(N-3，剂量30mg/kg)组ll:甲状旁腺激素(l-34)[PTH(l-34)](Ns3，刑量10ug/kg)所有给药都是皮下的。PTH(1-34)每天给药，单克隆抗体(Mab)给药2次(第一次剂量在研究开始时且笫二次剂量在一个月的时间点时).为了评估骨参数(例如骨矿物质密度)，PQCT(外周定量计算机断层摄影术)和DXA(双能X射线骨吸收测量仪)扫描在研究开始前(以获得基线值)和在一个月后(在第二次Mab给药前)以及最后在研究结束时(2个月的时间点)进行，在该点上猴进行尸检用于进一步分析(例如组织形态测定分析)。动物进行荧光染料标记(第14、24、47和57天)用于动态组织形态测定。在研究时的各个时间点上收集血清[第l天给药前(第一次Mab给药当天)、第1天给药后12小时、第2天、第3天、第5天、第7天、第14天、第21天、笫28天、第29天给药后12小时(第29天是笫二次和最后一次Mab给药当天)、第30天、第31天、第33天、第35天、第42天、第49天和第56天]。3种骨相关血清生物标记使用商购可得试刑盒进行测量骨钾蛋白(0C)(DSLOsteocalcinRadioimmunoassayKit;DiagnosticSystemsLaboratories,Inc.，Webster,TX,USA)I型前胶原N末端前肽(P1NP)(P1NPRadioimmunoassayKit;OrionDiagnostica，Espoo，Finland)I型胶原al链的C端肽片段(sCTXI)(SerumCrossLapsELISA;NordicBioscienceDiagnosticsA/S，Herlev，Denmark).pQCT和DXA扫描在众多骨骼位点(包括胫骨干銜端和骨干、桡骨干骺端和骨干、股骨颈、腰推)产生关于各种骨参数(包括骨矿物质密度(BMD)和骨矿物质含量)的数据。与媒介物組比较，在对于每种Mab的某些时间点和剂量上的某些参数中，这种骨数据(对于每个动物相对于基线的百分比变化)和合成代谢(0C，P1NP)血清生物标记数据(对于每个动物相对于基线的百分比变化)分析显示统计上显著的增加。这种骨参数数据、血清生物标记数据、以及组织形态测定数据指出3种Mab(Ab-23、Ab-5和Ab-14)中的每一种在短尾猴中都能够中和硬化素。这种活性对于Ab-23和Ab-5最强，特别是在最高剂量(30迈g/kg)时，伴随骨形成(合成作用)以及骨净增加(例如BMD)中的显著增加。骨参数和合成代谢组织形态测定参数中统计上显著的增加同样在阳性对照组(PTH(1-34))中发现。血清骨形成标记(P1NP,骨钙蛋白)在各个时间点和剂量上是增加的(与媒介物(VEH)比较p〈0.05)，但特別是对于Ab-23和Ab-5在30mg/kg组中。组织形态测定分析显示在Ab-23和Ab-5的较髙剂量时腰推和胫骨近端的松质骨成骨速度(高达5倍的增加)以及在股骨中段内皮质表面(endocorticalsurface)(高达10倍的增加)中的显箸增加(与VEH比较p<0.05)。对于高刑量的Ab-23和Ab-5在腰推中小梁厚度增加(>60%，与VEH比较p〈0.05)。在研究结束时(2个月)，作为相对于基线的百分比变化的面积BMD在股骨颈、桡骨超远端(Ab-23，30迈g/kg)和腰推(Ab-5，30mg/kg)处增加(与VEH比较p〈0，05)。在腰推处面积BMD中的增加伴随推骨强度中的增加(对于Ab-23，30mg/kg，推骨最大栽量增加97%;与VEH比较p<0.05);在Mab给药前关于腰部面积BMD的基线值在所有组中是统计上相似的。总之，在短尾猴中硬化素中和Mab的短期施用部分导致骨形成、BMD和推骨强度的增加。尽管为了举例说明的目的已在本文中描述了本发明的具体实施方案，但前述内容无需背离本发明的精神和范围即可进行各种修饰.因此，本发明除了如附加权利要求外不受限制。本文公开的所有出版物、公开的专利申请和专利文件在此引入作为参考。权利要求1.一种硬化素结合剂，其交叉阻断至少一种下列抗体与硬化素的结合Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-1、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-10、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24。2.权利要求1的硬化素结合剂，其中所述硬化素结合剂被至少一种下列抗体交叉阻断与硬化素的结合.'Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2,Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-ll、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23和Ab-24。3.—种硬化素结合剂，其被至少一种下列抗体交叉阻断与硬化素的结合Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22和Ab-24。4.权利要求1或3的硬化素结合剂，其中所述硬化素结合刑交叉阻断或被交叉阻断的能力是在Biacore测定法中进行检测的。5.权利要求1或3的硬化素结合刑，其中所迷硬化素结合刑交叉阻断或被交叉阻断的能力是在BLISA测定法中进行检测的。6.权利要求1或3的硬化素结合刑，其中所迷硬化素结合剂是抗体。7.权利要求1或3的硬化素结合刑，其中所述硬化素结合剂可以增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质密度、骨矿物质含量、骨量、骨质量和骨强度中的至少一种。8.权利要求1或3的硬化素结合剂，其中所迷硬化素结合剂在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应。9.一种硬化素结合刑，其中所述硬化素结合刑在基于细胞的矿化测定法中可以阻断硬化素的抑制效应。10.—种硬化素结合剂，其与Loop2表位结合。11.一种硬化素结合剂，其与T20.6表位结合。12.—种硬化素结合剂，其与"T20.6衍生物1(胱氨酸结+4臂)"表位结合。13.权利要求7-12中任何一项的硬化素结合剂，其中所迷硬化素结合剂是抗体。14.一种硬化素结合剂，其包含与选自下列SEQIDN0s的CDR具有至少75%同-一性的至少-一个CDR序列:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、78、79、80、81、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、351、352、353、358、359和360.15.权利要求14的硬化素结合刑，其包含至少2个所述CDR。16.权利要求14的硬化素结合剂，其包含6个所述CDR。17.根据权利要求14的硬化素结合刑，其中所述同一性百分比是85%,18.根据权利要求14的硬化素结合剂，其中所述同一性百分比是95%,19.根据权利要求14的硬化素结合刑，其包含a)SEQIDN0s:39、40和41的CDR序列;b)SEQIDN0s:42、43和44的CDR序列;c)SEQIDN0s:45、46和47的CDR序列;d)SEQIDN0s:48、49和50的CDR序列；e)SEQIDNOs:51、52和53的CDR序列;f)SEQIDNOs:54、55和56的CDR序列;g)SEQIDNOs:57、58和59的CDR序列;h)SEQIDNOs:60、61和62的CDR序列;i)SEQIDNOs:275、276和277的CDR序列；j)SEQIDNOs:287、288和289的CDR序列;k)SEQIDNOs:278、279和280的CDR序列;1)SEQIDNOs:290、291和292的CDR序列;m)SEQIDNOs:78、79和80的CDR序列；n)SEQIDNOs:245、246和247的CDR序列;o)SEQIDNOs:81、99和100的CDR序列;p)SEQIDNOs:248、249和250的CDR序列q)SEQIDNOs:101、102和103的CDR序列;r)SEQIDNOs:251、252和253的CDR序列;s)SEQIDNOs:104、105和106的CDR序列t)SEQIDNOs:254、255和256的CDR序列；u)SEQIDNOs:107、108和109的CDR序列v)SEQIDNOs:257、258和259的CDR序列w)SEQIDNOs:110、111和112的CDR序列;x)SEQIDNOs:260、261和262的CDR序列;y)SBQIDNOs:281、282和283的CDR序列;z)SEQIDNOs:293、294和295的CDR序列;aa)SEQIDNOs:113、114和115的CDR序列bb)SEQIDNOs:263、264和265的CDR序列cc)SEQIDNOs:284、285和286的CDR序列dd)SBQIDNOs:296、297和298的CDR序列ee)SEQIDNOs:116、237和238的CDR序列ff)SEQIDNOs:266、267和268的CDR序列gg)SEQIDNOs:239、240和241的CDR序列;hh)SEQIDNOs:269、270和271的CDR序列;ii)SEQIDNOs:272、273和274的CDR序列;jj)SBQIDNOs:242、243和244的CDR序列;kk)SEQIDNOs:351、352和353的CDR序列；或11)SEQIDNOs:358、359和360的CDR序列。20.根据权利要求14的硬化素结合剂，其包含a)SEQIDNOs:54、55和56的CDR序列以及SEQIDNOs:51、52和53的CDR序列;b)SEQIDNOs:60、61和62的CDR序列以及SEQIDNOs:57、58和59的CDR序列；c)SEQIDNOs:48、49和50的CDR序列以及SEQIDNOs:45、46和47的CDR序列；d)SEQIDNOs:42、43和44的CDR序列以及SEQIDNOs:39、40和41的CDR序列；e)SEQIDNOs:275、276和277的CDR序列以及SEQIDNOs:287、288和289的CDR序列;f)SEQIDNOs:278、279和280的CDR序列以及SEQIDNOs:290、291和292的CDR序列;g)SEQIDNOs:78、79和80的CDR序列以及SEQIDNOs:245、246和247的CDR序列;h)SEQIDNOs:81、99和100的CDR序列以及SEQIDNOs:248、249和250的CDR序列；i)SBQIDNOs:101、102和103的CDR序列以及SEQIDNOs:251、252和253的CDR序列;j)犯QIDNOs:104、105和106的CDR序列以及SEQIDNOs:254、255和256的CDR序列;k)SEQIDNOs:107、108和109的CDR序列以及SEQIDNOs:257、258和259的CDR序列;)SEQIDN0s:110、111和112的CDR序列以及SEQIDNOs:260、261和262的CDR序列；m)SEQIDNOs:281、282和283的CDR序列以及SEQIDNOs:293、294和295的CDR序列；n)SEQIDNOs:113、114和115的CDR序列以及SEQIDNOs:263、264和265的CDR序列;o)SEQIDNOs:284、285和286的CDR序列以及SEQIDNOs:296、297和298的CDR序列;p)SEQIDNOs:116、237和238的CDR序列以及SEQIDNOs:266、267和268的CDR序列;q)SEQIDNOs:239、240和241的CDR序列以及SEQIDNOs:269、270和271的CDR序列；r)SEQIDNOs:242、243和244的CDR序列以及SEQIDNOs:272、273和274的CDR序列;或s)SEQIDNOs:351、352和353的CDR序列以及SEQIDNOs:358、359和360的CDR序列。21.权利要求14-20中任何一项的硬化素结合剂，其中所述硬化素结合刑是抗体。22.—种药物組合物，其包含根据权利要求1-12和14-20中任何一项的硬化素结合剂。23.权利要求22的组合物，其中所述硬化素结合剂是抗体。24.—种硬化素结合刑，其包含与选自下列SEQIDNOs的CDR具有至少75。/。同一性的至少一个CDR序列245、246、247、78、79、80、25、270、271、239、240和241。25.—种硬化素结合刑，其包含与选自CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-U的CDR具有至少75%同一性的至少一个CDR序列，其中CDR-Hl具有SEQIDNO:245或SEQIDNO:269中给出的序列，CDR-H2具有SEQIDNO:246或SEQIDNO:270中给出的序列，CDR-H3具有SEQIDNO:247或SBQIDNO:271中给出的序列，CDR-L1具有SBQIDNO:78或SEQIDNO:239中给出的序列，CDR-L2具有SEQIDNO:79或SEQIDNO:240中给出的序列，和CDR-L3具有SEQIDNO:80或SEQIDNO241中给出的序列。26.根据权利要求25的硬化素结合刑，其包含3个CDR，即CDR-HI、CDR-H2和CDR-H3,其中(a)CDR-H1是SEQIDNO:245，CDR-H2是SEQIDNO:246和CDR-H3是SEQIDNO:247或(b)CDR-H1是SEQIDNO:269，CDR-H2是SEQIDNO:270和CDR-H3是SEQIDNO:271。27.根据权利要求25的硬化素结合剂，其包含3个CDR，即CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其中(a)CDRL1是SBQIDNO:78，CDR-L2是SEQIDNO:79和CDR-L3是SEQIDNO:80;或(b)CDRL1是SEQIDNO:239，CDR-L2是SEQIDNO:240和CDR-L3是SEQIDNO:241。28.根据权利要求25的硬化素结合刑，其包含6个CDR，即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其中(a)CDR-H1是SEQIDNO:245，CDR-H2是SEQIDNO:246,CDR-H3是SEQIDNO:247，CDR-L1是SEQIDNO:78，CDR-L2是SEQIDNO:79和CDR-L3是SEQIDNO:80;或(b)CDR-H1是SEQIDNO:269，CDR-H2是SEQIDNO:270，CDR-H3是SBQIDNO:271，CDR-LI是SEQIDNO:239，CDR-L2是SEQIDNO:240和CDR-L3是SEQIDNO:241.29.根据权利要求24-48中任何一項的硬化素结合刑，其是抗体。30.根据权利要求29的硬化素结合刑，其包舍重链，其中所述重链包含与SBQIDNO:333;SEQIDNO:378;SBQIDNO:327;SBQIDNO:329;或SEQIDNO:366中给出的序列具有至少85%同一性的多肽，31.根振权利要求29的硬化素结合剂，其包含轻链，其中所迷轻链包含与SEQIDNO:332;SEQIDNO:376;SEQIDNO:314;SEQIDNO:328;或SEQIDNO:364中给出的序列具有至少85%同一性的多肽。32.根据权利要求29的硬化素结合剂，其包含重链和轻链，其中(a)所述重链包含与SEQIDNO:333中给出的序列具有至少85%同一性的多肽并且所述轻链包含与SEQIDNO:332中给出的序列具有至少85%同一性的多肽；或(b)所述重链包含与SEQIDNO:378中给出的序列具有至少85%同一性的多肽并且所述轻链包含与SEQIDNO:376中给出的序列具有至少85%同一性的多肽；或(c)所述重链包含与SEQIDNO:327中给出的序列具有至少85%同一性的多肽并且所述轻链包含与SEQIDNO:314中给出的序列具有至少85%同一性的多肽；或(d)所述重链包含与SEQIDNO:329中给出的序列具有至少85%同一性的多肽并且所述轻链包含与SEQIDNO:328中给出的序列具有至少85%同一性的多肽；或(e)所述重链包含与SEQIDNO:366中给出的序列具有至少85%同一性的多肽并且所述轻链包含与SEQIDNO:364中给出的序列具有至少85%同一性的多肽。33.根据权利要求24-32中任何一项的硬化素结合刑，其包舍轻链和/或重链恒定区。34.根据权利要求33的硬化素结合剂，其包含IgG4或IgG2恒定区。35.—种硬化素结合刑，其具有包含CDRH1、H2和H3且包含具有SEQIDNO:137中提供的序列的多肽或其变体的重链，其中所迷CDR分别与SEQIDNO:245、246和247至少75%同一；以及包含CDRLl、L2和L3且包含具有SEQIDNO:133中提供的序列的多肽或其变体的轻链，其中所迷CDR分别与SEQIDNO:78、79和80至少75%同一。36.—种硬化素结合刑，其具有包含CDRH1、H2和H3且包含具有SEQIDNO:145或392中提供的序列的多肽或其变体的重链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:245、246和247至少75%同一；以及包含CDRLl、L2和L3且包含具有SEQIDNO:141中提供的序列的多肽或其变体的轻链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:78、79和80至少75%同一。37.—种硬化素结合刑，其具有包含CDRHl、H2和H3且包含具有SEQIDNO:335中提供的序列的多肽或其变体的重链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:269、270和271至少75%同一；以及包含CDRLl、L2和L3且包含具有SBQIDNO:334中提供的序列的多肽或其变体的轻链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:239、240和241至少75%同一。38.—种硬化素结合剂，其具有包含CDRHl、H2和H3且包含具有SEQIDNO:331中提供的序列的多肽或其变体的重链，其中所迷CDR分别与SEQIDN0:269、270和271至少75%同一；以及包含CDRLl、L2和L3且包含具有SEQIDNO:330中提供的序列的多肽或其变体的轻链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:239、240和241至少75%同一。39.—种硬化素结合剂，其具有包含CDRHl、H2和H3且包含具有SEQIDNO:345或396中提供的序列的多肽或其变体的重链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:269、270和271至少75%同一；以及包含CDRLl、L2和L3且包含具有SEQIDNO:341中提供的序列的多肽或其变体的轻链，其中所述CDR分别与SEQIDNO:239、240和241至少75%同一。40.—种硬化素结合刑，其具有包含具有SEQIDNO:137中提供的序列的多肽的重链，以及包含具有SBQIDNO:133中提供的序列的多舦的轻链。41.一种硬化素结合刑，其具有包含具有SBQIDNO:145或392中提供的序列的多肽的重链，以及包含具有SBQIDNO:l"中提供的序列的多肽的轻链。42.—种硬化素结合刑，其具有包含具有SEQIDNO:335中提供的序列的多肽的重链，以及包含具有SEQIDN0:334中提供的序列的多肽的轻链。43.一种硬化素结合剂，其具有包含具有SEQIDNO:331中提供的序列的多肽的重链，以及包含具有SEQIDNO:330中提供的序列的多肽的轻链。44.一种硬化素结合剂，其具有包含具有SEQIDNO:345或396中提供的序列的多肽的重链，以及包含具有SEQIDNO:341中提供的序列的多肽的轻链。45.根据权利要求24-44中任何一项的硬化素结合刑，其与一种或多种效应分子或报道分子连接。46.—种分离的多核苷酸序列，其编码根据权利要求24-44中任何一项的硬化素结合剂。47.—种克隆或表达栽体，其包含根据权利要求46的一种或多种多核苷酸序列。48.根据权利要求47的栽体，其中所述栽体包含SEQIDNO:134、136、138、140、142、144、146、148、308、310、312、342、344、346、348、349、365、367、373、375和379中给出的至少一种序列。49.一种宿主细胞，其包含根据权利要求47或权利要求48的一种或多种克隆或表达栽体。50.—种用于生产权利要求24—44中任何一项的硬化素结合刑的方法，其包括培养权利要求49的宿主细胞和分离所述硬化素结合刑。51.—种药物组合物，其包含与一种或多种药学可接受的赋形剂、稀释刑或栽体组合的根据权利要求24-45中任何一项的硬化素结合剂。52.根椐权利要求51的药物組合物，其还包含其他活性成分。53.根据权利要求24-45中任何一項的硬化素结合刑或根据权利要求51或权利要求52的药物組合物，用于治疗或预防由硬化素介导或与硬化素水平増加相关的病理性病症。54.—种用于治疗哺乳动物受试者中的骨相关病症的方法，其包括给需要此类治疗的受试者提供权利要求22的药物组合物。55.—种用于治疗哺乳动物受试者中的骨相关病症的方法，其包括给需要此类治疗的受试者提供权利要求23的药物组合物。56.—种用于治疗哺乳动物受试者中的骨相关病症的方法，其包括给需要此类治疗的受试者提供权利要求51的药物组合物。57.根据权利要求54的方法，其中所述骨相关病症是至少一种下列病症软骨发育不全，颅骨锁骨发育不良，内生软骨瘤病，纤维性结构不良，高歇病，低磷酸盐血症佝偻病，马方综合征，多发性遗传性外生骨疚，神经纤维瘤病，成骨不全，骨硬化症，全身脆弱性骨硬化，硬化损伤，假关节，化脓性骨髓炎，牙周病，抗癫痫药诱导的骨丢失，原发性和继发性甲状旁腺功能亢进症，家族性甲状旁腺功能亢进综合征，失重诱导的骨丟失，男性中的骨质疏松症，绝经后的骨丟失，骨关节炎，肾性骨营养不良，骨浸润性病症，口部骨丢失，颌骨坏死，青少年佩吉特病，肢骨紋状肥厚，代谢性骨病，肥大细胞增多症，镰状细胞性贫血/病，器官移植相关性骨丢失，肾移植相关性骨丟失，全身性红斑狼疮，强直性脊柱炎，癫痫，青少年关节炎，地中海贫血，粘多糖贮积病，法布里病，特纳综合征，唐氏综合征，克兰费尔特综合征，麻风病，佩特兹病，青少年特发性脊柱侧凸，婴儿期发病性多系统炎性疾病，温彻斯特综合征，门克斯病，威尔逊病，局部缺血性骨病(例如累-卡-佩病、局限性游走性骨质疏松)，贫血状态，由类固醇引起的病症，糖皮质激素诱导的骨丢失，肝素诱导的骨丢失，骨髓病症，坏血病，营养不良，钓缺乏，骨质疏松症，骨量减少，酒精中毒，慢性肝病，绝经后状态，慢性炎性病症，类风湿性关节炎，炎性肠病，溃疡性结肠炎，炎性结肠炎，克罗恩病，月经过少，无月经，妊娠，糖尿病，甲状腺功能亢进，曱状腺病症，曱状旁腺病症，库欣病，肢端肥大症，性腺机能减退，制动或废用，反射交感性营养不良综合征，局限性骨质疏松，骨软化症，与关节置换术相关的骨丢失，HIV相关的骨丢失，与生长激素缺少相关的骨丢失，与嚢性纤维化相关的骨丢失，化学治疗相关性骨丟失，肿瘤诱导的骨丢失，癌症相关的骨丢失，激素消融性骨丢失(hormoneablativeboneloss)，多发性骨髓瘤，药物诱导的骨丢失，神经性厌食症，疾病相关的面骨丟失，疾病相关的颅骨丢失，疾病相关的颌骨丢失，疾病相关的头盖骨丢失，与衰老相关的骨丢失，与衰老相关的面骨丢失，与衰老相关的颅骨丢失，与衰老相关的颌骨丢失，和与衰老相关的头盖骨丢失，以及与太空旅行相关的骨丢失。58.根据权利要求55的方法，其中所述骨相关病症是至少一种下列病症软骨发育不全，颅骨锁骨发育不良，内生软骨瘤病，纤维性结构不良，高歇病，低磷酸盐血症佝偻病，马方综合征，多发性遗传性外生骨疣，神经纤维瘤病，成骨不全，骨硬化症，全身脆弱性骨硬化，硬化损伤，假关节，化脓性骨髓炎，牙周病，抗癫痫药诱导的骨丢失，原发性和继发性甲状旁腺功能亢进症，家族性甲状旁腺功能亢进综合征，失重诱导的骨丢失，男性中的骨质疏松症，绝经后的骨丟失，骨关节炎，肾性骨营养不良，骨浸润性病症，口部骨丢失，颌骨坏死，青少年佩吉特病，肢骨紋状肥厚，代谢性骨病，肥大细胞增多症，镰状细胞性贫血/病，器官移植相关性骨丟失，肾移植相关性骨丟失，全身性红斑狼疮，强直性脊柱炎，癫痫，青少年关节炎，地中海贫血，粘多糖贮积病，法布里病，特纳综合征，唐综合征，克兰费尔特综合征，麻风病，佩特兹病，青少年特发性脊柱侧凸，嬰儿期发病性多系统炎性疾病，温彻斯特综合征，门克斯病，威尔逊病，局部缺血性骨病(例如累-卡-佩病、局限性游走性骨质疏松)，贫血状态，由类固醇引起的病症，糖皮质激素诱导的骨丢失，肝素诱导的骨丢失，骨髓病症，坏血病，营养不良，钧缺乏，骨质疏松症，骨量减少，酒精中毒，慢性肝病，绝经后状态，慢性炎性病症，类风湿性关节炎，炎性肠病，溃疡性结肠炎，炎性结肠炎，克罗恩病，月经过少，无月经，妊娠，糖尿病，甲状腺功能亢进，甲状腺病症，甲状旁腺病症，库欣病，肢端肥大症，性腺机能减退，制动或废用，反射交感性营养不良综合征，局限性骨质疏松，骨软化症，与关节置换术相关的骨丢失，HIV相关的骨丢失，与生长激素缺少相关的骨丢失，与嚢性纤维化相关的骨丢失，化学治疗相关性骨丢失，肿瘤诱导的骨丢失，癌症相关的骨丢失，激素消融性骨丢失，多发性骨髓瘤，药物诱导的骨丢失，神经性厌食症，疾病相关的面骨丟失，疾病相关的颅骨丟失，疾病相关的颌骨丢失，疾病相关的头盖骨丢失，与衰老相关的骨丢失，与衰老相关的面骨丢失，与衰老相关的颅骨丢失，与衰老相关的颌骨丢失，与衰老相关的头盖骨丟失，以及与太空旅行相关的骨丟失。59.根据权利要求56的方法，其中所述骨相关病症是至少一种下列病症软骨发育不全，颅骨锁骨发育不良，内生软骨瘤病，纤维性结构不良，高歇病，低磷酸盐血症佝偻病，马方综合征，多发性遗传性外生骨疣，神经纤维瘤病，成骨不全，骨硬化症，全身脆弱性骨硬化，硬化损伤，假关节，化脓性骨髓炎，牙周病，抗癫痫药诱导的骨丢失，原发性和继发性甲状旁腺功能亢进症，家族性甲状旁腺功能亢进综合征，失重诱导的骨丢失，男性中的骨质疏松症，绝经后的骨丢失，骨关节炎，肾性骨营养不良，骨浸润性病症，口部骨丢失，颌骨坏死，青少年佩吉特病，肢骨紋状肥厚，代谢性骨病，肥大细胞增多症，镰状细胞性贫血/病，器官移植相关性骨丢失，肾移植相关性骨丢失，全身性红斑狼疮，强直性脊柱炎，癫痫，青少年关节炎，地中海贫血，粘多糖贮积病，法布里病，特纳综合征，唐氏综合征，克兰费尔特综合征，麻风病，佩特兹病，青少年特发性脊柱侧凸，婴儿期发病性多系统炎性疾病，温彻斯特综合征，门克斯病，威尔逊病，局部缺血性骨病(例如累-卡-佩病、局限性游走性骨质疏松)，贫血状态，由类固醇引起的病症，糖皮质激素诱导的骨丢失，肝素诱导的骨丢失，骨髓病症，坏血病，营养不良，钓缺乏，骨质疏松症，骨量减少，酒精中毒，慢性肝病，绝经后状态，慢性炎性病症，类风湿性关节炎，炎性肠病，溃疡性结肠炎，炎性结肠炎，克罗恩病，月经过少，无月经，妊娠，糖尿病，甲状腺功能亢进，甲状腺病症，甲状旁腺病症，库欣病，肢端肥大症，性腺机能减退，制动或废用，反射交感性营养不良综合征，局限性骨质疏松，骨软化症，与关节置换术相关的骨丢失，HIV相关的骨丢失，与生长激素缺少相关的骨丢失，与囊性纤维化相关的骨丢失，化学治疗相关性骨丢失，肿瘤诱导的骨丢失，癌症相关的骨丢失，激素消融性骨丢失，多发性骨撖痗，药物诱导的骨丢失，神经性厌食症，疾病相关的面骨丢失，疾病相关的烦骨丢失，疾病相关的领骨丟失，疾病相关的头盖骨丟失，与衰老相关的骨丢失，与衰老相关的面骨丟失，与衰老相关的颅骨丢失，与衰老相关的颌骨丢失，与衮老相关的头盖骨丢失，以及与太空旅行相关的骨丢失。60.—种增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质含量、骨量、骨矿物质密度、骨质量和骨强度中的至少一种的方法，其包括给所述哺乳动物施用杈利要求22的药物組合物。61.—种增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质含量、骨量、骨矿物质密度、骨质量和骨强度中的至少一种的方法，其包括给所述哺乳动物施用权利要求23的药物組合物。62.—种增加哺乳动物中的骨形成、骨矿物质含量、骨量、骨矿物质密度、骨质量和骨强度中的至少一种的方法，其包括给所述哺乳动物施用权利要求51的药物組合物，63.—种改善经历一种或多种下列手术的哺乳动物中的结果的方法矫形术，牙科手术，植入手术，关节置换术，骨移植术，骨美容手术和骨修复例如骨折愈合、骨不连愈合、延迟的连接愈合和面部重建，所迷方法包括在所迷採作、置换、移植、手术或修复之前、之时和/或之后给所述哺乳动物施用权利要求22的葯物組合物。64.—种改善经历一种或多种下列手术的哺乳动物中的结果的方法矫形术，牙科手术，植入手术，关节置换术，骨移植术，骨美容手术和骨修复例如骨折愈合、骨不连愈合、延迟的连接愈合和面部重建，所逸方法包括在所迷採作、置換、移植、手术或修复之前、之时和/或之后给所迷,乳动物施用权利要求"的药物组合物.65.—种改善经历一种或多种下列手术的喷乳动物中的结果的方法矫形术，牙科手术，植入手术，关节置換术，骨移植术，骨美容手术和骨修复例如骨折愈合、骨不连愈合、延迟的连接愈合和面部重建，所迷方法包括在所述操作、置换、移植、手术或修复之前、之时和/或之后给所述哺乳动物施用权利要求51的药物组合物。66.—种抗体，其中所述抗体是Ab-A、Ab-B、Ab-C、Ab-D、Ab-l、Ab-2、Ab-3、Ab-4、Ab-5、Ab-6、Ab-7、Ab-8、Ab-9、Ab-lO、Ab-11、Ab-12、Ab-13、Ab-14、Ab-15、Ab-16、Ab-17、Ab-18、Ab-19、Ab-20、Ab-21、Ab-22、Ab-23或Ab-24。67.—种诊断试刑盒，其包含根据权利要求1、3、9-12和14-20中任何一项的硬化素结合刑。68.—种诊断试刑盒，其包含根据权利要求6的抗体。69.—种诊断试剂盒，其包含根据权利要求21的抗体.70.—种诊断试刑盒，其包含根据权利要求29的抗体。71.—种多肽:，其包含至少一种下列SEQIDNos:39、40、,41、42、43、44、45、46，,47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、78、79、80、81、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、351、352、353、358、359和360。72.根据权利要求71的多肽，其与Fc、PBG、白蛋白和转铁蛋白中的至少一种綴合。全文摘要提供了与sclerostin蛋白质表位，以及sclerostin结合剂，例如能够与sclerostin结合的抗体相关的组合物和方法。文档编号C07K16/18GK101287756SQ200680024330公开日2008年10月15日申请日期2006年4月28日优先权日2005年5月3日发明者A·G·温特斯,A·J·亨利,A·劳森,A·波普尔韦尔,C·帕斯蒂,D·温克勒,H·S·鲁,J·莱瑟姆,K·S·霍夫曼,K·格雷厄姆,M·K·罗宾森,W·沈申请人:安进公司;Ucb医药有限公司