专利名称：金黄色葡萄球菌粘附素功能肽及其编码序列的制作方法
技术领域：
本发明属于兽医学领域，具体地说，本发明涉及新的编码牛源金黄色葡萄球菌粘附 素功能肽的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和功能多 肽的可能用途和制备。
背景技术：
奶牛乳腺炎(Mastitis)是造成奶牛业生产效率低、成本高的主要原因，全国奶牛 每年因乳腺炎造成的损失达100多亿元。目前己证明引发奶牛乳腺炎的微生物约有150 多种，其中金黄色葡萄球菌感染引发的乳腺炎约占30. 6%—41. 7%。金黄色葡萄球菌感染 破坏乳腺组织，导致受感染乳腺泌乳功能下降或丧失，它还释放毒素导致奶牛急性死亡； 其次，金黄色葡萄球菌具有传染性，常可导致整个牛场乳腺炎蔓延；再者，金黄色葡萄 球菌是人、畜共染病原菌，能通过食物链使人患病，严重危害人类健康。
目前，应用抗生素防治金黄色葡萄球菌乳腺炎临床上起到了一定效果，但也带来了 "抗性乳"及耐药菌株等危及人类健康的公共卫生问题，因此，受到越来越多的限制。 接种疫苗预防是一种最为方便、有效和经济的措施，但国内至今还没有一种具有自主知 识产权的金黄色葡萄球菌疫苗可供生产上使用。
金黄色葡萄球菌的毒力因子主要包括荚膜多糖、粘附素、溶血素、肠毒素和杀白细 胞素等。金黄色葡萄球菌感染机体首先开始于细菌对宿主细胞的粘附。在所有脊椎动物 的组织和器官的细胞表面存在细胞外基质(ECM)，它除了介导细胞的支持，增殖及调节 基因表达外，更是通过它和各种病原菌的粘附素(细菌表面组分)之间的结合作用，病 原菌才得以粘附并侵袭细胞。金黄色葡萄球菌粘附素归于一个单独的群体，叫做细胞 表面成分识别粘附因子(MSCRAMM)。金黄色葡萄球菌的粘附素除了介导细菌粘附外，还 赋予细菌逃避宿主防御机制的功能，主要是通过粘附素将机体的可溶性ECM(纤连蛋白、 胶原蛋白和纤维蛋白原等)大量结合在细菌的表面，使细菌完全被宿主的ECM包被，从 而不被宿主的免疫系统所识别。
几乎所有的金黄色葡萄球菌都具有纤连蛋白结合蛋白(FnBP)，它由两个十分相近 的基因分别编码两个相似的FnBP分子(FnBP A和FnBP B)，这两个基因在革兰氏阳性 菌中相当保守，并且这两种粘附因子具有相同的粘附作用。金葡菌通过表面的粘附素与 宿主的细胞外基质发生特定的相互作用，是细菌感染的先决条件，阻断细菌粘附环节， 细菌就无法定居和繁殖，也不能产生和释放胞外酶和外毒素，就可降低乳腺炎的发病率。 因此基于细菌表面蛋白的粘附机制去研究抗金黄色葡萄球菌疫苗具有广阔的研究前景。
经检索，本领域还未见有公开的金黄色葡萄球菌粘附素，因此开发金黄色葡萄球菌 粘附素迫在眉睫，这有助于进一步研究金黄色葡萄球菌引发乳腺炎的致病机理和研究相 应的疫苗。
发明内容
本发明的目的是提供金黄色葡萄球菌粘附素功能肽以及其片段、类似物和衍生物。 本发明的另一目的是提供编码所述金黄色葡萄球菌粘附素功能肽及其片段、类似物 和衍生物氨基酸序列的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供制备所述功能肽的方法以及该功能肽和编码序列的用途。 本发明以如下技术方案实施完成-
采集奶牛急性坏疽型乳腺炎乳样，分离金黄色葡萄球菌，提取DNA作为模板，利用 设计合成的特异性引物对金黄色葡萄球菌进行纤连蛋白连接蛋白A (Fnbp A)功能基因 的PCR扩增，将目的基因回收并连接到T载体，鉴定后进行测序，然后将FnbpA基因 连接到pET32a(+)质粒中，经鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞，IPTG诱导后进行 SDS-PAGE分析蛋白质表达情况。亲和层析法分离纯化目的蛋白(金黄色葡萄球菌粘附素 功能肽)。表达产物活性分析与检测。利用基因工程蛋白混合佐剂免疫试验小鼠，通过 i5ZZS4方法检测血清中的抗体，分析表达产物的免疫原性。
本发明提供的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽，其特征在于，它包含SEQ IDN0:2所 示牛源金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白Fnbp的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异 多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQIDNO:2所示牛源 金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白Fnbp的氨基酸序列的多肽。更佳地，该多肽不含信 号肽序列。
本发明提供的编码金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的多核苷酸，其特征在于它包括
(a) 编码SEQ IDN0:2所示氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片 段、或其活性衍生物的多核苷酸；或
(b) 编码SEQ ID N0:2所示氨基酸序列的多核苷酸；或
(c) 与(a)或(b)所述多核苷酸互补的多核苷酸；或
(d) 与(a)、 (b)或(c)所述多核苷酸序列有至少80%相同性的核苷酸序列。 较佳地，所述多核苷酸是编码具有SEQ ID N0:2所示氨基酸序列的多核苷酸。 更佳地，所述多核苷酸是具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列的多核苷酸。 本发明提供的载体，其特征在于，所述载体含有如上所述的多核苷酸。 本发明提供的遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是被如上所述的
多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞或是被如上所述的载体转化或转导的宿主细胞。 本发明所述金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的制备方法，其特征在于，所述方法包含
(a) 在适合表达金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的条件下，培养权利要求7所述的宿 主细胞；
(b) 从培养物中分离出金黄色葡萄球菌粘附素功能月i。
本发明从奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株扩增出编码粘附素的基因(Fnbp A),与标准株进行核苷酸同源性比较，序列同源性为98%。蛋白诱导表达SDS-PAGE分析 发现在80ku处出现特异性条带，其中包括原核表达载体融合蛋白组氨酸标签20.5ku， 并通过组氨酸标签亲和纯化试剂盒纯化获得了预期蛋白。本发明成功地克隆到FnbpA 基因，构建的原核表达质粒/^T-尸/7&在大肠杆菌BL21中获得高效表达，蛋白表达量为 33. 4%,并得到了特定标签纯化的蛋白质。对所表达的基因工程蛋白进行活性检测试验 发现，其具有相应的粘附活性，该基因工程蛋白可以阻止73.24%的金黄色葡萄球菌粘附 到哺乳动物细胞，这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计奠定了良好的基础。
本发明获得的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽具有良好的抗原性，经ELISA法测定抗 体效价。试验小白鼠在免疫后，血清中检测到的特异性抗体效价呈明显上升趋势，在15d 后(二免后第一次采血)时各组的抗体效价呈快速升高，于免疫后28d内各组抗体效价
持续升高，抗体效价动态趋势基本相同(如表l数据的抗体效价动态变化曲线所示)。 本发明所述金黄色葡萄球菌粘附素功能肽和其编码序列的应用。
获得抗体所制备的抗体为能与如上所述的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽特异性结 合的抗体。
本发明的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增 反应，或者作为探针用于杂交反应。
检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的试剂盒所述试剂盒含有如上所述的抗体和/ 或能特异性检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的核酸分子引物。
应用上述试剂盒检测样品中是否存在粘附素的方法是将样品与粘附素的特异性抗 体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在金黄色葡萄球 菌粘附素。
疫苗组合物以安全有效量的本发明的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽或其片段再辅 以药学上可接受的载体可制备成应用于奶牛的疫苗组合物。
本发明的金黄色葡萄球菌粘附素功能多肽可用作研究其对乳腺致病机理的工具。
图1. Fnbp A基因的PCR扩增。
其中M Marker DL2000; 1金黄色葡萄球菌ATCC 25923; 2大肠杆菌ATCC 35218; 3无乳链球菌CVCC 1886: 4 9金黄色葡萄球菌分离株。 图2.重组质粒P^T-的PCR鉴定。
其中M Marker DL2000;1金黄色葡萄球菌ATCC 25923;2 13重组质粒
图3.重组质粒>^57-/=>3&的双酶切鉴定
其中M: Marker DL2000; 1 8重组质粒/^T-尸/ Ztp。 图4.表达蛋白SDS-PAGE电泳检测。
其中M蛋白Marker; l纯化后蛋白；2表达细菌裂解液。 图5.粘附素活性检测试验。
图6.金黄色葡萄球菌黏附试验(10X100倍镜检)。
具体实施例方式
本发明人经过广泛而深入的研究，从奶牛乳腺炎临床病例中分离到致病性金黄色葡 萄球菌，利用聚合酶链式反应克隆到粘附素Fnbp功能基因，经测序鉴定后釆用基因工 程原核表达方法，成功获得了具有生物活性的基因工程粘附素多肽，在此基础上完成了 本发明。
在本发明中，术语"粘附素功能肽"，指具有金黄色葡萄球菌粘附素纤连蛋白连接 蛋白(Fnbp)的氨基酸序列的蛋白或多肽。它们包括含有或不含有信号肽的粘附素。
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明有关内容。下列实例中未注明的具体试验 方法，通常按照分子克隆实验室手册中所述的条件，或按照制造厂商提供的条件。
实施例1
材料和方法
菌株和质粒以常规方式分离、鉴定获得金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎临床分离株；
大肠杆菌BL21(DE3); pMD18-T载体购自TaKaRa; pET32a+载体购自Novagen。
试剂高保真DNA聚合酶、限制性核酸内切酶(BamHI和HindIII)、 T4DNA连接酶均购 自TaKaRa; DNA胶回收试剂盒购自U-gene;氨苄青霉素购自华美公司；Ni-NTA亲和层析 柱是QIAGEN公司产品。
试验动物昆明系小白鼠，体重18 22g，购自山东中医药大学实验动物中心。
实施例2
PCR扩增Fnbp基因及其测序分析
采用酚-氯仿方法提取金葡菌DNA模板。根据GenBank上发表的Fnbp基因序列，设计 并合成了一对引物
上游(含BamHI酶切位点)KF1: 5' — AAA6WOGCATCAGAACAAAAGACA-3';
下游(含SalI酶切位点)KF2: 5' — AGAg7n7感TACTCAGAGGACTCAGTGTA—3'。
50uLPCR反应体系:10XPCRbuffer 5uL， Mg2+ (25mM) 3uL， dNTP (25mM) 4uL, Taq酶(2.5U) 0.5uL，引物各luL，模板2nL，无菌双蒸水33. 5 y L。循环条件94°C 预变性5min;94。C lmin， 50。Clmin, 72。C3min, 30个循环；72。C延伸10min。
PCR产物与pMD18-T载体连接，转化￡ coh' DH5 a ，提取质粒经BamH I和Sal I双酶 切后琼脂糖电泳鉴定。鉴定阳性的克隆由上海生物工程技术有限公司测序。PCR扩增产 物经1%琼脂糖凝胶电泳，检测到1.7kb左右的特异性条带，与预期大小相符(见图l)。 测序结果显示该基因全长约为1722bp，编码574个氨基酸；核苷酸序列如SEQ ID N0:1所 示，氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。与标准株(GenBank公布的Fnbp A序列)进行核苷 酸同源性比较，序列同源性为98%。
实施例3
重组表达质粒的构建
提取实施例2中阳性质粒，经BamH I和Sal I双酶切后,用试剂盒回收目的片段，与 同样经过BamHI和Sal I双酶切的pET-32a+表达载体连接，构建重组表达质粒 pET32a+-Fnbp，并将重组质粒进行BamH I 、 Sal I双酶切鉴定和PCR鉴定。双酶切后可 见在1. 7kb左右处有一条特异的条带，并且经PCR鉴定在1. 7kb左右处扩增出特异条带， 说明重组质粒构建正确(鉴定结果见图2、 3)。
实施例4
Fnbp基因在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析
将重组表达质粒061323+-Fnbp及空载体pET32a+质粒分别转化大肠杆菌BL21 (DE3)， 挑取单个菌落，37'C振荡过夜培养。过夜培养物以l : 100扩大培养2 4h至OD6。。值达 0.3 0.6时，加入IPTG至终浓度为lmmol/L，继续培养。分别于lh、 2h、 3h及4h取2ml菌 液，离心收集菌体。SDS-PAGE电泳鉴定表达情况，试验步骤参照《蛋白质电泳实验技术》 进行。
SDS-PAGE结果如图4所示，经IPTG诱导株在80kD左右出现一条特异蛋白带，与预测 分子量一致。经BandScan5.0分析，蛋白产量约占菌体总蛋白的33. 4%。 实施例5
亲和层析法分离纯化目的蛋白
重组质粒 ￡7323+^^ 转化大肠杆菌，挑取单菌落接种LB培养基，培养过夜后按1% 的比例接种于LB培养基，37"C培养至菌液的0D6。。达到0.4，加IPTG至终浓度为l國ol/L， 37'C诱导表达3h后，离心收获菌体，沉淀用磷酸盐缓冲液悬浮，超声波破碎菌体，再离
心收集上清，经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化收集目的蛋白(金黄色葡萄球菌粘附素功能 肽)。
蛋白纯化完后，依次用15L 0.2M乙酸，15mL 30%甘油，15mL纯水，15mL 30%乙醇处 理。最后用乙醇3保存于4。C，备用。 实施例6
表达产物(金黄色葡萄球菌粘附素功能肽)的生物活性分析
培养牛胎肾(MDBK)细胞，以处理的载波片覆盖培养，作为细胞爬片。纯化的重组蛋 白50倍和100倍稀释，进行细胞竞争性封闭(对照组用普通牛血清)，然后取lml (103cfu/ml)金葡菌培养稀释菌液覆盖细胞，粘附培养lh。洗涤5次，革兰氏染色后 进行显微镜下细菌计数，每组计数20个视野，取平均值。
与对照组相比，利用稀释后的重组粘附素蛋白预处理过的牛肾细胞周围粘附的金黄 色葡萄球菌数量相对明显减少，差异极显著。经数据分析处理，各组粘附细菌数分别为 对照组为16.22±6.88个/细胞；蛋白稀释50倍组为5.95士2.84个/细胞(p〈0.01);蛋白 稀释100倍组为4.34土3.26个/细胞(p〈0.01)(对比曲线如图5、粘附照片见图6)。
实施例7
表达产物(金黄色葡萄球菌粘附素功能肽)的免疫原性分析
rFnbp蛋白为所纯化蛋白，将其配制浓度为0. lmg/ml，然后将蛋白与佐剂按照1: 1的比例充分混合乳化后用于动物免疫。将所制备的疫苗取少量涂布于5%绵羊血琼脂 平板中，37t:培养48h，观察有无细菌生长。并将疫苗进行动物安全检验，分别用18-22g 的小白鼠6只，皮下注射疫苗10ug/只，观察二周。注意观察小白鼠的精神状态。在所 有疫苗涂布的5%绵羊血琼脂平板中无任何细菌生长，表明所制备的疫苗无菌性良好。 所注射疫苗的小白鼠在观察二周后均健活，精神状态良好，注射部位无化脓现象。小鼠 随机分组，每组6只。第一组注射rrFnbp蛋白疫苗，第二组为注射生理盐水的对照组。 将疫苗分别注射小鼠腹部皮下，并于实验的第O、 14、 28天免疫。免疫后第1、 2、 3、 4周采取血样，间接ELISA法测定抗体效价。试验小白鼠在免疫后所采集的血清中检测 到了特异性抗体，抗体效价呈明显上升趋势，在15d后(二免后第一次采血)时各组的 抗体效价呈快速升高，于免疫后28d内各组抗体效价持续升高，抗体效价动态趋势基本 相同(如表l数据的抗体效价动态变化曲线所示)。
表1 ELISA检测抗体水平
对照组粘附素免疫
第一次0.041±0. 02c0. 163±0. 08 a
第二次0. 052 ±0. 03 e0. 288 ±0. 09 b
第三次0. 058±0.03e0. 329±0. 15 a
第四次0. 075±0. 03°0. 5紙0. 22 b
注a、 b、 c表示差异性(p〈0.01)
实施例8
检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的试剂盒将含有如上所述的抗体和/或能特异性检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的核酸分 子引物以本领域常用方法制成试剂盒，用于金黄色葡萄球菌粘附素的检测。
应用上述试剂盒检测样品中是否存在粘附素的方法是将样品与粘附素的特异性抗 体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在金黄色葡萄球 菌粘附素。
实施例9
疫苗
以安全有效量的本发明的金黄色葡萄球菌粘附素功能肽或其片段再辅以药学上可 接受的载体，以常规方式可制备成应用于奶牛的疫苗组合物。
序列表
〈110〉山东省农科院奶牛研究中心
〈120>金黄色葡萄球菌粘附素及其编码序列
〈141〉 2007-10-20
〈160〉 2
〈210〉 1
〈211〉 1722
〈212〉醒
〈213〉金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureuse)
〈400〉 1
gca/tc3g犯ctacagtagaaga犯atgggsattcagctactgataataaa60
gtaaacga犯cacaaacaactacaactaacgttaatactatagatgaaac120
agcgcaacagaccgtcaaacgc肌c3caagtaacaactga180
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〈210〉 2 〈211〉 574 〈212〉 PRT
〈213〉金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureuse) 〈400〉 2
Ala Ser Glu Gin Lys Thr Thr Thr Val Glu Glu Asn Gly Asn Ser Ala Thr Asp Asn Lys 15 10 15 20
Val Asn Glu Thr Gin Thr Thr Thr Thr Asn Val Asn Thr lie Asp Glu Thr Gin Ser Tyr
25 30 35 40
Ser Ala Thr Ala Thr Glu Gin Pro Ser Asn Ala Thr Gin Val Thr Thr Glu Lys Ala Pro
45 50 55 60
Lys Ala Val Gin Ala Val Gin Ala Pro Gin Thr Ala Gin Pro Ala Asn Leu Glu Thr Val
65 70 75 80
Lys Glu Glu Val Val Lys Glu Glu Ala Lys Pro Gin Val Lys Glu Thr Thr Gin Ser Gin
85 90 95 100
Asp Asn Ser Gly Asp Gin Arg Gin Val Asp Leu Thr Pro Lys Lys Ala Thr Gin Asn Gin
105 110 115 120
Val Ala Glu Thr Gin Val Glu Val Ala Gin Pro Arg Thr Val Ser Glu Ser Lys Pro Arg
125 130 135 140
Val Thr Arg Ser Ala Asp Val Val Asp Ala Lys Glu Ala Ser Asp Val Ser Glu Val Lys
145 150 155 160
Gly Thr Asp Val Thr Ser Lys Val Thr Val Glu A印Glu Ser Lys lie Glu Ala Pro Lys
165 170 175 180
Gly Asn Asn Val Gin Pro His Glu Gly Gin Arg Val Val Leu Lys Tyr Lys Leu Lys Phe
185190195200
Gin AspGly LeuLysThrGly Asp Tyr PheAsp Phe Thr LeuSerAsn Asn ValAsnThr
205210215220
His GlyVal SerThrlieArg Lys Val ProAsp lie Lys AsnGlySer Leu ValMetAla
225230235240
Lys GlyGin ValLeuAspAsn Gly Arg lieArg Tyr Thr PhelieAsp Tyr lieLysAsp
245250255260
Lys ValAsn ValThrAlaAsn Leu GlulieAsn Leu Phe lieAspPro Lys ThrValGin
265270275280
Ser AsnGly GinGinThrlie Thr SerLysLeu Asn Gly LysGluThr Ser GlyThrMet
285290295300
Gin lieThr TyrLysAspGly Val LysAsnGin Tyr Thr AsnValAsn Gly SerlieGlu
305310315320
Thr PheAsp LysGluLysAsn Lys PheThrHis Val Ala TyrlieLys Pro lieAsnGly
325330335340
Asn AsnSer AspSerValThr Val ThrGlyMet Leu Thr GinGlySer Asn GluAsnGly
345350355360
Thr GinPro AsnValLyslie Tyr GluTyrVal Gly Thr GluAsnGly Leu ProGinSer
365370375380
Val TyrAla AsnThrAlaAsp Ser ThrGinLeu Lys Asp ValThrAsn Gin MetSerAsp
385390395400
Lys LeuLys ValGinAsnAsn Gly SerTyrSer Leu Asn PheAspLys Leu AspLysThr
405410415420
Tyr Vallie HisTyrThrGly Asp TyrLeuAsn Gly Thr SerGluV3l Asn PheArgThr
425430435440
Gin LeuThr GinTyrProGlu Asn ArgTyrLys Thr Tyr TyrTyrAsn Asn GlyTyrlie
445450455460
Leu ThrTrp AspAsnGlyLeu Val LeuTyrSer Asn Lys AlaAsnGly Asp GlyLysTyr
舰470475480
Gly Prolie ValAspSerAsn Asn PheGluPhe Ser Glu AspSerGly Asn GlySerlie
485490495500
Ser GlyGin TyrAspAlaLys Gin lielieGlu Thr Glu GluAsnGin Asp AsnThrPro
505510515520
Leu Asplie AspTyrHisThr Ala lieAspGly Glu Gly GlyTyrVal Asp GlyTyrlie
525 530 535 540
Glu Thr lie Glu Glu Thr Asp Ser Ser Ala lie A印lie Asp Tyr His Thr Ala Val Asp
545 550 555 560
Ser Glu Ala Gly His Val Gly Gly Tyr Thr Glu Ser Ser Glu
565 570
权利要求
1.一种金黄色葡萄球菌粘附素功能肽，其特征在于，它包含SEQ ID NO2所示牛源金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白Fnbp的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2. 如权利要求l所述的多肽，其特征在于，所述多肽是具有SEQ ID N0:2所示牛源 金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白Fnbp的氨基酸序列的多肽。
3. —种编码金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的多核苷酸，其特征在于它包括-(a) 编码权利要求1所述多肽的多核苷酸；或(b) 编码权利要求2所述多肽的多核苷酸；或(c) 与(a)或(b)所述多核苷酸互补的多核苷酸；或(d) 与(a)、 (b)或(c)所述多核苷酸序列有至少80%相同性的核苷酸序列。
4. 如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸是编码具有SEQ IDN0:2所示氨基酸序列的多核苷酸。
5. 如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列。
6. —种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求3所述的多核苷酸。
7. —种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是被权利要求3所述的 多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞或是被权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细 胞。
8. 权利要求1所述金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的制备方法，其特征在于，所述方 法包含(a) 在适合表达金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的条件下，培养权利要求7所述的宿 主细胞；(b) 从培养物中分离出金黄色葡萄球菌粘附素功能肽。
9. 一种抗体，其特征在于，所述抗体为能与权利要求1所述的金黄色葡萄球菌粘附 素功能肽特异性结合的抗体。
10. —种检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有 权利要求9所述的抗体和/或能特异性检测金黄色葡萄球菌粘附素功能肽的引物。
全文摘要
本发明公开了一种奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌粘附素功能肽，编码粘附素蛋白的多核苷酸和经基因工程技术制备粘附素蛋白功能肽的生物学方法；同时还公开了所述金黄色葡萄球菌粘附素蛋白功能肽在相关领域可能的用途。本发明助于进一步研究金黄色葡萄球菌引发乳腺炎的致病机理和研究相应的疫苗。
文档编号C07K14/31GK101177451SQ20071011329
公开日2008年5月14日 申请日期2007年11月2日 优先权日2007年11月2日
发明者仲跻峰, 杨宏军, 杨少华, 王长法, 高运东 申请人:山东省农业科学院奶牛研究中心