注射用盐酸多西环素的生产工艺的制作方法

专利名称：：注射用盐酸多西环素的生产工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种注射用盐酸多西环素的生产工艺。
背景技术：
：多西环素(doxycycline)为广谱抑菌剂，高浓度时具杀菌作用。许多立克次体属、支原体属、衣原体属、非典型分枝杆菌属、螺旋体也对本品敏感。本品对革兰阳性菌作用优于革兰阴性菌，但肠球菌属对其耐药。其他如放线菌属、炭疽杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌对本品敏感。本品对淋病奈瑟菌具一定抗菌活性，但耐青霉素的淋病奈瑟菌对多西环素也耐药。多年来由于四环素类的广泛应用，临床常见病原菌对本品耐药现象严重，包括葡萄球菌等革兰阳性菌及多数革兰阴性杆菌。本品为消除四环素分子中不稳定部分后的产品；四环素遇酸，6位羟基与5a位氢脱水形成去水四环素(anhydrotetracyclme)失去抗菌活性。经修饰后对酸稳定并兼具优异的药物动力学性能。本品与四环素类抗生素不同品种之间存在交叉耐药。本类药物进入菌体内发挥抑菌作用。在胞浆内，药物与核糖体30S亚基的A位特异性结合，阻止氨基酰tRNA(亦称氨酰tRNA)进入A位，阻碍肽链延长和蛋白质的合成。药物尚可使细菌细胞膜通透性改变，导致胞内核苷酸及其他重要成分外漏，从而抑制细菌DNA的复制。高浓度时也具有杀菌作用。.本品口服吸收完全，约可吸收给药量的90%以上，进食对本品吸收的影响小。单剂口服本品100mg后，血药高峰浓度为1.82.9mg/L。吸收后广泛分布于体内组织和体液，多西环素有较高的脂溶性，对组织穿透力较强，在胸导管淋巴液、腹水、肠组织、眼和前列腺组织中均有较高浓度，约为血药浓度的60%75%，在胆汁中浓度可达同期血药浓度的1020倍，表观分布容积(Vd)为0.7L/kg。蛋白结合率为80%93%，血消除半衰期(11/2)为12223小时，肾功能减退者tw延长不明显。本品部分在肝内代谢灭活，主要自肾小球滤过排泄，给药后24小时内可排出约35%40%。肾功能损害患者应用本品时，药物自胃肠道的排泄量增加，成为主要排泄途径，因此本品是四环素类中为肾衰病人感染最安全的药物之一，并对肠道菌群影响较小。血液或腹膜透析不能清除本品。多西环素为以发酵产生的土霉素碱原料经氯化、脱水、氢化成盐，置换而得，药典中将从起始原料带入、生产过程中氢化反应不完全、反应副产物等杂质，如杂质A-6-多西环素(6-epidoxycycline)、杂质B-美他霉素(甲烯土霉素metacycline)、杂质C-4-多西环素(4-epidoxycvcline)、杂质D-4、6-多西环素(4-epi-6-epi-doxycycline)、杂质E-土霉素(oxytetracycline)、杂质F-2-acetyl-2-decarbamoyldoxycycline等统称之为有关物质，因其疗效低、毒性大(其中6-多西环素又称多西环素e-差向异构体毒性大)，药典对其做限量规定。《中国药典》(2005年版)、《英国药典》(1998年版)、《美国药典》(25版)、《欧洲药典》(6版)对其原料和制剂中有关物质检查均采用高效液相色谱法对其限量进行控制。
发明内容本发明的目的是提供一种注射用盐酸多西环素的生产工艺，所制得的盐酸多西环素纯度高，副作用小，更适合于用于注射用盐酸多西环素的原料。为达到上述目的，本发明所提供的技术方案是一种注射级盐酸多西环素，由下述步骤制作而成(1)、在溶解罐加入3倍口服级盐酸多西环素重量的2832。C的无菌无水甲醇，再加入盐酸多西环素搅拌溶解，加入活性炭搅拌，并在30min内降温到2327°C，静置30min后用0.45pm滤膜过滤；(2)、混合液依次经过0.45iim钛棒过滤器、0.22(im及0.(Hiim滤芯超滤除菌，过滤后送入无菌万级区洁净干燥间结晶罐内；(3)、真空干燥将混合液加热到4852。C进行真空干燥；(4)、往结晶罐加入3倍盐酸多西环素重量的无菌无水乙醇，搅拌成混悬液，在25°C±2放置4小时转晶；用输液泵输送到经清洗消毒的三合一无菌干燥机中，再用盐酸多西环素重量3倍的无菌无水乙醇洗涤二次后，采用4555。C之间的热风干燥1012小时，即得到注射级盐酸多西环素。一种注射用盐酸多西环素冻干粉针剂，包括有重量份数比为115:380:300:2.9的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇和焦亚硫酸钠。注射用盐酸多西环素冻干粉针剂的生产工艺，包括以下步骤①、在室温下，将注射用水加入到经湿热灭菌的配液罐中，依次加入重量份数比为115:380:300:2.9的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇和焦亚硫酸钠，搅拌至完全溶解；②、称取溶液重量0.05%的活性炭，加入搅拌中的溶液中，继续搅拌脱色20分钟，用0.45(am滤膜粗滤脱炭，0.22pm和0.01iam除菌和除热源过滤，在无菌万级区接收备用；③、冻干药品温度为-28r，保持2.5小时；真空度小于30Pa，升温，控制温度低于-2(TC，保持2天；升温，控制药品温度低于3(TC，维持3小时，通入经0.22pm滤芯除菌过滤的高纯氮气破真空，恢复至常压，得到注射用盐酸多西环素冻干粉针剂。本发明具有的优点通过工艺过程的控制，使制得的注射级盐酸多两环素的毒性杂质3-多西环素和美他环素含量大幅度降低，优于《中国药典》、《欧洲药典》(6版)和《美国药典》(25版)标准，有效控制本品的杂质含量，提高纯度，提高疗效和安全性，具有低刺激性、低过敏性、低不良反应的优点。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但本发明的内容不限于所举的实施例。实施例1:一种注射用盐酸多西环素冻干粉针剂的生产工艺一、注射级盐酸多西环素的制备1、处方<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>1.1生产准备l丄l按无菌药品生产的要求做好产前准备；1丄2用活性炭按无菌要求分别处理无水甲醇和无水乙醇；l丄3按要求组装三合一过滤器，不锈钢滤板下安装经湿热灭菌的本品种专用无尘滤布，关紧所有阀门和螺栓。1.2配制1.2.1在溶解罐加入盐酸多西环素原料重量3倍的30°C±2无菌无水甲醇，将盐酸多西环素原料加入搅拌溶解，加0.2%的活性炭搅拌并在30min内降温到25°C±2,静置30min后用0.45um滤膜过滤；1.2.2将溶解罐内加有活性炭的混合溶液通过输液泵经过已灭菌的管道，依次经过0.45微米钛棒过滤器、0.22um及0.01微米滤芯超滤除菌过滤后送入无菌万级区洁净干燥间结晶罐内；1.3真空干燥1.3.1将结晶罐内经过除炭过滤、除菌过滤和超滤的盐酸多西环素无水甲醇溶液通过热水夹套加热到50°C±2真空干燥(开始启动搅拌电机(控制变频器数值为1520)缓慢搅拌，至药液有结晶析出并粘稠时停止搅拌)；1.4结晶、晶体洗涤1.4.1在盐酸多西环素结晶罐加入盐酸多西环素原料重量3倍的无菌无水乙醇搅拌成混悬液，在25°C±2放置4小时转晶，用输液泵打倒经清洗消毒的三合一无菌干燥机中，再用盐酸多西环素重量3倍的无菌无水乙醇洗涤二次后，干燥；1.4.2干燥用经蒸汽加热和除菌过滤的净化压縮热空气控制热风进风温度在4555'C之间，对精制后的注射级盐酸多西环素进行千燥1012小时左右。1.5整粒1.5.1将收得的注射级盐酸多西环素装于经湿热灭菌的不锈钢容器中，转移至整粒混合间进行整粒。1.5.2整粒、包装得注射级盐酸多西环素，本品的各项检验指标均高于《中国药典》、《欧洲药典》(6版)和《美国药典》(25版)，临床疗效显著增加，不良反应和皮肤刺激因素大幅下降。见表一。检测结果杂质A、杂质B、杂质C、杂质D表一<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注杂质A:6-多西环素(6-印idoxycycline);杂质B:美他霉素(甲烯土霉素metacycline);杂质C:4-多西环素(4-印idoxycv.c丄ine);杂质D:4、6-多西环素(4-epi-6-epi-doxycycline);杂质E:土霉素(oxytetracycline);杂质F:2-acetyl-2-decarbamoyldoxycycline。二、注射用盐酸多西环素冻干粉针剂制备1、处方<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2、生产准备2.1按冻干粉针生产要求做好生产前准备工作；3、配制3.1称好配液所需的的注射用水，加入到经湿热灭菌的配液罐中，开启配液罐冷却系统，降低注射用水温度到常温G0。C以下)。按处方量依次加入称量好的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇和焦亚硫酸钠等原辅料。搅拌使完全溶解。3.2称取溶液重量0.05%的活性炭(W/W)(己进行预处理)，湿润后加入搅拌中的溶液中，继续搅拌脱色20分钟，用0.45pm滤膜粗滤脱炭，().22pm和O.Olpm除菌和除热源过滤，在无菌万级区接收备用。取滤液送质检部检测含量、内毒素、pH值等项目。4、灌装半压塞、进箱；5、冻干5.1操作过程(1)预冻将搁板降至-4(TC以下，待品温降至-28"后，保持2.5小时。(2)升华干燥干燥箱内的真空度达到30Pa以下时，启动加热系统，温度控制在-2(TC以下，真空度控制在30Pa以下，升华干燥。(3)再干燥在干燥阶段温度控制制品在3(TC以下，再干燥时间为3小时。(4)冻干结束后，使用经0.22pm滤芯除菌过滤的高纯氮气破真空，恢复至常压后压塞出箱。(5)出箱完毕后。6、出箱、轧盖、灯检、贴标、装盒、装箱、入库。实施例2:—种注射用盐酸多西环素冻干粉针剂生产工艺一、注射级盐酸多西环素的制备1、处方物料名称投料比盐酸多西环素1无水甲醇3无水乙醇61.1生产准备1.1.1按无菌药品生产的要求做好产前准备；1丄2用活性炭按无菌要求分别处理无水甲醇和无水乙醇；l丄3按要求组装三合一过滤器，不锈钢滤板下安装经湿热灭菌的本品种专用无尘滤布，关紧所有阀门和螺栓。1.2配制1.2.1在溶解罐加入盐酸多西环素原料重量3倍的30°C±2无菌无水甲醇，将盐酸多西环素原料加入搅拌溶解，加0.2%的活性炭搅拌并在30mm内降温到25°C±2，静置30mm后用0.45pm滤膜过滤；1.2.2将溶解罐内加有活性炭的混合溶液通过输液泵经过已灭菌的管道，依次经过0.45微米ft棒过滤器、0.22pm及0.01微米滤芯超滤除菌过滤后送入无菌万级区洁净干燥间结晶罐内；1.3真空干燥1.3.1将结晶罐内经过除炭过滤、除菌过滤和超滤的盐酸多西环素无水甲醇溶液通过热水夹套加热到50°C±2真空干燥(开始启动搅拌电机(控制变频器数值为1520)缓慢搅拌，至药液有结晶析出并粘稠时停止搅拌)；1.4结晶、晶体洗涤1.4.1在盐酸多西环素结晶罐加入盐酸多西环素原料重量3倍的无菌无水乙醇搅拌成混悬液，在25C°±2放置4小时转晶，用输液泵打倒经清洗消毒的三合一无菌干燥机中，再用盐酸多西环素重量3倍的无菌无水乙醇洗涤二次后，干燥；91.4.2干燥用经蒸汽加热和除菌过滤的净化压縮热空气控制热风进风温度在4555'C之间，对精制后的注射级盐酸多西环素进行干燥1012小时左右。1.5整粒1.5.1将收得的注射级盐酸多西环素装于经湿热灭菌的不锈钢容器中，转移至整粒混合间进行整粒。1.5.2整粒、包装得注射级盐酸多西环素。二、注射用盐酸多西环素冻千粉针剂的制备1、处方物料名称投料量注射级盐酸多西环素230g(相当于多两环素200g)维生素c瑜甘露醇600g焦亚硫酸钠5.8g2、生产准备2.1按冻干粉针生产要求做好生产前准备工作；3、配制3.1称好配液所需的的注射用水，加入到经湿热灭菌的配液罐中，开启配液罐冷却系统，降低注射用水温度到常温G(TC以下)。按处方量依次加入称量好的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇等原辅料。搅拌使完全溶解。3.2称取溶液重量0.05%的活性炭(W/W)(已进行预处理)，湿润后加入搅拌中的溶液中，继续搅拌脱色20分钟，用0.45(am滤膜粗滤脱炭，().22pm和0.01pm除菌和除热源过滤，在无菌万级区接收备用。取滤液送质检部检测含量、内毒素、pH值等项目。4、灌装半压塞、进箱；5、冻干5.1操作过程(l)预冻将搁板降至-4(TC以下，待品温降至-28。C后，保持2.5小时。(2)升华干燥干燥箱内的真空度达到30Pa以下时，启动加热系统，温度控制在-2(TC以下，真空度控制在30Pa以下，升华干燥。(3)再干燥在干燥阶段温度控制制品在3(TC以下，再干燥时间为3小时。(4)冻干结束后，使用经0.22(am滤芯除菌过滤的高纯氮气破真空，恢复至常压后压塞出箱。(5)出箱完毕后。6、出箱、轧盖、灯检、贴标、装盒、装箱、入库。与同类品种的优势该药片剂于70年代投入世界抗生素市场。至今已有胶囊、片剂、注射剂等多种剂型。但由于口服生物利用度低，注射疼痛等原因，直接影响了多西环素的临床使用。本发明克服了口服生物利用度低，注射疼痛等不良反应，具有吸收快的优点。注射用盐酸多西环素冻干粉针剂中各成分的作用如下1、盐酸多西环素四环素类抗生素，为广谱抑菌剂，高浓度时具杀菌作用。许多立克次体属、支原体属、衣原体属、非典型分枝杆菌属、螺旋体也对本品敏感。本品对革兰阳性菌作用优于革兰阴性菌，但肠球菌属对其耐药。其他如放线菌属、炭疽杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌对本品敏感。本品对淋病奈瑟菌具一定抗菌活性，但耐青霉素的淋病奈瑟菌对多西环素也耐药。多年来由于四环素类的广泛应用,临床常见病原菌对本品耐药现象严重，包括葡萄球菌等革兰阳性菌及多数革兰阴性杆菌。本品与四环素类抗生素不同品种之间存在交叉耐药。本品作用机制为药物能特异性与细菌核糖体30S亚基的A位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。动物试验证实本品有致畸性。体外试验表明本品在一定浓度时有致突变的可能。2、维生素C:为冻干生产常用的临床可接受的骨架剂、抗氧剂，并调节pH值。3、甘露醇为冻干生产常用的，临床可接受的骨架剂。4、焦亚硫酸钠为注射剂生产常用的，临床可接受的抗氧剂。注射用盐酸多西环素的药理分析适应症敏感菌引起的呼吸系统感染、老年慢性支气管炎、肺炎、麻疹肺炎、泌尿系统感染、生殖系统感染、胆道感染等。对肾功能不良患者的肾外感染也可使用。对败血症、皮肤软组织感染、痤疮、布氏杆菌病、沙眼及淋病也有效。也可用于青霉素过敏的病人。过敏性、溶血性和局部刺激性试验注射用盐酸多西环素过敏性试验1试验摘要观察注射用盐酸多西环素静脉注射给药对豚鼠是否具有过敏作用，结果表明在本试验条件下，注射用盐酸多西环素对受试动物无致敏作用。2目的观察注射用盐酸多西环素静脉注射给药有无致过敏作用。3试验材料3.1受试药物注射用盐酸多西环素，规格O.lg/支，由海口奇力制药有限公司提供，批号011023。试验时取盐酸多西环素1支，先5ml无菌注射用水溶解，然后立即加氯化钠注射液，至125ml，混匀。注射用水，购自建联药店，批号200004121.氯化钠注射液，济南三九益民制药有限责任公司，批号2001082512-5-1。卵白蛋白，由联星生物有限公司提供，S!gma公司进口分装。试验时以氯化钠注射液配置成0.4%浓度。3.2动物白色豚鼠，由济南三九益民制药有限责任公司提供，合格证号鲁动质字200001012，购进后进行两周预饲养。饲养条件用不锈钢笼具词养，6只/笼，自由饮水，给予颗粒饲料，室温23251:，湿度60%左右。用于试验体重300g左右，雌、雄兼用。3.3试验方法1、取健康豚鼠18只，称重，依照体重、性别随机分为三组，每组6只，雌雄各半。分别为氯化钠注射液阴性对照组、注射用盐酸多西环素组及0.4%卵白蛋白阳性对照组。2、受试动物致敏按无菌操作隔日分别腹腔注射氯化钠注射液、0.8mg/ml注射用盐酸多西环素溶液、0.4%卵白蛋白，0.5ml/只，共三次致敏。3、攻击共进行两次攻击。将各组动物随机分为2批，每批3只，一批于首次致敏后14天静脉注射受试品lml/只攻击，另一批于首次致敏后第21天静脉注射lml/只攻击。3.4观察指标攻击给药后30min内观察动物有无咳嗽、抓鼻、烦躁、竖毛、痉挛、呼吸困难、休克、大小便失禁及死亡等情况，并按表l所列标准评分。表l.全身过敏性反应评分标准评分体征0无明显反应1轻微抓鼻、颤抖或梳毛1出现咳嗽，多次抓鼻、颤抖或梳毛1多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难或痉挛、抽搐1痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡结果判定评分》2使，为过敏试验阳性。3.5试验结果0.8mg/ml注射用盐酸多西环素溶液和氯化钠注射液的两次攻击试验结果均为阴性，未出现咳嗽、抓鼻、烦躁、竖毛、痉挛、呼吸困难、休克、大小便失禁及死亡等过敏反应。二0.4%卵白蛋白组两次注射后，短时间内均出现咳嗽、抓鼻、烦躁、竖毛、痉挛、呼吸困难、休克、大小便失禁及死亡等过13敏反应。试验结果参见表2。表2.注射用盐酸多西环素过敏试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>4、试验结论本试验结果表明在木试验条件下，注射用盐酸多西环素溶液以0.8mg/ml静脉给药，对豚鼠无致过敏作用。注射用盐酸多西环素溶血性试验1试验摘要观察注射用盐酸多西环素对家兔红细胞的溶血作用，结果表明注射用盐酸多西环素对家兔红细胞无明显体外溶血及致凝集作用。2试验目的观察注射用盐酸多西环素对家兔红细胞有无溶血和凝集作用。3试验材料3.1受试药物注射用盐酸多西环素，规格O.lg/支，由海口奇力制药有限公司提供，批号011023试验时取盐酸多西环素1支，先5ml无菌注射用水溶解，然后立即加氯化钠注射液，至125ml，混匀。注射用水，购自建联药店，批号200004121。氯化钠注射液，济南三九益民制药有限公司，批号2001082512-5-1。3.2动物新西兰家兔，由济南三九益民制药有限公司提供，合格证号鲁动质字200001010，购进后进行两周预饲养。兔饲料济南康大饲料有限公司与山东省试验动物中心联合生产，许可证号鲁饲准证字364号。饲养条件用金属兔笼单笼饲养，自由饮水，给予颗粒兔饲料，室温2325°C，湿度60%左右。试验动物环境设施合格证号鲁动环字200001012.3.3仪器LXJ—II型离心沉淀机上海医用分析仪器厂生产HH—W21—600型恒温水浴锅上海医用恒温设备厂生产。4试验方法2%兔红细胞混悬液的制备取家兔一只，雄性，体重2.25kg，心脏取血约20ml，置烧杯中用玻璃棒不停搅拌去除纤维蛋白，然后取10ml等量移入2支10ml刻度离心管中(5m1/管)，各加入氯化钠注射液5ml，混匀后离心5分钟(2500r/min)，去除上清液，再加入氯化钠注射液5ml混匀离心，反复洗涤，至上清液无色透明。将所得红细胞用氯化钠注射液稀释成2%(V/V)的混悬液备用。操作步骤取试管7支，按表3分别加入不等量的注射用盐酸多西环素溶液，第6号试管不加受试品，作为空白对照，第7管仍不加受试品，用蒸馏水代替氯化钠注射液，作为溶血的阳性对照。将各管轻轻摇匀，在37。C水浴中保温4小时，观察各管有无溶血现象。试验重复一次。表3.体外溶血试验加样表管号12345672%红细胞悬液(ml)2.52.52.52.52.52.52.5受试品(ml)0.10.20.30.40.5——氯化钠注射液(m)2.42.32.22.12.02.5一15<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>~~5观察指标与结果判断分别于保温15min、30min、45min、lh、2h、3h和4h肉眼观察各管溶血情况，用显微镜观察红细胞是否破裂。如第3号试管在2小时内不引起溶血者即可作注射用。结果判断标准参见表4.表4.红细胞溶血、凝集判断标准全溶血溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血溶液澄明红色或棕色，管底乂少呈红细胞残留;无溶血红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集红细胞聚集成块，振摇后不能分散。6实验结果第7号试管加入蒸馏水后混匀，出现全溶血显现。加入注射用盐酸多西环素溶液后混匀并保温，15min，l-6管又少量红细胞下沉；30min，l-6管更多红细胞下沉，有少量上清液分层；至1小时，1-6管红细胞继续下沉，分别上清液无色澄明，部分红细胞沉于管底，无红细胞凝集现象；2小时，l-6管分层上清液无色澄明，部分红细胞沉于管底，无红细胞凝集现象；3小时，l-6管分层上清液物色澄明，大量红细胞沉-T贷底，无红细胞凝集现象；4小时，l-6管溶液红细胞全部下沉，上层液体无色澄明，经振摇后可见红细胞均匀散开，证明无红细胞凝聚(见表5)。显微镜检红细胞外形正常。表5.注射用盐酸多西环素溶血试验结果观察时间试管编号(h)12345670.25一—一—一—+0.5——————十0.75一———一—+1一一————+2一———一—+3——————+4——————+注一无溶血+全溶血试验同法重复一次，结果相同。7试验结论在本试验条件下，注射用盐酸多西环素对家兔红细胞无明显体外溶血及致凝集作用。注射用盐酸多西环素血管剌激试验1试验摘要通过试验观察注射用盐酸多西环素对家兔耳缘静脉血管的刺激性，结果表明注射用盐酸多西环素以16mg/kg的剂量每天静脉滴注,连续7天,对家兔耳缘静脉无明显刺激作用。2试验目的观察注射用盐酸多西环素耳缘静脉多次给药后有无血管刺激作用。3试验材料3.1受试药物注射用盐酸多西环素，规格:0.1/支，由海口奇力制药有限公司提供，批号011023。试验时取盐酸多西环素1支，先5ml无菌注射用水溶解，然后立即加氯化钠注射液，至125ml，混匀。注射用水，购自建联药店，批号200004121。氯化钠注射液，由济南三九益民制药有限责任公司生产，批号2001082512-5-1。3.2动物新西兰家兔，由济南三九益民制药有限责任公司提供，合格证号鲁动质字200001010，购进后进行两周预饲养。兔词养济南康大饲养有限公司与山东省试验动物中心联合生产，许可证号鲁词准证字364号。饲养条件用金属兔笼单庞饲养，自由饮水，给予颗粒兔饲料，室温2325°C，湿度60%左右。试验动物环境设施合格证号鲁动环字200001012。4仪器WZ-50G单道微量注射泵，浙江医科大学医学仪器厂生产。5试验方法取健康、耳缘无损伤家兔6只，体重2.0-2.3kg，随机分为两组,每组3只，雌、雄兼用(雄2，雌l);注射用盐酸多西环素组及氯化钠注射液对照组，分别耳缘静脉滴注注射用盐酸多西环素溶液和氯化钠注射液，注射用盐酸多西环素给药量为16mg/kg，给药体积为20ml/kg，给药速度为60ml/hr。每天一次，连续7天，对照组给予等量氯化钠注射液。6观察指标给药后，肉眼观察给药局部的静脉血管及周围组织的红肿情况。末次给药后24小时将动物放血处死，分别于注射部位近心端1.5cm到3cm处剪取耳缘，用10%甲醛固定，常规组织切片，观察有无血栓形成、内皮损伤及其它病理变化。7试验结果与氯化钠注射液组兔耳血管周围组织比较，注射用盐酸多西环素每天一次，连续7天耳缘静滴注射用盐酸多西环素16mg/kg，末次给药24小时后观察，兔耳血管纹路均清晰，周围组织无水肿。组织切片检查，兔耳血管边缘清晰，耳血管壁规则完整，内壁光滑，周围组织无水肿、炎症等病理变化。表明在本实验条件下，注射用盐酸多西环素按16mg/kg家兔耳缘静脉滴注,给药速度为60ml/hr，对血管无明显刺激作用。8试验结论注射用盐酸多西环素按0.8mg/ml浓度，多次家兔耳缘静脉给药(16mg/kg/次)，对家兔无明显血管刺激作用，亦末引起血管周围组织明显病变。稳定性研究的试验资料本试验重点考察了样品的性状、酸度、溶液的澄清度与颜色、澄明度、有关物质和含量，其中有关物质与含量测定采用高效液相色谱法。18一、试验仪器及方法岛津高效液相LC-20ALC-Operation岛津UV-2401PC紫外分光光度计SevenMultipH计(S40)二、试验及结果(一)影响冈素试验1、光照试验仪器ST—80C照度计条件45001X将011029批样品置4500X日光灯下，分别于5、10天取样测定有关指标，结果见表l。2、温试验仪器AXGZ—10型K用千燥箱将011029批样品置6(TC条件下，分别地5、10天取要测定各项指标，结果见表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>(二)加速试验仪器WS/08-01型调温调湿箱取批号为01129、011102、011104批样品，置温度40。C士2。C、相对湿度75%±5%条件下，分别于l、2、3、6月取样测定各项指标，结果见表2。表2注射用盐酸多西环素加速试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>190110291淡黄色疏松块状物2.7澄清，浅于黄绿色8号00.111.071.240.09100.22淡黄色疏松块状物2.8澄清，浅于黄绿色8号00.121.]31.330.0799.33淡黄褐色块状物2.8澄清，浅于黄绿色8号00.121.31.310.0699.66淡褐色块状物2.7澄清,浅于黄绿色8号00.131.121.310.0498.90淡黄色疏松块状物2.4澄清，浅于黄绿色8号00.101.071.250.06101.40111021淡黄色疏松块状物2.4澄清，浅于黄绿色8号00.101.041.220.10101.0淡黄色疏松块状物2.4澄清，浅于黄绿色8号0011U21.310.07101.23淡黄祝色块状物2.3澄洁,浅于贞绿色s00.111.111.2S().06i()o.；6淡祸色块状物2.3澄洁，浅于黄绿色S00.12uo1.30().()50淡贞色疏松块状物2-6澄洁，戯实愁0.111.031.21()■04102.50111041淡黄色疏松块状物2.6澄清，浅于黄绿色8号00.121101.290.06101.9淡黄色疏松块状物2.6澄清，浅于黄绿色S号00.121.111.370.07102.5淡黄褐色块状物2.6澄清，浅于黄绿色s号00.121.101.290.07101.76淡褐色块状物2.5澄清，浅于黄绿色S号00.121.121.300.07102.2(三)长期试验仪器WS/08-01型调温调湿箱取批号为011029、011102、011104批样品，置温度25。C土2。C、相对湿度60%±10%条件下，分别于3、6、9、12月取样测定各项指标，结果见表3。表3注射用盐酸多西环素长期试验结果批号时间天性状酸度PH值溶液的登淸度与颜色澄明度不合格率％土霉素(%)美他环素(%)P-多西环素％W%^望(%)0淡黄色疏松块状物2.8澄淸，浅于黄绿色8号00,101.071.220.0699.20110293淡黄色疏松块状物2.8澄清，浅于贫绿色S号0(U2i.oyO.(M9义16淡黄色疏松块状物2.8澄淸，浅于黄绿色8号00.111.101.270.0799—59淡黄祸色块状物2.6澄清，浅于黄绿色8号00.121.051.260.0699.912淡祸色块状物2.7澄清，浅于黄绿色8兮00.131.171.340.0699.50淡黄色疏松块状物2.4澄清，浅于黄绿色8兮00.101.071.250.06101.4011]02淡黄色疏松块状物2.3澄清，浅于黄绿色8号00.121.071.260.04101.16淡黄色疏松块状物2.4澄洁，浅于黄绿色8号0O.U1.081.250.06102.19淡黄褐色块状物2.4澄淸，浅于黄绿色s号00.111.061.260.06101.512淡褐色块状物2.3澄清，浅于黄绿色8号00.121.081.310.06100.70淡黄色疏松块状物2.6澄清，浅亍黄绿色8号00.111.031.210.04102.5Ol腦3淡黄色疏松块状物2.5澄清，浅于黄绿色8号00.121.021.200.06]02.7206淡黄色疏松块状物2.6澄清，浅于黄绿色8300.121.061.200.06102.59淡黄褐色块状物2.6澄清，浅于黄绿色8号00.101.080.05102.912淡褐色块状物2.5澄清，浅于黄绿色8号00.121.171.240.06102.6二、结论1、影响因素试验本品在高温条件下，外观颜色完全变成浅褐色，美他环素明显增加；光照条件下，未见明显变化。本品应在密闭阴凉处保存。2、加速试验对本品在4(TC，RH75。/。条件下加速试验6个月，有关物质略有增加，其他有关的各项指标无明显变化。3、长期试验对本品25"C，RH60。/。条件下加速试验12个月，有关物质略有增加，其他有关的各项指标无明显变化，该项工作仍在进行中。临床试验结果注射用盐酸多两环素属半合成四环类抗生素，其抗菌原理通过阻断细菌蛋白质合成的各个环节、抑制细菌的复制,达到抗菌的效果。与网环素相比，其具有抗菌作用较强，耐药株少，半衰期长，不良反应少等特点。体内、外试验均表明它对革兰阳性需氧菌中包括金黄色葡萄球菌、链球菌和革兰阴性需氧菌中的淋病奈瑟氏菌、嗜麦芽窄食单胞菌和部分革兰阴性杆菌有良好的抗菌作用。国外d用于临床，主要用于呼吸系统感染、泌尿系统感染、生殖系统感染和胆道感染等。该药片剂于70年代投入世界抗生素市场。至今已有胶囊、片剂、口服液等多种剂型。国产注射用盐酸多西环素由海口奇力制药有限公司开发研制开发成功，为评价该药治疗急性细菌感染的临床疗效与安全性，本研究以注射用阿奇霉素为阳性对照药，由重庆医科大学附属第一医院、海南省人民医院、海南医学院附属医院、海口市人民医院、海南省农垦总局医院5家医院进行了多中心随机对照临床试验。临床疗效研究结果表明，ITT集试验组与对照组的临床痊愈率分别为77.52%与66.67%;临床有效率分别为96.90%与94.44%。PP集试验组与对照组的临床痊愈率分别为78.74%与67.74%;临床有效率分别为97.64%与94.35%。不同细菌感染的临床疗效结果表明，试验组痊愈率优于对照组，经统计学分析，差异有显著性；二组有效率差异无显著性。对革兰阳性菌感染患者的痊愈率，试验组优于对照组，经统计学分析，差异有显著性；二组有效率差异无显著性。二组对革兰阴性菌、支原体感染的痊愈率和有效率经统计学分析差异无显著性。对支原体感染患者的临床疗效结果显示，试验组共分离支原体15株，经治疗后感染患者的痊愈率86.67%，有效率100%;对照组共分离支原体27株，经治疗后感染患者的痊愈率74.07%，有效率92.59%。经统计学分析差异无显著性。细菌学疗效结果显示，ITT集试验组与对照组的细菌清除率分别为95.45%与90.57%，PP集两组的细菌清除率分别为95.45%与90.48%，两组比较差异均无统计学意义。对临床分离的致病菌进行纸片敏试测定及最低抑菌浓度测定，结果表明多西环素对多种需氧革兰阳性、阴性菌有较强的抗菌活性，对溶血性链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌属等革兰阳性菌有较好的抗菌活性,对大肠埃希菌属、嗜血杆菌、克雷伯菌属、及部分肠杆菌属科细菌也有良好的抗菌活性。安全性评价结果表明，试验组与对照组的临床不良反应发生率分别为17.05%与13.49%(P=0.4882)。两组不良事件均以局部刺激及消化道反应为多见，可能与输液浓度较高和输液速度较快有关，但患者均可耐受，勿需特殊处理也不影响疗程完成。极少患者可有皮疹及肝酶学升高，治疗过程中应予注意。综上所述，注射用盐酸多西环素治疗急性细菌性感染疗效确切，不良反应少，安全性较好，是一安全有效的抗菌药物，适于敏感菌所致的急、慢性轻、中度呼吸道、泌尿道细菌及支原体、衣原体感染患者使用。临床试验结果表明以注射用阿奇霉素为对照药，进行随机、双盲、平行、对照多中心临床试验结果显示，由海口奇力制药有限公司研制的注射用盐酸多西环素治疗呼吸系统和泌尿系统的急、慢性轻、中度细菌、支原体、衣原体感染疾病是安全的、有效的，在临床疗效、细菌清除率、不良反应发生率等方面效果相当，对敏感细菌感染疗效确切，部分指标上(革兰阳性菌22感染痊愈率)优与阿奇霉素，不良反应低，安全性高，病人依从性好，表明注射用盐酸多西环素是一安全有效的抗菌药物，适于敏感菌所致的急、慢性轻、中度呼吸道、泌尿道细菌及支原体、衣原体感染患者使用。权利要求1、一种注射级盐酸多西环素，由下述步骤制作而成(1)、在溶解罐加入3倍口服级盐酸多西环素重量的28～32℃的无菌无水甲醇，再加入盐酸多西环素搅拌溶解，加入活性炭搅拌，并在30min内降温到23～27℃，静置30min后用0.45μm滤膜过滤；(2)、混合液依次经过0.45μm钛棒过滤器、0.22μm及0.01μm滤芯超滤除菌，过滤后送入无菌万级区洁净干燥间结晶罐内；(3)、真空干燥将混合液加热到48～52℃进行真空干燥；(4)、往结晶罐加入3倍盐酸多西环素重量的无菌无水乙醇，搅拌成混悬液，在25℃±2放置4小时转晶；用输液泵输送到经清洗消毒的三合一无菌干燥机中，再用盐酸多西环素重量3倍的无菌无水乙醇洗涤二次后，采用45～55℃之间的热风干燥10～12小时，即得到注射级盐酸多西环素。2、一种注射用盐酸多西环素冻干粉针剂，其特征在于包括有重量份数比为115:380:300:2.9的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇和焦亚硫酸钠。3、如权利要求2所述的注射用盐酸多西环素冻干粉针剂的生产工艺，包括以下步骤①、在室温下，将注射用水加入到经湿热灭菌的配液罐中，依次加入重量份数比为115:380:300:2.9的注射级盐酸多西环素、维生素C、甘露醇和焦亚硫酸钠，搅拌至完全溶解；②、称取溶液重量0.05%的活性炭，加入搅拌中的溶液中，继续搅拌脱色20分钟，用0.45pm滤膜粗滤脱炭，0.22|im和O.Ol)im除菌和除热源过滤，在无菌万级区接收备用；◎、冻干药品温度为-28°C，保持2.5小时；真空度小于30Pa，升温，控制温度低于-2(TC，保持2天；升温，控制药品温度低于3(TC，维持3小时，通入经0.22pm滤芯除菌过滤的高纯氮气破真空，恢复至常压，得到注射用盐酸多西环素冻干粉针剂。全文摘要本发明公开了一种注射用盐酸多西环素冻干粉针剂的制作工艺。本发明生产制得的注射用盐酸多西环素，降低了毒性物质β-多西环素和美他环素含量，用本发明生产的注射级盐酸多西环素生产的注射用盐酸多西环素，具有低刺激性低过敏性低不良反应的特点。本发明生产的注射级盐酸多西环素可用于生产供静脉注射用、注射用盐酸多西环素粉针、冻干粉针、注射液等供体内注射给药的药物制剂，具有低刺激性、低过敏性、低不良反应等优点。文档编号C07C237/26GK101555215SQ20091013866公开日2009年10月14日申请日期2009年5月12日优先权日2009年5月12日发明者许礼贵,韩宇东申请人:海口奇力制药股份有限公司