专利名称：从大黄根茎中提取高纯大黄酚的方法
技术领域：
本发明涉及一种从药用植物中提取分离有效成分的技术，更具体涉及一种从植物
大黄的根茎中提取大黄酚的方法。高纯度的大黄酚能改变中药制剂的剂型，提高中药大黄 的附加值。
背景技术：
大黄为蓼禾斗植物掌叶大黄Rheum palmatum L。、药用大黄R. officinale Baill.或
唐古特大黄R. tanguticum Maxim, ex Balf.的根及根茎。目前从大黄属分离出成分160多
种，主要包括蒽醌类、蒽酚酮及其酯衍生物、双蒽酮类等。大黄游离蒽醌类主要物质包括大
黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚以及它们与糖苷生成的结合型蒽醌。随着
科学工作者对大黄研究的不断深入，其主要药用部位基本明确，而如何最大限度地保留其
有效成分，除去无效成分，提高大黄药用的附加值，已成为大黄制剂研究的重点。 目前，对大黄蒽醌成分的提取纯化方法有较多的研究报道，但在实际操作中，不易
分离得到高纯度的药用成分，试验方法也不易重复，本专利提供的分离方法，是在大量的试
验中总结出来的一种优良提取分离工艺，能获得纯度较高的有效成分。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种从大黄根茎中提取分离高纯度大黄酚的方法，该 方法的工艺简单，容易被掌握，且成本低，大黄酚含量在98 %以上，该方法分离出的大黄酚 不仅能用作标准品，还能提高大黄医药产品的附加值。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施 提取分为3步，第一步为提取乙醇浸膏，第二部为游离蒽醌的提取，第三步将大黄 中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元提取。 —种从大黄根茎中提取分离高纯度大黄酚的方法，其步骤是 A、将大黄干燥茎块切片，粉碎后过2号筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的 1/5，倒入95%的乙醇(乙醇水=95 : 5)，乙醇倒入量为药材重量的5 10倍。置入超 声仪中超声30 50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂。将回收的溶剂再 倒入三角瓶，继续超声，重复本步骤3 5次，得到用乙醇提取的干浸膏。
B、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4 5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30 50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂、即浓縮萃取液，再将回收的氯仿重 新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓縮，重复本步骤3 5次，合并这3 5次 的浓縮物，得到游离蒽醌。C、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中，用渣重量的4 5倍的20%的硫酸(硫酸
水=i : 5)和氯仿(硫酸水氯仿=i : 2)在水浴上回流4 5h，稍放冷，过滤，分离出
氯仿层，用水洗至中性。继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30 50min，分离出氯仿层， 重复本步骤3 5次，合并3 5次氯仿液，回收溶剂，得到酸水解后的游离蒽醌，并与第2步骤得到的游离蒽醌合并。得到总游离蒽醌。 D、大黄酚的分离向游离蒽醌内加4 5倍量的氯仿溶解为氯仿液，再以2%氢氧 化钠水溶液(氢氧化钠水=2 : 98)振摇萃取3 4次，直至碱水层无色为止。用盐酸 调至pH值二 3，可析出沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，低温在45t:干燥3 4h 后，得到大黄酚和大黄素甲醚的混合物。 E、取干燥后的混合物用乙酸乙酯溶解，加入1 4倍样品量的硅胶，拌均匀并挥干 至无乙酸乙酯味。取为样品50 100倍重量的已活化的硅胶(500目)装柱，先用石油醚 冲洗柱子30 50min，缓慢加入已拌好的硅胶样品。用混合溶剂A(石油醚)和B(乙酸乙
酯氯仿丙酮冰乙酸=io : 3 : 2 : i)，按不同的比例洗脱柱子，混合溶剂的流速为
40 60ml/min，不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号见表1 :
表1 :大黄酚不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号
序列号 洗脱液B的含量(13/。) 收集时间(min)收集瓶号
1 0 0 30 0
2 0~2 60 1~3
3 2 2 240 4-24
4 30~30 20 25-26 注意洗脱液A和B是同步洗脱，A与B含量的和为100X，当B的含量为5%，此 时的A含量为95%。 合并l-9瓶，用TLC检测为大黄酚，乙酸乙酯重结晶，得大黄酚单体，经液相色谱检 测；含量为98. 89% ;液相色谱图附后。 通过本发明的提取分离手段得到高纯度的大黄酚单体，经液相色谱检测其单体纯 度为98%以上，该技术与现有分离大黄酚的技术相比，现技术提取工艺流程短，技术方法容 易掌握，适合中小企业。此方法还能改变大黄酚产品的剂型，极大提高中药大黄的产品附加 值。
图1为大黄酚重结晶后液相色谱测试图，该图中大黄酚的出峰时间为13min。从图 谱中可以看到大黄酸的峰值大，其杂峰少，用大黄酚标准品对照测试，其含量为98. 89%。
具体实施方式
实施例1 : A、将10kg大黄干燥茎块切片，粉碎后过2号筛，装入5000ml三角瓶，加入量为三 角瓶容量的1/5，倒入含量为95%的乙醇(乙醇水=95 : 5)，乙醇倒入量为药材重量 的5 10倍。置入超声仪中超声30 50min，过滤出溶液后回收溶剂；将回收的溶剂再倒 入三角瓶，继续超声，重复以上操作3 5次，得到乙醇提取干浸膏2050g，乙醇浸膏得率为20. 50%。 B、将1025g乙醇干浸膏和乙醇干浸膏重量4 5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声 30 50min，将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂、即浓縮萃取液，再将回收的溶 剂重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、抽滤、浓縮，重复本步骤3 5次，得到游离蒽 醌109. 8g。 C、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中，用渣重量4 5倍的20%的硫酸(硫酸水
=1:5)和氯仿(硫酸水氯仿=i : 2)在水浴上回流4 5h，冷却到20 25t:，过
滤，分离出氯仿层，用水洗氯仿层至中性。继续将氯仿按以上比例加入三角瓶中超声30 50min，分离出氯仿层，用水洗氯仿层至中性，重复本步骤3 5次，合并这3 5次氯仿液， 回收氯仿，得到游离蒽醌39. 1克。 以上(B和C)2次提取游离蒽醌的量为148. 9克，得率为大黄茎块的2. 978%。
D、大黄酚的分离向100g游离蒽醌内加4 5倍量的氯仿溶解为氯仿液，再向氯 仿液里加2%氢氧化钠水溶液(氢氧化钠水=2 : 98);振摇萃取3 4次，直至碱水层 无色为止。用盐酸调PH值二 3，可析出沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，低温在 45t:干燥3 4h后，得到大黄酚和大黄素甲醚混合物17. 3克。 E、将17. 3克混合物干燥，用乙酸乙酯溶解，加入1 4倍样品量的硅胶，拌均匀并 挥干至无乙酸乙酯味。取样品50 IOO倍量的已活化的硅胶(500目)装柱，先用石油醚 冲洗柱子30 50min，缓慢加入已拌好的硅胶样品。用混合溶剂A(石油醚)和B(乙酸乙
酯氯仿丙酮冰乙酸=io : 3 : 2 : i)，按不同的比例洗脱柱子，混合溶剂的流速为
40 60ml/min，不同时间内洗脱溶剂的比例及收集瓶号见表2 :
表2 :大黄酚和大黄甲醚不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号
序列号洗脱液B的含量(。/。)收集时间(min)收集瓶号
1 0 0 30 0
2 0~2 60 1~3
3 2~2 240 4-24
4 30~30 20 25-26 合并l-9瓶，用TLC检测为大黄酚，大黄酚的粗结晶重量4.5g，用乙酸乙酯重结晶， 重结晶一次后大黄酚晶体重量为3. 6g，晶体经液相色谱检测；含量为98. 89%。
权利要求
一种从大黄根茎中提取分离高纯度大黄酚的方法，其步骤是A、将大黄干燥茎块切片，粉碎后过筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95％的乙醇，置入超声仪中超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂，将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复本步骤3～5次，得到用乙醇提取的干浸膏；B、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4～5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂，再将回收的氯仿重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓缩，重复本步骤3～5次，合并这3～5次的浓缩物，得到游离蒽醌；C、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中，用渣重量的4～5倍的20％的硫酸和氯仿在水浴上回流4～5h，过滤，分离出氯仿层，用水洗至中性，继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30～50min，分离出氯仿层，重复本步骤3～5次，合并3～5次氯仿液，回收溶剂，得到酸水解后的游离蒽醌，并与第B步骤得到游离蒽醌合并，得到总游离蒽醌；D、大黄酚的分离向游离蒽醌内加4～5倍量的氯仿溶解为氯仿液，再以2％氢氧化钠水溶液振摇萃取3～4次，用盐酸调至pH值＝3，析出沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，低温在45℃干燥3-4h后，得到大黄酚和大黄素甲醚的混合物；E、取干燥后的混合物用乙酸乙酯溶解，加入1～4倍样品量的硅胶，拌均匀并挥干至无乙酸乙酯味，取样品50～100倍量的已活化的硅胶装柱，先用石油醚冲洗柱子30～50min，加入以拌好的硅胶样品，用混合石油醚和乙酸乙酯∶氯仿∶丙酮∶冰乙酸＝10∶3∶2∶1，按不同的比例洗脱柱子，混合溶剂的流速为40～60ml/min，不同时间洗脱溶剂，用TLC检测为大黄酚，乙酸乙酯重结晶，得大黄酚单体。
全文摘要
本发明公开了一种从大黄根茎中提取分离高纯度大黄酚的方法，其步骤A、将大黄干燥茎块切片，粉碎，装瓶，倒入乙醇，置入超声仪中超声，回收过滤溶液中的溶剂；B、将乙醇干浸膏和干浸膏的氯仿倒入瓶里萃取超声，再过滤，回收过滤溶液中的溶剂，过滤、浓缩，得到游离蒽醌；C、将氯仿萃取后的渣置入瓶中，用硫酸和氯仿在水浴上回流，过滤，分离出氯仿层，分离出氯仿层，得到总游离蒽醌；D、大黄酚的分离向游离蒽醌内加氯仿溶解为氯仿液，再振摇萃取，调pH值，析出沉淀，静置后过滤；E、取干燥后的混合物用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，拌均匀并挥干至无乙酸乙酯味，检测为大黄酚。工艺简单，容易被掌握，且成本低，大黄酚含量在98％以上。
文档编号C07C46/10GK101698638SQ200910272509
公开日2010年4月28日 申请日期2009年10月23日 优先权日2009年10月23日
发明者袁晓, 袁萍 申请人:中国科学院武汉植物园