专利名称：一种奥曲肽二硫键氧化环合方法
技术领域：
本发明涉及一种奥曲肽的制备方法，具体地，本发明涉及奥曲肽二硫键氧化环合方法。
背景技术：
奥曲肽是人生长抑素类八肽衍生物，是含有一个二硫键的环八肽，临床上主要用于上消化道出血和急性胰腺炎的治疗。人工用合成法制备奥曲肽时，只能得到直八肽，然后再氧化成环八肽，氧化方法的优劣直接影响后续纯化的难易，更直接影响最后的产品收率。目前已有的多肽二硫键氧化成环肽的方法是采用碘、铁(III)氰化钾或二甲基亚砜进行氧化，这些方法具有反应条件要求高，副反应较多，后处理需要进行脱盐等诸多缺陷。因此，还有必要开发新的奥曲肽二硫键氧化环合方法。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种奥曲肽二硫键氧化环合方法。本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一种奥曲肽二硫键氧化环合方法，所述方法采用醋酸铵缓冲液作为氧化工作液，在PH 7. 50-8. 50下，将奥曲肽前体直八肽氧化成环八肽。优选地，所述方法中醋酸铵缓冲液的浓度为0. 01 0. 05mol/L ；优选地，所述方法中奥曲肽前体直八肽的浓度为1 X 10_5 1 X 10_4mol/L。优选地，所述方法中氧化的温度为22 35°C。优选地，所述方法中氧化时间为M 48小时。优选地，用醋酸调节pH值至酸性，优选为pH 5.0，氧化结束。在本发明的一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤1)将裂解后的奥曲肽前体直八肽用50%醋酸水溶液溶解；2)用浓度为0. 01 0. 05mol/L的醋酸铵缓冲液将溶解的奥曲肽前体直八肽的浓度稀释至 ι χ KT5 1 X l(T4mol/L，3)用氨水调节pH值至7. 50-8. 50 ；4)于22 ;35°C内搅拌氧化M 48小时；5)用醋酸调节pH值至酸性，优选为pH 5.0，氧化结束。优选地，所述方法中奥曲肽前体直八肽采用固相多肽合成方法合成和酸解方法裂解。另一方面，本发明还提供了上述方法制备的奥曲肽。综上所述，本发明提供的奥曲肽二硫键氧化环合方法的工艺流程图见图1，该方法采用空气中的氧气进行氧化，将PH调节至pH7. 50-8. 50的范围内发生氧化反应(经实验表明，PH低于7. 50氧化速度太慢，而pH值高于8. 50，容易引起目标产物奥曲肽的变性和消旋，同时氧化物从氧化液中析出而造成氧化液浑浊，因此得不到目标产物奥曲肽)，而且氧化时缓冲液的醋酸铵浓度在0. 01 0. 05mol/L范围内即可提供足够的pH缓冲，从而避免了缓冲液盐浓度过高而需要进行脱盐的后处理操作。由此可见，本发明提供的方法，反应条件温和，反应时间短，副反应少，后处理方便，产物纯度高，最后产品收率高，适用于规模化生产。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图1本发明提供方法的工艺流程图。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。以下各实施例中使用的试剂和设备说明如下1)样品采用固相多肽合成方法合成的奥曲肽前体直八肽后，采用酸解方法裂解，得到裸直八肽，具体方法可参见王德心主编的《固相有机合成——原理及应用指南》(化学工业出版社，第127页)，以及N.休厄德，H. D.贾库布克著，刘克良，何军林等译的《肽 化学与生物学》(科学出版社，第172-183页)。2)试验试剂分析纯氨水(北京精细化学品有限公司)分析纯醋酸(北京精细化学品有限公司)纯化水(自制)3)设备电动搅拌机(河南英予实验仪器厂)，100升不锈钢圆桶恒温水浴锅(河南英予实验仪器厂)pH计(上海雷磁仪器厂)岛津分析液相系统(LC-lOAvp Plus)4)液相分析方法采用岛津分析液相系统(LC-lOAvp Plus)进行HPLC检测的色谱条件如下0DS色谱柱4. 6X 150、检测波长210nm、流速lml/min，乙腈三氟乙酸流动相。实施例1裂解后的裸直八肽用体积比为50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取样做HPLC分析，作为氧化前的对照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸铵溶液稀释至5升，用体积比为50%的氨水溶液调节pH值至 8. 40。继续30°C保温搅拌氧化，每M小时取样HPLC检测一次，氧化48小时后，用醋酸调节氧化液PH值至5. 00结束氧化。经HPLC分析，采用归一法积分，即目标物积分面积占所有物质的积分面积比，得到目标产物纯度大于80%。实施例2裂解后的裸直八肽用体积比为50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取样做HPLC分析，作为氧化前的对照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸铵溶液稀释至5升，用体积比为50%的氨水溶液调节pH值至 8. 00。继续30°C保温搅拌氧化，每M小时取样HPLC检测一次，氧化48小时后，用醋酸调节氧化液PH值至5. 00结束氧化。经HPLC分析，目标产物纯度大于80 %。实施例3裂解后的裸直八肽用体积比为50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取样做HPLC分析，作为氧化前的对照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸铵溶液稀释至5升，用体积比为50%的氨水溶液调节pH值至 7. 50。继续30°C保温搅拌氧化，每M小时取样HPLC检测一次，氧化48小时后，用醋酸调节氧化液PH值至5. 00结束氧化。经HPLC分析，目标产物纯度大于80 %。实施例4裂解后的裸直八肽用体积比为50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取样做HPLC分析，作为氧化前的对照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸铵溶液稀释至5升，用体积比为50%的氨水溶液调节pH值至 8. 20。继续30°C保温搅拌氧化，每M小时取样HPLC检测一次，氧化36小时后，用醋酸调节氧化液PH值至5. 00结束氧化。经HPLC分析，采用归一法积分，即目标物积分面积占所有物质的积分面积比，得到目标产物纯度大于80%。实施例5裂解后的裸直八肽用体积比为50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取样做HPLC分析，作为氧化前的对照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸铵溶液稀释至5升，用体积比为50%的氨水溶液调节pH值至 7. 80。继续25°C保温搅拌氧化，每M小时取样HPLC检测一次，氧化36小时后，用醋酸调节氧化液PH值至5. 00结束氧化。经HPLC分析，采用归一法积分，即目标物积分面积占所有物质的积分面积比，得到目标产物纯度大于80%。
权利要求
1.一种奥曲肽二硫键氧化环合的方法，其特征在于，所述方法采用醋酸铵缓冲液作为氧化工作液，在PH值7. 50-8. 50下，将奥曲肽前体直八肽氧化成环八肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中醋酸铵缓冲液的浓度为 0.01 0. 05mol/L。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法中奥曲肽前体直八肽的浓度为 1Χ1(Γ5 lXl(T4mol/L。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中氧化的温度为 22 35°C。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中氧化时间为 24 48小时。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤1)将裂解后的奥曲肽前体直八肽用50%的醋酸水溶液溶解2)用浓度为0.01 0. 05mol/L的醋酸铵缓冲液稀释至1 X 10_5 1 X lO-W/L，3)用氨水调节pH值至7.50-8. 50 ；4)于22 35°C内搅拌氧化M 48小时；5)用醋酸调节pH值至酸性，氧化结束。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中的奥曲肽前体直八肽采用固相多肽合成方法合成和酸解方法裂解。
8.权利要求1至7中任一项所述方法制备的奥曲肽。
全文摘要
本发明提供一种奥曲肽二硫键氧化环合的方法。本发明所提供的方法采用醋酸铵缓冲液作为氧化工作液，在pH 7.5-8.5下，将合成的奥曲肽前体直八肽氧化成环八肽。本发明所提供的方法氧化条件温和，副反应少，产物纯度高，最后产品收率高，适用于规模化生产。
文档编号C07K7/06GK102336808SQ20101023079
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月14日 优先权日2010年7月14日
发明者万兴中, 侯全民, 孙平, 肖安付 申请人:北京百奥药业有限责任公司