专利名称：一种从凤仙花中提取分离山奈酚的方法
技术领域：
本发明是关于中药有效成分的提取分离方法，具体涉及一种山奈酚的提取分离方法。
背景技术：
山奈酚为一种黄酮醇类化合物。该化合物具有多种药理活性，如抗氧化作用、抗炎 作用等，存在于多种中药及其相关制剂中，如银杏及其提取物和制剂、桑叶、白蕊草、石韦、 菟丝子、罗汉果、金钱通淋颗粒等。山奈酚的含量是上述中药和制剂质量的重要检测指标， 因此，在实际工作中需要提取分离纯度高的山奈酚作为对照品。同时，山奈酚作为一种具有 多种药理活性的成分，在对于其活性进行深入研究的过程中，如何简化山奈酚的提取制备 工艺、提高分离纯度，是制剂工艺研究过程的关键环节之一。目前，报道的山奈酚的制备方法有如下方法1)国际专利 TO2006/093368A1 "MANUFACTURING METHOD 0FKAEMPFER0L”，公开了 从茶叶的种子和叶子中提取山奈酚的方法，该方法主要公开了主要采用酸、碱或酶对茶叶 种子和叶子中含量较高的两种山奈酚的糖苷，即camelliaside A、camelliaside B，进行水 解得到山奈酚的方法。2)文献报道以银杏为原料制备山奈酚的方法(苏静、谈锋、谢峻等，循环高速逆 流色谱从银杏叶提取物中制备异鼠李素和山奈酚，西南大学学报(自然科学版)，2009， 31 (10) 96-100)。该方法的主要过程是银杏叶超声提取、提取液氯仿净化、树脂富集黄酮成 分、总黄酮用甲醇-25%盐酸(4 1)混合液水解、3次HSCCC(高速逆流色谱)分离，得到 山奈酚。3)文献报道的另外一种以银杏为原料制备山奈酚的方法(徐涛、潘见、袁传勋等， 液相色谱法制备山柰酚单体，安徽化工，2005，(2) :54-55)。该方法取银杏提取物，正丁醇萃 取、正丁醇萃取液浓缩、浓缩物用3M的盐酸水解、水解液离心、上清液用树脂富集、得到山 奈酚的粗品、粗品再用制备高效液相色谱法进行分离、冷冻干燥得到山奈酚。可见，上述山奈酚的制备方法较为繁琐，具体体现在1)需要采用水解方法使山 奈酚的糖苷转变为山奈酚；2)山奈酚的制备中对设备的要求严格，使山奈酚的制备成本上 升。因此，需要寻找一种更为方便快捷的制备山奈酚的方法。凤仙花为凤仙花属植物凤仙花Impatiens balsamina L.的干燥花瓣，具有活血 通经、利尿止痛的作用，其中含有多种黄酮类化合物，文献显示山奈酚为其中含量较高的 黄酮类成分(胡喜兰、韩照祥、刘玉芬等，凤仙花不同提取物中山奈酚的测定，分析实验室， 2007,26(5) :33-35)。因此以凤仙花的干燥花瓣为原料分离制备山奈酚，相对于上述采用 水解的方法，方法简便。基于此，文献报道了相应的从凤仙花中制备山奈酚的方法(胡喜 兰、程青芳、尹福军等，凤仙花中山萘酚的提取、分离与纯化，时珍国医国药，2010，21 (4) 932-933)。
该方法的具体步骤是1)取凤仙花的干燥花瓣，置于索式提取器中，石油醚浸泡过夜，后回流至提取液无 色；2)再将提取过的花瓣，置于索式提取器中，乙酸乙酯浸泡过夜，后回流至提取液无 色；3)乙酸乙酯提取液回收溶剂，得山奈酚的粗提物；4)采用葡聚糖凝胶(LH-20)进行分离，收集含山奈酚的流分，并浓缩得相应山奈 酚精提物；5)采用制备高效液相色谱对山奈酚精提物进行分离制备山奈酚。该方法山奈酚制备成本较高，不合适大规模工业化生产。原因有1)葡聚糖凝胶 (LH-20)价格较贵；2)制备高效液相仪器昂贵，同时制备山奈酚的量有限。另外，该方法步 骤较多，过程较为复杂。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种以凤仙花为原料，提取分离山 奈酚的方法。该方法相对于已有方法更为简便，适合工业化生产。本发明的目的是通过如下技术方案来实现A 取干燥的凤仙花花瓣，适当粉碎，加入10 100%乙醇或甲醇进行提取，提取液 浓缩回收溶剂，得总提取物；B 总提取物加水适当分散，上大孔树脂吸附柱，先用水溶液洗脱除杂，再用10 40%乙醇洗脱除杂，最后用40 100%的乙醇洗脱并收集该部分洗脱液，浓缩回收溶剂，得 山奈酚粗品；C 取聚酰胺湿法装柱，将30 100%乙醇溶解的山奈酚粗品溶液加入柱顶，用 30 100%乙醇洗脱，收集洗脱液，薄层检识，合并含有山奈酚的流份，回收溶剂，得山奈酚 的精品；D 取山奈酚的精品，于甲醇或乙醇与水组成的混合溶剂中重结晶，过滤，干燥，得 山奈酚纯品。上述方法中步骤A中的提取方式为煎煮、加热回流、超声提取、微波提取、高压提 取中的任意一种。上述方法中步骤A的方法为取干燥的凤仙花花瓣25重量份，加入浓度为40 100%的乙醇或甲醇400 900体积份，加热回流提取0. 5 2小时，过滤，药渣以同样的方 法先后提取2 5次，合并提取液，药渣弃去；提取液回收乙醇，得稠膏，即总提取物。上述方法中步骤A的优选方法为取干燥的凤仙花花瓣25重量份，加入浓度为 80%的乙醇750体积份，加热回流提取1小时，过滤，药渣以同样的方法先后提取3次，合并 提取液，药渣弃去，提取液回收乙醇，得稠膏，即总提取物，6. 8重量份。上述方法中步骤B中大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中等极性中的任意一种。上述方法中步骤B的方法为取总提取物，加药材量5 9倍体积份的水稀释，上 非极性、弱极性或中等极性中的任意一种大孔吸附树脂柱，树脂量为药材量的6 10倍体 积份，径高比为1 5 8，吸附流速2 4BV/h ；先用水洗脱5 13BV，流速2 5BV/h，再用10 40%的乙醇洗脱5 10BV，流速2 5BV/h;最后用40 100%的乙醇洗脱2 5BV,流速2 5BV/h，收集40 100%的乙醇洗脱液，回收溶剂，得山奈酚粗品。上述方法中步骤B的优选方法为取上述总提取物6. 8重量份，加药材量6倍体积 份的水稀释，上DlOl型大孔吸附树脂柱，树脂量为药材量的8倍体积份，径高比为1 6， 吸附流速3BV/h，先用水洗脱9BV，流速3BV/h，再用30%的乙醇洗脱9BV，流速3BV/h，最后 用50%的乙醇洗脱4BV，流速2BV/h，收集50%的乙醇洗脱液，回收溶剂，得0. 55重量份山 奈酚粗品。上述方法中步骤C的方法为取山奈酚粗品，用药材量0. 1 1倍体积份50 90 %的乙醇充分溶解，得上样液，另取聚酰胺湿法装柱，将上样液加入柱顶，径高比为 1 8 15，以50 100%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，薄层检识，合并含有山奈酚的流 份，回收溶剂得山奈酚的精品。上述方法中步骤C优选的方法为取山奈酚粗品0. 55重量份，用药材量0. 2倍体 积份70%的乙醇充分溶解，得上样液，另取药材量0. 4倍重量份的80 100目聚酰胺，用 70%乙醇湿法装柱，径高比为1 10，将上样液加入柱顶，以70%的乙醇水溶液洗脱，收集 洗脱液，薄层检识，合并含有山奈酚的流份，回收溶剂得0. 25重量份山奈酚的精品。上述方法中步骤D的方法为取山奈酚的精品，于2 8 4 9甲醇-水或2 8 4 9乙醇-水的混合溶剂中进行重结晶，过滤，干燥得山奈酚纯品。上述方法中步骤D优选的方法为取0.25重量份山奈酚的精品，于3 7乙醇-水 混合溶剂中重结晶，过滤，干燥得0. 15重量份山奈酚纯品。采用本方法提取制备山奈酚，提取工艺路线简单，适合于工业化大规模生产。
具体实施例方式下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1 山奈酚的纯度检查用高效液相色谱法检查纯度。仪器=Waters 600高效液相色谱仪。色谱柱=YWG-C18 色谱柱，250mmX4. 6mm，5ym。流动相甲醇_0. 1 %磷酸水溶液(50 70 50 30)；流 速0. 8 1. 2mL/min ；柱温室温；检测波长:367nm ；进样量:10μ 1 ；保留时间(RT)山奈 酚为5 30min ；色谱图纪录时间60min。面积归一化法测纯度，山奈酚的纯度为98. 8%.实验例2 山奈酚的结构测定熔点用X-4型数字显示显微熔点测定仪；紫外(UV)光谱用日本岛津UV-260型 紫外可见分光光度计；红外(IR)光谱用Perkin-Elmer 983G型仪器测定，KBr压片；核 磁共振氢谱和碳谱(1HNMR和13CNMR)用MERCURY-400核磁共振仪测定；质谱(MS)用 Finnigan-LCQDECA型质谱仪测定。上述精制方法所得的山奈酚纯品为黄色颗粒状结晶，熔点276 278 °C。 UV λ max (nm) :226，267，349。IRumax(KBr，cnf1) 3324 (OH)，1662 (C = 0)。MS (m/ ζ) :309 (M+Na)o 1H NMR ( δ，DMS0-d6) 12. 47 (5-0H) , 10. 85 (7-0H) , 10. 12 (3-0H), 9.43(4' -OH)，8. 03 (2H，d, J = 9.0Hz，C2, -H, C6, _H)，6. 91(2H，d, J = 9.0Hz，C3, -H, C5 , -H) ,6. 43 (1H, d, J = 1. 8Hz，C8-H)，6. 18 (1H，d, J = 1.8Hz，C6_H)。13C NMR( δ , DMS0-d6) : 175. 9 (C_4)，163. 9 (C_7)，160. 7 (C_5)，159. 2 (C_4 ' )，156. 2 (C_9)，146. 8 (C_2)，135. 6(C-3), 129. 5(C-2' )，129.5(C_6' ), 121. 7 (C-I' )，115.4(C_3' )，115.4(C_5')， 103. 1 (C-IO)，98. 2 (C_6)，93. 5 (C_8)。以上波谱数据与文献报道一致，结构如下
权利要求
一种山奈酚的提取分离方法，其特征在于包括如下步骤A取干燥的凤仙花花瓣，适当粉碎，加入10～100％乙醇或甲醇进行提取，提取液浓缩回收溶剂，得总提取物；B总提取物加水适当分散，上大孔树脂吸附柱，先用水溶液洗脱除杂，再用10～40％乙醇洗脱除杂，最后用40～100％的乙醇洗脱并收集40～100％的乙醇洗脱液，浓缩回收溶剂，得山奈酚粗品；C取聚酰胺湿法装柱，将30～100％乙醇溶解的山奈酚粗品溶液加入柱顶，用30～100％乙醇洗脱，收集洗脱液，薄层检识，合并含有山奈酚的流份，回收溶剂，得山奈酚的精品；D取山奈酚的精品，于甲醇或乙醇与水组成的混合溶剂中重结晶，过滤，干燥，得山奈酚纯品。
2.根据权利要求1中所述的提取分离方法，其特征是所述步骤A中提取方式为煎煮、 加热回流、超声提取、微波提取、高压提取中的任意一种。
3.根据权利要求1中所述的提取分离方法，其特征是所述步骤B中大孔吸附树脂为 非极性、弱极性或中等极性中的任意一种。
4.根据权利要求1中所述的提取分离方法，其特征是该方法包括如下步骤A 取干燥的凤仙花花瓣25重量份，加入浓度为40 100%的乙醇或甲醇400 900 体积份，加热回流提取0. 5 2小时，过滤，药渣以同样的方法先后提取2 5次，合并提取 液，药渣弃去；提取液回收乙醇，得稠膏，即总提取物；B 取总提取物，加药材量5 9倍体积份的水稀释，上AB-8、DlOl、D4020、HPD100中 的任意一种大孔吸附树脂柱，树脂量为药材量的6 10倍体积份，径高比为1 5 8，吸 附流速2 4BV/h，先用水洗脱5 13BV，流速2 5BV/h，再用10 40%的乙醇洗脱5 10BV,流速2 5BV/h，最后用40 100%的乙醇洗脱2 5BV，流速2 5BV/h，收集40 100%的乙醇洗脱液，回收溶剂，得山奈酚粗品；C 取山奈酚粗品，用药材量0. 1 1倍体积份50 90%的乙醇充分溶解，得上样液， 另取聚酰胺湿法装柱，将上样液加入柱顶，径高比为1 8 15，以50 100%的乙醇水溶 液洗脱，收集洗脱液，薄层检识，合并含有山奈酚的流份，回收溶剂得山奈酚的精品；D 取山奈酚的精品，于2 8 4 9甲醇-水或2 8 4 9乙醇-水的混合溶 剂中进行重结晶，过滤，干燥得山奈酚纯品。
5.根据权利要求1中所述的提取分离方法，其特征是该方法包括如下步骤A 取干燥的凤仙花花瓣25重量份，加入浓度为80%的乙醇750体积份，加热回流提取 1小时，过滤，药渣以同样的方法先后提取3次，合并提取液，药渣弃去，提取液回收乙醇，得 稠膏，即总提取物，6. 8重量份；B 取上述总提取物6. 8重量份，加药材量6倍体积份的水稀释，上DlOl型大孔吸附树 脂柱，树脂量为药材量的8倍体积份，径高比为1 6，吸附流速3BV/h，先用水洗脱9BV，流 速3BV/h，再用30%的乙醇洗脱9BV，流速3BV/h，最后用50%的乙醇洗脱4BV，流速2BV/h， 收集50%的乙醇洗脱液，回收溶剂，得0. 55重量份山奈酚粗品；C 取山奈酚粗品0. 55重量份，用药材量0. 2倍体积份70 %的乙醇充分溶解，得上 样液，另取药材量0. 4倍重量份的80 100目聚酰胺，用70 %乙醇湿法装柱，径高比为'1 10，将上样液加入柱顶，以70%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，薄层检识，合并含有山 奈酚的流份，回收溶剂得0. 25重量份山奈酚的精品；D 取0.25重量份山奈酚的精品，于3 7乙醇-水混合溶剂中重结晶，过滤，干燥得 0. 15重量份山奈酚纯品。
全文摘要
一种从凤仙花中提取分离山奈酚的方法。该方法是关于中药有效成分的提取分离方法，具体涉及一种山奈酚的提取分离方法。该方法是针对目前山奈酚制备过程复杂、成本较高的现状而建立的。该方法具体步骤为首先将凤仙花提取得到的总提取物，然后经过大孔树脂纯化得到山奈酚粗品，最后用柱层析和重结晶方法制备得到山奈酚的纯品。该方法能有效从凤仙花中分离得到山奈酚单体，为含山奈酚中成药的质量检测提供对照品，并有利于山奈酚活性的开发。
文档编号C07D311/40GK101941961SQ20101028691
公开日2011年1月12日 申请日期2010年9月20日 优先权日2010年9月20日
发明者刘璐, 姜华, 李军, 李晓明, 柴元武 申请人:河南科技大学