专利名称：一种断血流皂苷a的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种凝胶柱分离断血流皂苷A的方法
背景技术：
断血流为安徽省民间草药，为唇形科植物风轮菜与多头风轮菜的干燥地上部分， 主要含黄酮和皂甙成分。断血流总皂苷属于五环三萜类皂苷，是断血流中的主要止血成分， 有清热解毒、凉血止血功能。其中断血流皂苷A是其主要代表成分，可用于妇科出血及其他出血症、肠炎、菌痢、疮疡肿毒，蛇犬咬伤。其药理作用主要有促进血凝作用、收缩血管作用、 收缩子宫作用、直接止血作用、抑菌作用，临床应用对多种出血症特别是妇科出血有较好疗效。断血流皂苷A是断血流主要成分，化学性质稳定，它属于齐墩果烷型三萜皂苷类，易溶于热水，稀醇溶液，不溶于或难溶于丙酮、乙醚等极性小的有机溶剂。该皂苷在含水丁醇中溶解度较好。现有提取与分离断血流皂苷A的所得产品含量较低，方法多是水或乙醇回流提取、萃取、氧化铝柱或大孔树脂柱分离纯化。如张慧慧等发表的《断血流中断血流皂苷A的提取与含量测定》，该文献采用氧化铝柱分离纯化断血流皂苷A，并对比了水提，不同比例的醇提以及提取时间差异对提取的影响。专利200510027812. 4“中药断血流总皂苷的提取方法”，公开的方法是采用水提、醇沉、树脂纯化、硅胶柱层析等多种手段进行分离纯化断血流总皂苷，该方法操作较繁琐。而现有高含量断血流皂苷A的提取方法研究较少。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高含量的断血流皂苷A的制备方法。本发明之所以采用葡聚糖凝胶LH-20柱层析法分离断血流皂苷A，是因为传统的硅胶柱或者氧化铝柱层析时，硅胶柱料通常不能再生，而且柱料用量大。本试验的分离方法，分离效果较好，柱料的用量少、使用周期长，多次重复利用仍能保持较好的分离效果，再生处理简单。与以往的分离方法相比，克服了层析柱料不能重复利用的弊端。本发明的目的是采用以下技术方案实现的一种断血流皂苷A的制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取取断血流药材粉碎物，加入原料的8-15倍量水，加热提取2-3次，提取液加入沉降剂沉淀，静置，离心；2)大孔树脂吸附上述离心液加入大孔树脂吸附，水洗糖反应阴性，60-80%乙醇溶液洗脱，得洗脱液；3)萃取将上述洗脱液减压浓缩，浓缩液用水饱和正丁醇萃取2 3次，收集下柱液，减压浓缩；4)凝胶柱分离将上述浓缩液过凝胶柱层析分离，30-35%乙醇洗脱，收集下柱液，减压浓缩，真空干燥得产品。所述步骤1)中的提取时间为2-3小时，温度控制在60-80°C，沉降剂为ZTC-II型中药澄清剂，用量为药液的2-5%。所述步骤2)中的大孔树脂型号可选AB-8、X_5和HPD100中的一种，洗脱剂用量为树脂柱的3-4BV。所述步骤3)中的浓缩液浓缩至密度1. 1-1. 2，水饱和正丁醇用量为浓缩液的3-5倍。步骤4)中的凝胶柱是葡聚糖凝胶LH-20，洗脱液流速为0. 1-0. 3ml/min,薄层监测。综上所述，本发明存在以下优点热水提取，减少黄酮类杂质的混入；ZTC-II型中药沉淀剂的应用，有利于大孔树脂吸附，延长树脂寿命；大孔树脂富集和正丁醇萃取；再经过凝胶树脂分离，工艺操作简单，重现性高。
具体实施例方式下述实施实例中的断血流皂苷A的监测采用薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)，具体方法如下薄层色谱条件薄层板高效薄层硅胶板GF254展开剂氯仿-甲醇-冰醋酸-水(14 6 2 1)为展开剂显色剂10%的硫酸乙醇液在15°C左右展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰，供试品展开后在与对照品色谱相应的位置上，有一相同颜色的斑点。实施例1 取断血流药材粉碎物2Kg，加入20L的水加热至65°C提取3个小时，过滤，滤渣加入18L的水加热至65°C提取2个小时，过滤，滤渣加入16L的水加热至65°C提取1个小时， 过滤，合并滤液，加入1. 2L的ZTC-II型中药澄清剂，静置，离心滤过液通过1. 2L的HPD100 型大孔树脂柱，水洗至糖反应阴性，用4L的70%的乙醇溶液洗脱，旋转蒸发仪减压回收乙醇，浓缩洗脱液至密度1. 2，再用0. 4L水饱和正丁醇萃取3次，浓缩萃取液，加入处理好 0. 3L的LH-20型葡聚糖凝胶柱(径高比10 1)，用35%的乙醇溶液以0. 2ml/min流速洗脱，薄层监测，减压浓缩洗脱液，得结晶物1. 5g，含量96. 8%。实施例2 取断血流粉碎药材5Kg，加入60L的水加热至65°C提取3个小时，过滤，滤渣加入 50L的水加热至65°C提取3个小时，过滤，滤渣加入40L的水加热至65°C提取2个小时，过滤，合并滤液，加入3L的ZTC-II型中药澄清剂，静置，离心滤过液通过4L的X-5型大孔树脂柱，水洗至糖反应阴性，用15L的75 %的乙醇溶液洗脱，旋转蒸发仪减压回收乙醇，浓缩洗脱液至密度1. 1，再用1L、0. 8L水饱和正丁醇萃取2次，浓缩萃取液，加入LH-20型葡聚糖凝胶柱(径高比7 1)，用30%的乙醇溶液以O.lml/min流速洗脱，薄层监测，减压浓缩洗脱液，得结晶物3. 4g，含量95. 4%。实施例3 取断血流药材粉碎物5Kg，加入50L的水，加热至70°C提取3个小时，过滤，滤渣加入45L的水，加热至70°C提取3个小时，过滤，滤渣加入40L的水，加热至70°C提取2个小
4时，过滤，合并滤液，加入3L的ZTC-II型中药沉淀剂，静置，滤过液通过3L的AB-8型大孔树脂柱，水洗至糖反应阴性，用12L的70 %的乙醇溶液洗脱，旋转蒸发仪减压回收乙醇，浓缩洗脱液至密度1. 2，浓缩液分别用1L、0. 8L、0. 6L水饱和正丁醇萃取3次，减压浓缩萃取液，加入LH-20型葡聚糖凝胶柱(径高比8 1)，用32%的乙醇溶液以0. 2ml/min流速洗脱，薄层监测，浓缩得结晶物3. 2g，含量96. 5%。
权利要求
1.一种断血流皂苷A的制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取取断血流药材粉碎物，加入原料的8-15倍量水，加热提取2-3次，提取液加入沉降剂沉淀，静置，离心；2)大孔树脂吸附上述离心液加入大孔树脂吸附，水洗至糖反应阴性，60-80%乙醇溶液洗脱，得洗脱液；3)萃取将上述洗脱液减压浓缩，浓缩液用水饱和正丁醇萃取2 3次，收集下柱液， 减压浓缩，得浓缩液；4)凝胶柱分离将上述浓缩液过凝胶柱层析分离，30-35%乙醇洗脱，收集下柱液，减压浓缩，真空干燥得产品。
2.如权利要求1所述断血流皂苷A的制备方法，其特征在于所述步骤1)中的提取时间为2-3小时，温度控制在60-80°C，沉降剂为ZTC-II型中药澄清剂，用量为药液的2_5%。
3.如权利要求1所述断血流皂苷A的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的大孔树脂型号可选AB-8、X-5和HPD100中的一种，洗脱剂用量为树脂柱的3-4BV。
4.如权利要求1所述断血流皂苷A的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的浓缩液浓缩至密度1. 1-1. 2，水饱和正丁醇用量为浓缩液的3-5倍。
5.如权利要求1所述断血流皂苷A的制备方法，其特征在于所述步骤4)中的凝胶柱是葡聚糖凝胶LH-20，洗脱液流速为0. 1-0. 3ml/min，薄层监测。
全文摘要
本发明提供一种断血流皂苷A的制备方法，工艺步骤是将断血流粉碎，加8-15倍量的水加热提取2～3次，提取液加沉降剂沉淀，滤过液加入大孔树脂吸附，用60-80％的乙醇溶液洗脱，减压浓缩洗脱液，用水饱和正丁醇萃取2～3次，再减压浓缩萃取液，浓缩液过凝胶柱层析分离，用30-35％乙醇洗脱，收集下柱液，减压回收乙醇，干燥即得。本工艺操作简单，重现性好，适合制备高含量断血流皂苷A产品。
文档编号C07J63/00GK102443035SQ20101050013
公开日2012年5月9日 申请日期2010年10月9日 优先权日2010年10月9日
发明者刘东锋, 李法庆, 杨成东 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司