专利名称：一种双水相体系纯化远志呫吨酮类化合物的方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取纯化技术领域，涉及一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法。
背景技术：
远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.和卵叶远志Polygala sibirica L.的干燥根，主产于山西、陕西、河南、内蒙等地，具有益智安神、祛痰消肿等功效，常用于治疗心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒、乳房肿痛等。其化学成分主要包括皂苷类、咕吨酮类和糖酯类成分。药理研究表明，咕吨酮酮类化合物有着非常广泛的药理活性，包括利尿、抗微生物、抗病毒、强心、抗抑郁、抗结核、抗癌等活性。多数咕吨酮类化合物能够抑制单胺氧化酶A和B。一些在自然界分布极少的咕吨酮类化合物表现出抗白血病、中枢神经系统镇静作用。此外，咕吨酮类化合物的还有抗炎、 抑制脂质氧化等作用。咕吨酮类化合物现有的提取富集分离方法主要有溶剂提取、有机溶剂萃取、柱层析等方法，未见到用双水相系统富集分离远志咕吨酮类化合物的报道。双水相萃取(Aqueous two-phase extraction, ATPE)是两种水溶性不同的聚合物或者一种聚合物和无机盐的混合溶液，在一定的浓度下，体系就会自然分成互不相容的两相。被分离物质进入双水相体系后由于表面性质、电荷间作用和各种作用力(如憎水键、 氢键和离子键)等因素的影响，在两相间的分配系数不同，导致其在上下相的浓度不同，达到分离目的。由于双水相萃取条件较为温和，不会导致被分离物质的失活，该技术已应用于生物大分子的分离和纯化，并且在生物小分子的分离、抗生素提取、中药中有效成分提取分离、稀有金属/贵金属分离等方面的应用也取得了进展。近几年有关双水相提取天然药物中有效成分的报道也逐年增多。甘草酸采用乙醇/磷酸氢二钾双水相体系萃取，分配系数达到12. 8，回收率可达98. 3%。选用PEG/磷酸盐体系在一定温度、pH条件下萃取银杏浸取液，主要药用成分黄酮类化合物进入上相，达到分离目的，最佳条件在25V，PEG分子量在1500左右。天然产物有效成分含量低、难于富集，体系复杂，大分子与小分子、生命与非生命物质共存，特别是存在结构异构体等都使分离提纯的工作难度加大，ATPE技术在天然产物的分离纯化等方面的研究和开发是中药提纯技术领域的一个重要方向。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，该方法利用双水相萃取技术的特点，生产成本低、操作简单、可放大工业化，同时提高了远志咕吨酮类化合物的提取率。本发明以如下技术方案解决上述技术问题一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将远志根粉碎，加入60-90%乙醇溶液超声或加热回流提取，过滤，得到提取液；(2)大孔树脂吸附将上述提取液浓缩，得到乙醇浸膏，用蒸馏水溶解，置大孔树脂柱上，用蒸馏水洗至流出液无色后，再用3-5倍柱床体积50-65%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收试剂得到浓缩液；(3)双水相萃取取上述浓缩液，加入乙醇和硫酸铵双水相系统，混勻，分为上、下两相；(4)乙酸乙酯反萃取取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化钠，混勻，室温静置，分上、下两相；(5)浓缩干燥取出含有远志咕吨酮类化合物的上相，减压浓缩，真空干燥得到远志咕吨酮类化合物。步骤(2)所述大孔树脂为D101、AB_8、HPD100等型号中的一种。步骤C3)所述双水相萃取中，浓缩液与乙醇体积比为(3 9) 1，硫酸铵加入量为15-20g/100ml (浓缩液与乙醇总体积)；分相温度为30_50°C，静置时间为2_4小时。步骤(4)所述乙酸乙酯反萃取中，分相温度为20-30°C，静置时间为1-2小时。采用双水相体系富集分离远志咕吨酮类化合物，具有以下优势(1)采用大孔树脂吸附，对远志咕吨酮类化合物进行初步富集，提高了咕吨酮类化合物的浓度和纯度。(2)乙醇-硫酸铵双水相分相迅速，没有乳化层，缩短了生产周期。(3)双水相富集分离既达到了富集的目的，又浓缩了料液，表现为大量的杂质(如亲水性物质，细胞碎片等)进入下相，咕吨酮类物质进入上相，上相体较原始处理液减少， 达到浓缩效果。(4)双水相体系条件温和，能耗低，乙醇和硫酸铵易回收利用，不会造成环境污染。(5)本发明方法回收率高，操作简单、成本低，可放大工业化。
具体实施例方式实施例1 (1)远志提取液的制备远志根粉碎成粗粉，取5kg采用60%乙醇作为提取溶剂， 固液比为1 8，超声提取40分钟，提取2次，合并提取液。(2)大孔树脂吸附浓缩提取液得到乙醇浸膏，用等体积量的蒸馏水溶解，置于 DlOl大孔吸附树脂柱上，先用蒸馏水洗至流出液无色后，再以4倍柱床体积50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至原体积的1/5得到浓缩液。(3)双水相萃取取浓缩液加入硫酸铵和乙醇混勻，使浓缩液与乙醇体积比为 3 1，硫酸铵的质量浓度为20%，35°C水浴搅拌30分钟，然后静置3小时分相，上相是含有远志咕吨酮的乙醇水相，将下相降温、结晶，过滤，所得硫酸铵晶体可供循环利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml上相液加入70ml乙酸乙酯、40ml水和2g氯化钠， 充分混勻，在25 °C条件下静置2小时分相。(5)浓缩与干燥取富含远志咕吨酮的乙酸乙酯相，对其进行减压浓缩、70°C真空干燥，得到远志咕吨酮类化合物(9. 89g)。实施例2
(1)远志提取液的制备远志根粉碎成粗粉，取5kg采用70%乙醇作为提取溶剂， 固液比为1 10，超声提取30分钟，提取2次，合并提取液。(2)大孔树脂吸附浓缩提取液得到乙醇浸膏，用等体积量的蒸馏水溶解，置于 AB-8大孔吸附树脂柱上，先用蒸馏水洗至流出液无色后，再以5倍柱床体积65%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至原体积的1/6得到浓缩液。(3)双水相萃取取浓缩液加入硫酸铵和乙醇混勻，使浓缩液与乙醇体积比为 3 1，硫酸铵的质量浓度为20%，45°C水浴搅拌30分钟，然后静置4小时分相，上相是含有远志咕吨酮的乙醇水相，将下相降温、结晶，过滤，所得硫酸铵晶体可供循环利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml止相液加入90ml乙酸乙酯、45ml水和3g氯化钠， 充分混勻，在30°C条件下静置1. 5小时分相。(5)浓缩与干燥取富含远志咕吨酮的乙酸乙酯相，对其进行减压浓缩、70°C真空干燥，得到远志咕吨酮类化合物(9.46g)。实施例3 (1)远志提取液的制备远志根粉碎成粗粉，取5kg采用90%乙醇作为提取溶剂， 固液比为1 6，超声提取50分钟，提取2次，合并提取液。(2)大孔树脂吸附浓缩提取液得到乙醇浸膏，用等体积量的蒸馏水溶解，置于 HPD100大孔吸附树脂柱上，先用蒸馏水洗至流出液无色后，再以3倍柱床体积60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇至原体积的1/8得到浓缩液。(3)双水相萃取取浓缩液加入硫酸铵和乙醇混勻，使浓缩液与乙醇体积比为 3 1，硫酸铵的质量浓度为20%，5(TC水浴搅拌30分钟，然后静置2小时分相，上相是含有远志咕吨酮的乙醇水相，将下相降温、结晶，过滤，所得硫酸铵晶体可供循环利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml上相液加入75ml乙酸乙酯、35ml水和2. 5g氯化钠，充分混勻，在20°C条件下静置1小时分相。(5)浓缩与干燥取富含远志咕吨酮的乙酸乙酯相，对其进行减压浓缩、70°C真空干燥，得到远志咕吨酮类化合物(8.68g)。
权利要求
1.一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将远志根粉碎，加入60-90%乙醇溶液超声或加热回流提取，过滤，得到提取液；(2)大孔树脂吸附将上述提取液浓缩，得到乙醇浸膏，用蒸馏水溶解，置大孔树脂柱上，用蒸馏水洗至流出液无色后，再用3-5倍柱床体积50-65%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液， 减压回收试剂得到浓缩液；(3)双水相萃取取上述浓缩液，加入乙醇和硫酸铵双水相系统，混勻，分为上、下两相；(4)乙酸乙酯反萃取取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化钠，混勻，室温静置，分上、下两相；(5)浓缩干燥取出含有远志咕吨酮类化合物的上相，减压浓缩，真空干燥得到远志咕吨酮类化合物。
2.根据权利要求1所述的一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，其特征在于步骤(2)所述大孔树脂为DlOl、AB-8、HPD100等型号中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，其特征在于步骤C3)所述双水相萃取中，浓缩液与乙醇体积比为(3 9) 1，硫酸铵加入量为 15-20g/100ml (浓缩液与乙醇总体积)；分相温度为30_50°C，静置时间为2_4小时。
4.根据权利要求1所述的一种双水相体系纯化远志咕吨酮类化合物的方法，其特征在于步骤(4)所述乙酸乙酯反萃取中，分相温度为20-30°C，静置时间为1-2小时。
全文摘要
本发明提供一种双水相体系纯化远志呫吨酮类化合物的方法，该方法包括以下步骤将远志用60-90％乙醇超声或加热回流提取、过滤、浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂柱，50-65％乙醇洗脱，洗脱液浓缩后按比例加入硫酸铵和乙醇双水相系统，加热混合均匀，分为上下两相；下相降温、结晶回收硫酸铵晶体，取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化钠，混合均匀，取含有远志呫吨酮类化合物的上相，减压浓缩，真空干燥得到远志呫吨酮类化合物。本发明采用大孔树脂分离和双水相萃取技术提纯远志呫吨酮类化合物，工艺操作简单，为远志呫吨酮类化合物的工业化提供了技术基础。
文档编号C07D311/86GK102229594SQ20111011797
公开日2011年11月2日 申请日期2011年5月6日 优先权日2011年5月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司