专利名称：在自组装单层上固定a蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及在自组装单层上固定A蛋白的方法。
背景技术：
生物传感器用于检测或定量样品中的靶物质，即抗原。抗原与抗体、A蛋白与抗体之间的高亲和カ可用于生物传感器之中。具体来说，将A蛋白固定在生物传感器上。进ー步将抗体固定在A蛋白上。当向生物传感器提供抗原时，抗原就会由于抗原与抗体之间的高亲和カ被固定在生物传感器上。专利文件I公开了现有的利用A蛋白与生物素之间高亲和力的生物传感器。图2显示公开于专利文件I图7的生物传感器。 根据专利文件I图7的描述，该传感器用于筛选活体分子的活性。该传感器包含单层7、亲和标签8、接头分子9和蛋白质10。单层7包含化学式=X-R-Y所示的自组装单层(见专利文件I的第24页的23至26行、第25页的3至20行，第25页的27行至第26页的13行、第26页的14至22行)。X、R和Y的实例分别为HS-、烷烃和羧基(见专利文件I的第25页的3至20行，第25页的27行至第26页的13行、第28页的21至23行)。引用列表专利文献PTLl :W000/04382，对应于日本公开特许公报 No. 2002-520618(见第
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段)发明概述技术问题为了提高对靶物质的检测灵敏度或定量准确性，需要増加固定于生物传感器的A蛋白的量。本发明的发明人已发现，使自组装单层与一分子氨基酸结合之后再固定A蛋白，可以使得每单位面积固定的A蛋白的量显著增加。以此发现为基础提供本发明。本发明的目的是提供一种增加固定在自组装单层上的A蛋白的方法，以及提供具有使用此方法固定的A蛋白的传感器。问题解决方案以下的Al至C6项用于解决以上问题。Al :在自组装单层上固定A蛋白的方法，包含以下步骤(a)和步骤(b)，其顺序为步骤(a)，制备包含一分子氨基酸和自组装单层的基材，其中所述一分子氨基酸通过如下化学式(I)所示肽键与所述自组装单层结合[化学式I]
权利要求
1.在自组装单层上固定A蛋白的方法，包含以下步骤(a)和步骤(b)，其顺序为 步骤(a)，制备包含一分子氨基酸和自组装单层的基材，其中所述一分子氨基酸通过如下化学式(I)所示肽键与所述自组装单层结合 [化学式I]
2.根据权利要求I的方法，其中步骤(a)包含以下步骤(al)和步骤(a2)，其顺序为 步骤(al)，制备在其表面包含自组装单层的基材，所述自组装单层在一端具有羧基；和 步骤(a2)，提供所述一分子氨基酸，通过所述自组装单层一端的羧基与所述一分子氨基酸的氨基之间的反应形成化学式(I)所示的肽键。
3.根据权利要求I的方法，还包含在步骤(a)和(b)之间的如下步骤(ab) 步骤(ab)，使用N-羟基琥珀酰亚胺和I-こ基-3- (3- ニ甲基氨基丙基)碳ニ亚胺盐酸盐的混合物活化所述一分子氨基酸的羧基。
4.根据权利要求2的方法，还包含在步骤(al)和(a2)之间的以下步骤(ala) 步骤(ala)，使用N-羟基琥珀酰亚胺和I-こ基-3_ (3_ ニ甲基氨基丙基)碳ニ亚胺盐酸盐的混合物活化所述自组装单层的羧基。
5.根据权利要求I的方法，其中化学式(II)由如下化学式(III)表不 [化学式3]
6.根据权利要求I的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。
7.根据权利要求I的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸和苏氨酸。
8.根据权利要求I的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸和色氨酸。
9.根据权利要求I的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸。
10.包含自组装单层、一分子氨基酸和A蛋白的传感器，其中 所述一分子氨基酸位于所述自组装单层和A蛋白之间， 所述A蛋白通过如下化学式(II)所示的两个肽键与所述自组装单层结合， [化学式2]
11.根据权利要求10的传感器,其中化学式(II)由如下化学式(III)表示 [化学式3]
12.根据权利要求10的传感器，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。
13.根据权利要求10的传感器，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸和苏氨酸。
14.根据权利要求10的传感器，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸和色氨酸。
15.根据权利要求10的传感器，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸。
16.使用传感器检测或定量样品中含有的靶物质的方法，包含以下步骤(a)至(C)，其顺序为 步骤(a)，制备包含自组装单层、一分子氨基酸、A蛋白和抗体的传感器，其中 所述一分子氨基酸位于所述自组装单层和A蛋白之间， 所述A蛋白位于所述抗体和所述一分子氨基酸之间， 所述抗体特异性结合靶物质， 所述A蛋白通过如下化学式(II)所示的两个肽键与所述自组装单层结合， [化学式2]
17.根据权利要求16的方法,其中化学式(II)由如下化学式(III)表不
18.根据权利要求16的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。
19.根据权利要求16的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸和苏氨酸。
20.根据权利要求16的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸和色氨酸。
21.根据权利要求16的方法，其中所述一分子氨基酸选自半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸。
全文摘要
本发明的目的是提供一种提高在自组装单层上固定的A蛋白的量的方法。通过如下化学式(II)所示结构，将A蛋白固定到自组装单层可以达到此目的。[化学式2]
文档编号C07K17/02GK102725637SQ20118000694
公开日2012年10月10日 申请日期2011年1月19日 优先权日2010年1月25日
发明者畠冈由香利 申请人:松下电器产业株式会社