专利名称：针对人乳头瘤状病毒的疫苗及其制法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及了基因工程和疫苗学领域。具体地，本发明涉及针对人乳头瘤状病毒的疫苗及其制法和用途。更具体地，本发明涉及优化的适合毕赤酵母表达的人乳头瘤状病毒的主要衣壳蛋白Ll的编码序列，以及高效生产主要衣壳蛋白的方法。本发明还涉及由主要衣壳蛋白自组装形成的HPV的病毒样颗粒(HPVVLP)以及含HPV VLP的疫苗组合物。
背景技术：
宫颈癌的发病率在最常见的妇女癌症中，尤其是发展中国家，排居第二。自从 1983-1984年间发现HPV病毒感染与宫颈癌发生的相关性后，至今已经分离到了至少118种人乳头瘤状病毒，且现已被证实在肛生殖系统癌症中由HPV感染所诱发的癌症占3. %。在已被分离出的一百多种HPV病毒亚型中，已发现有15种具有诱导生殖系统癌症的发生因而被归为高危性HPV病毒亚型(例如朋￥16，18，31，33，52和58)，其中HPV16和 HPV18两种亚型在全世界占所有由HPV感染诱发宫颈癌的70%。继HPV16和HPV18之后， HPV52和HPV58在亚洲和非洲的具高患病率，占全世界宫颈癌发病率的2_3%。目前的研究资料表明，在中国，宫颈癌的发生率居高不下，是对目前妇女健康威胁性最高的问题之一，尤其是在中国的农村地区。中国地区的人乳头瘤状病毒的流行病学研究发现，中国地区HPV58病毒的检出率是仅次于HPV16病毒。当然，人乳头瘤状病毒的患病率在整体人群中呈现病毒亚型特异性分布。在山西， 广东和辽宁等地区，虽然HPV病毒型呈现不同分布特征，但是在这些地区中最常见的HPV病毒感染亚型为HPV16，其次分别为HPV58和HPV52。在最近一项大规模中国妇女HPV病毒亚型分布数据分析表明，整体上HPV的患病率(包括高危和低危HPV病毒亚型)在侵入性子宫颈癌(ICC)为82.7%，在高度鳞状上皮内病变(HSIL)中为88. 5%和在低度鳞状上皮内病变(LSIL)为69.3%。在侵入性子宫颈癌ICC中，HPV16为最常见亚型，HPV18居于HPV16之后。在ICC病例中，居于HPV16、HPV18 之后的为 HPV58，HPV52 和 HPV31。自HPV病原体被确认后，科学家们开始进行大量研究并发现，将HPV病毒样颗粒 (VLPs)中的主要衣壳蛋白Ll和次要衣壳蛋白L2构建进痘病毒内，两种蛋白表达后能自主组装成病毒样颗粒，其形态和免疫原性都与天然病毒颗粒相似。基于该发现，一些实验室和公司研制了含有HPVLl和/或L2及VLPs的单价或多价疫苗，并且发现与L2相比，Ll疫苗具有更强的抗原性和免疫原性。含不同亚型或混合型HPV的VLPs/Ll蛋白预防性疫苗已相继被成功研制并开始在临床实验上使用。其中美国默克公司研究出了含有HPV6、HPV11、HPV16和HPV18的四价疫苗，英国的葛兰素史克公司研究出了含有HPV16和HPV18的两价疫苗，临床结果表明两种疫苗的安全性和有效性都较好。虽然某些HPV亚型的VLPs/Ll的制备已经成功，然而，对于某些亚型VLP的制备却极其困难。例如，出于某种未知的原因，迄今为止，本领域尚没有成功地工业化生产HPV52 和HPV58亚型的Ll蛋白/VLP的报道。至今还没有人体对具有不同基因型的各HPV病毒亚型之间存在交叉反应的报道， 因此针对某一病毒亚型的特异性疫苗通常只能使得接种者对该特定病毒亚型有预防效果。 为使易感人群或患者具有针对抗一种以上病毒亚型(尤其是多种高危HPV)的预防免疫功能或治疗效果，则需对该人群联合施用针对几种相应的不同病毒亚型疫苗。因此，研制同时针对几种不同HPV亚型且适合在多种不同HPV亚型流行地域内使用的预防混合疫苗，将使接种的对象获得针对几种不同高危HPV病毒亚型的免疫力，从而预防和降低宫颈癌的发病率以及治疗宫颈癌患者的有效治疗。就目前的HPV疫苗的生产工艺而言，大多采用大肠杆菌或酿酒酵母作为工程菌进行生产。其中，大肠杆菌的表达的Ll蛋白没有被正确折叠和修饰，以包涵体的形式表达，因此要组装成病毒样颗粒Ll蛋白需要经过变性和复性的过程，纯化工艺复杂。同时体外组装的病毒样颗粒的免疫原性低于真核表达并自主组装的病毒样颗粒。用酿酒酵母生产HPV的VLP也存在一些明显的缺点。例如，在酿酒酵母中，外源的HPVLl基因存在于质粒中，而非染色体上，因此在培养或发酵生产过程中易发生质粒丢失。酿酒酵母易导致过度糖基化，从而导致所生产的VLP在某些个体中产生不利的过敏反应。酿酒酵母无法采用高密度发酵，另外培养基等原因导致发酵成本高，这些都造成生产成本居高不下。因此，本领域迫切需要开发新的高效、简便、低成本地制备HPV的Ll蛋白或VLP的方法，尤其是制备HPV52和HPV58的Ll蛋白或VLP的方法，以便能够开发针对这些特定亚型的疫苗。
发明内容
本发明的目的就是提供一种高效表达和生产人乳头瘤状病毒HPV52的主要衣壳蛋白L1(HPV52L1)以及病毒样颗粒(HPV52VLP)的方法。本发明的目的就是提供一种高效表达和生产人乳头瘤状病毒HPV58的主要衣壳蛋白L1(HPV58L1)以及病毒样颗粒(HPV58VLP)的方法。本发明的另一目的是提供相应的编码序列、载体、宿主细胞以及表达和纯化的工艺。在本发明的第一方面，提供了一种编码人乳头瘤状病毒的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列选自下组(a)编码人乳头瘤状病毒52的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与SEQ ID NO :1所示核苷酸序列有彡95%相同性，较佳地彡98%相同性，更佳地彡99%相同性；和(b)编码人乳头瘤状病毒58的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与SEQ ID NO :5所示核苷酸序列有彡95%相同性，较佳地彡98%相同性，更佳地彡99%相同性。
在另一优选例中，该编码人乳头瘤状病毒52的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如 SEQ ID NO 1 所示。在另一优选例中，该编码人乳头瘤状病毒58的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如 SEQ ID NO 5 所示。此外，本发明还提供了(c)编码人乳头瘤状病毒16的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :10所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与SEQ ID NO :9所示核苷酸序列有彡95%相同性，较佳地彡98% 相同性，更佳地> 99%相同性；和(d)编码人乳头瘤状病毒18的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :12所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与SEQ ID NO :11所示核苷酸序列有彡95%相同性，较佳地彡98%相同性，更佳地彡99% 相同性。在另一优选例中，该编码人乳头瘤状病毒16的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如 SEQ ID NO 9 所示。在另一优选例中，该编码人乳头瘤状病毒18的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如 SEQ ID NO 11 所示。在本发明的第二方面，提供了含有一种表达载体，它含有本发明第一方面中所述的核苷酸序列。在本发明的第三方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有第二方面中所述的表达载体或者基因组中整合有本发明第一方面中所述的人乳头瘤状病毒HPV的主要衣壳蛋白Ll的编码序列。在另一优选例中，所述宿主细胞是通过转入本发明第二方面中所述的表达载体或第一方面中所述的核苷酸序列并经同源重组而形成的，从而在基因组或染色体中整合有人乳头瘤状病毒HPV (尤其是HPV52和/或HPV58)的主要衣壳蛋白Ll的编码序列。在另一优选例中，所述的宿主细胞是毕赤酵母(Pichia Pastoris)。 在本发明的第四方面，提供了一种生产人乳头瘤状病毒HPV (尤其是HPV52和/或 HPV58)的主要衣壳蛋白Ll的方法，它包括以下步骤(a)在适合表达条件下，培养本发明第三方面中所述的宿主细胞，从而表达人乳头瘤状病毒HPV的主要衣壳蛋白Li，其中所述的宿主细胞是毕赤酵母；(b)分离纯化出步骤(a)中所表达的人乳头瘤状病毒HPV主要衣壳蛋白Ll或由人乳头瘤状病毒HPV主要衣壳蛋白Ll构成的病毒样颗粒在另一优选例中，所述的毕赤酵母宿主细胞的基因组中整合有2-30拷贝的人乳头瘤状病毒HPV的主要衣壳蛋白Ll的编码序列。在另一优选例中，所述的毕赤酵母工程细胞包括快速利用甲醇型和慢速利用甲醇型。在本发明的第五方面，提供了一种人乳头瘤状病毒HPV(尤其是HPV52和/或 HPV58)的病毒样颗粒(VLP)，所述的病毒样颗粒是由重组表达的主要衣壳蛋白Ll自组装构成。在另一优选例中，所述的HPV52主要衣壳蛋白Ll的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所
5示；所述的HPV58主要衣壳蛋白Ll的氨基酸序列如SEQ ID NO 6所示；所述的HPV16主要衣壳蛋白Ll的氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示；所述的HPV18主要衣壳蛋白Ll的氨基酸序列如SEQ ID NO 12所示。在另一优选例中，所述的主要衣壳蛋白Ll是在毕赤酵母中重组表达的。在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒HPV的病毒样颗粒(VLP)和药学上可接受的载体或赋形剂。在另一优选例中，所述的病毒样颗粒包括HPV52VLP和/或HPV58VLP。
在另一优选例中，所述的药物组合物是疫苗组合物。在另一优选例中，所述的疫苗组合物是单价疫苗或多价疫苗。在另一优选例中，所述的多价疫苗含有HPV16、HPV18、HPV52和HPV58的病毒样颗粒。在另一优选例中，所述的多价疫苗是含有HPV16、HPV18、HPV52和HPV58的病毒样颗粒的四价疫苗。在本发明的第七方面，提供了本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒52的病毒样颗粒(VLP)的用途，它被用于制备预防和/或治疗宫颈癌的疫苗组合物；或用于制备预防人乳头瘤状病毒52感染的疫苗组合物。此外，还提供了本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒58的病毒样颗粒(VLP) 的用途，它被用于制备预防和/或治疗宫颈癌的疫苗组合物；或用于制备预防人乳头瘤状病毒58感染的疫苗组合物。在本发明的第八方面，提供了一种预防人乳头瘤状病毒HPV52感染的方法，所述方法包括步骤给需要的对象施用免疫有效量的本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒 HPV52的病毒样颗粒(VLP)或含所述VLP的疫苗组合物。此外，还提供了一种预防人乳头瘤状病毒HPV58感染的方法，所述方法包括步骤 给需要的对象施用免疫有效量的本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒HPV58的病毒样颗粒(VLP)或含所述VLP的疫苗组合物。此外，还提供了一种预防人乳头瘤状病毒感染的方法，所述方法包括步骤给需要的对象施用免疫有效量的本发明第五方面中所述的人乳头瘤状病毒HPV52、HPV58、HPV16、 和HPV18的病毒样颗粒(VLP)或含所述VLP的多价疫苗组合物。应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再--累述。
图1显示了扩增HPV16L1，HPV18L1, HPV52L1和HPV58L1基因序列的结果。其中， Marker为分子量标准。图2显示了 pPIC3. 5K质粒的图谱，其中Ampicillin为氨苄青霉素抗性基因， Kanamycin为卡那霉素抗性基因。图3显示了酶切鉴定正确构建子的琼脂糖电泳分析结果。其中，各泳道如下1 pPIC3. 5K 质粒；2 分子量标准；3 :HPV16 ；4 :HPV18 ；5 :HPV52 ；6 :HPV16。
图4显示了不同优化方法优化后的HPV52L1基因和天然HPV52L1基因在毕赤酵母中表达情况比较结果。其中，各泳道如下1 阴性酵母破菌上清；M 蛋白质分子量标准；2-5 =SEQ ID NO 4序列构建的不同酵母菌种诱导后的破菌上清；6-9 :SEQ ID NO :21序列构建的不同酵母菌种诱导后的破菌上清；10-13 :SEQ ID NO :1序列构建的不同酵母菌种诱导后的破菌上清；14 :SEQ ID NO 3 序列构建的酵母菌种诱导后的破菌上清。图5显示了不同优化方法优化后的HPV58L1基因和天然HPV58L1基因在毕赤酵母中表达情况比较结果。其中，各泳道如下1 阴性酵母破菌上清；M 蛋白质分子量标准；2-5 :SEQ ID NO :22序列构建的酵母菌种诱导后的破菌上清；6-10 :SEQ ID NO :5序列构建的酵母菌种诱导后的破菌上清； 11-13 =SEQ ID NO :8序列构建的酵母菌种诱导后的破菌上清；14 :SEQ ID NO :7序列构建的酵母菌种诱导后的破菌上清。图 6 显示了 HPV52L1 蛋白的 POROS 50HS 纯化 SDS_PAGE(图 6A)和 Westernblotting(图6B)分析结果。其中，各泳道如下=A 阳离子纯化样品；B和C 阳离子纯化上样起始和结束时收集的流穿样品；M 蛋白质分子量标准；1-15 洗脱峰收集的样品。图 7 显示了 HPV58L1 蛋白的 POROS 50HS 纯化 SDS_PAGE(图 7A)和 Westernblotting(图7B)分析结果。其中，各泳道如下=M 蛋白质分子量标准；2-15 洗脱峰收集的样品。图8显示了 HPV52L1蛋白的凝胶过滤层析SDS-PAGE (图8A)和Western印迹分析 (图8B)结果。其中，各泳道如下A 阴性酵母破菌上清；B 蛋白分子量标准；1-5 第一峰收集的样品，每管IOml ；6-13 第二峰收集的样品，每管10ml。图中指针所指的位置为HPV Ll蛋白。图9显示了 HPV58L1蛋白的凝胶过滤层析SDS-PAGE (图9A)和Western印迹分析 (图9B)结果。其中，各泳道如下M 蛋白分子量标准；1-5 第一峰收集的样品，每管IOml ； 6-13:第二峰收集的样品，每管10ml。图中指针所指的位置为HPV Ll蛋白。图 10 显示了 HPV52L1 蛋白的 CHT 纯化 SDS-PAGE(图 10A)和 Western blot 分析 (图10B)结果。其中，各泳道如下1 凝胶过滤层析第一峰收集的样品；2和3 羟基磷灰石层析上样起始和结束时收集的流穿样品；M 蛋白质分子量标准；4-11 洗脱峰收集的样品。图 11 显示了 HPV58L1 蛋白的 CHT 纯化 SDS-PAGE(图 11A)和 Western blot 分析 (图11B)结果。其中，各泳道如下1 凝胶过滤层析第一峰收集的样品；2和3 羟基磷灰石层析上样起始和结束时收集的流穿样品；M 蛋白质分子量标准；4-13 洗脱峰收集的样品。图12显示了 4种HPV病毒样颗粒的透射电镜照片。图13显示了单价和四价疫苗小鼠血清中特异性抗体滴度比较柱状图。
具体实施例方式本发明人通过深入而广泛的研究，发现人乳头瘤状病毒HPV52和HPV58的主要衣壳蛋白Ll用常规技术无法成功表达，其主要原因之一是天然基因序列未经合理的优化。本发明人对基因编码序列进行了针对性优化设计，将优化后的HPV52L1蛋白的编码序列(SEQ ID NO 1)或HPV58L1蛋白的编码序列(SEQ ID NO 5)转入合适的宿主毕赤酵母(P. pastoris)，从而实现了 HPV52L1和HPV58L1的高水平分泌表达，在此基础上完成了本发明。在本发明的生产工艺中，因为HPV52L1和HPV58L1的表达水平高，可大幅度提高产品得率，从而获得表达量高、自组装性能高、提纯方便、得率高和性状稳定的HPV Ll蛋白以及自组装的VLP，因而大幅了降低生产成本，非常适合大规模生产。术语如本文所用，术语“病毒样颗粒”或“VLP”或“VLPs”指通过体外基因重组技术获得的病毒样颗粒(Virus-like particle, VLP)，它具有天然病毒的外部结构但不包含病毒 DNA/RNA,因此VLP在体内不会复制，提高了疫苗应用的安全性。同时，VLP具有极好的免疫原性。如本文所用，术语“HPV52L1，，和“HPV52VLP”分别指人乳头瘤状病毒HPV52的主要衣壳蛋白Ll和由该Ll蛋白自组装形成的病毒样颗粒。如本文所用，术语“HPV58L1”和“HPV58VLP”指人乳头瘤状病毒HPV58的主要衣壳蛋白Ll和由该Ll蛋白自组装形成的病毒样颗粒。如本文所用，术语“HPV16L1”和“HPV16VLP”指人乳头瘤状病毒HPV16的主要衣壳蛋白Ll和由该Ll蛋白自组装形成的病毒样颗粒。如本文所用，术语“HPV18L1”和“HPV18VLP”指人乳头瘤状病毒HPV18的主要衣壳蛋白Ll和由该Ll蛋白自组装形成的病毒样颗粒。如本文所用，术语“HPV Li”和“HPV VLP”指人乳头瘤状病毒HPV的主要衣壳蛋白 Ll和由该Ll蛋白自组装形成的病毒样颗粒。序列优化在本发明中，提供了优化的、特别适合在酵母细胞中表达的HPV52L1蛋白的编码序列以及HPV58L1蛋白的编码序列。HPV52L1的天然核苷酸序列是已知的(如SEQ ID NO :3所示)，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。HPV58L1的天然核苷酸序列是已知的(如SEQ ID NO :7所示)，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 6所示。本发明人先根据毕赤酵母密码子偏爱性，在不改变其氨基酸序列的前提下对 HPV52L1或HPV58L1的DNA序列进行了优化。然而，本发明人发现，仅依据密码子偏爱性而获得的优化序列并不适合在毕赤酵母中表达。因此，本发明人还根据其他因素进行了针对性的二次优化，其中包括消除不利于表达的二级结构(如发夹结构)，改变基因中A+T组成、改变G+C含量、改变mRNA 5’及3’ 非翻译区(UTR)、和/或改变mRNA的二级结构及翻译起始密码子的AUG旁侧序列等。经过测试和筛选，在众多修饰序列中获得了一个特别优化的HPV52L1编码序列。 此优化的HPV52L1的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，与HPV52L1天然序列的同源性较低， 仅约76. 0%。本发明优化的HPV52L1编码序列仍然编码天然的HPV52L1蛋白。经过测试和筛选，在众多修饰序列中获得了一个特别优化的HPV58L1编码序列。 此优化的HPV58L1的核苷酸序列如SEQ ID NO :5所示，与HPV58L1天然序列的同源性较低， 仅约79. 0%。本发明优化的HPV58L1编码序列仍然编码天然的HPV58L1蛋白。
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本发明的优化的HPVLl编码序列可用常规方法获得，例如通过全基因合成。工程菌的制备和发酵生产本发明的发明点主要在于改构的HPV Ll基因。至于将改构的HPV Ll基因插入质粒、转化毕赤酵母、工程菌的筛选、工程菌的发酵、以及产物的分离等技术基本上按本领域已知的常规方法进行(例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York =Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件)。通常，可在优化基因的5’端与3’端分别引进特异性酶切位点，用分子克隆的常规方法，将优化基因克隆入表达载体(如pPIC9、pPIC9K等)。然后，转化、整合入P.pastoris 宿主细胞染色体。利用常规方法(如G418抗性或Southern印迹法)选出高拷贝转化株， 摇瓶表达选出高表达工程细胞。工程细胞可以是快速利用甲醇型(Mut+)或慢速利用甲醇型(Muts)。整合入毕赤酵母染色体(或基因组)中的HPV Ll编码序列的拷贝数没有特别限制，可以为1-50个或更高，通常为2-30个。在获得工程细胞后，便可在适合的条件下培养工程细胞。凡适合于毕赤酵母生长、 表达的培养基都可用于本发明。例如，合适的培养基包括(但并不限于)以下培养基
权利要求
1.一种编码人乳头瘤状病毒的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其特征在于，所述的核苷酸序列选自下组(a)编码人乳头瘤状病毒52的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与 SEQ ID NO 1所示核苷酸序列有彡95%相同性；和(b)编码人乳头瘤状病毒58的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列，其中所述的核苷酸序列编码SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列，而且所述核苷酸序列的主要衣壳蛋白Ll编码区与 SEQ ID NO :5所示核苷酸序列有彡95%相同性。
2.如权利要求1所述的核苷酸序列，其特征在于，该编码人乳头瘤状病毒52的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；和该编码人乳头瘤状病毒58的主要衣壳蛋白Ll的核苷酸序列如SEQ ID NO 5所示。
3.—种表达载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的核苷酸序列。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体或者基因组中整合有权利要求1所述的人乳头瘤状病毒HPV的主要衣壳蛋白Ll的编码序列。
5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，它是毕赤酵母(PichiaPastoris)。
6.一种生产人乳头瘤状病毒HPV (尤其是HPV52和/或HPV58)主要衣壳蛋白Ll的方法，其特征在于，包括以下步骤(a)在适合表达条件下，培养如权利要求4所述的宿主细胞，从而表达人乳头瘤状病毒 HPV的主要衣壳蛋白Li，其中所述的宿主细胞是毕赤酵母；(b)分离纯化出步骤(a)中所表达的人乳头瘤状病毒HPV主要衣壳蛋白Ll或由人乳头瘤状病毒HPV主要衣壳蛋白Ll构成的病毒样颗粒。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的毕赤酵母宿主细胞的基因组中整合有2-30拷贝的人乳头瘤状病毒HPV52的主要衣壳蛋白Ll的编码序列。
8.一种人乳头瘤状病毒HPV52或HPV58的病毒样颗粒(VLP)，其特征在于，所述的病毒样颗粒是由重组表达的主要衣壳蛋白Ll自组装构成。
9.一种组合物，其特征在于，它含有权利要求8所述的人乳头瘤状病毒HPV52或HPV58 的病毒样颗粒(VLP)和药学上可接受的载体或赋形剂；更佳地，所述的组合物是疫苗组合物。
10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述的疫苗组合物是多价疫苗，并且所述的多价疫苗含有HPV16、HPV18、HPV52和HPV58的病毒样颗粒。
11.如权利要求8所述的人乳头瘤状病毒HPV52或HPV58的病毒样颗粒(VLP)的用途， 其特征在于，用于制备预防和/或治疗宫颈癌的疫苗组合物；或用于制备预防人乳头瘤状病毒52或人乳头瘤状病毒58感染的疫苗组合物。
全文摘要
本发明涉及针对人乳头瘤状病毒的疫苗及其制法和用途。具体地，本发明提供一种优化的适合毕赤酵母表达的人乳头瘤状病毒的主要衣壳蛋白L1(HPV L1)的编码序列，以及高效生产HPV L1的方法。优化后的主要衣壳蛋白L1基因非常适合酵母表达，具有高表达、高稳定的特点。本发明可高效、简便、低成本地获得HPV L1蛋白以及自组装的病毒样颗粒。本发明还提供了含HPV的病毒样颗粒的疫苗组合物。
文档编号C12P21/02GK102154325SQ20111000005
公开日2011年8月17日 申请日期2011年1月1日 优先权日2011年1月1日
发明者仝光杰, 姜自军, 徐绎函, 楼觉人, 蔡蓓蓓 申请人:上海生物制品研究所