专利名称：一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原及其制备的抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原及其制备的抗体。
背景技术：
3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮在动物体内产生的代谢物。由于能够抑制多种革兰氏阳性菌和阴性菌，并且对畜、禽、鱼肉类等具有明显的促生长作用，喹噁啉类药物(包括喹乙醇、乙酰甲喹、喹烯酮等药物)在我国的应用十分广泛。研究发现，喹噁啉类原形药物及代谢物存在着明显的安全性问题，具有明显的致畸、致癌、致突变、光敏和肾上腺皮质损害等毒副作用，严重危害了人和动物的健康。欧盟于1998年发文禁止在饲料中添加喹乙醇，在我国仅被批准用于35kg以下的猪使用。乙酰甲喹批准的是原料和片剂，规定用作猪痢疾和猪、牛细菌性肠炎的治疗药。3-甲基喹噁啉-2-羧酸是世界粮农组织和世界卫生组织所属的食品添加剂联合专家委员会(JECFA)确定的喹噁啉类药物残留的标志物和监控对象。国际上有关喹噁啉类药物的最高残留限量规定非常严格。欧盟规定卡巴氧和喹乙醇以及其代谢产物在动物性食品中不得检出而且规定这两种兽药禁止销售。我国农业部公告第235号规定，喹乙醇最高残留限量为喹乙醇+3-甲基喹卩惡啉-2-羧酸4ug/kg(肌肉),50ug/kg(肝脏),2mg/kg (饲料)。我国进行残留监测时，常采用免疫化学分析进行初筛，仪器方法进行确证。免疫化学分析由于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足。影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成就是产生特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。
发明内容
本发明的目的是提供一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原及其制备的抗体。本发明提供了一种化合物，即式(I)所示化合物。式(I)所示化合物为将3-甲基喹噁啉-2羧酸进行结构改造得到的化合物，既最大程度保留了 3-甲基喹噁啉-2羧酸的特征结构，又具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团。本发明还保护式(I)所示化合物的制备方法，包括如下步骤将3-甲基喹噁啉-2羧酸和Y-氨基丁酸反应，获得所述化合物。所述3-甲基喹噁啉-2羧酸和所述Y-氨基丁酸的质量比具体可为I : 2。所述反应具体可采用吡啶作为催化剂。本发明还保护一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原，为将式(I)所示化合物与载体蛋白偶联得到的偶联物。所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联比具体可为(11-8) I。所述偶联比指的是摩尔比。式(I)所示化合物与所述载体蛋白具体可通过活性酯法偶联。所述3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原如式
(II)所示。所述3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原可以作为免疫原也可以作为包被原。将所述3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原免疫动物，可获得高特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，方法简便、易行。将所述3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原包被酶标板，也可以用于喹乙醇代谢物(3-甲基喹噁啉-2羧酸)抗血清的检测。包被原与免疫原结构上的差异可以进一步提高检测的灵敏度和特异性。
权利要求
1.式⑴所示化合物；
2.式(I)所示化合物的制备方法，包括如下步骤将3-甲基喹噁啉-2-羧酸与Y-氨基丁酸反应，获得所述化合物。
3.式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物。
4.根据权利3所述的偶联物，其特征在于所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。
5.权利要求3或4所述偶联物在制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸特异性抗体中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
7.以权利要求3或4所述偶联物为免疫原制备得到的单克隆抗体。
8.抗喹乙醇代谢物单克隆抗体杂交瘤细胞5A2，它的保藏编号为CGMCCNo. 5778。
9.权利要求8所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
10.权利要求3或4所述偶联物，或，权利要求7或9所述单克隆抗体在检测喹乙醇代谢物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原及其制备的抗体。本发明提供了一种化合物，即式(I)所示化合物。式(I)所示化合物为将3-甲基喹噁啉-2羧酸进行结构改造得到的化合物，既最大程度保留了3-甲基喹噁啉-2羧酸的特征结构，又具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团。本发明还保护一种3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原，为将式(I)所示化合物与载体蛋白偶联得到的偶联物。将所述3-甲基喹噁啉-2羧酸人工抗原免疫动物，可获得高特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，方法简便、易行。所述人工抗原可用于检测喹乙醇代谢物。所述抗体可用于检测喹乙醇代谢物。
文档编号C07K14/77GK102659693SQ20121008863
公开日2012年9月12日 申请日期2012年3月29日 优先权日2012年3月29日
发明者张素霞, 李建成, 江海洋, 沈建忠, 王战辉 申请人:中国农业大学