专利名称：一种莱克多巴胺半抗原、人工抗原及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种莱克多巴胺半抗原、人工抗原及其制备方法。
背景技术：
莱克多巴胺是一种医药原料，具有广泛的生理效应，可用治疗充血性心力衰竭症的强心药，且常用于支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病的治疗。当其用量增加到临床用量的5-10倍时，可增加肌肉生长，减少脂肪蓄积，是良好的营养分配剂和生长促进剂。美国FDA在2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。可以同时提闻动物的日增重，提闻词料利用率，提闻动物的蛋白质含量。但是其在动物体内的残留一旦经食物链进入人体，会对食用者产生巨大危害，特别对心脏病、糖尿病、高血压、甲亢、青光眼、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精在上海曾经引发几百人的中毒事件；在台湾由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精，几乎挑起一场政治争端。目前我国禁止将3 -激动剂等药物动物促生长剂使用。但长期以来，各种因非法使用3 -激动剂而造成的中毒事件时有发生。为打击非法用药，保护消费者的健康与安全，迫切需要健全相关的检测方法。目前，兽药残留检测常用的方法有气相色谱、高效液相色谱以及气质联用等理化分析方法。虽然这些方法特异性强、灵敏度高，但是样品前处理操作步骤繁琐，成本较高，也不适用于大批量样品的筛选检测。免疫化学分析鉴于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足，在莱克多巴胺的残留检测中起着越来越重要的作用。影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成是产生特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。目前莱克多巴胺抗体的制备一般采用琥珀酸酐与混合酸酐联用法，此法以莱克多巴胺的亚氨基为偶联位点，用多元酸酐法使其与戊二酸酐反应引入游离羧基，然后用混合酸酐法使其生成混合酐，再在载体蛋白的游离氨基反应生成酰胺键，从而与载体偶联，增加了一个五个碳原子的间隔臂；或采用1，4-丁二醚作为连接臂活化载体蛋白，活化载体上的1，4-丁二醚游离的环氧基团与莱克多巴胺的2个苯酚基团中的任何一个反应而完成抗原的合成，增加一个四个碳原子的间隔臂。但是含有五个或四个碳原子的间隔臂可以在空间自由旋转，使连接的莱克多巴胺分子有可能被载体蛋白遮蔽，影响动物机体的识别。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种莱克多巴胺半抗原。本发明提供的莱克多巴胺半抗原，其结构式为如下式II所示
权利要求
1.一种莱克多巴胺半抗原，其结构式为如下式II所示
2.—种权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原的制备方法，包括如下步骤 1)莱克多巴胺与溴苄间甲酸甲酯在60°C-80°C反应12-18小时，得到中间产物； 2)水解所述中间产物，即得到权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于 步骤I)中，所述莱克多巴胺与所述溴苄间甲酸甲酯的摩尔比I : 1-1.5; 所述反应是在有机溶剂中进行，所述有机溶剂为含有K2CO3的丙酮溶液； 步骤2)中，所述水解采用LiOH水溶液；所述水解的时间为3h-5h。
4.一种莱克多巴胺抗原，为将权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原和载体蛋白偶联，得到莱克多巴胺抗原。
5.根据权利要求4所述的莱克多巴胺抗原，其特征在于 所述载体蛋白为牛血清白蛋白。
6.根据权利要求4或5所述的莱克多巴胺抗原，其特征在于 所述莱克多巴胺抗原的结构式如式III所示
7.一种制备权利要求4-6中任一所述的莱克多巴胺抗原的方法，包括如下步骤 将莱克多巴胺半抗原溶液加入载体蛋白溶液中，反应，得到所述的莱克多巴胺抗原。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述莱克多巴胺半抗原溶液按照如下方法制备将N，N-二甲基甲酰胺、I- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原和水混合，得到所述莱克多巴胺半抗原溶液； 所述载体蛋白溶液为将所述载体蛋白溶于PH为7. 4、浓度为O. OlM磷酸盐缓冲液得到的溶液。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于 所述反应的时间为12h-16h ； 所述混合的时间为3h-5h ； 所述N，N-二甲基甲酰胺、所述水、所述I- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、所述N-羟基琥珀酰亚胺、权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原的配比为2ml : 3ml : 30mg : 30mg : 20mg。
10.权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原或权利要求4-6中任一所述的莱克多巴胺抗原在检测莱克多巴胺或制备检测莱克多巴胺的产品中的应用； 或由权利要求I所述的莱克多巴胺半抗原或权利要求4-6中任一所述的莱克多巴胺抗原制备的抗体； 或一种化合物，其结构式为如下式I :
全文摘要
本发明公开了一种莱克多巴胺半抗原、人工抗原及其制备方法。本发明提供的莱克多巴胺半抗原，其结构式为如下式Ⅱ所示本发明的实验证明，本发明的莱克多巴胺半抗原、人工抗原，合成方法简单，纯度和产率较高。
文档编号C07K14/765GK102718670SQ20121017705
公开日2012年10月10日 申请日期2012年5月31日 优先权日2012年5月31日
发明者丁双阳, 史为民, 张素霞, 曹兴元, 李建成, 梁琦, 江海洋, 沈建忠, 王战辉 申请人:中国农业大学