制造用于经皮给药的透明质酸-蛋白结合体的方法以及由该方法制造的用于经皮给药的 ...的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于药物的经皮给药的剂型及其制造方法。更特别地，涉及用于经皮给药的药物给药体的制造方法、由该方法制造的用于经皮给药的药物给药体及其用途，通过使用具有生物适应性、生物降解特性和经皮给药特性的给药体，能够适用于包括疫苗的各种各样的蛋白药品及化学药品的经皮药物给药系统，能够安全地适用于人体，并且使得蛋白的生物活性最大化、生物结合效率高、药效保持时间增加。
【专利说明】制造用于经皮给药的透明质酸-蛋白结合体的方法W及由 该方法制造的用于经皮给药的透明质酸-蛋白结合体
【技术领域】
[0001] 本发明涉及经皮给药系统W及制造该经皮给药系统的方法。更特别地，通过使用 具有生物适应性、生物降解能力和经皮给药能力的给药系统，本发明提供一种经皮给药系 统和制造该经皮给药系统的方法，对于各种蛋白、化学药物和疫苗都是安全的给药工具，并 提供一种最有效的经皮给药方式，能够对具有最大生物活性的、强生物结合的和长期疗效 的蛋白进行给药。
【背景技术】
[0002] 经皮给药系统是将有效成分通过皮肤进行给药，具有无疼痛、自我给药和可在任 何时间处理等优点。
[0003] 但是，只有少量的药物才能渗透过作为外部物质的最初屏障的皮肤，经皮给药系 统尚未被积极地采用。
[0004] 因此，为了通过提高皮肤组织屏障的渗透性来增加穿过皮肤的量，正在积极进行 对使用微芯片的补下系统（patch system)的研究、W及对使用外部刺激例如超声波、电场 等的经皮给药系统的研究。
[0005] 包括精密成型的微芯片的补下在制造方面存在困难且成本高。在使用外部刺激来 提高皮肤渗透性的给药系统的情况下，因为需要设备和刺激，会丧失经皮给药系统的优点。
[0006] 因此，对于具有高皮肤渗透性和有效经皮给药能力的，不需要设备和外部刺激的 经皮给药系统提出了需求。
【发明内容】
[0007] 为了克服现有技术的问题，本发明提供一种制备透明质酸（HA)-蛋白结合体的方 法、由该方法制备的HA-蛋白结合体及其应用，其中，HA-蛋白结合体可W被用作经皮给药 系统，该经皮给药系统能够维持蛋白质药物的最大生物活性，并具有强生物结合效率，且能 够用于多种水溶性活性成分。
[0008] 在研究中，本发明的发明人发现，使用透明质酸的经皮给药系统与注射相比使用 起来更简单，且给药效率更高，尽管透明质酸的分子量高，但其具有优异的经皮能力。此外， 发明人发现，由于人体皮肤上存在HA受体因而细胞的生长可W被浓度控制，并且可W在例 如皮肤组织再生和化妆品的应用中有用。特别地，本发明中，被转送给透明质酸的蛋白的 结合是在特定抑条件下进行的，防止具有胺基的其他氨基酸的反应，例如蛋白质中的赖氨 酸，从而增加最大活性、生物结合效率和有效性的持续时间。
[0009] 根据本发明的实施方式，提供一种制备透明质酸-蛋白结合体的方法，包括制备 由化学式1所表示的透明质酸-酵（HA-酵）的第1步骤，和该透明质酸-酵与水溶性蛋白 的N-末端反应的第2步骤。
[0010] 根据该方法，提供由化学式2所表示的透明质酸-蛋白结合体。
[0011] [化学式1]
[0012]
【权利要求】
1. 一种制造透明质酸-蛋白结合体的方法，包括： 制造由化学式1表示的透明质酸-醛（HA-醛）化合物的第1步骤；和 使该透明质酸-醛与水溶性蛋白的N-末端反应的第2步骤， [化学式1]
在化学式1中，m和η的合计为50至10000的整数，η是5至5000的整数。
2. 如权利要求1所述的方法，其中，该方法包括通过使透明质酸（ΗΑ)、透明质酸的盐或 透明质酸的衍生物在黑暗条件下与氧化剂反应来对纤维素环进行开环的步骤。
3. 如权利要求2所述的方法，其中，透明质酸（ΗΑ)、透明质酸的盐或透明质酸的衍生物 具有10000至3000000Da的分子量。
4. 如权利要求2所述的方法，其中，氧化剂是过碘酸钠。
5. 如权利要求2所述的方法，其中，氧化剂以相对于透明质酸、透明质酸的盐或透明质 酸的衍生物的摩尔量的1至10摩尔倍的量，与透明质酸、透明质酸的盐或透明质酸的衍生 物反应2至24小时。
6. 如权利要求1所述的方法，其中，透明质酸-醛化合物具有10至50mol%的醛基取 代度。
7. 如权利要求1所述的方法，其中，第2步骤在pH5至7的缓冲溶液中进行。
8. 如权利要求1所述的方法，其中，缓冲溶液是pH5至6. 5的乙酸钠缓冲溶液。
9. 如权利要求1所述的方法，其中，透明质酸-蛋白结合体具有结合到1个透明质 酸-醛化合物的分子上的1至10个蛋白分子。
10. 如权利要求1所述的方法，其中，该方法进一步包括在第2步骤之后使用胺来封闭 未与蛋白反应的残留醛基的步骤。
11. 如权利要求10所述的方法，其中，胺是C1至C5的直链或支链的肼基甲酸烷基酯或 C1至C5的低级烷醇胺。
12. 如权利要求11所述的方法，其中，肼基甲酸烷基酯是肼基甲酸乙酯或肼基甲酸叔 丁酯，烷醇胺是甲醇胺、乙醇胺、丙醇胺、丁醇胺或戊醇胺。
13. 如权利要求10所述的方法，其中，胺是肼基甲酸烷基酯，且以相对于醛基的摩尔量 为5至10摩尔倍的肼基甲酸烷基酯反应12至24小时。
14. 如权利要求10所述的方法，其中，胺是烷醇胺，且以相对于醛基的摩尔量为5至10 摩尔倍的烷醇胺反应12至24小时。
15. 如权利要求1所述的方法，其中，水溶性蛋白是人体生长激素、α干扰素、红细胞生 成素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)、卵清蛋白或胰岛素。
16. -种透明质酸-蛋白结合体，由化学式2表示，并由权利要求1?15中任一项所述 的方法来制造， [化学式2]
化学式2中， P是水溶性蛋白， m、η和1的合计为50至10000的整数， η和1的合计为5至5000的整数，且 1是1至1〇〇的整数。
17. -种用于经皮给药的药物组合物，含有权利要求16所述的透明质酸-蛋白结合体。
18. -种化妆品组合物，含有权利要求16所述的透明质酸-蛋白结合体。
19. 一种疫苗组合物，含有权利要求16所述的透明质酸-蛋白结合体。
20. -种透明质酸-蛋白结合体的给药方法，包括： 制造由化学式2表示并由权利要求1?15中任一项所述的方法来制造的透明质酸-蛋 白结合体；和 对所需对象以有效治疗量给药该透明质酸-蛋白结合体， [化学式2]
化学式2中， Ρ是水溶性蛋白， m、η和1的合计为50至10000的整数， η和1的合计为5至5000的整数，且 1是1至1〇〇的整数。
【文档编号】C07K17/10GK104302670SQ201380018200
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2013年2月7日 优先权日:2012年2月7日
【发明者】韩世光, 金应三, 梁贞娥, 金慧珉, 崔宽镕, 申智惠, 权正熙 申请人:Phi生物医药股份有限公司