一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷c、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法，将玄参药材粉碎、乙醇提取后，经大孔吸附树脂富集得到安哥拉苷C粗提物、桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物，安哥拉苷C粗提物进行高速逆流色谱分离得到安哥拉苷C粗品，然后通过中低压制备色谱制得安哥拉苷C；桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物进行高速逆流色谱分离得到桃叶珊瑚苷粗品A和哈巴苷粗品，桃叶珊瑚苷粗品A通过中低压制备色谱结合制备液相色谱制得桃叶珊瑚苷，哈巴苷粗品通过制备色谱分离制得哈巴苷。本发明采用采用高速逆流色谱法制备，避免了样品的损耗，具有分离效果好，溶剂用量少，无污染，高效、快速的特点。
【专利说明】一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊 瑚苷和哈巴苷的方法 (一）
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物分离领域，涉及一种分离纯化安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴 苷的方法，尤其涉及一种利用高速逆流色谱分离纯化高纯度安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴 苷的方法。 (二）
【背景技术】
[0002] 玄参为玄参科植物玄参ScrophularianingpoensisHemsl的干燥根。中医认为 玄参味甘、苦、咸，其性微寒，具有滋阴凉血、泻火解毒等功效，一般用于热病烦躁、发斑、夜 寐不宁，自汗盗汗，喉咙肿痛等症，为临床常用中药。
[0003] 现代医学表明，玄参中含萜类、苷类、生物碱等成分，具有抗炎、抗肿瘤、保肝作用。
[0004] 安哥拉苷C分子结构式如下：
[0005]
【权利要求】
1. 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法，其 特征在于所述方法包括以下步骤： (1) 将玄参药材粉碎成粗粉，加入体积分数30%的乙醇溶剂中，加热至回流提取1-3 次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物； (2) 将乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和乙醇的混合溶剂梯度 洗脱，分别收集含有安哥拉苷C的洗脱液、含有桃叶珊瑚苷和哈巴苷的洗脱液，减压回收乙 醇，干燥、分别得到安哥拉苷C粗提物、桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物； ⑶将安哥拉苷C粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为4 :6 :10的正丁醇、乙酸 乙酯、水组成高速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分 开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设 定高速逆流色谱仪，在500?1000r/min转速下，以0. 5?5ml/min的流速注入流动相，以 波长190-380nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取安哥拉苷C粗提物，用上相、 下相体积比1 :1的混合溶剂溶解后进样，根据紫外检测器光谱图的峰形收集含安哥拉苷C 的流出液，浓缩、干燥，制得安哥拉苷C粗品； (4) 将安哥拉苷C粗品用中低压制备色谱进行纯化，用水、甲醇体积比1 :1的混合溶剂 进行等度洗脱，流速35mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含安哥 拉苷C的洗脱液、减压浓缩，冷冻干燥，制得安哥拉苷C纯品； (5) 将桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为2:7:8:8 的正丁醇、乙醇、硫酸铵饱和溶液、水组成高速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混 合充分后静置，按上下两相分开，取下相为固定相，上相为流动相，将固定相充满高速逆流 色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500?1000r/min转速下，以0. 5? 5ml/min的流速注入流动相，以波长190-380nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出 时，取桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物，用上相、下相体积比1 :1的混合溶剂溶解后进样， 定时收集流出液，用HPLC检测，合并相同成分的流出液，分别得到含桃叶珊瑚苷的流出液 和含哈巴苷的流出液，浓缩、干燥，分别制得桃叶珊瑚苷粗品A、哈巴苷粗品； (6) 将桃叶珊瑚苷粗品A通过中低压制备色谱分离，用水和甲醇的混合溶剂梯度洗脱， 流速35mL/min，波长210nm的紫外检测器检测，定时收集洗脱液，用HPLC检测，合并相同成 分的洗脱液，收集得到含桃叶珊瑚苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得桃叶珊瑚苷粗品B ; (7) 桃叶珊瑚苷粗品B再通过制备液相色谱进行纯化，以甲醇、水体积比5:95的混合溶 剂等度洗脱，流速3mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含桃叶珊瑚 苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得桃叶珊瑚苷纯品； (8) 取步骤（5)得到的哈巴苷粗品，通过制备液相色谱进行纯化，以甲醇、水体积比 12:88的混合溶剂等度洗脱，流速3mL/min，根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形 收集含哈巴苷的洗脱液，浓缩，干燥，制得哈巴苷纯品。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，乙醇溶剂的体积用量以粗粉 的质量计为3?10L/kg，每次回流提取的时间为30-60min，提取次数为1-3次。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2)中，所述大孔吸附树脂为非极 性、弱极性或中极性的大孔吸附树脂。
4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2)中，所述大孔吸附树脂为D101、 AB-8、DM301大孔吸附树脂。
5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2)中，所述大孔吸附树脂为AB-8 大孔吸附树脂。
6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2)中，所述梯度洗脱的程序为： 先用2-6倍柱体积的水洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数10 %乙醇的水溶液洗脱，再 用2-6倍柱体积的体积分数30%乙醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数50%乙醇 水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数95%乙醇水溶液洗脱。
7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2)中，所述梯度洗脱的程序为： 先用5倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积的体积分数10%乙醇的水溶液洗脱，再用5 倍柱体积的体积分数30%乙醇水溶液洗脱，再用5倍柱体积的体积分数50%乙醇水溶液洗 脱，再用5倍柱体积的体积分数95%乙醇水溶液洗脱。
8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（6)中，梯度洗脱的程序是：以甲醇 为流动相A，水为流动相B，Omin，流动相A的体积百分浓度为5 %，设定0至lOmin，流动相A 的体积百分浓度线性上升至10 %，10至35min，流动相A的体积百分浓度线性上升至30 %， 35至60min，流动相A的体积百分浓度线性上升至50%。
9. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3)或步骤（5)中，所述紫外检测器 的波长为210?254nm。
10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3)或步骤（5)中，高速逆流色谱 仪的条件为：800r/min转速，流速1. 5ml/min。
【文档编号】C07H1/08GK104327127SQ201410520014
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月30日 优先权日:2014年9月30日
【发明者】李行诺, 童胜强, 张文强, 钱夏娜, 颜继忠 申请人:浙江工业大学