生物学活性乳清蛋白质组合物，其生产方法及该组合物的应用的制作方法

专利名称：生物学活性乳清蛋白质组合物，其生产方法及该组合物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有相当量乳清蛋白质浓缩物的生物学活性乳清蛋白质组合物，所说的浓缩物含带有谷氨酰半胱氨酸基团之蛋白质和/或肽成分的乳清蛋白质离析混合物，其中所说的成分基本上以未变性状态存在，且乳清蛋白质浓缩物的生物学活性限于其未变性的构象。本发明还涉及经超滤和使乳清、乳清浓缩物或再生的乳清蛋白质浓缩物粉末受离子交换树脂作用以生产所说乳清蛋白质组合物的方法，以及生物学活性乳清蛋白质组合物的下列应用形式1)以适当浓度作为牛乳或牛乳蛋白质的代用品;
2)作为欲用于有乳糖吸收障碍者的食品的代用品;
3)作为乳制品，人或动物食品的代用品或补充品;
4)作为药物;
5)在增加人和动物器官内谷胱甘肽的合成速率，补充速率，和/或浓度水平的方法中使用;
6)给人或动物口服治疗或预防有效量的乳清蛋白质组合物以改善人和动物宿主抵抗力;
7)作为抗肿瘤疗效组合物。
本发明还涉及含有所说的生物学活性乳清组合物及必要时加有适于经口供给之中性载体的食品或食品添加剂、疗效食品、强化保健食品、医药组合物及抗肿瘤疗效组合物。
本发明还涉及经口服给予相当量含谷氨酰半胱氨酸(Glu-Gys)基团的牛乳清蛋白质混合物之未变性成分，即β-乳球蛋白和血清白蛋白及可能的免疫球蛋白，以增加细胞谷胱甘肽(GSH)水平的方法。
乳清是一种已知的乳品工业付产品。其组成近于没有其酪蛋白的脱脂乳的组成。酸乳清是经加入无机酸或经产生乳酸(在牛乳内接入乳酸发酵剂)，于PH接近酪蛋白等电点时酸化而成的。在分离凝乳后回收乳清。向牛乳内加入凝乳酶也可使酪蛋白絮凝或凝结。脱水收缩后得到的乳清即所谓酶凝乳清。如果在牛乳的PH值或稍低但高于5.8到6.0的PH下絮凝，则所得乳清称为甜乳清。
因此乳清是根据牛乳凝结的性质而限定的。酸乳清主要是由制造新鲜凝固乳酪和酪蛋白工厂得到的。根据所用原料乳及干酪加工工艺的不同，乳清的组成成分可有很大差异。所有乳清均含有矿无机盐、某些脂肪、一定量的乳酸及凝固酶，而最有用的部分显然是含氮组分。事实上，含氮部分主要包含具有高生物学价值的可溶性乳蛋白质。
从乳清中提取蛋白质的传统技术包括在PH接近其等电点的条件下，经变性加热处理，使之变为不溶性的。这种技术的一个明显缺点是使蛋白质变性。
如上所述，乳清蛋白是于PH4.6和20℃下沉淀酪蛋白后仍溶在乳清中的一组乳蛋白质。牛乳中的大部分乳清蛋白质是β-乳球蛋白(β-L)、α-乳球蛋白(α-L)、免疫球蛋白和血清白蛋白(SA)(其含量依次减少)。
从远古以来就已将乳清和乳清蛋白质用于营养目的。另外，在民间和古代医药中推荐使用乳清治疗各种疾病，而且有一个例子是终生给仓鼠喂饲乳清蛋白质食物，证明可以延长仓鼠的寿命，但未作出解释。
所有这些情况似乎都以某种方式与谷胱甘肽的改变有关，谷胱甘肽是一种对过氧化物游离基及其他毒性剂发挥抵御作用的普遍存在的要素。
谷胱甘肽是一种具有多种重要功能的、普遍存在的三肽硫醇(L-γ-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸)，这些功能包括异源生物质的解毒及使细胞免受氧中间体和游离基等需氧代谢付产物的损伤。调节细胞内谷胱甘肽将影响可被氧化损伤抑制的淋巴细胞增殖性免疫反应。谷胱甘肽可使细胞免受幅射及烷基化剂的影响。年龄相关的或实验诱发的晶状体谷胱甘肽水平降低与白内障形成有关。氧化性DNA损伤可得以迅速而有效地修复。人体能够不断地修复被氧化的DNA。小部分未被修复的损伤可引起DNA的持久性改变，并可能是引起老年病和肿瘤的一个主要因素。有几种与年龄相关的疾病很可能是由游离基诱发的。对实验动物和人体的研究显示，有关组织中年龄相关的维生素E和其他抗氧化剂改变的数据是很不一致的，反之则一致认为组织谷胱甘肽水平随着年龄老化而降低。
鉴于这些原因，已对影响细胞内谷胱甘肽合成的因素和增加细胞谷胱甘肽水平的途径产生了很大兴趣。
谷胱甘肽由三种氨基酸组成谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸。半胱氨酸的可用性是谷胱甘肽合成中的一个限制因素。半胱氨酸可得自食物蛋白质并在肝脏中由蛋氨酸经转硫作用而产生。已尝试了多种方法来增加细胞的谷胱甘肽水平。给予游离半胱氨酸并不是理想的方法，因为这种氨基酸会很快被氧化，有毒性并可能真正引起谷胱甘肽减少。给大鼠腹腔内注射N-乙酰基半胱氨酸已产生了相似的问题，不过口服这种化合物显示可防止4-乙酰氨基酚诱发的谷胱甘肽降低。给予被运输并在细胞内转化成半胱氨酸的化合物，如L-2-氧噻唑烷-4-羧酸酯用作细胞内半胱氨酸的输送系统可有利于增加细胞内谷胱甘肽。注射后4小时肝谷胱甘肽增加一倍，但8小时后转为正常，16小时后则低于正常水平。为增加组织谷胱甘肽水平所作另一项研究发现，给小鼠皮下注射γ-谷氨酰半胱氨酸(胱氨酸)，40～60分钟后肾中谷胱甘肽约增加55%，2小时后又转而接近对照值。所给予的化合物被完整地输送并用作谷胱甘肽合成酶的底物。另据报导，在给小鼠腹腔注射γ-谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酰-甲基(或乙基)酯后约2小时，小鼠肝和肾谷胱甘肽水平增加一倍，但8小时后又转为正常值。Meister给小鼠注射谷胱甘肽的一烷基酯，组织谷胱甘肽水平也具有相似的增加(US-A-4，784，685)。这种酯被输送到组织细胞内，并在细胞中去酯化，从而导致细胞谷胱甘肽水平增加。用这种方法获得的组织谷胱甘肽渐增的动力学是与已述及的腹腔注射谷胱甘肽甲基或乙基酯后的动力学改变是相似的。在急性实验中已清楚地证明这些方法的效果(US-A-4，784，685);在用L-2-氧噻唑烷-4-羧酸酯处理的小鼠中，注射乙酰氨基苯之后并没有出现预料的组织谷胱甘肽水平降低而是代之以组织谷胱甘肽水平和存活率的实际增加。增加组织谷胱甘肽水平的其他方法是基于在浓度降低后给予马来酸二乙酯或BSO，以使谷胱甘肽浓度“过调节”(“overshoot”)而建立的。这些研究都是于体外使用小鼠细胞系进行的。还发现使大鼠预先接触缺氧环境可增加肺内谷胱甘肽水平。
服用谷胱甘肽本身对组织谷胱甘肽水平影响不大，因为它显然地不能被完整地输送穿越细胞膜。
以前讨论的某些增加细胞内谷胱甘肽浓度的方法，由于存在与初期谷胱甘肽减少有关的危险，因此是有毒性或对健康不利的。这些包括使用γ-谷氨酰半胱氨酸(胱氨酸)、噻唑烷或谷胱甘肽酯(US-A-4，784，685)的方法为短期调整提供一种有益的可能性。但尚没有显示出它们在导致持久性细胞谷胱甘肽增高上的长期效力，也没有证明不存在可能的长期毒性。在最常使用的短期致癌性和诱变性试验中，确实发现谷胱甘肽和谷胱甘肽二硫化物是有积极效果的。
因此，本发明的一个目的是提供一种有生物学活性的新的乳清蛋白组合物，其可用于人和动物的食物中，并可作为药物使用，该组合物含有特异的乳清蛋白质组分或增加宿主细胞谷胱甘肽的组分，与使用未变性的乳清蛋白浓缩物相比，减少了为达到相似目的所需要的总量，该新的产品可作为胶囊，或易溶于水及其他液体的粉末给药。
本发明的另一个目的是提供一种通过口服给予含在牛源未变性乳清蛋白浓缩物中的半胱氨酸前体，来增加细胞内谷胱甘肽水平的方法。给予相似量的游离半胱氨酸则没有效果。另一方面，发现给予同样量的其他蛋白质，如有同样高半胱氨酸含量的卵清，也不能有效地增加组织半胱氨酸水平。因此，以其未变性形式(即半胱氨酸的位置与蛋白质的一级、二级和三级结构相关联)存在的特定的乳清蛋白浓缩物物理-化学组合物，似乎对半胱氨酸作为细胞内合成谷胱甘肽之前体的生物可利用性是一个关键性因素。
本发明的另一个目的是提供一种在不接触与使用其他已知方法有关之毒性作用的条件下增加细胞谷胱甘肽水平的方法;已有证据表明，小鼠、仓鼠和人长期摄入牛乳清蛋白质浓缩物是无毒性的。
本发明的另一个目的是提供为了任何目的的组织谷胱甘肽的持久性升高，这些目的是现有技术中期望得到的预防性细胞谷胱甘肽水平的长期升高，如使细胞免受游离基、外来有害化合物、药物解毒作用、幅射、免疫缺陷状态等的伤害。
基于工业上由牛乳制备乳清和乳清蛋白质浓缩物(W.P.C.)之方法的技术进步，令人惊奇地发现，为了保留生物学活性，W.P.C.必须是未变性的。
因此，本发明中提出了一个与制备乳清蛋白质浓缩物有关的新概念，即制备方法中具有保持未变性之构象的特定目的，而其新发现的生物学活性正是依赖于这种构象。这一概念自然地涉及工业化生产乳清蛋白质中的两个基本阶段。
1.由牛乳中分离乳清的过程，其应使乳清蛋白质构象尽可能小地偏离天然可接受的范围。因此该过程应避免过度加热处理，及避免在可能使乳清蛋白质变性的空气存在下振荡。
2.设计适当的乳清蛋白质浓缩物生产工艺，以使乳清中的蛋白质恢复其天然构象。因此超滤和工艺的其他步骤应尽可能地避免或限制加热、泵送、通气及其他促进蛋白质变性的加工步骤。
本发明所提供的优点主要有1.口服给予相当量的牛乳清蛋白质浓缩物可提高小鼠肝、心和脾脏中的谷胱甘肽含量(

图1、2、3)。
2.这种改变是温和但持久的，而且是有着重要生物学意义的。
3.这一特性限于未变性乳清蛋白质浓缩物的构象。
4.谷胱甘肽是一种三肽(L-γ-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸)。
给予半胱氨酸(极限底物)或谷胱甘肽本身或其他蛋白质源(如卵清)并不能有效地提高细胞GSH水平。但发现给小鼠腹腔注射γ-谷氨酰-半胱氨酸可在短时间(几个小时)内提高组织GSH水平。
5.乳清蛋白质浓缩物含有相当量的谷氨酰半胱氨酸基团，与酪蛋白不同，当以其喂饲小鼠时并不能增加组织GSH水平。
6.谷氨酰半胱氨酸基团位于β-乳球蛋白和血清白蛋白部分中(见表1)。对牛乳免疫球蛋白的氨基酸序列尚未完全明了。
7.胰酶消化并不能裂解乳清蛋白质的二硫键;已知代之以热变性可裂解该键，从而使分子的球形结构伸展以形成一种无规则的螺旋构象。
下面参考附图和附表进一步描述本发明。
图1喂饲不同食物之小鼠的脾谷胱甘肽含量。
＊未免疫的小鼠用4种食物喂饲3周，脾谷胱甘肽或身体生长无组间差异＊＊饮食治疗3周后免疫身体生长和血清蛋白无组间差异＊＊＊U-Lacp未变性的乳清蛋白质浓缩物D-Lacp变性的乳清蛋白质浓缩物“DanmarkProtein”生产的Lacprodan-80免疫后第2、3、4和6天，喂饲U-Lacp的小鼠脾谷胱甘肽水平分别为13%(P＜0.01)、8%(P＜0.02)、21%(P＜0.01)和20%(P＜0.01)，此高于喂饲D-Lacp之小鼠的相应值，即分别为12%(P＜0.01)、7%(P＜0.05)、20%(P＜0.001)和20%(P＜0.001)，此又高于喂饲酪蛋白之小鼠的相应值，即分别是4%(N.S)、10%(P＜0.02)、21%(P＜0.001)和19%(P＜0.01)，此又高于喂饲卵清蛋白质之小鼠的相应值。
图2和3喂饲不同食物的雄性C57BL/6NIA小鼠的肝和心脏谷胱甘肽含量。
各数值均代表平均值±标准差(n＝10)U-LACP未变性的乳清蛋白质浓缩物D-LACP变性的乳清蛋白质浓缩物食物消耗量、体重和血清蛋白无组间差异图2中，U-LACP＞Purina，酪蛋白，卵清ANOVA(Sheffe试验)分析P＜0.05U-LACP＞D-LACPANOVA(Sheffe试验)分析P＜0.01图3中，U-LACP＞酪蛋白，卵清ANOVA(Sheffe试验)分析P＜0.05U-LACP＞D-LACP，PurinaANOVA(Sheffe试验)分析P＜0.01图4在喂饲含有未变性乳清蛋白质浓缩物的食物之小鼠中，其对SRBC的脾细胞免疫反应增强。
U-Lacp未变性的乳清蛋白质浓缩物D-Lacp变性的乳清蛋白质浓缩物“DanmarkProtein”生产的Lacprodan-80
U-Lacp＞D-Lacp，酪蛋白，酪蛋白+CYS，卵清蛋白P＝0.0004图5谷胱甘肽在食物乳清蛋白之免疫增强效应中的作用。
图5给出了用106个羊红血细胞(SRBC)免疫后第5天显示空斑形成细胞产生之峰值的空斑形成细胞/脾(PEC)数值。用20gU-Lacp丁硫堇硫氧亚胺(BSO)或酪蛋白(C)/100g食物进行饮食治疗3周后的效果。各数值均代表均数±标准差(n＝10)U-Lacp+BSO或酪蛋白P＜0.005。右用5×106个羊红血细胞(SRBC)免疫后第4天显示谷胱甘肽(GSH)之峰值的脾SH含量。用20g U-Lacp+BSO或酪蛋白(C)/100g食物进行饮食治疗3周后的效果。各数值均代表均数±标准差(n＝10)。U-Lacp对U-Lacp+BSO或酪蛋白p＜0.0005。U-Lacp＝未变性的乳清蛋白质浓缩物(Lacprodan-80)。
表1牛和人乳的蛋白质组成。
表2乳清蛋白质浓缩物和卵清蛋白质的氨基酸组成。
探索了食物蛋白质、GSH与宿主免疫反应的相互关系。即研究了是否不同的蛋白质源如含与乳清蛋白质浓缩物同样高水平半胱氨酸的卵清(表2)，具有相似的增加GSH组织含量的作用。结果发现卵清蛋白食物并不能使宿主免疫反应提高到平均水平以上。尽管喂饲三周U-Lacp(未变性的乳清蛋白质)并未改变脾脏中静止不变的GSH水平，但在成年C3H小鼠中所作的这项研究表明，在喂饲U-Lacp的小鼠中，其对SRBC的脾细胞免疫反应增强(图4)是与抗原引发的淋巴细胞克隆扩增期间脾细胞GSH的持续高水平相关联的，相比之下，喂饲营养等价物D-Lacp(变性的乳清蛋白质)、酪蛋白、富半胱氨酸酪蛋白、或卵清蛋白质食物的小鼠则呈现脾GSH水平降低的图形(图1)。后四组也显示较低的免疫反应(图4)。给予S-(正丁基)同型半胱氨酸硫氧亚胺可使喂饲乳清蛋白质(U-Lacp)食物的小鼠脾谷胱甘肽水平降低一半，同时其体液免疫反应产生显著降低。该试验进一步证实了谷胱甘肽在食物乳清蛋白质之免疫增强效应中的重要作用(图5)。
组织谷胱甘肽检测法在5-磺基水杨酸(5%W/V)中匀浆处理90毫克小鼠心脏或肝脏。在微量离心管中以10，000g将匀浆离心5分钟。按照Anderson方法在同一天使用上清液进行检测。数值以每克湿组织中的微摩尔数(μmol)表示(图2和3)。
结果表明在17月龄开始喂饲三个月后，喂饲U-Lacp小鼠肝和心脏谷胱甘肽含量比喂饲D-Lacp、酪蛋白、卵清蛋白质或Purina食物者高(图2和3)。喂饲Purina实验室食物的小鼠在10周、17、20、21月龄对心和肝脏中GSH值是相近的。连续喂饲U-Lacp食物3和4个月后，心和肝脏GSH含量提高到“正常”值以上(图2和3)。总之，在给成年C3H/HeN小鼠喂饲U-Lacp食物3周后，在其淋巴细胞的抗原引发的克隆扩增期间，脾GSH含量得以增加，相比之下，喂饲D-Lacp、酪蛋白或卵清蛋白质食物的对照组则呈现GSH水平降低(图1)。在老龄C57BL/6N1A小鼠中，长期喂饲U-Lacp食物可导致肝和心脏GSH水平的温和但持久的增加(图2和3)。WPC(乳清蛋白质浓缩物)的GSH增加活性只限于它的未变性形式(U-Lacp)。这一特性不仅是由于WPC的高半胱氨酸含量造成的;因为具有相似半胱氨酸含量的其他蛋白质(卵清)并未表现出这一生物学活性。U-Lacp的这一特性并不是特异地依赖于它的根据体重、血清蛋白量和食物消耗量所估计的营养效率，而似乎是依赖于天然形式之蛋白质的一级、二级和三级结构。
图2和3的数据表明，喂饲Purina食物的对照小鼠中，心和肝脏谷胱甘肽浓度可较长期保持恒定。另一方面，喂饲营养上等价的未变性乳清蛋白质(U-Lacp)食物的小鼠，则记录到组织GSH的适度但持久的升高。只有很小量的谷胱甘肽和属于谷胱甘肽的非分解产物由尿中排出。可能达到的细胞谷胱甘肽浓度的改变程度是相当有限的，此大概也反应了这种分子的极端重要性，以及密切连带的调控机制。谷胱甘肽本身作为GSH合成酶的负反馈因素，其显然可限制细胞增加GSH浓度的能力。谷胱甘肽还原酶使GSH主要以其还原态存在(＞90%)。这便可使之即保持其功能状态，又可控制细胞浓度，因为还原态谷胱甘肽(GSH)不能穿过细胞膜，而氧化态谷胱甘肽(GSSG)可穿越细胞膜并流失，导致谷胱甘肽总量降低。除了这些酶以外，γ-谷氨酰转肽酶(GGT)在GSH代谢也起着重要作用。GGT可在细胞膜水平上用作谷氨酰部分的补救途经，使之返回胞浆内用于GSH合成。在许多细胞系和恶性肿瘤组织中，这种酶增高活性与升高的GSH浓度有关。
细胞GSH小量增加的效应要比预期的大。例如，已有许多关于选择的人和小鼠肿瘤细胞系于体外可对抗各种化学治疗剂的报告。在这些细胞系中，与药物敏感性亲代细胞系比较，它们的细胞GSH含量增加达2倍，尽管其药物抗性的水平常常更高，如高出30倍。在这些细胞系中，通过选择性地抑制合成作用使细胞GSH含量减少，即可恢复抗性细胞对药物的敏感性。这只有在整个药物治疗期间维持GSH的缺乏才是有效的。
事实上，细胞GSH水平是受到严密调控的，2倍增加量可能是最大的，而且可通过各种GSH利用酶(如谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽-S-转移酶)放大GSH小量增加的效应，在喂饲富乳清食物之动物中观察到可再现的GSH浓度改变，可能具有重要的生物学意义。这种增加的长期性可能对上述效益有重要意义。
与本发明相关联的是，最近资料表明，老年动物中GSH不足的原因是GSH前体即半胱氨酸的缺乏，而不是生物合成酶活性的降低，相似地，长期少量喂饲乙醇的大鼠，肝细胞浆中GSH的降低似乎并不是因限制了γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性引起的。
本

发明内容
的总结和意义a.食物乳清蛋白质浓缩物的谷胱甘肽促增活性，依赖于含在β-乳球蛋白和血清白蛋白部分以及可能含在IgG部分中的谷氨酰半胱氨酸基团。
b.保存二硫键(其涉及半胱氨酸)，对于消化后释放完整的谷氨酰半胱氨酸肽以便被小肠粘膜吸收是至关重要的。另一方面，通过伸展蛋白质分子使之变性，将使谷氨酰半胱氨酸序列暴露于消化酶，继而释放单个氨基酸或其他肽混合物。对此，始终可观察到变性形式的乳清蛋白质浓缩物是没有谷胱甘肽促增活性的。
本发明提供了一种由乳清蛋白质中除去α-乳白蛋白的方法(表1)。
发现口服乳清蛋白质的一个或多个组分，经消化后可释放出大部分谷氨酰半胱氨酸，达到增加宿主细胞谷胱甘肽的目的。所需要的总量明显少于为达到相似目的所需要的未变性乳清蛋白质浓缩物的量。因此本产品可以其胶囊或易(未变性的)溶于水或其他液体之粉末形式给药。


权利要求
1.含相当量乳清蛋白质浓缩物的乳清蛋白质组合物，其中所说的乳清蛋白质浓缩物含带有谷氨酰半胱氨酸基团之蛋白质和/或肽成分的乳清蛋白质离析混合物，所说的成分是以基本上未变性的状态存在的，且其中乳清蛋白质浓缩物的生物学活性只限于其未变性的构象。
2.根据权利要求1的乳清蛋白质组合物，其中所说的乳清蛋白质离析混合物有β-乳球蛋白和/或血清白蛋白和/或免疫球蛋白。
3.根据权利要求1或2的乳清蛋白质组合物，其中除去了α-乳白蛋白部分。
4.根据权利要求1至3的乳清蛋白质组合物，其中乳清蛋白质离析混合物被进一步浓缩并精制成医药纯。
5.根据权利要求1至4的乳清蛋白质组合物，其中乳清蛋白质浓缩物含有不耐热的并且是对消化作用不敏感的免疫增强作用蛋白质，其中免疫增强性质依赖于含在所说乳清蛋白质混合物中的肽和蛋白质的未变性状态。
6.根据权利要求1的乳清蛋白质组合物，其中乳清蛋白质浓缩物是牛和/或山羊和/或绵羊和/或人乳清蛋白质浓缩物。
7.根据权利要求1至3的乳清蛋白质组合物，其中所说的相当量乳清蛋白质浓缩物是18至28g乳清蛋白质、特别是20g乳清蛋白质/100g食物的治疗或预防量。
8.根据前述权利要求中任一项的乳清蛋白质组合物，其含有所说的乳清蛋白质浓缩物及超过每日最小需要量的维生素B1和B2。
9.根据权利要求8的乳清蛋白质组合物，维生素B1量为1.5至2.0mg，维生素B2量为1.5至2.0mg。
10.根据权利要求1至8的乳清蛋白质组合物，其中没有乳糖。
11.生产根据权利要求1至7和10之生物学活性乳清蛋白质浓缩物组合物的方法，该方法包括下列步骤a)挤奶后立即将其冷却到2℃至10℃，最好是4℃，并除去污染物。b)再次净化后，于20℃下首先用乳酸降低pH至大约4.6使凝乳块沉淀，c)加入凝乳酶，升高温度至大约30℃，保持20分钟以促进从凝乳块中除去乳清，得以在桶内低速搅拌以使之解析，d)在桶内对余留的产物作热处理以进行巴氏灭菌并高速搅拌，e)照射并分离乳清，f)使用截留分子量约10，000或小于10，000的膜超滤乳清，或g)使用截留分子量大致为17，000或小于17，000的膜超滤乳清，以保留β-乳球蛋白和血清白蛋白，该方法的特征在于乳清蛋白质浓缩物部分未经加热，且由之得到该浓缩物组分的材料被缓慢搅拌以尽可能减少蛋白变性，而所说的超滤是在包括支撑许多所说膜的多达20个框架式铸模的生产线中进行的，从而得到一种最终未变性的蛋白质浓缩物干燥制品，其中所说的超滤是在4℃至20℃，尤其是在4℃下进行的。
12.根据权利要求11的方法，特征在于乳清蛋白质浓缩物是使用截留分子量大致为100，000的膜对乳清、液体乳清蛋白质浓缩物或加水复原的乳清蛋白质浓缩物粉末进行超滤处理而生产的。
13.根据权利要求11的方法，特征在于乳清蛋白质浓缩物是使乳清、液态乳清蛋白质浓缩物或加水复原的乳清蛋白质浓缩物粉末通过截留分子量大致为500，000的膜超滤而生产的。
14.根据前述权利要求11至13中任一项的方法，特征在于使通过截留分子量为10，000或小于10，000的膜超滤得到的截留物再通过截留分子量大致为500，000和/或100，000的膜进一步超滤，以形成可进一步干燥成粉末的浓缩物。
15.根据权利要求11至14中任一项的方法，特征在于使乳清、乳清蛋白质浓缩物或复原的乳清蛋白质浓缩物粉末经受阴离子交换树脂的作用以得到流出物，该乳清蛋白质比原来未经处理的乳清或乳清蛋白质浓缩物或复原的粉末含有更高比例的β-乳球蛋白和/或血清白蛋白和/或免疫球蛋白，以及其乳清蛋白质内容物含有较低比例之β-乳球蛋白和/或血清白蛋白和/或免疫球蛋白的洗脱物，并且至少要超滤浓缩流出物。
16.根据权利要求1至10中任一项的乳清蛋白质组合物以适当浓度作为牛乳或牛乳蛋白质之代用品的应用。
17.根据权利要求10的乳清蛋白质组合物作为欲用于有乳糖吸收障碍者之食品的代用品的应用。
18.根据权利要求1至10的乳清蛋白质组合物作为乳制品、人或动物食物之代用品或补充品的应用。
19.根据权利要求1至10的乳清蛋白质组合物作为药物的应用。
20.根据权利要求1到10的乳清蛋白质组合物在增加人和动物器官内谷胱甘肽的合成速率，补充速率，和/或浓度水平之方法中的应用，该方法包括给人或动物口服治疗或预防有效量的乳清蛋白质组合物。
21.根据权利要求1到10的乳清蛋白质组合物在改善人和动物宿主抵抗力之方法中的应用，该方法包括给人或动物口服治疗或预防有效量的乳清蛋白质组合物。
22.根据权利要求21的乳清蛋白质组合物的应用，其中改善了的宿主抵抗力包括提高了对细菌感染的抵抗力和/或提高了对慢性生长的癌瘤的抵抗力和/或提高了对老化过程的抵抗力和/或上述改善的结合。
23.根据权利要求1到10的乳清蛋白质组合物作为抗肿瘤疗效组合物的应用。
24.根据权利要求23的乳清蛋白质组合物的应用，其中抗肿瘤组合物被用于预防结肠癌。
25.含有根据权利要求1到10之乳清蛋白质组合物的适于特殊营养需要的食品或食品添加剂。
26.含有根据权利要求1到10中任一项之乳清蛋白质组合物的人或动物的疗效营养产品。
27.含有根据权利要求1到10之乳清蛋白质组合物及适于经口喂饲之中性载体的疗效食品。
28.含有根据权利要求1到10之乳清蛋白质组合物及适于经口喂饲之中性载体的强化保健食品。
29.含有根据权利要求1到10之乳清蛋白质组合物及适于经口喂饲之中性载体的医药组合物。
30.含有根据权利要求1到10之乳清蛋白质组合物及适于经口喂饲之中性载体的抗肿瘤疗效组合物。
31.含有基本上呈未变性形式之乳清蛋白质组分或其变体的组合物，其中所说的组分或其变体含有谷氨酰半胱氨酸基团，并且是由乳或乳清中除去即通过在华氏100°到140°(37.8℃到87.8℃)的温度下处理30分钟而变性失活的。
32.含有基本上呈未变性形式之乳清蛋白质组分或其变体的组合物，其中所说的组分或变体含有谷氨酰半胱氨酸基团，并且是由原料乳或乳清中除去即在148℃下经间接蒸汽处理2.5秒钟而变性失活的。
33.含有基本上呈未变性形式之乳清蛋白质组分或其变体的组合物，所说的组分或其变体含有谷氨酰半胱氨酸基团，并且是由原料乳或乳清中除去即于77℃下巴氏灭菌15秒钟而变性失活的。
34.含有基本上呈未变性形式之其他食用蛋白质的组合物，所说的蛋白质含有Glu-Cys基团，如鸡卵清卵糖蛋白。
全文摘要
本发明涉及含相当量乳清蛋白质浓缩物的生物学活性乳清蛋白质组合物，该乳清蛋白质浓缩物含有带谷氨酰半胱氨酸基团之蛋白质和/或肽组分的乳清蛋白质离析混合物，其中所说的组分是以基本上未变性的状态存在的，并且其中乳清蛋白质浓缩物的生物学活性限于其未变性的构象；本发明还涉及生产生物学活性乳清蛋白质浓缩物组合物的方法。
文档编号C07K16/00GK1044660SQ8910944
公开日1990年8月15日 申请日期1989年12月22日 优先权日1988年12月23日
发明者古斯塔夫·鲍诺思, 菲尔·古尔德 申请人:古斯塔夫·鲍洪恩