9-氨基-哒嗪并[4′，5′:3，4]-吡咯并[2，1-a]异喹啉其在药物配制中的应用的制作方法

专利名称：9-氨基-哒嗪并[4′，5′:3，4]-吡咯并[2，1-a]异喹啉其在药物配制中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及9-氨基-哒嗪并[4′，5′∶3，4]-吡咯并[2，1-a]-异喹啉，以及其与酸、碱和络合物组分所形成对机体无损害的盐类，在制备治疗慢性炎症过程、溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的药剂中的应用。
该化合物的结构式如下
如后所述，这些化合物中的一部分已在专利文献DE3500941，DE3525048，EP190563和EP252299中公开了。然而，这些化合物中还有一部分是新的。因此，本发明也涉及这些新的化合物和含有这些化合物的药剂，特别是它们作为保护脑部药剂的用途，尤其是用于治疗患过中风病的或受到中风危害的病人。
在通式Ⅰ中，R1和R2可以相同或不相同，可以是氢;C3-C7环烷基;C2-C5烯烃基;苯基(苯环可由卤素或甲氧基一次或两次取代);炔丙基;一个带有1-5个碳原子的直链的或支链的饱和或不饱和烃基，该烃基可由羟基，1-4碳原子烷氧基，卤素，氨基，1-2碳原子NH-烷基，N，N-二(C1-C2)烷基氨基，2-4碳原子NH-酰基，3-7碳原子环烷基，一个或两个苯基基团(其中，苯环可一次或两次由卤素，三氟化碳(CF3)，1-4碳原子烷基，1-2碳原子烷氧基，1-2碳原子NH-烷基，1-2碳原子N，N-二烷基，氨基，2-3碳原子N-酰基，烷基磺酰基氨基或苄基氧基所取代)，呋喃基，噻吩基，含氮五杂环或六杂环，它也许也含其它杂原子如氧原子或硫原子(其中，该环也可由1-4碳原子烷基所取代)所取代。
或R1和R2与氮原子结合一起成为一个3-7节环，该环也许再含有其它的杂原子如氧原子或氮原子，其中，该环也许被苯基-(C0-C4-烷基取代(其中，该苯环可一次或两次被卤素，三氟化碳，C1-C4-烷氧基，(C1-C4)烷基或CN所取代，这些取代基可以相同也可以不相同)或假如R1为氢，R2也可以是氨基;二(C1-C2)-烷基氨基;丙酮氨基;-NH(C2-C3)酰基;烷基链中含1-3碳原子的一个烷基磺酰基或烷氧基羰基;异亚丙基氨基
或含有一个杂环，一个氮原子，也许在环上再含有其它的杂原子如氧原子、氮原子或硫原子的五环或六环;
R3，R4和R5，可以相同或不同，可以是氢，或1-4碳原子烷基;
R7和R8，可以相同或不同，为羟基，1-4碳原子烷氧基或1-4碳原子烷硫基;
R6和R9，可以相同或不同，为氢、羟基、1-4碳原子烷氧基，1-4碳原子烷硫基，或是
其中，R10为氢、或1-4碳原子烷基，R11为氢，或1-4碳原子烷基，其中烷基也许由羟基，甲氧基或糠基取代，或者由取代基R6，R7，R8和R9中的两个相邻的取代基组成基团-O-(CH2)1或2-O-，而其它的两个取代基则按照上述的定义。
本发明的内容还包括其与酸、碱或络合物组份形成对机体无损害的盐类在制备治疗慢性发炎过程，溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的药剂中的应用。
按照本发明，其应用的主要范围为按上述定义的通式Ⅰ化合物的应用，其中R1和R2可以相同或不同，可以是氢;C3-C7环烷基;C2-C5烯烃基;苯基(苯环也许可以由卤素或甲氧基一次或两次取代);炔丙基;一个带有1-5碳原子的直链或支链的饱和或不饱和烃基，该基团可由羟基，1-4碳原子烷氧基，卤素，氨基，1-2碳原子NH-烷基，N，N-二(C1-C2)烷基氨基，2-4碳原子NH-酰基，3-7碳原子环烷基，苯基(其中，苯环又可以一次或两次被卤素，1-2碳原子烷基，1-2碳原子烷氧基，1-2碳原子NH-烷基，1-2碳原子N，N-二烷基，氨基，2-3碳原子N-酰基或烷基磺酰基氨基取代)，呋喃基，噻吩基，一个含氮的五杂环或六杂环，它也许还含有其他的杂原子如氧原子或硫原子(其中，该环有时可以被1-4碳原子烷基取代)，R1与R2与氢原子结合一起成为一个3-7节环，该环也许再含有其它杂原子如一个氧原子或一个氮原子。其中，该环也许被苯基-(C0-C4)-烷基取代(其中苯环可一次或两次由卤素或甲氧基取代)。
假如R1为氢，R2也可以是氨基;二(C1-C2)烷基氨基;丙酮基氨基;-NH(C2-C3)酰基;烷基链中含1-3碳原子的一个烷基磺酰基或烷氧基羰基;异亚丙基氨基
或含有一个杂环，一个氮原子的，也许在环上再含有其它杂原子如一个氧原子、氮原子或硫原子的五环或六环;
R3，R4和R5，可以相同或不同，可以是氢，或一个1-4碳原子烷基;
R7和R8，可以相同或不同，可以是羟基，1-4碳原子烷氧基;或1-4碳原子烷硫基;
R6和R9，可以相同或不同，为氢;羟基;1-4碳原子烷氧基，1-4碳原子烷硫基;或是
其中，R10为氢;或1-4碳原子烷基，R11为氢;或1-4碳原子烷基，其中烷基也许由羟基，甲氧基或糠基取代;
以及与酸、碱或络合物组份形成对机体无损害的盐类，应用于制备治疗慢性发炎过程，溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的药剂。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中-NR1R2代表
其中的苯基可由1个或2个甲氧基取代。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中-NR1R2是指基团
其中的苯基可如上述的定义被取代。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中-NR1R2是指基团
其中的苯环可以一次或两次由氟，氯，三氟化碳，甲氧基，甲基，乙基或CN取代。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中R1为氢，R2为一个1-4碳原子的直链或支链的烷基，它由3-7碳原子环烷基，噻吩基或1个或2个未被取代的苯基或由一个被取代的苯基(其取代基如上述定义)取代。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中R1为氢，R2为(C1-C4)烷基环己基，特别是-CH2-C6H11。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中R1为氢，R2为(C1-C4)烷基苯基，其中的苯基没有被取代，或是一次或两次由氟、氯、三氟化碳、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基取代。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中NR1R2为下述基团中的一个
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中NR1R2为下列基团中的一个
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8是1-4碳原子烷氧基，或R7或R8合起来成为-OCH2O-或-OCH2CH2O-。
一种化合物(Ⅰ)的应用，其中R7和R8是甲氧基。
还要优先考虑式Ⅰ的如下化合物的应用在化合物中R1和R2可以相同或不同，可以是氢;1-5碳原子直链或支链烷基或R1为氢，R2为氨基、甲基氨基、二甲基氨基、异亚丙基氨基、二甲基氨基-C1-C4-烷基、甲氧基-C1-C4烷基、环丙基、环戊基、环己基、环己基甲基、苯基、苯乙基(其中苯环也许可一次或两次由甲氧基或卤素取代)、吡唑基、炔丙基、[1-甲基吡咯烷-2-基]-乙基、(哌啶-1-基)乙基、烯丙基、4-苄基-哌嗪-1-基、(呋喃-2-基)甲基、(吡咯烷-1-基)-乙基、2-羟乙基、(吡啶-4-基)-乙基、苄基、(噻吩-3-基)乙基;或R1和R2与和它们相连的氮原子结合形成吡咯烷、吗啉、可以是由苯乙基或甲氧苯基取代的哌嗪。
R7和R8，可互不相关地为氢;甲基;甲氧基;羟基或甲硫基;
R3，R4，R5，R6和R9为氢。
式Ⅰ的化合物是碱，能以通常方式与无机或有机酸以及盐和络合物组份形成对机体无损害的加成物(盐类)。
适合于形成盐的酸可以是例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸、丙酸、丁酸、己酸、戊酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、苯甲酸、对-羟基苯甲酸、邻苯二甲酸、肉桂酸、水杨酸、抗坏血酸、甲磺酸等。
优先考虑通式Ⅰ的化合物的应用，其中R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8为甲氧基，和/或R1为氢，R2为-(CH2)0-3-A基，而A是环戊基、环己基、苯基、一甲氧基苯基或二甲氧基苯基，
或R2为4或5个碳原子支链或非支链的烷基，尤其是由
基代表
的化合物，其中苯基可以由一个或二个甲氧基基团取代;或R1为氢，而R2为如下基团之一环戊基环己基苯基
或由
基代表
的化合物，尤其是当R1为氢，而R2为如下基团之一
的化合物在下列的表1和表2中汇总了式Ⅰ化合物的实例。
表1中的化合物在前述的公开出版物DE3500941，DE3525048，EP190563和EP252299中已经公开了。
表2的化合物为通式Ⅰ的新化合物。
表1
表2
由德国专利申请DE3500941.1，DE3525048.8和欧洲专利190563已经公开了通式Ⅰ化合物具有强心作用。这些化合物可以按照这些出版物的说明，用于防治心脏机能不全和/或大脑的新陈代谢受阻。从欧洲专利申请252299(A)已得知，这些化合物具有心脏和神经保护作用，此外还可促进中枢神经系统中的组织血流量和组织供氧量。
本发明的一个方面是上述的新化合物及含有这些化合物的药剂。本发明的内容还包括这些新化合物的应用。这些化合物对于治疗脑部的退化和坏死症特别有利。同样地，也能够对于受到这种病症危害的病人进行预防性的治疗。这些化合物的作用并非基于组织供血的改善。因此，这些化合物适用于治疗癫痫病和阿尔茨海姆(Alzheim)病，特别是用于治疗患过中风症或受到中风危害的病人。
本发明的内容还包括上述的通式Ⅰ的老的和新的化合物及其盐类在制备治疗慢性炎症过程、溃疡性结肠炎和克隆氏病(Crohn)的药剂及制备具有抗增殖作用的药剂中的应用。这些化合物的作用，可以用它们对无选择性的阳离子通道(UKK)的抑制来解释。
慢性支气管哮喘的病理生理学基础是炎性过程，这些炎性过程是通过炎性细胞的激活来诱导的(Barnes，1987;Seifertu.Schultz，1991)。
炎性细胞(例如中性粒细胞和肥大细胞或者它们的恒久性细胞系HL-60细胞或致敏的即荷有球蛋白E的RBL-细胞)由受体调节的激活，与兴奋性激动剂的种类(例如内皮素(Endothelin)，血小板激活因子(PAF)，Leukotriene，化学趋向性肽fMLP，或对于致敏的肥大细胞的抗原)无关，而受无选择性的阳离子通道(UKK)阻断剂的阻断(Rink，1990)。通过这些通道，细胞外的钙进入细胞内，这对于维持由受体介导的细胞激活是必需的(Putney，1990)。如果这种钙内流被中断，即可阻断炎性细胞的激活。
二氢吡啶型或苯烷基胺(Phenylalkylamin)型的经典的钙拮抗剂，既不抑制无选择性的阳离子通道，也不抑制炎性过程(Wells等，1986)。
用Grynkiewicz等(1985)介绍的方法，对荷有Fura-2的细胞的胞浆钙离子浓度的动力学进行荧光光度定量测定，作为细胞激活的尺度，以及它们被无选择的阳离子通道阻断剂抑制的尺度。在本发明中，这一方法被证明是发现无选择的阳离子通道阻断剂的可靠的筛选方法。
所谓的功能性Thapsigargin阻断，是属于无选择性的阳离子通道阻断剂的特性。Thapsigargin是一种由Thastrup等(Proc.Natl.Acad.Sci(USA)，87∶2466-2470，1990)描述过的促癌剂，它选择性地和不可逆地抑制细胞内的、IP3致敏的Ca2+存储库的Ca2+-三磷酸腺甙酶(ATPase)，从而导致Ca2+存储库的快速排空。正如J.Putey所报导的(Calcium，11∶611-624，1990)，这种存储库的排空，将成为打开细胞膜内无选择性的阳离子通道的生理性刺激。其结果是Na+和Ca2+向细胞内大量的内流。根据这一性质，Thapsigargin适合作为开放无选择性的阳离子通道的间接诱导剂，而与激动剂和IP3无关。
在本发明范围内，在HL-60细胞(人白血病细胞)，海马和皮质的神经元细胞以及RBL-细胞(大鼠嗜碱性淋巴瘤细胞)，成功地进行了无选择性的阳离子通道的Thapsigargin刺激，以此证明了这些细胞系内存在这些通道。
胞浆的Ca2+浓度([Ca2+]i)，对细胞的增殖和肿瘤的生长，起到重要作用(见L.R.Zacharski的综述，Journal of Medicine 19∶145-177，1988)。特别是通过受体激活的由相继的肌醇三磷酸(Inositoltriphosphat，IP3)介导的Ca2+向细胞的内流，对于致癌的细胞增殖，具有决定性意义(U.Kikkawa u.Y.Nishizuka，Ann.Rev.Cell.Biol.2∶149-178，1986)。这一机理对于转移的形成和“多药抗药性”，也起有一定的作用(见上述的Zacharski的综述)。
这一假说也得到下列结果的支持，即Thapsigargin作为无选择性的阳离子通道(UKK)的间接刺激剂，既可导致细胞内Ca2+的超载，也是一种高度作用的促癌剂(V.Thastrup等，Proceedings of the Natl.Acad.Sci(USA)87∶2466-2470，1990)。
阻断通过无选择性的阳离子通道而发生的Ca2+内流，将使细胞内Ca离子浓度恢复正常，从而导致肿瘤生长等的抑制。
经典的钙拮抗剂不抑制这些无选择性的阳离子通道。但惊奇地证实，本发明的这些化合物却能抑制通过无选择性的阳离子通道而发生的Ca向细胞内的内流。
如S.H.Murch等所证实(Lancet 339∶381-385，1992)，内皮素I对于炎性肠疾患，如溃疡性结肠炎和克隆氏病，起有重要的病生理作用。借助免疫组化方法可以证明，在克隆氏病患者结肠上皮的粘膜下层和溃疡性结肠炎患者结肠上皮的粘膜固有层，与健康的正常人比较，内皮素I深度有明显的剧烈的升高。人们认为，局部的内皮素释放，可引起强烈的血管收缩和相继的弥散性局部缺血，伴有微小梗塞的形成，这些被看作是上述疾患的根本原因。内皮素致使血管收缩的效应，是由于血管肌细胞的Ca2+超载。对此，内皮素首先引起IP3介导的细胞内的Ca2+释放，随之将导致一个强烈的经过细胞膜的、通过对二氢吡啶不敏感的通道的Ca2+的内流(M.S.Simonson等，Clin.Invest.Med.14∶499-507，1991;T.Masakai，J.Cardiovasc.Pharmacol.13∶Suppl.5，S1-S5，1989;D.W.Hay，R.J.Pharmacol.100∶383-392，1990)。这些通道均是无选择性的阳离子通道，不久前证实了它们在结肠粘膜中的存在(Chr.Siemer u.H.Gogelein，Europ.J.Physiol.420∶319-328，1992)。
适合于发现功能性内皮素拮抗剂的筛选模型，选用了内皮素激发的荷有Fura-2的人白血病细胞(HL-60细胞)的激活。依据G.Grynkiewicz等的报导(J.Biol.Chem.260∶340-3450，1985)，对HL-60细胞(悬浮液)胞浆内的Ca2+浓度，进行荧光分光光度追随测定，作为内皮素引起的细胞激活的尺度。激活是通过加入0.1μM的内皮素，这种激活被此发明中的物质所阻断，它与剂量有关。本发明中的这些物质功能性的对内皮素的拮抗作用，是通过对无选择性的阳离子通道的阻断表现出来的。因此，在RBL-hm1细胞上证明的功能性对Thapsigargin的拮抗作用，适合于用作对功能性内皮素拮抗剂的筛选方法。
实验的进行为了筛选目的，在无Ca2+的孵育环境中，荷有Fura-2的贴壁的RBL-hm1细胞，用0.1μM的Thapsigargin激活。4分钟后，细胞外的Ca2+恢复到1.5mM，根据Fura-2的荧光强度，可证实由于Ca2+经细胞膜通过无选择性的阳离子通道的强烈内流，而引起胞浆Ca2+浓度的极度升高。
这种内流只能被无选择性的阳离子通道阻断剂来阻断，且与其剂量相关。经典的钙拮抗剂也好，能够激发IP3更新的激动剂也好，均不能抑制由Thapsigargin间接诱发的经细胞膜的Ca2+流入。本发明的化合物则显示出对无选择性的阳离子通道的抑制。
单个贴壁的RBL-hm1细胞胞浆内Ca的荧光光度测定，是用Kudo和Ogura(1986)在神经元性细胞介绍的方法进行的。应用一架蔡司(Zeiss)厂的Axiovert35荧光显微镜，联接一台Hamamatsu图像分析系统，后者由ICMS图像处理系统，带有核校单位的余光像机和图像放大器DVS3000组成。
胞浆的Ca2+浓度的动力学，是在细胞被Thapsigargin(0.1μM)激活以后，以浓度-时间的曲线连续显示的。对加入和不加入10μM测试物质的两种被激活的细胞培养的曲线进行了比较。对这些曲线以下的面积(area under the curve＝AUC)进行积分，并作为细胞激活的尺度记录下来。被测试的无选择性的阳离子通道阻断剂的阻断作用强度，用下列公式求出％H＝100 (AUC阻断×100)/(AUC(对照))
%H＝10μM测试物质对通过无选择性的阳离子通道的Ca内流的百分抑制率AUC阻断＝激活剂加上10μM阻断性测试物质存在时的曲线以下面积AUC对照＝只加入激活剂时的曲线以下面积上述所介绍的参考文献BARNESP.J.，I.W.RODGERundN.C.THOMSONPathogenesisofasthma，in“ASTHMA，basicmechanismsandclinicalmanagement”EDbyP.J.BARNES;ACADEMICPRESS，LONDON，1988GRYNKIEWICZG.，M.POENIEundR.Y.TSIENA new generation of Ca2+-indicators with greatly improved fluorescence propertiesJ.BIOL.CHEM.2603440-3450，1985HIDE，M.undM.A.BEAVENCalciuminfluxinaratmastcell(RBL-2H3)lineJ.BIOL.CHEM.26615221-15229，1991KUDO，Y.undA.OGURAGlutamate-inducedincreaseinintracellularCa2+-concentration in isolated hippocampal neuronesBR.J.PHARMACOL.89191-198，1986PUTNEY，J.W.，jr.
CapacitativeCalciumentryrevisedCELLCALCIUM11611-624，1990
RINK，T.J.
Receptor-mediatedcalciumentryFEBSLETT.268381-385，1990SEIFERT，R.undG.SCHULTZThesuperoxideformingNADPHoxidaseofphagocytesAnenzymsystemregulatedbymultiplemechanismREV.PHYSIOL.BIOCHEM.PHARMACOL.，Vol.117，SPRINGERVERL.，1991WELLS，E.，C.G.JACKSON，S.T.HARPER，J.MANNandR.P.EAOYCharacterization of primate bronchoalveolar mast cells II，inhibition of histamine，LTC4and PGF2αreleasefromprimatebronchoalveolarmastcellsandacomparisonwithratperitonealmastcellsJ.IMMUNOL.1373941-3945，1986.
测量结果给出的是RBL-hm 1细胞被Thapsigargin激发后(0.1μM Thapsigargin)，无选择性的阳离子通道的百分抑制率。测试物质的浓度为10-5Mol.(见表3)或1μMol和10μMol(见表4)。
表3
RBL-hm1细胞-Thapsigargin(0.1μM)-激发
盐的形式 IC50%HNH-CH2-CH(CH3)2HCl - 65,7NH-CH2-C6H5HCl 1,8.10-690,1
HCl 2,5.10-690,1
表4
RBL-hm1细胞-Thapsigargin(0，1μM)-激发(1)测试物质的浓度为1μMol(2)测试物质的浓度为10μMol
根据下列测试，可得出功能性抗炎效应应用单个的贴壁于玻璃小片上的RBL-2H3-细胞(一种与肥大细胞有亲缘的肿瘤细胞系)。
RBL-2H3细胞的培养和贴壁，是应用Hide和Beaven(1991)介绍的方法。为了得到致敏的贴壁的RBL-2H3细胞，细胞用1∶2000稀释的市售丙种球蛋白E溶液，在室温下对二硝基酚-牛血清白蛋白的复合物(DNP-BSA-抗元)培育2小时。随即清洗细胞。通过加入0.1ml DNP-BSA溶液(10μg/ml)，完成剧烈的免疫的细胞激活，表现为胞浆的Ca2+超载。单个贴壁的RBL-2H3细胞的胞浆内Ca的荧光光度测定，是应用Kudo和Ogura(1986)在神经元性细胞介绍的方法，前面已加以介绍。
在本实验中，作为对比物质的是Chromoglycat(10μM)，它对抗元诱发的细胞激活大约有50%的抑制。
在此测试中，上述的化合物测得的%H，与前面的测量数值(表2中)是可比的。
表5RBL-2H3细胞AK(单克隆小鼠)1∶2000激活DNP-BSA(10μg/ml)
利用四唑试验，在不同的人肿瘤细胞系的微量培养上，测定本发明中物质的抗增殖效应的实验，惊人地发现，测试化合物的作用比对比物质戊脉安(Verapamil)强5至100倍。
测试物质的抗增殖效应，是利用Mosmann(J.Immunol.Meth.65∶55-63，1983)，Denizot等(J.Immunol.Meth.89∶271-277，1986)和J.Eliason等(Int.J.Cancer 46∶113-117，1990)介绍的MTT试验测定的(MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-四唑溴]，CHEMICON Inc.EI Segundo，Co.USA)。这种指示剂只能被具有完好线粒体的活细胞代谢成一种兰色的甲
(Formazan)产物。在我们的测试中，应用了下列人肿瘤细胞系A 549(肺腺癌)，A 431(外阴表皮癌)，PC 3(前列腺腺癌)，SK BR 3(乳腺腺癌)，HT-29(C×11)(结肠腺癌)和K 562(慢性髓性白血病细胞)。测试是在微量滴度板上进行的。每个穴含有100μl细胞悬浮液(0.2×106细胞/ml)。用加入10%高温失活的胎牛血清和50μg/ml庆大霉素的RPMI 1640作培养液。细胞悬浮在饱和的空气湿度，CO2(5%)-空气(95%)混合条件下，37℃时，加入和不加入不同浓度的抗增殖测试物质时，培养0，24，48或72小时。测试物质溶于DMSO中(最终稀释0.1%)。接着加入10μl MTT溶液(3mg/ml)，3小时后加入100μl含有0.08 N HCl的异丙醇(Isopropanol)浓度。再过一小时，在570nm(比较波长630nm)用微量板计量器测定光吸收。光吸收与存活细胞数成正比。测试物质的半数最高抑制浓度为1μg/ml。
上述功能性内皮素或Thapsigargin拮抗剂缓解血管收缩的效应，是在离体血管标本上证实的在大鼠Langendorff氏逆行灌流的自主节律跳动的心脏，利用电磁流量测定(HugoSachsElektronik，MARCH生产的仪器)，连续地测定冠脉流量。用这种测量装置，可以高精度地测得收缩的程度、持续时间和演变形式。人们用100nm浓度的内皮素来灌流，冠脉流量将从11ml/分降至5ml/分。冠脉流量的限制可以被本发明中的物质所解除。本发明中的化合物在荷有Fura-2的RBL-hm1细胞上对于Thapsigargin的阻断效应，或在荷有Fura-2的HL60细胞上对内皮素的阻断效应的作用强度，与Langendorff氏标本上证实的血管收缩缓解效应是相关的。由此得出结论，测试物质的缓解血管收缩的拮抗内皮素的作用，是由于无选择性的阳离子通道的阻断。
在这里，补充进与权利要求13-24相对应的，本发明(新化合物)的优选范围。
这些化合物既可胃肠内给药，也可胃肠外给药。口服剂量为每次0.1至500mg有效物，静脉应用为每次0.05至150mg。治疗剂量与适应症和给药方式有关，可以通过试验来确定。
适宜的应用形式可以是，例如片剂、胶囊、栓剂、溶液、糖浆、乳剂、气溶胶或弥散的粉剂。
相应的片剂可由有效物质与已知助剂混合而得到，例如惰性的稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或乳糖;膨胀剂如玉米淀粉或藻朊酸等;粘合剂如淀粉或明胶;润滑剂如硬脂酸镁或滑石粉和/或含有长效功能的助剂如羧基聚亚甲基，羧甲基纤维素，醋酸邻苯二甲酸纤维素或聚醋酸乙烯。片剂也可以由多层组成。
相应地，糖衣片可以由制成的药芯，按通常方法裹上糖衣，所用糖衣制剂如可利酮(kollidon)或虫胶，阿拉伯胶、滑石粉、二氧化钛或蔗糖。为了达到贮藏功能或防止配伍禁忌性，药芯可以由多层组成。为了达到贮藏功能，糖衣外壳也同样可由多层组成。为此，可应用上述的助剂。
在所发明的有效物质或有效物组合物的糖浆中还可加入甜味剂，如糖精、环己烷氨基磺酸盐(Cyclamat)、甘油或糖以及一种改善味道的物质，例如香料，如香兰素或桔汁。此外，还可以加入悬浮助剂或增稠剂如羧甲基纤维素钠，润湿剂如脂肪醇与环氧乙烷的缩合物或还可加入对-羟基苯甲酸酯(盐)等保护物质。
注射液是按通常方法，例如加入对-羟基苯甲酸盐等保藏剂或者乙二胺四乙酸钠等稳定剂而制成，并装入注射瓶或安培瓶中。
含有上述一种或多种有效物质或有效组合物的胶囊例如是将有效物与乳糖或山梨糖醇等惰性载体进行混合后，装入明胶(凝胶)胶囊中而制成的。
适宜的栓剂例如是经过和为它们提供的惰性载体如中性脂肪或聚乙二醇及其衍生物混合后制成的。
式Ⅰ化合物的制备方法在欧洲专利申请190563和252299已作了叙述，在这里只是涉及它们。
这些新的化合物能够通过通式Ⅱ的一个化合物与通式Ⅲ的一个化合物的反应而得到
其中，通式Ⅱ中的R3，R4，R5，R6，R7，R8和R9，以及通式Ⅲ中的R1和R2的具有前述的含义。
这时，通式Ⅱ的一个原料化合物在一种高沸点、惰性的溶剂，例如二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，氯苯或六甲基磷酸三酰胺中溶解，并与通式Ⅲ的氨基组份，在回流情况下加热，直到反应完毕。反应时间为约1小时至15小时，时间长短与使用的原料组份有关。
对于可起反应的胺类，也可以用醇类或四氢呋喃作为溶剂，在某些情况下，在高压反应釜中反应比较有利。
如加入的胺类是液体并具有足够高的沸点，反应可以在胺类过剩的情况下进行，而不需要额外的溶剂(例如，在使用苯胺、吗啉、苯基乙基胺时)，该反应有时是在氮气氛中进行的。
在一些情况下，也能够使用一种反应物质，它既能用来作为溶剂，又能通过分解作用提供反应所需要的胺，例如二甲基甲酰胺。
按本发明的9-氨基-哒嗪并-吡咯并-异喹啉，都是碱类，并能按一般的方式与无机或有机酸反应而变成任意的对机体无损害的酸加成盐类。
适用于盐的生成的酸类，例如是盐酸，溴氢酸，碘氢酸，氟氢酸，硫酸，磷酸，硝酸，醋酸，丙酸，丁酸，己酸，戊酸，草酸，丙二酸，丁二酸，顺丁烯二酸，反丁烯二酸，乳酸，酒石酸，柠檬酸，丁羟二酸，苯甲酸，对-羟基苯甲酸，对-氨基苯甲酸，邻苯二甲酸，肉桂酸，水杨酸，抗坏血酸和甲磺酸。
举例5，6-二氢化-2，3-二甲氧基-9-4[(2，6-二甲基)哌嗪并]-哒嗪并[4′，5′∶3，4]-吡咯并[2，1-a]-异喹啉-盐酸盐3克S-甲基化合物(盐酸盐)，5毫升1-(2，6-二甲基苯基)-哌嗪和50毫升甲苯在回流情况下加热约5小时。在反应结束后(DC-控制)，进行冷却并将反应生成物抽出。
用甲苯洗涤两次，反应生成物在CH2Cl2和稀氢氧化钠中进行分配。将有机相用水洗涤多次，用硫酸钠进行干燥，然后蒸发。将残渣在通过一个硅胶柱(洗脱液CH2Cl2/NaOH＝100+10 V.V)进行净化后，接收到少量的CH2Cl2中，并通过加入乙醇.盐酸形成盐酸盐。
收率2.86克(68%d.Th);沸点294-295℃用于制药的实例a)糖衣药丸1份糖衣药芯含有通式Ⅰ的有效物质30.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉75.0毫克明胶3.0毫克硬脂酸镁2.0毫克210.0毫克制备方法由有效物质与乳糖、玉米淀粉组成的混合物，与一个10%的明胶水溶液，通过一个1毫米筛眼大小的筛子进行造粒，在40℃下进行干燥，并再一次研磨通过一个筛子。由此得到的粒状物与硬脂酸镁混合并压片。这样制得的药芯，用一般的方法涂层糖衣，该糖衣由糖、二氧化钛、滑石粉和阿拉伯胶形成的水悬浮液进行处理。形成糖衣药丸后，用蜂蜡进行打光。
b)药片通式Ⅰ的有效物质30.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉70.0毫克可溶性淀粉7.0毫克硬脂酸镁3.0毫克210.0毫克制备方法有效物质与硬脂酸镁在可溶性淀粉的水溶液中进行造粒，将粒状物干燥，并与乳糖和玉米淀粉充分混合。此混合物再压成重量为210毫克的药片。
c)胶囊按照权利要求1所述的有效物质20.0毫克乳糖230.0毫克玉米淀粉40.0毫克滑石粉10.0毫克300.0毫克制备方法有效物质、乳糖和玉米淀粉首先在一个混合器中，然后在一个磨碎机中进行渗混。将混合物再次加到混合器中，用滑石粉充分渗混，并用器械装进硬的明胶胶囊中。
权利要求
1.式(Ⅰ)化合物的应用
其中，R1和R2可以相同或不相同，可以是氢；C3-C7环烷基；C2-C5烯烃基；苯基(苯环也许可由一次或两次通过卤素或甲氧基取代)；炔丙基；一个带有1-5碳原子的直链或支链的饱和或不饱和烃基，该基团可由羟基，1-4碳原子烷氧基，卤素，氨基，1-2碳原子NH-烷基，N，N-二(C1-C2)烷基氨基，2-4碳原子NH-酰基，3-7碳原子环烷基，一个或两个苯基(其中，苯环可一次或两次由卤素，三氟化碳(CF3)，1-4碳原子烷基，1-2碳原子烷氧基，1-2碳原子NH-烷基，1-2碳原子N，N-二烷基，氨基，2-3碳原子N-酰基或烷基磺酰基氨基或苄基氧基取代)，呋喃基，噻吩基，含氮五杂环或六杂环，它也许也可含其它杂原子如氧原子或硫原子(其中，该环也可由1-4碳原子烷基取代)所取代。R1和R2与氮原子结合一起成为一个3-7节环，该环也许再含有其它杂原子如一个氧原子或氮原子。其中，该环也许被苯基-(C0-C4)-烷基取代(其中苯环可一次或两次由卤素，三氟化碳，C1-C4-烷氧基，(C1-C4)烷基或CN取代)。假如R1为氢，R2也可以是氨基；二-(C1-C2)-烷基氨基；丙酮氨基；-NH(C2-C3)酰基；烷基链中含1-3碳原子的一个烷基磺酰基或烷氧基羰基；异亚丙基氨基
或含有一个杂环一个氮原子的也许在环上再含有其它的杂原子如一个氧原子、氮原子或硫原子的五环或六环；R3，R4和R5，可以相同或不同，可以是氢或一个1-4碳原子烷基；R7和R8可以相同或不同，为羟基，1-4碳原子烷氧基或1-4碳原子烷硫基；R6和R9可以相同或不同，为氢、羟基、1-4碳原子烷氧基；或1-4碳原子烷硫基，或是
其中，R10为氢、或1-4碳原子烷基，R11为氢，或1-4碳原子烷基，其中烷基也许由羟基、甲氧基或糠基取代，或者由取代基R6，R7，R8和R9中的两个相邻的取代基组成-O-(CH2)1或2-O-，而其它的两个取代基则按照上述的定义，以及与酸、碱或络合物组份形成对机体无损害的盐类，应用于制备治疗慢性发炎过程，溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的药剂。
2.按照权利要求1所述式Ⅰ化合物的应用，其中R1和R2可以相同或不同，可以是氢;C3-C7环烷基;C2-C5烯烃基;苯基(苯环也许可以由卤素或甲氧基一次或两次取代);炔丙基;一个带有1-5碳原子的直链或支链的饱和或不饱和烃基，该基团可由羟基，1-4碳原子烷氧基，卤素，氨基，1-2碳原子NH-烷基，N，N-二(C1-C2烷基氨基，2-4碳原子NH-酰基，3-7碳原子环烷基，苯基(其中苯环又可以一次或两次被卤素，1-2个碳原子烷基，1-2碳原子烷氧基，1-2碳原子NH-烷基，1-2碳原子N，N-二烷基，氨基，2-3碳原子N-酰基或烷基磺酰基氨基取代)，呋喃基，噻吩基，一个含氮的五杂环或六杂环，它也许还含有其他的杂原子如氧原子或硫原子(其中，该环有时可以被1-4碳原子烷基取代)所取代;R1与R2与氢原子结合一起成为一个3-7节环，该环也许再含有其它杂原子如一个氧原子或一个氮原子，其中，该环也许被苯基-(C0-C4)-烷基取代(其中苯环可一次或两次由卤素或甲氧基取代)，假如R1为氢，R2也可以是氨基;二(C1-C2)-烷基氨基;丙酮基氨基;-NH(C2-C3)-酰基;烷基键中含1-3碳原子的一个烷基磺酰基或烷氧基羰基;异亚丙基氨基
或含有一个杂环，一个氮原子的，也许在环上再含有其它杂原子如一个氧原子、氮原子或硫原子的五环或六环;R3，R4和R5，可以相同或不同，可以是氢或一个1-4碳原子烷基;R7和R8，可以相同或不同，可以是羟基，1-4碳原子烷氧基;或1-4碳原子烷硫基;R6和R9，可以相同或不同，为氢;羟基;1-4碳原子烷氧基，1-4碳原子烷硫基;或是
其中，R10为氢;或1-4碳原子烷基，R11为氢;或1-4碳原子烷基，其中烷基也许由羟基，甲氧基或糠基取代;以及与酸、碱或络合物组份形成对机体无损害的盐类，应用于制备治疗慢性发炎过程，溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的药剂。
3.按权利要求2所述的一个化合物的应用，其中-NR1R2代表
其中的苯环可由1个或2个甲氧基取代。
4.按权利要求1-3中之一所述的一个化合物的应用，其中-NR1R2是指基团
其中的苯基可以按权利要求1，2或3所述被取代。
5.按权利要求1或2所述的一个化合物的应用，其中-NR1R2是指基团
其中的苯环可以一次或两次由氟，氯，三氟化碳，甲氧基，甲基，乙基或CN取代。
6.按权利要求1或2所述的一个化合物的应用，其中R1为氢，R2为一个1-4碳原子的直链或支链的烷基，它由3-7碳原子环烷基，噻吩基或1个或2个未被取代的苯基，或由一个被取代的苯基(其取代基如在权利要求1或2中所定义的那样)取代。
7.按照权利要求6所述的一个化合物的应用，其中R1为氢，R2为(C1-C4)烷基环己基，特别是-CH2-C6H11。
8.按权利要求6所述的一个化合物的应用，其中R1为氢，R2为(C1-C4)烷基苯基，其中的苯基没有被取代，或是一次或两次由氟、氯、三氟化碳、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基取代。
9.按照权利要求1或2所述的一个化合物的应用，其中NR1R2为下述基团之一
10.按照权利要求9所述的一个化合物的应用，其中NR1R2是下列基团中的一个
11.按照权利要求1-10中之一所述的一个化合物的应用，其中R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8是1-4碳原子烷氧基，或R7和R8合起来成为-OCH2O-或-OCH2CH2O-。
12.按照权利要求11所述的一个化合物的应用，其中R7和R8为甲氧基。
13.通式Ⅰ的化合物，或者是它们与酸类、碱类或络合物组份形成的对机体无损害的盐类，其中
R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8为1-4碳原子烷氧基，或R7和R8合起来成为-OCH2O-或-OCH2CH2O-，而且NR1R2基团是
其中Z为0，1或2，R12为CN，三氟化碳，卤素，(C1-C4)烷基或(C1-C4)烷氧基，下列化合物除外
14.按照权利要求13所述的化合物，其中R7和R8为甲氧基。
15.按照权利要求13或14所述的化合物，其中R12为CN，OCH3，CH3，C2H5，C(CH3)3，F，Cl或CF3。
16.按照权利要求13-15中之一所述的化合物，其中-NR1R2是指
其中R12和Z如权利要求13-15中的定义。
17.按照权利要求13所述的化合物，其中R7和R8为甲氧基，-NR1R2为下列基团中的一个
18.按权利要求17所述的化合物，其中NR1R2代表
19.通式Ⅰ的化合物，或者是它们的与酸、碱或络合物组分形成的对机体无损害的盐类
其中，R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8为1-4碳原子烷氧基，或R7和R8合起来成为-CH2O-或-OCH2CH2O-，和-NR1R2是指
或是-NH(CH2)1或2CH(C6H5)2，R3是CF3，C(CH3)3或-OCH2C6H5，y为1或2。
20.按照权利要求19所述的化合物，其中-NR1R2是指
其中R13和y如权利要求19所定义的那样。
21.按照权利要求19-20中的一个所述的化合物，其中R7和R8为甲氧基。
22.按照权利要求19所述的化合物，其中R7和R8为甲氧基，和-NR1R2则为下列含义之一
23.通式Ⅰ的化合物，
其中，R3，R4，R5，R6和R9为氢，R7和R8为甲氧基，和-NR1R2具有下列含义之一
或是它们与酸碱或络合物形成的对机体无损害的盐类。
24.按权利要求23所述的化合物，其中-NR1R2具有下述含义之一
而且优先考虑
25.按4照权利要求13-24中的一个所述的通式Ⅰ化合物或它们与酸、碱或络合物组份形成的对机体无损害的盐类的制备方法，
其特征为，将通式(Ⅱ)的一个化合物(其中R3，R4，R5，R6，R7，R8和R9具有上述的含义)与通式(Ⅲ)的一个化合物(其中，R1和R2具有上述的含义)进行反应，
由此得到最终产物有时可以按已知的方法转化为一个对机体无损害的盐。
26.医药制剂，其中含有按照权利要求13-24中的一个所述的一个或多个化合物用来作为有效物质，并与一般的辅料或载体物质结合而形成该制剂。
27.按照权利要求26所述的医药制剂的制备方法，其特征是将按照权利要求13-24中之一所述的化合物与一般的将药材配合成药剂配合成药剂所用的辅料和/或载体物质加工制成一般的医药应用的形式。
全文摘要
本发明涉及9-氨基-哒嗪并[4′，5′:3，4]-吡咯并[2，1-a]-异喹啉以及其与酸、碱和络合物组分所形成对机体无损害的盐类制备治疗慢性炎症过程，溃疡性结肠炎以及克隆氏病的药剂和抗增殖作用的应用。所述化合物的结构式如式(I)，R
文档编号C07D471/14GK1082046SQ9310761
公开日1994年2月16日 申请日期1993年6月22日 优先权日1992年6月22日
发明者迪特里希·阿恩特斯, 沃尔特·洛斯尔, 奥托·鲁斯 申请人:贝林格尔·英格海姆公司