专利名称：增加红细胞生成的噻吩并[2,3－b]吡唑并[3,4－d]吡啶－3－酮的制作方法
背景技术：
一般，由于降低肾脏促红细胞生成素(EPO)的分泌，慢性肾衰性贫血导致红血球的生成减少。EPO是肾脏对肾的氧传递作出应答时生成的，主要作用部分是骨髓中的红细胞谱系。它可调节红细胞前体细胞的增殖和变异，以产生足够的红血球。对晚期肾病患者的替代治疗临床试验证实，促红细胞生成素通过增加红细胞生成能够制止病人的贫血。
起因于或与慢性肾衰无关的增强红细胞生成的能力被认为是一种对贫血、血细胞减少症和伴随红细胞生成减少的其他症状的有诱惑力的治疗。
需要提供可使红细胞增加的化合物。
如本文所公开的，已出乎意外地发现，某些选出的噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮能够有效地增加哺乳动物包括人类的红细胞生成。
发明概要本发明发现，某些取代的噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮能够增加哺乳动物包括人类的红细胞生成。
目前优选的用于本发明的药物组合物和本发明方法的本发明的化合物包括2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮；2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮。
本发明的进一步方面是提供了用于制备本发明化合物的新中间体和新方法。
含有药物载体和用于本发明方法的化合物的药物组合物也包括在本发明内。
发明详述此处所用术语“增加红细胞生成”意指增加红血球的生成。
此处所用术语“治疗”及其衍生物意指预防性的或治疗学上的治疗。
能够增加红细胞生成的本发明的化合物为下式(Ⅰ)化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物
其中X为O或NR5，其中R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，所有这些都可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n为0-6，且R6和R7为(ⅰ)氢，或独立地选自氢，直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和Ar，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH和卤素，或
(ⅱ)当连于同一氮原子时，R6和R7可一起形成选自以下的环哌啶基、吗啉基(morpholynyl)、哌嗪基和吡咯烷基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立选自氢，直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个或2个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外；但包括2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物和溶剂化物。
其中优选的本发明的式(Ⅰ)化合物为式(Ⅱ)化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物；
其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，n为0-6，且R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上，
(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个氮原子，被一个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n的定义同上，或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基和卤素，n的定义同上；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外；但包括2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物和溶剂化物。
其中优选的本发明的式(Ⅱ)化合物是其中各基团定义如下的式(Ⅱ)化合物X为NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；R1为氢，或选自直链或支链C1-C6烷基、C3-7环烷基和苯基；且
R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C5-7环烷基，它任选地含有1个氮杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、苯基、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，或(ⅲ)R2和R3一起形成苯环，它被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外。
其中优选的本发明的化合物为2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物和溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物或溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3,:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
能够增加红细胞生成的本发明的化合物为式(Ⅲ)化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物
其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n为0-6，且R6和R7为(ⅰ)氢，或独立地选自氢，直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和Ar，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH和卤素，或(ⅱ)当连于同一氮原子时，R6和R7可一起形成选自以下的环哌啶基、吗啉基、哌嗪基和吡咯烷基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自氢，直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个或2个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上。
其中优选的增加红细胞生成的本发明的上述式(Ⅲ)化合物是式(Ⅳ)化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物
其中X为O或NR5，
R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，n为0-6；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个氮原子，被一个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n的定义同上，或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基和卤素，n的定义同上；其中优选的本发明的式(Ⅳ)化合物为式中各基团定义如下的式(Ⅳ)化合物X为NR5，
R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；及R2和R3为(ⅰ)氢，或分别选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C5-7环烷基，它任选地含有1个氮杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、苯基、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，或R2和R3一起形成苯环，它被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外。
优选的用于增加红细胞生成的本发明的化合物为2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[47,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
式(Ⅲ)化合物被包括在本发明的药物组合物中和用于本发明的方法中。
此处所用术语“Ar”意指苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基或嘌呤基。
此处所用术语“CX-Y环烷基”意指有X-Y个碳原子的非芳香的、不饱和或饱和的、环状或多环的化合物。指明时，术语“CX-Y环烷基”可包括一个或两个杂原子。
此处所用CX-Y环烷基的例子包括环乙基和环戊基。
此处所用术语“杂原子”意指O或N。
此处所用术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
式(Ⅰ)化合物可按下面反应流程Ⅰ制备，前提是，R’取代基不包括任何使反应流程Ⅰ不可操作的取代基。
反应流程(Ⅰ)式(Ⅰ)化合物的制备反应流程(Ⅰ)描述了自式(2)化合物制备式(Ⅰ)化合物的方法。
式(2)的酮与氰乙酸乙酯在溶剂如甲苯中，在胺如二乙胺的存在下回流，用迪安-斯达克装置共沸除水，生成式(3)的氰基酯，
R2和R3的定义同上；
式(3)的氰基酯与元素硫在溶剂中，优选的是乙醇，在胺如乙二胺的存在下反应生成式(4)的噻吩-3-羧酸酯
式(4)化合物与式(5)的3-乙氧巴豆酸酯在适宜的溶剂如甲苯中，在酸催化剂如樟脑磺酸存在下回流反应，用迪安-斯达克装置共沸除水。所得物质与1M乙醇钠溶液处理，回流生成式(6)的噻吩并[2,3-d]吡啶。
R1的定义同上式(6)化合物与磷酰氯回流下反应，生产式(7)的氯代噻吩并[2,3-b]吡啶。
式(6)化合物与三氟甲磺酸酐(triflic anhydride)在吡啶中于0℃反应，进行水性后处理生成式(8)的三氟甲磺酸酯衍生物
式(7)化合物或式(8)化合物与式(9)的肼衍生物在溶剂如甲醇中回流，得到X为NR5的式(Ⅰ)化合物，
R5的定义同上。
或者，式(7)化合物或式(8)化合物与式(10)的羟胺在溶剂如甲醇中，在碱如三乙胺或氢氧化钠存在下回流，生成式(Ⅰ)化合物，式中X为O。
适当时，用本领域普通技术人员已知的方法制备本发明化合物的药用盐、水合物和溶剂化物。
在制备本发明的式(Ⅰ)化合物时，合成了下式(Ⅴ)的新中间体
其中R1的定义同式(Ⅰ)；且R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和C3-12环烷基，它任选地含有1个或多个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同式(Ⅰ)。
优选的制备式(Ⅰ)化合物，包括被排除在外的化合物，及其可药用盐、水合物和溶剂化物的方法包括将下式化合物与下式的肼衍生物在溶剂如甲醇中回流，然后任选地形成可药用盐、水合物和溶剂化物，
NR5，而NR5、R1、R2和R3的定义同上式(Ⅰ)，
R1、R2和R3的定义同上，
R5的定义同式(Ⅰ)；优选的制备式(Ⅰ)化合物，包括被排除在外的化合物，及其可药用盐、水合物和溶剂化物的方法包括将下式化合物与下式的肼衍生物在溶剂如甲醇中回流，然后任选地形成可药用盐、水合物或溶剂化物，
其中X为NR5，而NR5、R1、R2和R3同上式(Ⅰ)，
R1、R2和R3的定义同上，R5的定义同上式(Ⅰ)优选的制备式(Ⅰ)化合物，包括被排除在外的化合物，及其可药用盐、水合物和溶剂化物的方法包括将下式化合物与下式的羟胺在溶剂如甲醇中，在碱如三乙胺或氢氧化钠存在下回流，然后任选地形成可药用盐、水合物或溶剂化物，
其中X为O，而R1、R2和R3同上式(Ⅰ)，
其中R1、R2和R3的定义同上，
优选的制备式(Ⅰ)化合物，包括被排除在外的化合物，及其可药用盐、水合物和溶剂化物的方法包括将下式化合物与下式的羟胺在溶剂如甲醇中，在碱如三乙胺或氢氧化钠存在下回流，然后任选地形成可药用盐、水合物或溶剂化物，
其中X为O，R1、R2和R3的定义同上式(Ⅰ)，
其中R1、R2和R3的定义同上，
由于本发明的化合物增加红细胞生成的药物作用，所以它们具有治疗贫血、血细胞减少症及伴有红细胞生成减少的其他疾病。
为证实本发明化合物增加红细胞生成的作用，采用以下方法。
本发明化合物对红细胞生成素依赖的UT7/EPO人类细胞系的细胞生长的作用UT7/EPO细胞在细胞表面表达人EPO受体并通过细胞增殖对EPO进行应答。用T.Mosmann(1983)在J.Immunol Methods，细胞生长和存活的快速比色法增殖和细胞毒性测试应用65∶55-63中所述的MTT法对响应EPO或本发明化合物的UT7/EPO细胞的增殖进行定量。UT7/EPO细胞在培养基中生长(Iscove’s Modified Dulbecco’s培养基，含L-谷酰胺和25mM HEPES缓冲液)(IMDM培养基)及0.4U/ml重组人EPO(Amgen)和10％胎牛血清(FBS)至细胞密度约为5×105个细胞/ml。离心分离(约600×g)收集细胞，用不含EPO或FBS的IMDM洗涤两次。将细胞重新悬浮于含有10％FBS或不含血清的5×105个细胞/ml的IMDM培养基中。将100微升等份液体加到96孔微滴板中。将本发明的化合物(或EPO)用连续稀释法加入，维持最终体积为0.1ml。将处理过的细胞在增湿培养器中于37℃和5％CO2中培养2-3天。在培养期结束时，每一孔以0.025ml体积加入0.04mg MTT[(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四鎓溴化物]，培养4小时。加入10％SDS溶于0.01NHCl的溶液来终止MTT的反应，并于37℃增溶过夜。用BioTek II Microplate Reader于570/750nM比色定量测定增殖量。OD570/750的增加与细胞生成成比例。
测试了本发明的化合物，结果对UT7/EPO细胞的EC50活性为MTT活性的1(uM)至＞66(uM)。其中特别优选的本发明的化合物和用于本发明的药物组合物和发明方法的化合物为2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物或溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物或溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4，,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
本发明的化合物也可在最适度下的(suboptimal)EPO的存在下刺激UT7/EPO细胞的增殖。
需要时，本发明的药物活性化合物可用于增加包括人在内的哺乳动物的红细胞生成。
本发明的药物活性化合物可制成方便的剂型，如胶囊、片剂或注射剂。可用固体或液体药物载体。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水和水。类似地，载体或稀释剂可以包括任何延长释放的物质，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，有或无石蜡存在。固体载体量的范围较宽，但优选的是每剂量单位中为约25mg-约1g。当用液体载体时，制剂形式为糖浆、酏剂、乳液、软明胶胶囊、无菌注射液如安瓶，或水或非水液体悬浮液。
按照药剂师的常规技术制备药物制剂，包括混合、制粒和必要时，如片剂的压片，或混合、填充和溶解组分，适宜时制成所需的口服或非经胃肠制剂。
本发明的药物活性化合物在上述药物剂量单位中的剂量为有效的、无毒性的量，优选的是每千克患者体重0.001mg-100.0mg，优选的是0.001-10mg/kg。可通过常规给药途径给需增加红细胞生成的病人服用活性化合物，给药方法包括但不限于静脉、肌肉内、口服、皮下、真皮内和非经胃肠道。在治疗需增加红细胞生成的病人时，所选剂量最好是每天1-6次给药，口服或非经胃肠道。优选的非经胃肠道给药形式包括局部、直肠、经皮，注射和连续输注。优选的人类口服剂量单位含有0.05-500mg活性化合物。口服时，优选是用较低剂量。非经胃肠道给药，在对病人安全和方便的条件下，也可用高剂量。
服用的最佳剂量可容易地由本领域中的普通技术人员确定，随所用特定药物活性化合物、制剂浓度、给药方式和疾病进程而变化。其他调节剂量的因素取决于受治疗患者的情况，包括年龄、体重、膳食和给药时间。
本发明的增加包括人类在内的哺乳动物红细胞生成的方法包括给需治疗者服用增加红细胞生成有效量的本发明的药物活性化合物。
本发明也提供了式(Ⅲ)化合物用于制造用来增加红细胞生成的药物的用途。
本发明也提供了一种用于治疗贫血的、含有式Ⅲ化合物和可药用的载体的药物组合物。
本发明也提供了一种用于治疗血细胞减少症的、含有式Ⅲ化合物和可药用载体的药物组合物。
本发明也提供了一种制备含有可药用的载体或稀释剂和式Ⅲ化合物的药物组合物的方法，包括将式Ⅲ化合物与可药用的载体或稀释剂混合。
按照本发明的方法服用本发明的化合物未见到不能接受的毒性作用。
此外，本发明的药物活性化合物可与其他活性组分一起服用，如已知的其他可增加红细胞生成的化合物。
无须进一步的详述，相信本领域的技术人员可通过前面的描述最大限度地利用本发明。因此，下列实施例仅用于说明但不是以任何方式限制本发明的范围。
实验详述实施例12,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
a)4-羟基-2-甲基-5,6,7,8-四氢-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯2-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(8.9g,39mmol)和3-乙氧巴豆酸乙酯(12.4g,78mmol)溶于甲苯(300ml)的溶液与樟脑磺酸(0.78g,3.4mmol)反应，用迪安-斯达克榻分水器将反应混合物加热回流3小时。然后将混合物冷至室温，随后用新制成的1M乙醇钠溶液(48ml,48mmol)处理。加完后，将反应混合物加热回流3小时。将混合物冷却、浓缩，残余物溶于乙酸乙酯。加入醋酸(2ml)，蒸发溶剂，所得固体用甲醇研磨，生成标题化合物，为米白色固体(8.4g,74％).mp 140℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.48(q,J=7.2Hz,2H),3.04(brs,2H),2.81(s,3H),2.80(brs,2H),1.87(brs,4H),1.47(t,J=7.2Hz,3H)；元素分析C15H17NO3S计算值C,61.83；H,5.88；N,4.81；实验值C,61.69；H,5.81；N,4.73。
b)4-氯-2-甲基-5,6,7,8-四氢-[1]苯并噻吩[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯实施例1(a)的化合物(8.0g,27.4mmol)溶于磷酰氯(100ml)的溶液回流3.5小时。真空除去磷酰氯，残余油溶于乙酸乙酯，用5％碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥．蒸除溶剂得到标题化合物为结晶固体(8.5g,95％).mp 65-66℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.47(q,J=7.1Hz,2H),3.10(brs,2H),2,85(brs,2H),2.60(s,3H),1.89(brs,4H),1.43(t,J=7.1Hz,3H)；元素分析C15H16ClNO2S.5/4H2O计算值C,57.73；H,5.25；N,4.49；实验值C,57.69；H,5.08；N,4.30。
c)2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮盐酸盐将实施例1(b)的化合物(2.0g,6.4mmol)溶于甲醇(50ml)的溶液用一水合肼(10ml)处理，所得混合物加热回流16小时。将反应物倾入稀盐酸水溶液中，标题化合物沉淀析出，为黄色固体(1.8g)。
1H NMR(400MHz,d4-MeOH)δ3.01(brs,2H),3.00(s,3H),2.92(brs,2H),2.00(brs,4H)；元素分析C13H13N3OS.HCl.1/4H2O计算值C,52.00；H,4.87；N,13.99；实验值C,51.92；H,5.01；N,13.70。
实施例22,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
a)4-氯-2-甲基-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯实施例1(b)化合物(400mg,1.3mmol)溶于甲苯(20ml)的溶液用DDQ(1.8g,8.0mmol)处理，所得悬浮液于100℃回流24小时。将混合物过滤，蒸发溶剂，粗品用闪式层析纯化(硅胶，9∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到标题化合物为固体(400mg):mp 111-112℃；元素分析C15H12ClNO2S计算值C,58.92；H,3.96；N,4.58；实验值C,58.78；H,3.84；N,4.56。
b)2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并-[3,4-d]吡啶-3-酮实施例2(a)的化合物(160mg,0.52mmol)溶于甲醇(10ml)的溶液用一水合肼(2ml)处理，所得混合物加热回流24小时。将溶液减压浓缩后，倾入稀盐酸水溶液中；标题化合物沉淀析出，为黄色固体(140mg,90％)元素分析C13H9N3OS.0.25H2O计算值C,59.01；H,3.81；N,15.90；实验值C,59.38；H,3.80；N,15.58。
实施例38,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
a)2-氰基-2-(4,4-亚乙二氧基亚环己基)乙酸乙酯室温下，向1,4-环己二酮单乙缩酮(25g,0.160mol)和氰乙酸乙酯(18g,0.160mol)溶于甲苯(400ml)的混合物中滴加乙二胺(25g,0.337mol)。将反应混合物加热回流过夜(用迪安-斯达克装置)。将混合物冷却，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液(3x)间分配。有机萃取液用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，用乙醇重结晶，得到标题化合物，为白色固体(15.8g,45％).mp 80-81℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.28(q,J=7.2Hz,2H),4.00(s,4H),3.18(t,J=6.5Hz,2H),2.85(t,J=6.5Hz,2H),1.89(t,J=6.5Hz,2H),1.82(t,J=6.5Hz,2H),1.35(t,J=7.1Hz,3H).
b)2-氨基-6,6-亚乙二氧基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯0℃下，向实施例3(a)化合物(10g,45.6mmol)、硫(1.6g,50.2mmol)溶于乙醇(164ml)的悬浮液中滴加二乙胺(3.6g,50.2mmol)溶于乙醇(26ml)的溶液。所得溶液于0℃搅拌1小时，然后室温搅拌3.5小时。用乙酸乙酯终止反应混合物，用饱和氯化铵水溶液萃取。水相用乙酸乙酯萃取，有机提取液用盐水洗涤。合并有机提取液，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，层析(硅胶，梯度洗脱，5-10％二氯甲烷乙酸乙酯)，得到标题化合物，为油(11.3g,87％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.25(q,J=7.1Hz,2H),4.02(s,4H),2.92(t,J=6.5Hz,2H),2.74(s,2H),1.90(t,J=6.6Hz,2H),1.33(t,J=7.1,3H).
c)7,7-亚乙二氧基-4-羟基-2-甲基-5,6,7,8-四氢-[1]-苯并噻吩并[2,3-b]-吡啶2-羧酸乙酯室温下，向实施例3(b)化合物(11.2g,39.5mmol)溶于甲苯(307ml)的溶液中加入3-乙氧巴豆酸乙酯(12.4g,78.6mmol)和樟脑磺酸(0.78g,3.4mmol)。用迪安-斯达克榻分水器将反应混合物加热回流3.5小时。然后冷却混合物，滴加新制备的1M乙醇钠溶液(49ml)。一加完，将反应混合物加热回流3小时。冷却混合物，过滤沉淀。将盐溶于甲醇(60ml)后，加水(500ml)和醋酸(2ml)，得到标题化合物，为黄色固体(10.4g,76％).mp94-95℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.48(q,J=7.1Hz,2H),4.06(s,4H),3.26(t,J=6.5Hz,2H),3.02(s,2H),2.81(s,3H),2.02(t,J=6.5,2H),1.47(t.J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z350[M+H]+；元素分析C17H19N3O5S计算值C,58.44；H,5.48；N,4.01；实验值C,58.34；H,5.46；N,3.86。
d)7,7-亚乙二氧基-4-三氟甲磺酰氧基-2-甲基-5,6,7,8-四氢-[1]-苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸乙酯向实施例3(c)化合物(5.0g,14.3mmol)溶于吡啶(50ml)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(4.0g,14.2mmol)。然后将反应混合物在0℃搅拌4小时至反应完成。将反应混合物用硫酸铜水溶液(3x)、然后用水(2x)和盐水(2x)洗涤。蒸发有机层，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。用闪式层析纯化(硅胶，1∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到标题化合物，为浅黄色固体(3.7g,54％).mp133-134℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.43(q,J=7.2Hz,2H),4.06(s,4H).
3.16(t,J=6.5Hz,2H),3.10(s,2H),2.77(s,3H),2.03(t,J=6.8Hz,2H),1.41(t,J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z 482[M+H]+；元素分析C18H18F3NO7S2计算值C,44.90；H,3.77；N,2.91；实验值C,45.03；H,3.62；N,2.89。
e)8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮室温下，向实施例3(d)化合物(2.4g,5.0mmol)溶于甲醇(40ml)的溶液中加入一水合肼(4.1g,82.3mmol)反应，将反应混合物加热回流3小时。然后将混合物冷却，用pH为7的缓冲液和乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，用甲醇/乙酸乙酯重结晶，得到标题化合物，为浅黄色固体(0.99g,60％)。
1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δ4.05(s,4H),3.15(t,J=6.5Hz,2H),3.04(s,2H),2.82(s,3H),2.06(t,J=6.5Hz,2H)；MS(ESI)m/z318[M+H]+；元素分析C15H15N3O3S.0.25H2O计算值C,55.97；H,4.85；N,13.05；实验值C,55.85；H,4.75；N,13.30。
实施例41,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮室温下，实施例3(d)化合物(0.4g,0.83mmol)溶于甲醇(6.7ml)的溶液与甲基肼(0.16g,3.45mmol)反应，将混合物加热回流2小时。混合物冷却，沉淀，含有150mg 2,4-二甲基位置异构体(regioisomer)，过滤。滤液蒸发，用闪式层析纯化(硅胶，以80∶20∶5乙酸乙酯∶甲醇∶醋酸洗脱)，得到标题化合物，为黄色固体(22mg).
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.03(s,4H),3.73(s,3H),3.76(t,J=6.0Hz,2H),3.00(s,2H),2.80(s,3H),2.03(t,J=6.0Hz,2H)；MS(ESI)m/z332(M+H)+.
实施例58-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
a)N-叔丁氧羰基-4-(1-氰基-1-乙氧羰基)亚甲基哌啶室温下，向N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(25g,0.125mol)和氰乙酸乙酯(18g,0.160mol)溶于甲苯(400ml)的混合物中滴加二乙胺(18.25g,0.25mol)。用迪安-斯达克装置将反应混合物加热回流过夜。将混合物冷却，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液(3x)萃取。有机提取液用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到38g粗品。用硅胶层析纯化(70∶30己烷∶乙酸乙酯)，得到标题化合物，为白色固体(22.2g,60％).
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.31(q,J=7.1Hz,2H),3.63(t,J=5.5Hz,2H),3.56(t,J=5.5Hz,2H),3.12(t,J=5.5Hz,2H),2.78(t,J=5.5Hz,2H),2.83(s,3H),1.48(s,9H),1.35(t,J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z 295[M+H]+.
b)2-氨基8-叔丁氧羰基-4,5,6,7-四氢吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩-3-羧酸乙酯0℃下，向实施例5(a)化合物(17g,58mmol)和硫(2.0g,65mmol)溶于乙醇(160ml)的悬浮液中滴加二乙胺(4.75g,65mmol)溶于乙醇(160m)的溶液，将混合物于0℃搅拌1小时，然后室温搅拌15小时。过滤所得的固体沉淀，滤液用水稀释，生成另一部分沉淀。共计得到15.6g(82.5％)标题化合物。mp153-154℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.35(s,2H),4.27(q,J=7.2Hz,2H),3.62(t,J=5.8Hz,2H),2.80(t,J=5.8Hz,2H),1.48(s,9H),1.34(t,J=7.2Hz,3H).
c)7-叔丁氧羰基-4-羟基-2-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯室温下，实施例5(b)化合物(14.0g,42.9mmol)溶于甲苯(300ml)的溶液与3-乙氧巴豆酸乙酯(13.6g,85.8mmol)和樟脑磺酸(1.0g,4.3mmol)反应。用迪安-斯达克榻分水器将所得混合物加热回流3.5小时。冷却后，反应混合物与乙醇钠(55mmol)的乙醇(60ml)溶液反应。一加完，就将反应混合物加热回流3小时。冷却混合物，用醋酸中和至pH6。然后用乙酸乙酯萃取，所得溶液用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到14.5g油状物质。用硅胶层析纯化(95∶5二氯甲烷∶乙酸乙酯)，得到标题化合物，为白色固体(11.5g,77％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ12.8(s,1H),4.65(s,2H),4.49(q,J=7.1Hz,2H),3.75(t,J=5.6Hz,2H),3.13(t,J=5.6Hz,2H),2.83(s,3H).1.50(s,9H),1.48(t,J=7.1Hz,3H).
d)7-叔丁氧羰基-2-甲基-4-三氟甲磺酰氧基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯-30℃、氩气保护下，向实施例5(c)化合物(3.48g,10mmol)溶于吡啶(25ml)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(6.0g,2.5mmol)。然后将反应混合物于-30℃搅拌30分钟，室温搅拌1小时。随后用硫酸铜水溶液(3x)、水(2x)和盐水(2x)萃取。有机层蒸发，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到标题化合物，为浅黄色固体(4.38g,83.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.73(s,2H),4.44(q,J=7.1Hz,2H),3.75(t,J=5.6Hz,2H),3.05(t,J=5.6Hz,2H),2.79(s,3H),1.51(s,9H),1.42(t,J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z525[M+H]+.
e)8-叔丁氧羰基2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮室温下，向实施例5(d)化合物(4.0g,7.6mmol)溶于甲醇(50ml)的溶液中加入-水合肼(3.0g,75mmol)。将反应混合物加热回流15小时。将混合物浓缩至约剩10ml溶剂，然后用水稀释。所得固体过滤，得到标题化合物，为白色粉末(1.7g,62％)。mp＞300℃。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ4.63(s,2H),3.71(t,J=5.6Hz,2H),3.33(t,J=5.6Hz,2H),2.69(s,3H),1.44(s,9H)；元素分析C17H20N4O3S计算值C,56.65；H,5.59；N,15.54；实验值C,56.59；H,5.63；N,15.55；MS(ESI)m/z 361[M+H]+。
实施例62,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的制备
2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮三氟醋酸盐向实施例5(e)化合物(0.50g,1.39mmol)溶于二氯甲烷(15ml)的悬浮液中加入三氟醋酸(3ml)，所得澄清溶液于室温搅拌1.5小时。将混合物减压浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，得到标题化合物，为浅黄色固体(0.494g,96％)。mp 200-203℃(分解)；1HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ4.48(s,2H),3.55(t,J=5.6Hz,2H),3.25(t,J=5.6Hz,2H),2.77(s.3H)；MS(ESI)m/z261[M+H]+.
实施例7用筛分、混合、按下表1中的量将各组分填入明胶胶囊来制备式(Ⅲ)化合物的口服剂型。
表Ⅰ组分 量8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮 50mg硬脂酸镁5mg乳糖75mg实施例8蔗糖、硫酸钙二水合物和下表Ⅱ中的式(Ⅲ)化合物按表中比例与10％明胶溶液混合、制粒。将湿颗粒进行筛分、干燥、与淀粉、滑石和硬脂酸混合，筛分并压成片。表Ⅱ组分 量8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮 100mg硫酸钙二水合物 150mg蔗糖 20mg淀粉 10mg滑石 5mg硬脂酸 3mg实施例975mg 8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮分散于25ml常用盐水，制备注射剂。
以上说明本发明优选的例子，应懂得，本发明不限于此处公开的详细说明，将保留对所有落在下列权利要求范围内的改进和修改的权利。
权利要求
1．式(Ⅰ)化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物；
其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n为0-6，且R6和R7为(ⅰ)氢，或独立地选自氢，直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和Ar，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH和卤素，或(ⅱ)当连于同一氮原子时，R6和R7可一起形成选自以下的环哌啶基、吗啉基、哌嗪基和吡咯烷基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自氢，直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个或2个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外；但包括2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物和溶剂化物。
2．权利要求1的化合物或其可药用盐、水合物或溶剂化物，其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，n为0-6R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个氮原子，被一个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n的定义同上，或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基和卤素，n的定义同上；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外；但包括2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物和溶剂化物。
3．权利要求1的化合物，其中X为NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；及R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C5-7环烷基，它任选地含有1个氮杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、苯基、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，或(ⅲ)R2和R3一起形成苯环，它被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外。
4．权利要求1的化合物，选自2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物或溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮的可药用盐、水合物或溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,1O-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
5．一种增加患者红细胞生成的方法，包括给需要治疗的患者服用有效量的式(Ⅲ)化合物，或其可药用盐、水合物或溶剂化物
其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n为0-6；R6和R7为(ⅰ)氢，或独立地选自氢、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和Ar，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH和卤素，或(ⅱ)当连于同一氮原子时，R6和R7可一起形成选自以下的环哌啶基、吗啉基、哌嗪基和吡咯烷基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自氢、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，所有这些都可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代-OH、-OR6、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个或2个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上；或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基、-CONR6R7、-NR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同上。
6．权利要求5的方法，其中X为O或NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基或-(CH2)nAr，n为0-6；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上，R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基和-(CH2)nAr，n的定义同上；(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，它任选地含有1个氮原子，被一个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n的定义同上；或(ⅲ)R2和R3一起形成选自以下的芳环苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、异噻唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咔唑基、吲哚基、喹啉基和嘌呤基，所有这些可被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、-(CH2)nPh、-O-C1-6烷基和卤素，n的定义同上；或其可药用盐、水合物或溶剂化物。
7．权利要求5的方法，其中X为NR5，R5为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；R1为氢，或选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基；且R2和R3为(ⅰ)氢，或独立地选自直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯基，(ⅱ)R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C5-7环烷基，它任选地含有1个氮杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基、苯基、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，或(ⅲ)R2和R3一起形成苯环，它被一个或多个选自以下的取代基任选地取代卤素、-OH、直链或支链C1-6烷基、C3-7环烷基和苯环；2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮和8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮除外。
8．权利要求5的方法，其中的化合物选自2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物或溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
9．权利要求1-4的任一项的化合物制造用于增加红细胞生成的药物的用途。
10．一种药物组合物，含有适宜的药物载体和权利要求5所述的式(Ⅲ)化合物。
11．权利要求10的组合物，其中的化合物为2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；2,3-二氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物或溶剂化物；1,4-二甲基-8,8-亚乙二氧基-2,3,7,8,9,10-六氢-1H-[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；8-叔丁氧羰基-2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物；和2,3,7,8,9,10-六氢-4-甲基-1H-吡啶并[4’,3’:4,5]噻吩并[2,3-b]吡唑并[3,4-d]吡啶-3-酮及其可药用盐、水合物和溶剂化物。
12．一种制备式(Ⅰ)化合物，包括被排除在外的化合物，及其可药用盐、水合物和溶剂化物的方法，
其中X为NR5，而NR5、R1、R2和R3的定义同上述权利要求1，该方法包括将下式化合物与下式的肼衍生物在溶剂如甲醇中回流进行反应，然后任选地形成其可药用盐、水合物或溶剂化物，
其中R1、R2和R3同上
其中R5同式(Ⅰ)中；
13．制备含有可药用载体或稀释剂和有效量的如权利要求5所述的式(Ⅲ)化合物的药物组合物的方法，该方法包括将式(Ⅲ)化合物与可药用载体或稀释剂混合。
14．式(Ⅴ)化合物
其中R1的定义同权利要求1中的式(Ⅰ)中的；且R2和R3一起形成非芳香的饱和或不饱和的C3-12环烷基，任选地含有一个或两个杂原子，被一个或多个选自以下的取代基任选地取代亚乙二氧基、直链或支链C1-C6烷基、-(CH2)nC3-7环烷基、直链或支链C2-6链烯基、直链或支链C2-6炔基、-(CH2)nAr、-OH、-OR6、-CONR6R7、-COR6、-CO2R6、-SO2NHR6、-NHCOR6和卤素，n、R6和R7的定义同权利要求1中的式(Ⅰ)中的。
全文摘要
本发明为取代的噻吩并(2,3－b)吡唑并(3,4－d)吡啶－3－酮、含有这些化合物的药物组合物及用这些化合物增加红细胞生成的方法。本发明也涉及用于制备这些化合物的中间体和方法。
文档编号C07D495/14GK1211920SQ96180144
公开日1999年3月24日 申请日期1996年12月20日 优先权日1995年12月29日
发明者J·I·鲁恩戈 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司