利用韦林－α－干扰素联合疗法根除慢性丙型肝炎感染患者可检测的HCV－RNA的制作方法

专利名称：利用韦林－α－干扰素联合疗法根除慢性丙型肝炎感染患者可检测的HCV－RNA的制作方法
背景技术：
本发明涉及治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予治疗有效量的利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段应足以在该给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在给药期结束后至少24周内，无可检测的HCV-RNA，以及涉及式I代表的利巴韦林衍生物。 丙型肝炎病毒慢性感染是一种对生活质量具有严重影响的隐伏的、慢性加剧的疾病。其最终导致肝硬变、肝代偿性失调(decompensated liver disease)和/或肝细胞癌。
Reichard等(The Lancet 1998；351；83-87)和T.Poynard等(TheLancet1998；Vol.352；Oct.31，P1426-1432)公开了α-2b干扰素和利巴韦林联合疗法治疗慢性丙型肝炎患者。还可见J.G.McHutchinson等(N.Engl.J.Med.1998，3391485-1492)和G.L.Davis等(N.Engl.J.Med.1998，3391493-1499)。但是，由于利巴韦林有关的副作用，如与利巴韦林有关的溶血作用以及贫血，该联合疗法并不总是有效的。
因此，确实需要更有效、安全的利巴韦林衍生物，该衍生物具有较少的副作用，可用作单一治疗剂或者与抗病毒药(如α-干扰素)联合使用，以便以长期有效的方式治疗患有易感(susceptible)病毒感染(如慢性丙型肝炎感染)的患者。
发明概述本发明提供治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的方法，其包括在一定时间段内给予治疗有效量的式I利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间足以在该给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在给药期结束后至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式I代表 其中R2、R3或R5中至少一个是H、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)xPO-(OH)-或HO-SO2-，以及R2、R3或R5中至少一个不是H；其中R6是H、烷基、链烷酰基、环烷基、杂环基、芳基、NR7aR7b、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR7aR7b、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R18、CF3、SH、SR7a、SOR7a、SO2R7a取代的芳基，NR7aR7bCO2H、CO2-M+，O-M+OR7a或S-M+；其中M+是碱金属阳离子；或者R6是-(CHR7a)e-(CH2)f-CO-OR7b-、-(CHR7a)e-(CH2)f-OR7b-或-(CHR7a)e-(CH2)f-NR7aR7bW是O、NR18或S；R7a是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R7b是H、烷基或芳基，或者是被卤代、CN、NO2、CO2H、OH或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R7a和R7b一起与N和CHR7a、NR7a、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；R17是H、OR7a、NR7aR7b、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-；R18是H、烷基、链烷酰基或芳基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
本发明还提供治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的方法，其包括给予至少20-50周的一定时间段的治疗有效量的式I利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段足以在所述20-50周的期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在该给药期结束至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式I代表 其中R2、R3或R5中至少一个是H、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-，以及R2、R3或R5至少一个不是H；其中R6是H、烷基、链烷酰基、芳基、杂环基、环烷基、NR7aR7b、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR7aR7b、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R18、CF3、SH、SR7a、SOR7a、SO2R7a取代的芳基，NR7aR7b、CO2H、CO2-或OR7a、O-M+或S-M+；其中M+是碱金属阳离子；或者R6是-(CHR7a)e-(CH2)f-CO-OR7b-、-(CHR7a)e-(CH2)f-OR7b-或-(CHR7a)e-(CH2)f-NR7aR7b-；W是O、NR18或S；R7a是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R7b是H、烷基或芳基，或者是被卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R7a和R7b一起与N和CHR7a、NR7a、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；R17是H、OR7a、NR7aR7b、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS、(HO)2PO-、R6-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-；R18是H、烷基、链烷酰基或芳基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
在另一个实施方案中，本发明涉及式II代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R2’、R3’或R5’中至少一个是H、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS或R20-(W)x-PO(OH)-；以及其中R2’、R3’或R5’至少一个不是H；其中R20是H、烷基、链烷酰基、环烷基、芳基、杂环基、NR21R22、链烯基或链炔基；或者是被卤素、苯基、环烷基、NR21R22、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被卤素、苯基、CN、NO2、OH、R28、CF3、SH、SR21、SOR21、SO2R21、NR21R22、CO2H、CO2-、OR21、O-M+或S-M+取代的芳基；其中M+是碱金属阳离子；或者R20是-(CHR21)e-(CH2)f-CO-OR22、-(CHR21)e-(CH2)f-OR22或-(CHR21)e-(CH2)f-NR21R22；W是O、NR28或S；R21是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R22是H、烷基或芳基，或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R21和R22一起与N和CHR21、NR21、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；或者R27是H、OR21、NR21R22、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS-、(OH)2PO-或R20-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-；R28是H、链烷酰基或烷基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
在另一个实施方案中，本发明涉及治疗患有慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间内给予治疗有效量的式II利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间足以在该给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在给药期结束至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中该利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式II代表 其中R2’、R3’或R5’至少一个是H、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS或R20-(W)x-PO(OH)-；以及其中R2’、R3’或R5’至少一个不是H；其中R20是H、烷基、链烷酰基、环烷基、芳基、杂环基、NR21R22、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR21R22、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、R28、CF3、SH、SR22、SOR21、SO2R21、NR21R22、CO2H、CO2-、OR21、O-M+或S-M+取代的芳基；其中M+是碱金属阳离子；或者R20是-(CHR21)e-(CH2)f-CO-OR22、-(CHR21)e-(CH2)f-OR22或-(CHR21)e-(CH2)f-NR21R22；W是O、NR28或S；R21是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R22是H、烷基或芳基，或者是被卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R21和R22一起与N和CHR21、NR21、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；或者R27是H、OR21、NR21R22、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS-、(HO)2PO-或R20-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-；R28是H、链烷酰基、芳基或烷基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
本发明提供式III代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R50’、R30’或R20’中至少一个由下式代表 以及R50’、R30’或R20’中的其它两个是H或者由下式代表 其中Q是 其中R51和R52独立是H、烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR57、OR57或NR55R56取代的烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者其中R51和R52与(CR51R52)中的碳原子一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；其中R53和R54独立是H、链烷酰基、烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR57、OR57取代的链烷酰基、烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；或者R53和R54独立是 其中R57是H、烷基、链烷酰基、链烯酰基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、链烷酰基噻吩基或烷酰氧基取代的烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；其中R58是H、烷基、芳基、芳烷基、链烯基或链炔基；q是0、1或2；k是1或2。
在优选实施方案中，式III化合物中的R30’或R20’各自是H。
本发明提供式IV代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R50”、R30”或R20”至少一个由下式代表 以及R50”、R30”或R20”中的其它两个是H或者由下式代表 其中T为由下式代表的部分H2NCH2-、H2NCH2CH2-、CH3CH(H2N)-、CH3CH2CH(H2N)-、CH3(CH2)2CH(H2N)-、(CH3)2CHCH(H2N)-、(CH3)2CHCH2CH(H2N)-、CH3CH2CH(CH3)CH(H2N)-、PhCH2CH(H2N)-、HOOCCH2CH2CH(H2N)-、HOOCCH2CH(H2N)-、HSCH2CH(H2N)-、CH3SCH2CH2CH(H2N)-、HOCH2CH(H2N)-、H2N(CH2)4CH(H2N)-、CH3CH(OH)CH(H2N)、 其中R58和R59独立是H、烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR60、OR60或NR60R61取代的烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者其中R58和R59与(CR58R59)中的碳原子一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；其中R60是H、烷基、链烷酰基、链烯酰基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、链烷酰基噻吩基或烷酰氧基取代的烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；其中R61是H、烷基、芳基、芳烷基、链烯基或链炔基；d是0、1或2。
在优选实施方案中，式IV化合物中的R30’或R20’各自是H。
本发明提供式V代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中R20CO-是天然或非天然由下式代表的氨基酸部分 Y＝H、CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-；PhCH2-；HOOCCH2CH2-；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或其药学上可接受的盐；或者Y与α碳和N一起形成 或其药学上可接受的盐；或者Y与α碳和N一起形成 或其药学上可接受的盐。
本发明提供式VI代表的化合物或其药学上可接受的盐，
其中AA是下式的天然或非天然氨基酸部分。
本发明还提供式VII代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中R50是CH3CH(NH2)-CO-、CH3CH2(CH3)CHCH(NH2)-CO-或H2N(CH2)4CH(NH2)-CO-。
本发明还提供用于治疗病毒性感染的药用组合物，其包括式VII化合物以及至少一种药学上可接受的载体。
本发明还提供治疗被病毒感染的患者的方法，该方法包括给予该患者有效量的式VII化合物。
本发明还提供治疗感染慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予该患者有效量的式VII化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物或其药学上可接受的盐由式VII代表 其中R50是CH3CH(NH2)-CO-、CH3CH2(CH3)CHCH(NH2)-CO-或H2N(CH2)4CH(NH2)-CO-。
本发明提供式VIII代表的化合物或其药学上可接受的盐 本发明还提供治疗患有慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括给予该患者一定时间段的足以根除可检测的HCV-RNA水平的有效量的式VIII化合物或其药学上可接受的盐，以及有效量的α-干扰素。 发明详述本发明所用术语“烷基”是指1-20个碳，优选1-6个碳，更优选1-3个碳的直和支链碳链。
本发明所用术语“链烯基”是指含有至少1个碳-碳双键，并具有2-20个碳，优选2-8个碳的直和支链烷基。
本发明所用术语“链炔基”是指含有至少1个碳-碳三键并具有2-20个碳，优选含有至少1个碳-碳三键和2-6个碳的直和支链烷基。
本发明所用术语“环烷基”是指任选被一个双键取代、3-12个碳，优选3-7个碳，更优选3-6个碳的碳环环系。
本发明所用术语“链烷酰基”是指1-20个碳，优选2-12个碳，更优选2-10个碳，最优选2-6个碳的直和支链链烷酰基。
本发明所用术语“链烯酰基”是指含有至少1个碳-碳双键的1-20个碳，优选2-12个碳，更优选2-10个碳，以及最优选含有至少1个碳-碳双键的2-6个碳的直和支链链烯酰基。
本发明所用术语“卤代”是指氟代、氯代或溴代，优选氟代或氯代。
本发明所用术语“链炔酰基”是指含有至少1个碳-碳三键的1-20个碳，优选2-12个碳，更优选2-10个碳，以及最优选含有至少1个碳-碳三键的2-6个碳的直和支链链炔酰基。
本发明所用术语“烷氧基”是指在一碳原子上含有1个氧键并含有1-10个碳的直和支链烷基。一般适合的烷氧基包括甲氧基、乙氧基和叔-丁氧基。
本发明所周术语“芳基”(包括芳氧基和芳烷基的芳基部分，如苄基)代表含有6-15个碳原子并具有至少一个芳环(如，芳基是苯环)的碳环，或者是含有一或多个杂原子(如N或S)的多环芳环，如喹啉基、异喹啉基，该碳环的所有可取代的碳原子可任选被一或多个(如1-3个)卤素、烷基、羟基、烷氧基、CN、苯氧基、CF3、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、SH、S-M+或-NO2取代；术语“M+”代表碱金属阳离子，如Na+、K+和Li+。
本发明所用术语“芳烷基”是指可被芳基取代的烷基。
本发明所用术语“杂环基”是指下式代表的环基 其中J是-CHR60、-O-、-NR60-、-S-、-SO-或-SO2-，I是-CR60或-N-；R60是H、烷基或芳基，g和g’独立是1-4，g+g’是2、3、4或5。典型的适当杂环包括 本发明所用术语“卤代”是指氟代、氯代或溴代，优选氟代或氯代。
在本发明优选实施方案中，式I化合物的R2、R3或R5中的1或2个是R6(W)xCO-、(HO)2PO-或R6(W)xPO(OH)-，以及R2、R3或R5中至少一个是H。更优选的式I化合物具有R2＝R3＝H，并且R5是R6(W)xCO-、(HO)2PO-或R6(W)xPO(OH)-。在R6-(W)xCO-和R6(W)x-PO(OH)-的优选方案中，W＝O，x＝0或1。在R6-(W)xCO-和R6(W)xP(OH)O-的优选方案中包括R17(CH2)m-NR7bR7a-(CH2)nOCO-和R17(CH2)m-NR7bR7a-(CH2)n-O-PO(OH)，其中m＝0-4，n＝0-4；R17是H、Me、MeCO-或Me2N-，以及R7aR7bN(CH2)f-(CHR7a)eOCO-或R7aR7bN(CH2)f-(CHR7a)eCO-，其中f＝0-4，e＝1-5，R7aR7b是Me2N-、MeHN-或MeCONH-。
R6-(W)xCO-的最优选方案中，x＝0，R6CO是以下基团之一 HOCH(CH3)CO-、HOCH(C6H5)CO-、C2H5CH(OH)CO-或CH3CO2(CH2)2CO-、或者R6CO中的R6是以下基团之一 R6CO是天然或非天然α-氨基酸残基，选自 其中Y＝H、CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-；PhCH2-；HOOCCH2CH2-；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或其药学上可接受的盐；或者Y与α碳和N一起形成 或其药学上可接受的盐；或者 其中R21定义同上；或其药学上可接受的盐。
式I化合物中的另一R6CO的优选方案包括 (CH3)3CO-、C6H5CO-、(HO)2PO-和L-C6H5CH2OCONHCH(CH3)CO-，即C6H5CH2OCONHCH。
在本发明优选实施方案中，式II化合物的R2、R3或R5的1或2个是R20(W)xCO-或R20(W)xPO(OH)-，并且R2、R3或R5中至少一个是H。最优选的式II化合物具有R2＝R3＝H，并且R5是R26(W)xCO-或R20(W)xP(OH)O-。在R20(W)xCO-和R20(W)xP(OH)O-的优选方案中，W＝O，x＝0或1。在R20(W)xCO-和R20(W)xP(OH)O-的优选方案中包括R27(CH2)m-NR21R22-(CH2)nOCO-和R27(CH2)m-NR21R22-(CH2)nCO-、R27(CH2)m-NR21R22-(CH2)nOPO(OH)-，其中m＝0-4，n＝1-5；R27是H、Me、MeCO-或Me2N-，R21是H、Me、MeCO-R22是H、Me、MeCH2，以及R21R22N是Me2N-、MeHN-或MeCONH-。
R20(W)xCO-的最优选方案中，x＝0，R20CO是HOCH(CH3)CO-、HOCH(C6H5)CO-、C2H5CH(OH)CO-或CH3CO2(CH2)2CO-，或者R20CO是天然α-氨基酸残基 其中Y＝H、CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-；PhCH2-；HOOCCH2CH2-；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或者Y与α碳和N一起形成 其中R21定义同上；或其药学上可接受的盐，或者R20CO是 *(和取代的Ph) 或其药学上可接受的盐；其中Ph是苯基和被卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的苯基；式I-VIII化合物在体内代谢成利巴韦林，可单独使用利巴韦林或与其它抗病毒治疗剂(如α-干扰素)合用以治疗易感的病毒感染，该疗法被称为高活性抗逆病毒疗法(“HAART”)。A-M，Vandamme等，Antiviral Chemistry & Chemotherapy，9187-203(1998)公开HIV-1感染病人的当前临床疗法，其包括至少三种药物联合疗法，即所谓的高活性抗逆病毒疗法(“HAART”)；HAART包括核苷逆转录酶抑制剂(“NRTI”)、非核苷逆转录酶抑制剂(“NNRTI”)和HIV蛋白酶抑制剂(“PI”)的各种联合用药。用式I-VIII化合物治疗慢性丙型感染患者是作为与α-干扰素的部分联合疗法进行的，α-干扰素包括α-2a干扰素、α-2b干扰素、共有序列干扰素，尤其是α-2b干扰素以及聚乙二醇化的(pegylatyed)α-2a干扰素和聚乙二醇化的α-2b干扰素。
本发明提供用于治疗易感的病毒感染，尤其是丙型肝炎病毒感染的方法和含有式II-VIII化合物的药用组合物。
本发明所用术语“易感病毒感染”是指由很大范围RNA和DNA病毒引起的病毒感染，包括，但不限于的病毒家族，如包括黄病毒属的黄病毒、包括Kunjin病毒的鼠病毒、和包括丙型肝炎病毒的肝炎病毒、以及包括West Nile病毒的虫媒病毒-正粘病毒、副粘病毒、沙粒病毒、布尼奥罗病毒、疱疹病毒、腺病毒、痘病毒和逆转录病毒。
一般适当的“易感病毒感染”包括流感A和B病毒感染；副流感病毒感染，呼吸道肺合胞病毒(“RSV”)感染，如RSV支气管炎和RSV肺炎，尤其是儿童和婴儿的RSV感染以及已存在心肺疾病的患者的RSV肺炎，麻疹病毒感染，拉沙热病毒感染，朝鲜出血热感染、乙型肝炎病毒(HBV)感染，克里米亚-刚果出血热和HCV感染以及HIV-1感染，脑炎感染，如由WestNile病毒或Kunjin病毒引起的脑炎，或者St.Louis脑炎感染，以及在免疫受损患者中发现的病毒感染。其它易感的病毒感染在USP4,211,771第2段第21行至第3段第37行中公开；剂量和剂量方案以及制剂在第3段第4行至第9段第5行中公开；还可见加拿大专利No.1,261,265。Sidwell，R.W.等在Pharmacol.Ther.，1979，第6卷，第123-146页中它公开了用利巴韦林进行的体内抗病毒实验一般证实体外可见的广谱抗病毒活性，并表明利巴韦林的作用依据感染的位置而定；它还公开了治疗方法；所使用的动物年龄以及病毒剂量。127页表4和5列出了体内可被利巴韦林明显抑制的RNA和DNA病毒感染。
利巴韦林的体外抑制浓度在Goodman & Gilman’s“ThePharmacological Basis of Therapeutics”，第9版，(1996)McGraw Hill，NY，1214-1215页中公开。1999 Physicians Desk Reference第1382-1384中的病毒唑产物信息公开病毒唑气雾剂18小时暴露的剂量为20mg/mL。
利巴韦林的剂量和剂量方案还可见Sidwell，R.W.等，Pharmacol.Ther.，1979，第6卷，第123-146页中2.2部分的126-130页。Femandes，H等，Eur.J.Epidemiol.，1986，Vol2(1)pp1-14的第4-9页公开各种不同临床前和临床研究中，利巴韦林的口服、非肠道和气雾剂给药的剂量和剂量方案。
本发明所用术语“患有丙型肝炎感染的患者”是指患有丙型肝炎的任何患者-包括儿科患者，包括初次治疗(treatment-naive)的丙型肝炎感染患者、已接受过治疗的丙型肝炎感染患者以及那些具有慢性丙型肝炎感染的儿科、初次治疗和已接受过治疗的患者。
这些患有丙型肝炎的患者包括那些感染了多种HCV基因型(包括1型)的患者以及那些感染了如，HCV基因2、3、4、5和/或6型以及其它可能的HCV基因型的患者。
本发明所用术语“初次治疗的丙型肝炎感染患者”是指从未用过利巴韦林或任何干扰素(包括但不限于α-干扰素或聚乙二醇化的α-干扰素)治疗的丙型肝炎患者。
本发明所用术语“已接受过治疗的丙型肝炎感染患者”是指已用过利巴韦林或任何干扰素(包括但不限于α-干扰素或聚乙二醇化的α-干扰素)治疗的丙型肝炎患者，包括复发者或未应答者(non-responder)。
本发明所用术语“复发者”是指对以前用干扰素单独治疗或与利巴韦林联合治疗初步应答后，复发的已接受过治疗的丙型肝炎患者。
本发明所用术语“未应答者”是指对以前用干扰素单独治疗或与利巴韦林联合治疗未有反应的已接受过治疗的丙型肝炎患者。
当给予的聚乙二醇化的α-干扰素是聚乙二醇化的α-2b干扰素时，本发明治疗期间(包括第一和第二治疗时间段)给予的聚乙二醇化的α-2b干扰素的治疗有效量的范围约为每周给予约0.1-9.0ug/kg聚乙二醇化的α-2b干扰素，以单剂量或分剂量给予，优选每周1次(QW)或每周2次(BIW)，优选每周1次(QW)给予约0.1-9.0ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周2次(BIW)每次给予约0.05-4.5ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者其有效量的范围约为每周给予约0.5-3.0ug/kg聚乙二醇化的α-2b干扰素，优选每周1次(QW)给予约0.5-3.0ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周2次每次给予约0.25-1.5ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者其有效量的范围约为每周给予约0.75-1.5ug/kg聚乙二醇化的α-2b干扰素，最优选每周1次给予约0.75-1.5ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周2次每次给予约0.375-0.75ug/kg范围的聚乙二醇化的α-2b干扰素。
当给予儿科患者的聚乙二醇化的α-干扰素是聚乙二醇化的α-2b干扰素时，本发明治疗期间给予的聚乙二醇化的α-2b干扰素的治疗有效量的范围为每周以单剂量或分剂量给予约0.1-9.0ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，优选每周1次(QW)或每周2次(BIW)，更优选每周1次(QW)给予约0.1-9.0ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周以单剂量或分剂量给予约0.05-4.5ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，优选每周1次(QW)或每周2次(BIW)，更优选每周1次给予约0.05-4.5ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者优选以单剂量或分剂量给予约0.75-3.0ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，优选每周1次(QW)或每周2次(BIW)，更优选每周1次给予约0.75-3.0ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周2次每次给予约0.375-1.5ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，最优选每周1次给予约2.25-2.6ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素，或者每周2次(BIW)每次给予约1.1-1.3ug/kg的聚乙二醇化的α-2b干扰素。
当给予的聚乙二醇化的α-干扰素是聚乙二醇化的α-2a干扰素时，本发明给予的聚乙二醇化的α-2a干扰素的治疗有效量的范围约为每周1次(“QW”)给予约50-500 ug，优选QW约150-250ug的范围，或者该有效量为每周2次约50-250ug的范围，优选每周2次约100-125ug的范围。
当给予儿科患者的聚乙二醇化的α-干扰素是聚乙二醇化的α-2a干扰素时，本发明给予的聚乙二醇化的α-2a干扰素的治疗有效量的范围约为每周1次(“QW”)给予约50-500 ug，优选QW约300-375ug的范围，或者给予儿科患者的聚乙二醇化的α-2a干扰素的治疗有效量为每周2次约50-250ug的范围，优选每周1次约150-190ug的范围。
对于慢性HCV患者，将式I-VIII代表的利巴韦林的酯与聚乙二醇化的α-干扰素联合给药，即在给予聚乙二醇化的α-干扰素之前、之后或同时给药。优选在患者接受式I-VIII代表的利巴韦林的酯的相同时间内，给予聚乙二醇化的α-干扰素。与聚乙二醇化的α-干扰素同时给予的式I-VIII代表的利巴韦林的酯的量约为每日200-1600mg，优选约300-1200mg/日或约400-800mg/日，最优选约400-600mg/日。还优选在该患者接受式I-VIII代表的利巴韦林的酯的相同时间内，给予儿科患者聚乙二醇化的α-干扰素。与聚乙二醇化的α-干扰素同时给予慢性HCV儿科患者的式III-VIII代表的利巴韦林的5’-氨基酸酯的量约为每日1-30mg/kg，优选每日约4-15mg/kg，更优选每日约6、8或15mg/kg，最优选每日约8-10mg/kg，分次给予。
由于聚乙二醇化的α-干扰素制剂口服无效，所以聚乙二醇化的α-干扰素的优选给药方法是非肠道给药，优选通过皮下(SC)、静脉(IV)或肌内(IM)注射给药。式I代表的利巴韦林的5’-氨基酸酯可以以胶囊剂、片剂或液体形式口服给药、或以气雾剂形式通过鼻内喷射鼻内给药，或者非肠道给药，优选SC、IV或IM注射。式I-VIII代表的利巴韦林酯与非肠道给药的聚乙二醇化的α-干扰素联合，以口服形式给药。当然，如果可以，还可考虑两种药物的其它给药形式，如经皮给药、通过栓剂给药、通过缓释剂型给药以及通过肺吸入给药。只要能传递适当的剂量，并且不破坏该活性组分，即可进行任何形式的给药。
本发明所用术语“α-干扰素”是一族能抑制病毒复制和细胞增殖，并能调节免疫反应的高度同源性的特异性蛋白质。一般适当的α-干扰素包括，但不限于，重组α-2b干扰素，如由ScheringCorporation，Kenilworth，N.J.提供的Intron-A干扰素，重组α-2a干扰素，如由Hoffmann-La Roche，Nutley，N.J.提供的Roferon干扰素，重组α-2c干扰素，如由Boehringer Ingelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT.提供的Berofbrα2-干扰素，α-n1干扰素，天然α-干扰素的纯混合物，如由Sumitomo，Japan提供的Sumiferon或者由Glaxo-Wellcome Ltd.，London，Great Britain提供的Wellferonα-n1干扰素(INS)，或者共有序列α-干扰素，如美国专利Nos.4,897,471和4,695,623中公开的干扰素(尤其是实施例7、8或9)以及由Amgen，Inc.，Newbury Park，CA提供的专一产品，即α-n3干扰素，天然α-干扰素的混合物，如由Interferon Sciences制造或由Purdue Frederick Co.，Norwalk，CT.制备，商品名为Alferon。优选使用α-2a或α-2b干扰素。由于在所有干扰素中，全世界最公认α-2b干扰素可治疗慢性丙型肝炎感染，所以最优选α-2b干扰素。α-2b干扰素的制备见美国专利No.4,530,901。
本发明所用术语“聚乙二醇化的α-干扰素”是指聚乙二醇修饰的α-干扰素的缀合物，优选α-2a或-2b干扰素。优选的聚乙二醇-α-2b干扰素缀合物是PEG12000-α2b干扰素。本文所用短语“12,000分子量聚乙二醇缀合的α-干扰素”和“PEG12000-IFNα”是指缀合物，如根据国际申请No.WO95/13090的方法制备的缀合物，该缀合物在α-2a或-2b干扰素的氨基和平均分子量为12000的聚乙二醇之间含有尿烷键合。
优选的PEG12000-α-2b干扰素通过将PEG多聚物与IFNα-2b分子中的赖氨酸残基的ε氨基相连制备。通过尿烷键合，将单个PEG12000分子与IFNα-2b分子中游离氨基缀合。该缀合的特征在于连接的PEG12000的分子量。可将PEG12000-IFNα-2b缀合物制成注射用冷冻干燥粉末剂。IFNα与PEG缀合的目的是通过显著延长其血浆半衰期，提高蛋白质的转运，从而延长IFNα的活性。
其它聚乙二醇化的α-干扰素缀合物可通过将α-干扰素与水溶性多聚物偶合制备。这些非限定的多聚物包括其它聚环氧烷均聚物，如聚丙二醇，聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌断共聚物。除聚环氧烷基的多聚物外，还可使用有效的非抗原性物质，如葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、糖基多聚物等。这些α-干扰素-多聚物缀合物可见美国专利No.4,766,106、美国专利No.4,917,888、欧洲专利申请No.0236987、欧洲专利申请Nos.0510356、0593868和0809996(聚乙二醇化的α-2a干扰素)和国际申请No.WO95/13090的描述。
适于非肠道给药的聚乙二醇化的α-干扰素的药用组合物可使用适当的缓冲液，如Tris-HCl、乙酸盐或磷酸盐(如磷酸二钠/磷酸一钠缓冲液)，以及药学上可接受的赋形剂(如蔗糖)、载体(人体重组血浆白蛋白)、等渗剂(如NaCl)、防腐剂(如硫柳汞、甲苯酚或苄醇)以及表面活性剂(如注射用无菌水中的吐温或聚山梨酸酯)制备。聚乙二醇化的α-干扰素作为冷冻干燥粉末，可在2-8℃下储存。当该冷冻干燥粉末在2-8℃下储存并在24小时内重新配制时，重新配成的水溶液是稳定的。如见美国专利No.4,492,537；5,762,923和5,766,582。还可将再制成的水溶液储存在预充填的、多剂量的注射器中，如用于传递药物(如胰岛素)的注射器内。一般适当的注射器包括含有连接笔型(pen-type)注射器预充填管的系统，如NoVO Nordisk提供的NOVOLET Novo Pen，以及使用者易于自己注射的预充填笔型注射器。其它注射器系统包括含有玻璃药筒的笔型注射器，该玻璃药筒包括隔室存放的稀释剂和冷冻干燥的聚乙二醇化的α-干扰素粉末。
慢性丙型肝炎感染的患者可出现一或多种以下体征或症状(a)ALT升高，(b)抗-HCV抗体实验阳性，(c)血清HCV-RNA阳性实验表明存在HCV，(d)慢性肝病的临床特征，(e)肝细胞损伤。
对于HIV-1和HCV感染的共感染并呈现一或多种以上体征或症状的患者，还可将聚乙二醇化的α-干扰素与式I-VIII代表的利巴韦林的酯和式III-VIII代表的利巴韦林的优选的5’-氨基酸酯的联合疗法与抗逆转录病毒疗法(如HAART)结合，进行给药，其剂量足以消除或至少缓解一或多种HCV感染的体征或症状，并各自降低至少十分之一(a power of ten)的HIV-1-RNA和HCV-RNA血清水平，优选至少在约20-50周结束时根除可检测的HCV-RNA，优选至少24-48周，并在该约20-50周结束之后的至少24周内，保持无可检测的HCV-RNA。依据主治医师的判断，可在第二时间阶结束之后，终止式I代表的利巴韦林的5’-氨基酸酯的给药。
本发明中术语“无可检测的HCV-RNA”是指通过定量、多循环(multi-cycle)逆转录酶PCR方法测定，每ml患者血清中HCV-RNA的拷贝(copies)小于100。本发明中HCV-RNA的测定优选通过临床经验丰富人员熟悉的RT-PCR的基础研究方法测定。该方法本文称为HCV-RNA/qPCR。HCV-RNA的检测低限为100拷贝/mL。血清HCV-RNA/qPCR试验和HCV基因型试验由中心实验室进行。还可见J.G.McHutchinson等(N.Engl.J.Med.1998，3391485-1492)和G.L.Davis等(N.Engl.J.Med.3391493-1499)。
生理活性式I-VIII化合物作为与α-干扰素(尤其是α-2b干扰素)联合疗法的一部分，用于治疗易感的病毒感染(如慢性丙型肝炎)的患者。式I和II化合物，其中R5是R6(W)xCO-、R6(W)xCS、(HO)2PO-、R6(W)xP(OH)O-或HOSO2-，在体内代谢为利巴韦林。
式I化合物，其中R2＝R3＝H，R5是＝(HO)2PO-、或 或(CH3)3CO-、或C6H5CO-或C6H5-CH2OC(O)NHCCO-，在给予大鼠后，可产生较高的利巴韦林血浆浓度。
表1口服给予20％羟丙基-β-环糊精溶液中的40mpk的式I化合物后的混合大鼠1血浆(2只大鼠/混合血浆)的利巴韦林浓度。化合物2AUC(混合血浆)3C.V.4浓度(6hr) C.V.4(ng.hr/mL) (％) (ng/mL)(％)A1523.6523.56142.54 49.37B1309.761.68 241.83 19.61C1303.34 67.42170.42 37.78D1065.88 29.12116.33 10.73E754.7774.42122.71 44.681雄性Charles River大鼠由Charles River，Wilmington，MA01887提供2(a)化合物A是式I化合物，其中R5是(CH3)3CCO-(b)化合物B是式I化合物，其中R5是(HO)2P(O)-(c)化合物C是式I化合物，其中R5是C6H5CO-(d)化合物D是式I化合物，其中R5是C6H5CH2OCONHCH(CH3)CO-(e)化合物E是利巴韦林3口服给予2只大鼠式I化合物20％HPBCD水溶液后，0-6小时测定的曲线下面积4％CV为相对变异性测定的百分变异系数。见Steele和Torrie，“Principles and Procedures of Statistics”，(1980)第二版，McGraw-Hill。NY，p27.
由本发明化合物，惰性、药学上可接受的载体制备的药用组合物可以是固体或液体形式。固体形式的制剂包括粉末剂、片剂、分散颗粒、胶囊剂、锭剂和栓剂。粉末剂和片剂可含有约5-95％的活性组分。适当的固体载体是本领域熟悉的载体，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或乳糖。可将片剂、粉末剂、锭剂和胶囊剂用作适于口服的固体剂型。药学上可接受的载体实例以及制备各种组合物的方法可见A.Gennaro(ed)，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体制剂包括溶液剂、悬浮剂或乳剂。如实例中提到，可用水或水-丙二醇溶液制成非肠道注射剂，或者可在口服液、悬浮剂或乳剂中加入甜味剂和遮光剂。液体形式的制剂还包括供鼻腔给药的溶液剂。
适于吸入给药的气雾剂可包括溶液或粉末形式的固体，它们可与药学上可接受的载体结合，如惰性压缩气体，如氮气。
还包括可在临用前，将其转化为供口服或非肠道给药的液体形式制剂的固体形式制剂。这些液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。
本发明化合物还可通过经皮传递。经皮组合物可采用霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂形式，可包括本领域为此目的常用的基质型或储存型透皮贴剂。
本发明化合物优选口服给药。
药用制剂优选采用单位剂量形式。在该形式中，该制剂被分为适当大小的单位剂量，该剂量含有适当量的活性组分，如可达到所要求目的的有效量。
根据特定的化合物和特定的应用，单位剂量制剂中的活性化合物的量可以在约0.01-1000mg，优选约0.01-750mg，更优选在约0.01-500mg，最优选在约0.01-250mg内变化或调节。
所用的实际剂量可依据患者的要求以及所治疗症状的严重程度而变化。特定情况下正确剂量的确定在本领域的技术范围之内。为方便起见，可按要求，将一日之内的总日剂量进行划分，分次给药。
本发明化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率，可根据临床医生所考虑的因素判断，如患者的年龄、病情和体重以及所治疗症状的严重程度，进行调节。一般推荐的口服日剂量方案为约1-100mg/kg/日，分2-4个分剂量进行。
在本发明优选实施方案中，对于HIV-1和HCV感染共感染的患者，可用聚乙二醇化的α-干扰素联合式III-VIII代表的优选的利巴韦林5’-氨基酸酯治疗，以及临床医生和患者所考虑的适当HAART联合疗法治疗。还可见J.G.MeHutchinson等(N.Engl.J.Med.1998，3391485-1492)和G.L.Davis等(N.Engl.J.Med.1998，3391493-1499)。
优选的式III-VIII化合物可用于治疗易感的病毒感染(如慢性丙型肝炎)患者。在体内，式III-VIII化合物可代谢成利巴韦林，可单独使用或与其它抗病毒治疗剂(如α-干扰素和HAART)合用用于治疗可用利巴韦林治疗的病毒感染。用式III-VIII化合物治疗慢性丙型感染患者是作为与α-干扰素(尤其是α-2b干扰素)联合疗法的一部分进行的。
式III-VIII化合物在体内可代谢成利巴韦林，在口服给予大鼠和猴子式VII化合物后，与服用利巴韦林相比，可产生较高的利巴韦林血浆浓度。优选的式VII化合物的药动学见表2和3所示。
表2口服给予20％羟丙基-β-环糊精(HPBCD)溶液中的20mpk利巴韦林等当量的式VII化合物的盐后的混合大鼠1血浆(2只大鼠/混合血浆)的利巴韦林浓度。
化合物2AUC(混合血浆)3C.V.4浓度(6hr)C.V.4(ng.hr/mL)(％) (ng/mL) (％)A1238 81.415230.5B2554 25.022620.0C1011 *** 294---D2043 1.4 17367.31雄性Sprague Dawely(CD)大鼠(N＝2)由Charles River，Wilmington，MA01887提供；单剂量，PO，(禁食过夜)；口服给予20％HPBCD溶液(w/v)中的相当于20mg/Kg(mpk)利巴韦林PO量的式I化合物；浓度4mg/ml等当量利巴韦林，给药体积5ml/Kg。2(a)化合物A是式VII化合物，其中R50是H，即，利巴韦林(b)化合物B是式VII化合物的三氟乙酸盐，其中R50是[CF3CO2-]L-CH3CH2(CH3)CHCH(NH3)-CO-。
(c)化合物C是式VII化合物的二对甲苯磺酸盐，其中R50是2[p-CH3C6H4SO3-]L-H3N(CH2)4CH(NH3)-CO-。
(d)化合物D是式VII化合物的对甲苯磺酸盐，其中R50是[p-CH3C6H4SO3-]L-CH3CH(NH3)-CO-，即 3口服给予2只大鼠式VII化合物20％HPBCD水溶液后，0-6小时测定的曲线下面积4％CV为相对变异性测定的百分变异系数。见Steele和Torrie，“Principles and Procedures of Statistics”，(1980)第二版，McGraw-Hill。NY，p27.
表3口服给予0.4％甲基纤维素(MC)溶液中的10mpk利巴韦林等当量的式VII化合物的盐后的混合Cynomolgus猴1血浆(2只猴/混合血浆)的利巴韦林浓度。化合物2AUC(24)3AUC(48hr)AUC(72hr)Cmax(ng.hr/mL) (ng.hr/mL) (ng hr/mL) (ng/mL)A 4013 5506 5902 3984B 4791 5749 5749 8315C 6033 8050 8381 6616D 9072 1163212528 101271成年雄性Cynomolgus猴(N＝2)2(a)化合物A是式VII化合物，其中R是H，即，利巴韦林(b)化合物B是式VII化合物的三氟乙酸盐，其中R50是[CF3CO2-]L-CH3CH2(CH3)CHCH(NH3)-CO-。
(c)化合物C是式VII化合物的二对甲苯磺酸盐，其中R50是2[p-CH3C6H4SO3-]L-H3N(CH2)4CH(NH3)-CO-。
(d)化合物D是式VI化合物的对甲苯磺酸盐，其中R50是[p-CH3C6H4SO3-]L-CH3CH(NH3)-CO-，即 3口服给予成年Cynomolgus猴式I化合物的0.4％MC水溶液(靶剂量为10mg(游离碱)/Kg，靶剂量体积为2ml/Kg)后0-24、48或72小时测定的曲线下面积。4A的Tmax为1.5小时。5B的Tmax为1.0小时。6C的Tmax为1.5小时。7D的Tmax为1.5小时。
可将优选的本发明利巴韦林5’-氨基酸酯(式III-VIII代表)的药用组合物以任何给药方式给药，如口服、非肠道给药，例如，皮下(“SC”)、肌内(“IM”)、静脉(“IV”)和腹腔内(“IP”)给药、局部或阴道内给药或者通过吸入给药(口腔内或鼻腔内)。式I代表的利巴韦林化合物优选口服给药。
这些组合物，可通过将式III-VIII化合物或等当量的化合物I的药学上可接受的盐与适当的、惰性的、药学上可接受的固体或液体载体或稀释剂混合配制。通过向式III-VIII化合物中加入等当量的(或者某些情况下，如赖氨酸酯，2当量)药学上可接受的酸，优选将式III-VIII化合物转化为药学上可接受的酸加成盐。一般适当的药学上可接受的酸包括无机酸，如HNO3、H2SO4、H3PO4、HCl、HBr，有机酸，包括但不限于，乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、葡糖醛酸和柠檬酸以及烷基或芳磺酸，如对甲苯磺酸、2-萘磺酸或甲磺酸。
一般适当的药学上可接受的盐包括下列阴离子乙酸盐、己二酸盐、besylate(苯磺酸盐)、溴化物、camsylate[(+)-7，7-二甲基-2-氧代二环[2.2.1]庚烷-1-甲磺酸盐]、氯化物、柠檬酸盐、edisylate(1，2-乙二磺酸盐)、estolate(十二烷基硫酸盐)、富马酸盐、gluceptate(葡庚糖酸盐)、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、hyclate(盐酸盐，半乙醇酸盐)、氢溴酸盐、盐酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐(2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、乳糖酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硫酸盐、napsylate、硝酸盐、油酸盐、扑酸盐[4，4’-亚甲基双[3-羟基-2-萘甲酸盐]]、磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、对苯二酸盐、对甲苯磺酸盐、triethiodide；和以下阳离子benzathine(N，N-二(苯甲基)-1，2-乙二胺)、钙、diolamine(2，2-亚氨基二(乙醇))、葡甲胺[1-脱氧-1-(甲氨基)-D-山梨醇]、olamine(2-氨基乙醇)、钾、普鲁卡因、tromethamine钠[2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇]和锌。
优选药学上可接受的盐是三氟乙酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐和氯化物。
固体形式制剂包括粉末剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、锭剂和栓剂。粉末剂和片剂可含有约5-95％活性组分。适当的固体载体是本领域熟悉的载体，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或乳糖。可将片剂、粉末剂、锭剂和胶囊剂用作适于口服的固体剂型。药学上可接受的载体实例以及制备各种组合物的方法可见A.Gennaro(ed)，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack PublishingCo.，Easton，Pennsylvania。
液体剂型包括溶液剂、悬浮剂或乳剂。如实例中提到，可用水或水-丙二醇溶液制成非肠道注射剂。固体形式的制剂可在临用前，将其转化为供口服或非肠道给药的液体形式制剂。静脉、肌内或皮下注射的非肠道剂型一般采用无菌溶液，可含有等渗剂(盐或葡萄糖)和缓冲液。口服溶液剂、悬浮剂和乳剂中可含有遮光剂。液体形式制剂还可包括供鼻腔给药的溶液剂。
适于吸入给药的气雾剂可包括溶液或粉末形式的固体，它们可与药学上可接受的载体，如惰性压缩气体如氮气混合。
还包括可在临用前，将其转化为供口服或非肠道给药的液体形式制剂的固体形式制剂。这些液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。
本发明化合物还可通过经皮传递。经皮组合物可采用霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂形式，可包括本领域为此目的常用的基质型或储存型透皮贴剂。
药用制剂优选采用单位剂量形式。在该形式中，该制剂被亚分为适当大小的单位剂量，该剂量含有适当量的活性组分，如可达到所要求目的的有效量。
根据特定的化合物和特定的应用，单位剂量制剂中的本发明活性化合物(式I-VIII)的治疗有效量可以在每日约1-1600mg，优选每日约1-1200mg，或每日约300-1200mg，更优选在每日约1-800mg，或每日约400-800mg，最优选在每日约1-100mg，或每日约400-600mg范围内变化或调节，以单剂量或分剂量形式给予。
所用的准确剂量可依据患者的要求以及所治疗症状的严重程度而变化。特定情况下正确剂量的确定在本领域的技术范围之内。为方便起见，可按要求，将一日之内的总日剂量进行划分，分次给药。
本发明化合物和/或其药学上可接受的盐的给药量和给药频率，可根据临床医生所考虑的因素判断，如患者的年龄、病情和体重以及所治疗症状的严重程度进行调节。所选择的优选的式III-VIII化合物的剂量应能提供稳态的利巴韦林血浆浓度，该浓度范围约为0.1-100ug/mL，优选约0.1-50ug/mL，更优选约1-3ug/mL，最优选约1.8-2.6ug/mL。血浆利巴韦林浓度可采用联有质谱检测器的高效液相色谱物质测定。该方法的线性、选择性、精密度、准确性均可靠，检测限度为50ug/mL。一般推荐的口服日剂量方案为约1-100mg/kg/日，分2-4个分剂量给予。
式VI代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中AA是由下表AA中结构式代表的天然或非天然氨基酸部分表AA
表AA续
表AA续
表AA续
本发明涉及式VII代表的化合物或其立体异构体、或其药学上可接受的盐， 其中R50是CH3CH(NH2)-CO-、CH3CH2(CH3)CHCH(NH2)-CO-或H2N(CH2)4CH(NH2)-CO-。
R可以是立体异构体混合物形式的CH3CH(NH2)-CO-(即α-氨基丙酰基)，即DL-形式的α-氨基丙酰基，或者其中之一的对映体，或者其混合物，即L-形式 或者D-形式 R可以是CH3CH2(CH3)CHCH(NH2)-CO-，即2-氨基-3-甲基戊酰基，(a)其立体异构体混合物，即下式的DL-形式-DL-(-+)-赤-2-氨基-3-甲基戊酰基 或者(b)其中之一的下式非异构体，或者其混合物，即L-异-形式的下式 [(+)-苏-2-氨基-3-甲基戊酰基]；或L-形式的下式 [L-(+)-氨基-3-甲基戊酰基，或者(2S，3S)-2-氨基-3-甲基戊酰基]；或者(c)为其中之一的下式的非对映体，或其混合物，即 [(2R，3S)-2-氨基-3-甲基戊酰基]；或者 [(2R，3R)-2-氨基-3-甲基戊酰基]。
R可以是立体异构体混合物形式的H2N(CH2)4CH(NH2)-CO-，或者其中之一的对映体，即，L-形式的下式 D-形式的下式 优选，R是下式的L-α-氨基丙酰基 合成制备通法利巴韦林，1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，由ICNPharmaceutical，Inc.，Costa Mesa，California提供，见第十一版，默克索引，化合物No.8199中说明。其制备与制剂见美国专利No.4,211,771。
可采用下列方案、以及方案下所列的化合物的实施例中说明的步骤过程，制备式I-VIII的利巴韦林衍生物。
在方案I中，制备式1化合物，其中R5＝R5aCO-、R3＝R3aCO和R2＝H，以及R5＝R5aCO-、R2＝R2aCO-和R3＝H，以及R5＝R5aCO-和R3＝R2＝H。在室温(20-25℃)下，以过量苯甲醛作为溶剂，将化合物110(利巴韦林)和苯甲醛用ZnCl2处理24小时，得到化合物111。在碱(如，三乙胺，“TEA”)存在下，将化合物111用链烷酰基氯R5aCOCl处理；或者用羧酸(R5aCOOH)和三乙胺及偶合剂(如，二环己基碳化二亚胺，“DCC”)处理，生成化合物112。室温下，用0.25-2小时，优选约0.05小时，用三氟乙酸∶水(9∶1，v/v)除去乙缩醛保护基，得到化合物113。通过将化合物113与R3aCOOH、碱和DCC或者R5aCOCl和碱(如TEA)处理，将化合物113转化为化合物114和115混合物。
通过标准色谱技术，分离化合物114和115，得到纯品化合物114和115。
在方案II中，从化合物110(利巴韦林)制备式1化合物，其中R5＝R3＝H和R2＝R2aCO-。在室温下，在咪唑存在下，以DMF作为溶剂，将化合物110用1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷，即，[(i-Pr)2SiCl]2O处理1-4小时，得到化合物116。室温下，将化合物116用R2aCOCl和碱(如TEA)或者R2aCOOH、碱和偶合剂(如DCC)处理12-48小时，得到化合物117。在室温下，用Bu4NF在四氢呋喃(“THF”)中处理化合物171-10小时，提供化合物118。
方案III说明式I化合物，其中R5＝R2＝H和R3＝R3aCO-以及R5＝R3＝H和R2＝R2aCO-的制备。在室温下，在DMF溶剂中，将利巴韦林用三苯甲基氯或[MeOC6H4(C6H5)2]CCOCl和碱(如，吡啶)处理6-24小时，得到化合物119。将化合物119用R2aCOCl和碱，或者用R2aCOOH、碱和偶合剂(如，DCC)处理，生成化合物120和121混合物。通过标准色谱技术，将该混合物分离为纯品化合物。室温下，在氢气和钯碳催化剂存在下，在甲醇中，将120或121用对甲苯磺酸(“p-TsOH”)处理2-48小时，除去保护基，分别得到化合物122和123的p-TsOH盐。
方案IV说明式I化合物，其中R5＝R5aCO-或R5＝R5a和R3＝R2＝H的制备。在65℃下，在溶剂(如THF或二氧六环)中，在酶(如Novo SP435脂肪酶)存在下，可选择加入R5aCO，将利巴韦林110用R5aCOON＝C(CH3)2处理12-48小时，形成化合物124。还可见实施例9-14。
方案I(5’-取代) 试剂(i)ZnCl2，PhCHO，(ii)R5aCOCl，Et3N；R5aCOOH，Et3N，偶合剂，(iii)TFA-H2O(9∶1)，(iv)R3aCOOH或R3a(W)xCOOH、偶合剂、碱；或R3aCOCl或R3a(W)xCOCl、碱，(v)R3aCOOH、偶合剂、碱；或R3aCOCl、碱方案II(2’-取代) 试剂(i)[(i-Pr)2SiCl]2O，咪唑，DMF；(ii)R2aCOCl，碱；或R2aCOOH，偶合剂，碱；(iii)Bu4NF，THF
方案III(2’和3’-取代) 试剂(i)TrCl，碱；(ii)R2aCOCl，碱；或R2aCOOH，碱，偶合剂；(iii)TsOH，MeOH，H2，Pd/C
方案IV(5’-取代) 试剂 SP435脂肪酶，65℃，THF所有方案实例R2aCO，R3aCO或 X＝OH、OAc、NH2、NHCbz、OMe、CN、NO2、F、Cl、Br以及被这些基团‘X’组合取代的苯甲酸酯。
*(和取代的Ph) (和5’-->3’环二酯) (n＝0，1，2)*(顺和反) (n＝0，1，2，3) R2aCO、R3aCO和R5aCO还可由下式代表 Y＝H，CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-PhCH2-；HOOCCH2CH2；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或者Y与α碳和N一起形成 或其药学上可接受的盐。
式I&II的5’-杂芳基酯的实例，其中R5＝ 代表具有5-7个原子的、最大不饱和的杂芳环其中D＝C，或者当θ＞0时，是N或SE＝O或NHZ1和Z2独立＝-C(H)＝、-C(H)＝N-、-N＝、-N(H)-、S-C(H)＝或S-n＝θ和β独立＝0、1，或者ω和φ独立＝1、2或3。该式5’-酯由下式代表 以下5’酯可按以上方案说明制备，采用根据本领域技术熟练人员的熟知方法容易获得的适当保护酸进行。 D＝C，E＝NH，Z1＝(-CH＝N-)，ω＝1，Z2＝-NH-，φ＝1，θ＝0，和β＝0 D＝C，E＝O，Z1＝(-CH＝N-)，ω＝1，Z2＝-CH＝，φ＝2，θ＝0，和β＝1
可采用以上方案和易于得到的原料，制备以下5’-3’环酯(式I，其中R2＝H)。 其中R101和R102独立是H、链烷酰氧基、OR7b或NR6R7b，x＝1或2。
可采用以上方案和易于得到的原料，制备以下3’-2’环酯(式I，其中R5＝H)。
实施例1 A.亚苄基利巴韦林将20g利巴韦林(1.87mmol)、200ml苯甲醛和20g ZnCl2混合。室温下，将形成的反应混合液搅拌24小时。搅拌下，将得到的溶液倒入2.5L乙醚(Et2O)中。将得到的混合液抽气过滤，干燥该固体沉淀。将该固体沉淀与1.2L冰冷的2N氢氧化钠(NaOH)溶液混合。将该混合液用2×0.75L冷乙酸乙酯(EtOAc)提取，有机层用盐水洗涤。通过槽纹滤纸(flutedfilter)重力过滤有机层，然后真空浓缩得到固体。用0.5L Et2O充分研磨该固体，抽气过滤，用新鲜Et2O洗涤形成的沉淀，得到23g化合物2，为固体；C15H16N4O5计算值(332.32)。MS(FAB)＝333.1。
将0.5g(2.8mmol)步骤A中的化合物2、0.80g(2.4mmol)化合物4[MeO(CH2CH2O)2CH2CO2H]和0.8g(1.2mmol)的4-(N，N-二甲氨基)吡啶(DMAP)的15ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合。加入2.5ml1M二环己基碳化二亚胺(DCC)的二氯甲烷(CH2Cl2)溶液，室温下，将得到的混合液搅拌0.5小时。在100℃下，将形成的反应混合液加热1小时。用5％KH2PO4水溶液猝灭反应混合物，用2×100ml乙酸乙酯(EtOAc)提取。将有机提取液用20ml冷水、再用饱和盐水洗涤。通过槽纹滤纸重力过滤有机提取液，然后真空浓缩得到胶状残留物。残留物经柱层析(硅胶，1％-6％甲醇-CH2Cl2梯度洗脱)纯化，得到0.48g化合物4，为固体；C22H28N4O9计算值(492.49)。MS(FAB)＝493.1。 C.室温下，将0.45g4(0.91mmol)用10ml三氟乙酸(TFA)-水(9∶1v/v)处理0.5小时。用30ml二甲苯猝灭，然后真空浓缩形成的混合液，得到胶状物。用EtOAc研磨，用Et2O稀释，抽气过滤，干燥该胶状物，得到0.23g化合物5，为固体；C15H24N4O9计算值(404.38)。MS(FAB)＝405.1。
实施例2按实施例1A和1B的方法，但在步骤B中，用等当量的化合物6(MeOCH2CH2OCHCO2H)代替化合物3，形成化合物8。按实施例1步骤C的方法，但用等当量的化合物7代替化合物4，形成化合物8。 实施例3 在5℃下，将0.32g(3.6mmol)化合物9[2-(N，N’-二甲氨基)乙醇]的10mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液用0.58g羰基二咪唑(3.6mmol)处理，然后用0.5小时，将形成的溶液温热至20℃。向得到的反应混合液中加入0.8g(2.4mmol)按实施例1A制备的化合物2，室温下，将形成的反应混合液搅拌24小时。真空浓缩，加入50mL乙醚，将形成的混合液放置24小时。倾出上清液，残留物经柱层析(硅胶，10％-20％甲醇-四氢呋喃梯度洗脱)纯化，得到0.21g化合物10，为固体；C20H25N5O7(447.44)计算值。MS(FAB)＝448.1。 按实施例1C的方法，但用等当量的化合物10代替化合物4，得到化合物11。
实施例4 室温、通氮气下，将搅拌的500mg(1.506mmol)按实施例1A方法制备的化合物2、300mg(1.2eq)胡椒基酸(化合物12)的干燥DMF(5mL)溶液用732mg(1.1eq)苯并三唑基氧基三-(二甲氨基)鳞六氟磷酸盐(“BOP”试剂)和576μL(2.2eq)的Hunig氏碱，即二异丙基乙胺，[(i-Pr)2NEt]处理。室温下，将形成的反应混合液搅拌过夜。薄层层析(TLC)表明一主要的新斑点。将反应混合液用NH4Cl水溶液猝灭，用EtOAc稀释。将有机层用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥。蒸发有机溶剂得到粗品红紫色固体。该粗品固体经硅胶柱层析纯化，用2-3％MeOH/CH2Cl2为洗脱剂。合并适当的部分得到550mg化合物13，为红紫色固体(76％收率)。1Hnmr光谱(350MHz，CDCl3)与13的结构一致。 室温下，将得自步骤A的化合物13用4mL TFA∶H2O(9∶1，v/v)处理40分钟。蒸发溶剂得到黄色固体。加入水，蒸发。将粗品固体干燥过夜。向该粗产物中加入2×4mL MeOH。MeOH层为黄色。收集不溶性固体，干燥得到342mg化合物14，为白色固体。1Hnmr光谱与14的结构一致。
实施例5 室温下，向搅拌的500mg(1.505mmol)按实施例1A方法制备的化合物2的3mL干燥DMF溶液中，加入516mg(1.2eq)的硬脂酸(化合物15)、670mg(1.0eq)的BOP试剂和792μL(3.0eq)的Hunig氏碱。室温下，将形成的反应混合液搅拌过夜。根据实施例4A方法，分离反应混合液，得到595.5mg化合物16，为粘性白色固体(66％收率)。1Hnmr光谱与16的结构一致。 根据实施例4B方法，处理化合物16(417mg，0.697mmol)，得到330mg化合物17，为白色固体(93％收率)。1Hnmr光谱和MS-FAB与17的结构一致。
实施例6 向搅拌的332mg(1.0mmol)按实施例1A方法制备的化合物2的5mL干燥CH2Cl2混悬液中，加入209μL(1.5eq)的三乙胺(Et3N)和167μL(1.2eq)的邻甲苯酰氯(化合物18)。室温下，将反应混合液搅拌4小时后，TLC表明反应完成。将形成的澄清反应混合液用EtOAc稀释，用水洗涤。将分离的有机层用水和盐水洗涤，干燥，蒸发得到粗品白色固体。该粗品固体经硅胶柱层析纯化，用2-3％MeOH洗脱得到262mg化合物19，为白色固体(57％收率)。 根据实施例4A方法，将化合物19(262mg)用3mL TFA∶H2O(9∶1，v/v)处理，得到210mg(99％收率)的化合物20。1Hnmr光谱与20的结构一致。
实施例7 在0℃下，浸入冰浴的反应瓶中搅拌的498mg(1.5mmol)按实施例1A方法制备的化合物2的10mL干燥CH2Cl2混悬液中，加入146μL(1.80mmol，1.2eq)吡啶和203μL(1.65mmol，1.1eq)三甲基乙酰氯(化合物21)。5分钟后，移去冰浴。继续搅拌30分钟，加入1mL DMF；该混合液由悬浮液变为絮状溶液。TLC表明，存在大量未反应的原料(化合物2)。将混合液搅拌过夜，再加入额外量的化合物21(203μL，1.1eq)和180mg(1.5eq)DMAP。室温下，将形成的反应混合液搅拌4日。TLC表明，尚存在一些未反应的原料(化合物2)。将反应混合液在H2O/EtOAc之间经常规提取处理。粗产物经硅胶柱层析纯化，用2-5％MeOH/CH2Cl2洗脱得到411.3mg化合物22(66％收率)，为白色固体。 根据实施例4B方法，将化合物22(316mg)用4mL TFA∶H2O(9∶1，v/v)处理，得到265mg化合物23。
实施例8 室温下，向搅拌的500mg(2.1mmol)利巴韦林和2.07g(1.04mL，1.5eq，3.1mmol)N，N-二异丙基二苄基磷酰胺的5mL DMF混合液中，加入433mg(6.1mmol，3eq)四唑。室温下，将得到的反应混合液搅拌2小时，然后加入1.11mL(3eq)的叔丁基过氧化物(5.5M癸烷液)。将形成的反应混合液搅拌2小时。加入水，有机层用水洗涤，干燥，蒸发得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析纯化，用MeOH/CH2Cl2为洗脱剂，得到493mg化合物24，为白色固体。FAB∶MS∶MH+＝505.2。 将化合物24(278mg)在3mL MeOH和3mL水混合液中的悬浮液以及150mg10％Pd-C置于氢气下4小时。将混悬液通过硅藻土层过滤，将该固体用MeOH充分洗涤。减压浓缩得到的滤液，得到169.3mg化合物25，为白色固体。FAB-MS，MH+＝325.1。
实施例9 将NaH的油分散液(0.88g的NaH，0.022mmol，1.1eq)用干燥己烷洗涤一次，然后混悬于10mL干燥的THF中。向浸入冰浴的装有NaH的干燥THF液的反应容器中，加入化合物26(N-苯基哌嗪，3.24g，20mmol)。移去冰浴，室温下，将得到的反应混合液搅拌1小时。向该搅拌的白色反应混合液中，加入2.66mL(0.024mmol，1.2eq)溴乙酸乙酯。将形成的反应混合液搅拌过夜。将反应混合液冷却至冰浴温度，用NH4Cl水溶液猝灭。将形成的混合液用EtOAc提取，将有机层用NH4Cl水溶液、盐水洗涤，干燥。减压除去溶剂，得到粗产物，经硅胶柱层析纯化，用20％EtOAc/己烷(v/v)为洗脱剂，得到2.10g化合物27(N-苯基哌嗪乙酸乙酯)，为澄清油状物。1Hnmr光谱与27的结构一致。 向搅拌的2.10g(8.47mmol)化合物27的8.47mL MeOH溶液中，加入8.47mL(1.0eq)的1N NaOH溶液。室温下，将形成的反应混合液搅拌3小时(TLC表明未发现化合物27)。减压除去溶剂，得到粗产物。向粗产物中加入水，将该溶液冰冻过夜，得到2.10g化合物28，为白色固体。1Hnmr光谱与28的结构一致。 将搅拌的1.21g(5.0mmol)化合物28在15mL CH3CN和5mL DMF溶液中，加入1.146g(6.0mmol，1.2eq)EDC.HCl，然后加入837μL(6.0mmol，1.2eq)的Et3N和731mg(10.0mmol，2eq)丙酮肟(化合物28)。将形成的反应混合液搅拌过夜，然后用EtOAc稀释。将有机层用水和盐水洗涤，干燥，浓缩得到粗产物。该粗产物经硅胶柱层析纯化，用20％EtOAc/己烷(v/v)为洗脱剂，得到237mg化合物29，为白色固体。该肟酯的1Hnmr光谱与化合物29的结构一致。 65℃下，向105.0mg(0.431mmol)利巴韦林、237mg(0.862mmol)肟酯29和0.1g Novo SP435脂肪酶(Candida antarctica)的5mL无水THF混悬液搅拌24小时。将形成的反应混合液冷却至室温，过滤，用MeOH洗涤。粗产物经硅胶柱层析纯化，用10％MeOH/CH2Cl2为洗脱剂，得到66mg化合物30(白色固体)，为单一产物(42％收率)。TLC未发现其它产物。1Hnmr光谱(300MHz，DMSO-d6)与结构30的5’-利巴韦林酯一致。
实施例10 室温下，向搅拌的2.45g(1.4mmol)马尿酸(化合物31)和1.00g(1.0eq)丙酮肟的10mL CH2Cl2溶液中，加入2.83g(1.0eq)的DCC。将形成的反应混合液搅拌过夜，然后过滤。减压浓缩滤液，得到残留物，经EtOAc/己烷纯化，得到2.36g丙酮喔星酯(32)，为无色油状物。FAB-MS∶MH+＝235.1。 采用实施例9、步骤D的方法，但用2.13g(9mmol)化合物32代替化合物29，用0.734g(3mmol，1/3eq)利巴韦林和0.6g SP435脂肪酶的25mL THF溶液。粗产物经硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH(20∶1，v/v)为洗脱剂，得到粗产物。粗产物经MeOH∶Et2O结晶，得到0.936g化合物33。FAB∶MS，MH+＝406.1。
实施例11 根据F.Morris和V.Gotor，Tetrahedron，1994，50，69-6934中段落6932-6933的方法制备化合物34，Cbz-L-丙氨酸的丙酮肟酯。然后，按照实施例10、步骤B的方法，但用1.00g(3.6mmol)化合物34代替化合物32，并使用0.294g(1.2mmol)利巴韦林和0.48g Novo SP435脂肪酶的12mL THF溶液。粗产物经硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH(20∶1，v/v)为洗脱剂，得到0.660g化合物35，为白色固体。将该白色固体用MeOH-EtOAc重结晶，得到0.532g化合物35。 向0.100g(0.222mmol)化合物35和42.3mg(1eq)TSOH.H2O的3mlMeOH水溶液的混合液中，加入50mg10％Pd-C。将得到的黑色混悬液置于氢气下4小时。将形成的反应混合液通过硅藻土层过滤，将该固体用甲醇充分洗涤。浓缩合并的滤液，除去溶剂得到0.101g化合物36，为白色固体。FAB∶MS MH+＝316.1。
实施例12 根据实施例10步骤A的方法，由2.17ml(2.53eq)苄氧基乙酰氯(化合物37)和1.00g丙酮喔星的20ml含有1.67g(1eq)DMAP的CH2Cl2溶液制备化合物38(PhCH2OCH2COO-N＝C(CH3)2)。然后，按照实施例10步骤B的方法，但用2.40g(10.8mmol)化合物38代替化合物32，并使用1.325g(5.4mmol)利巴韦林和2.18g Novo SP435脂肪酶的70mLTHF溶液。在70℃、氮气下，将该混合液处理过夜。粗产物经硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH(10∶1，v/v)为洗脱剂，得到0.511g两种化合物混合物。经用MeOH∶Et2O结晶，得到0.367g化合物39，为白色结晶产物。 通氮气下，向搅拌的0.200g化合物39的5mL含有50mg钯黑的MeOH混悬液中，加入0.20ml甲酸。将得到的反应混合液加热回流1小时。将得到的反应混合液冷却，通过棉毛层过滤。将该固体先用甲醇、再用水充分洗涤。减压浓缩合并的滤液，得到残留物。加入甲醇，得到99.2mg化合物40。FAB-MS∶MH+＝303.1。
实施例13 根据实施例10步骤A的方法，制备化合物40(PhCH2OCOO-N＝C(CH3)2)。然后，按照实施例10步骤B的方法，但用500mg(2.4mmol)化合物40代替化合物32，并使用295mg(1.2mmol)利巴韦林和160mgNovo SP435脂肪酶的15ml THF溶液。在70℃下，将形成的反应混合液加热3日。将粗产物溶于MeOH中，经硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH(20∶1，v/v)为洗脱剂，得到156mg化合物41。FAB∶MSMH+＝379.2。
实施例14A.根据UWidner Synthesis 1987，568的方法，由L-乳酸甲酯制备L-乳酸甲酯的苄基醚(化合物42)。 向搅拌的1.00g化合物42在9ml MeOH和3ml水混合液的溶液中，加入216mg(1eq)的LiOH.H2O。将形成的反应混合液搅拌4小时。将得到的混合液在CH2Cl2和水之间分配。分离水相，用CH2Cl2洗涤，用过量10％HCl水溶液酸化。将有机相用EtOAc提取。干燥EtOAc层，浓缩得到779mg化合物43，为无色油状物。 根据实施例10步骤A的方法，但用1.15g(6.39mmol)化合物43代替化合物31，并使用513mg(7.03mmol，1.1eq)丙酮肟、1.45g DCC的5ml CH2Cl2溶液，生成1.20g丙酮肟酯，化合物44。 按照实施例10步骤B的方法，但用1.2g(5.1mmol)化合物44代替化合物32，并使用600mg(2.5mmol)利巴韦林和500mg Novo SP435脂肪酶的20ml THF溶液。在70℃下，洗涤混合液直至TLC未发现原料。
粗反应产物经硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH(20∶1，v/v)洗脱，得到183mg化合物45，为白色固体。
实施例15 室温下，将N-t-Boc-L-异亮氨酸(由Sigma Chemical Co.St.Louis，Mo提供)(1.270g，5.5mmol)的无水THF(30ml)溶液用CDI，即羰基二咪唑(981mg，6.05mmol)处理1小时。然后向该反应混合液中，加入实施例1的化合物2(1.660g，5.00mmol)和(imidazolide)钠(150mg，1.5mmol)。在45℃下，将混合液加热20小时。将反应液用EtOAc稀释，用NH4Cl水溶液猝灭。将有机层用水洗涤3次，再用盐水洗涤1次，经Na2SO4干燥。过滤干燥的有机层，浓缩滤液得到灰白色固体，经硅胶柱层析纯化(5-10％(体积)的MeOH的CH2Cl2溶液)，得到1.244g化合物47。
室温下，将化合物47用三氟乙酸(TFA)/水(9∶1 v/v)处理1小时。蒸发所有的挥发物。加入水，再蒸发得到1.10g化合物48，为软固体。MS(FAB)＝358(MH+，100％)。
实施例16 室温、通氮气下，将N，N-二Cbz-L-赖氨酸(由Sigma ChemicalCo.St.Louis，Mo提供)(749mg，1.81mmol)和化合物2(500mg，1.506mmol)的无水DMF(5ml)溶液用(732mg，1.66mmol)苯并三唑基氧基三-(二甲氨基)鳞六氟磷酸盐(“BOP”试剂，由Sigma Chemical Co.St.Louis，Mo提供)处理，再用576mL3.31mmol的Hunig氏碱，即N，N-二异丙基乙胺，[“(i-Pr)2NEt”，由Aldrich Chemical Co.Milwaukee，WI提供]处理。将反应混合液用EtOAc稀释，用NH4Cl水溶液猝灭。将有机层用水洗涤3次，再用盐水洗涤1次，经Na2SO4干燥。过滤干燥的有机层，浓缩滤液得到化合物49，为灰白色固体。
室温下，将化合物49用三氟乙酸/水(9∶1v/v)处理1小时。蒸发所有挥发物。加入水，再蒸发得到粗产物，经硅胶柱层析纯化，(10％(体积)MeOH的CH2Cl2溶液)，得到520mg化合物50，为白色固体。
在1atm压力的H2下，将含有化合物50(140mg，0.219mmol)和对甲苯磺酸单水合物，TsOH H2O(83mg，0.438mmol)的溶液经10％Pd/C(50mg)氢化4小时。通过硅藻土层滤除催化剂，用甲醇-水洗涤。蒸发滤液得到157mg化合物51，为白色粉末。MS(FAB)＝373(MH+，100％)。
实施例17按照实施例11、15或16的方法，但用等当量的、下表3左栏中所列的氨基酸的Cbz-或Boc-D-氨基酸衍生物代替实施例15中所用的Boc-L-异亮氨酸、或者实施例16中所用的二Cbz-L-赖氨酸、或者实施例11中所用的Cbz-L-丙氨酸，得到式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R是下表4的右栏中所列的部分。
表4栏A栏B
表4续栏A 栏B
表4续栏A栏B
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表4续栏A 栏B 本领域技术熟练人员清楚，在不背离本发明精神和范围下，可对本发明进行许多修饰和变化。本发明说明的具体实施方案仅通过举例的方式提出，本发明只受所附的权利要求书，以及这些权利要求所需要的全部等同的范围的限定。
权利要求
1.式I代表的利巴韦林衍生物在制备用于治疗患有慢性丙型肝炎患者的药用组合物中的用途，治疗方法包括在一定时间段内给予治疗有效量的式I的利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段足以在所述给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在所述给药期结束后至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式I代表 其中R2、R3或R5中至少一个是H、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-，以及其中R2、R3或R5中至少一个不是H；其中R6是H、烷基、链烷酰基、芳基、杂环基、环烷基、NR7aR7b、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR7aR7b、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R18、CF3、SH、SR7a、SOR7a、SO2R7a取代的芳基，NR7aR7bCO2H、CO2-或OR7a、O-M+或S-M+；其中M+是碱金属；或者R6是-(CHR7a)e-(CH2)f-CO-OR7b、-(CHR7a)e-(CH2)f-OR7b或-(CHR7a)e-(CH2)f-NR7aR7b；W是O、NR18或S；R7a是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R7b是H、烷基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R7a和R7b一起与N和CHR7a、NR7a、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；R17是H、OR7a、NR7aR7b、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-、(HO)2PO-、R6-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-；R18是H、烷基、链烷酰基或芳基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
2.α-干扰素在制备用于治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的药用组合物中的用途，治疗方法包括在一定时间段内给予治疗有效量的式I的利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段足以在所述给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在所述给药期结束后至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式I代表 其中R2、R3或R5中至少一个是H、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-，以及其中R2、R3或R5中至少一个不是H；其中R6是H、烷基、链烷酰基、芳基、杂环基、环烷基、NR7aR7b、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR7aR7b、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R18、CF3、SH、SR7a、SOR7a、SO2R7a取代的芳基，NR7aR7bCO2H、CO2-或OR7a、O-M+或S-M+；其中M+是碱金属；或者R6是-(CHR7a)e-(CH2)f-CO-OR7b、-(CHR7a)e-(CH2)f-OR7b或-(CHR7a)e-(CH2)f-NR7aR7b；W是O、NR18或S；R7a是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R7b是H、烷基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R7a和R7b一起与N和CHR7a、NR7a、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；R17是H、OR7a、NR7aR7b、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-、(HO)2PO-、R6-(W)x-PO-(OH)-或HO-SO2-；R18是H、烷基、链烷酰基或芳基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
3.式I的利巴韦林衍生物和α-干扰素在制备用于治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的药用组合物中的用途，所述方法包括在一定时间段内给予治疗有效量的式I利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段足以在所述给药期结束时，根除可检测的HCV-RNA，并在所述给药期结束后至少24周内，无可检测的HCV-RNA，其中利巴韦林衍生物或其药学上可接受的盐由式I代表 其中R2、R3或R5中至少一个是H、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS-(HO)2PO-、R6-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-，以及其中R2、R3或R5中至少一个不是H；其中R6是H、烷基、链烷酰基、芳基、杂环基、环烷基、NR7aR7b、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR7aR7b、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R18、CF3、SH、SR7a、SOR7a、SO2R7a取代的芳基，NR7aR7bCO2H、CO2-或OR7a、O-M+或S-M+；其中M+是碱金属；或者R6是-(CHR7a)e-(CH2)f-CO-OR7b、-(CHR7a)e-(CH2)f-OR7b-或-(CHR7a)e-(CH2)f-NR7aR7b；W是O、NR18或S；R7a是H、烷基、链烷酰基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R7b是H、烷基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R7a和R7b一起与N和CHR7a、NR7a、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；或者R17是H、OR7a、NR7aR7b、R6-(W)x-CO-、R6-(W)x-CS、(HO)2PO-、R6-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-；R18是H、烷基、链烷酰基或芳基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
4.上述权利要求中任何一项的用途，其中R2＝R3＝H或R2＝R5＝H或者其中R3＝R5＝H。
5.上述权利要求中任何一项的用途，其中R5是以下基团之一R7aCH＝CH-CH2CO-、R7aCH＝CH-CH2CS-、R7aC≡C-CO-、R7aC≡C-CS-、R17(CH2)n-CO-、R17(CH2)n-CS-、R17(CH2)n-(W)x-CO-、R17(CH2)n-(W)x-CS-、R17(CH2)n-(W)xCO-、 R7bOCO-(CH2)f-CO-或R7bOCO-(CH2)f-(W)x-CO-。
6.上述权利要求中任何一项的用途，其中式I的利巴韦林衍生物的给药量为每日每千克体重约1-100mg。
7.上述权利要求中任何一项的用途，其中给予的α-干扰素选自α-2a干扰素、α-2b干扰素、共有序列干扰素、纯α-干扰素产品或聚乙二醇化的(pegylated)α-干扰素。
8.上述权利要求中任何一项的用途，其中给予的α-干扰素是α-2b干扰素，α-干扰素的给药量以每周、TIW、QOD或每日计为200万-1000万IU。
9.上述权利要求中任何一项的用途，其中有效的给药时间段为20-30周。
10.上述权利要求中任何一项的用途，其中更有效的给药时间段为40-50周。
11.式II代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R2’、R3’或R5’中至少一个是H、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS或R20-(W)x-PO(OH)-；以及其中R2’、R3’或R5’中至少一个不是H；其中R20是烷基、H、链烷酰基、环烷基、芳基、杂环基、NR21R22、链烯基或链炔基；或者是被卤代、苯基、环烷基、NR21R22、羟基或烷氧基取代的烷基、链烷酰基、链烯基或链炔基；或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、R28、CF3、SH、SR21、SOR21、SO2R21取代的芳基，NR21R22、CO2H、CO2-、OR21、O-M+或S-M+；其中M+是碱金属阳离子；或者R20是-(CHR21)e-(CH2)f-CO-OR22、-(CHR21)e-(CH2)f-OR22或-(CHR21)e-(CH2)f-NR21R22；W是O、NR28或S；R21是H、烷基、链烷酰基、Y或芳基，或者是被卤代、苯基、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基、链烷酰基或芳基；R22是H、烷基或芳基，或者是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的烷基或芳基；或者R21和R22一起与N和CHR21、NR21、O、S、SO或SO2中的一个形成一个5-、6-或7-元环；或者R27是H、OR21、NR21R22、R20-(W)x-CO-、R20-(W)x-CS-、(HO)2PO-或R20-(W)x-PO(OH)-或HO-SO2-；R28是H、链烷酰基、芳基或烷基；e＝0-6，f＝0-10，x＝0或1。
12.药用组合物，其包括权利要求11的式II化合物以及至少一种药学上可接受的载体。
13.权利要求11的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是 R27O(CH2)-(W)x-CO- R21R22N-(CH2)tCO- 其中t＝0-400；r＝100-5000；x＝0或1。
14.权利要求11的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2’、R3’或R5’中至少一个是R20-(W)x-CO-，x＝0，R20-CO-是天然α-氨基酸残基，选自 Y＝H；CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-；PhCH2-；HOOCCH2CH2-；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或者Y与α碳和N一起形成 或其药学上可接受的盐；或者R20-CO-选自 *(和取代的Ph) 其中Ph是被苯基、卤代、CN、NO2、OH、CO2H或烷氧基取代的苯基；或者R20CO-是
15.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者治疗有效量的权利要求11的式II利巴韦林衍生物。
16.治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予治疗有效量的式II利巴韦林衍生物和治疗有效量的α-干扰素，该时间段足以在所述给药期结束时根除可检测的HCV-RNA，并在所述给药期结束后至少24周内无可检测的HCV-RNA，其中该利巴韦林衍生物由权利要求11的式II代表。
17.式III代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R50’、R30’或R20’中至少一个由下式代表 以及R50’、R30’或R20’中的其它两个是H或者由下式代表 其中Q是 其中R51和R52独立是H、烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR57、OR57或NR55R56取代的烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者其中R51和R52与(CR51R52)中的碳原子一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；其中R53和R54独立是H、链烷酰基、烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR57、OR57取代的链烷酰基、烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；或者R53和R54独立是 其中R57是H、烷基、链烷酰基、链烯酰基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、链烷酰基噻吩基或链烷酰氧基取代的烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；其中R58是H、烷基、芳基、芳烷基、链烯基或链炔基；q是0、1或2；k是1或2。
18.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求17的式III代表的化合物。
19.治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的式III化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物由权利要求17的式III代表。
20.式IV代表的化合物或其药学上可接受的盐 其中R50”、R30”或R20”中至少一个由下式代表 以及R50”、R30”或R20”中的其它两个是H或者由下式代表 其中T是由下式代表的部分H2NCH2-、H2NCH2CH2-、CH3CH(H2N)-、CH3CH2CH(H2N)-、CH3(CH2)2CH(H2N)-、(CH3)2CHCH(H2N)-、(CH3)2CHCH2CH(H2N)-、CH3CH2CH(CH3)CH(H2N)-、PhCH2CH(H2N)-、HOOCCH2CH2CH(H2N)-、HOOCCH2CH(H2N)-、HSCH2CH(H2N)-、CH3SCH2CH2CH(H2N)-、HOCH2CH(H2N)-、H2N(CH2)4CH(H2N)-、CH3CH(OH)CH(H2N)、 其中R58和R59独立是H、烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、SR60、OR60或NR60R61取代的烷基、链烯基、链炔基、(C3-C7)环烷基、芳烷基，或者其中R58和R59与(CR58R59)中的碳原子一起形成环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；其中R60是H、烷基、链烷酰基、链烯酰基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基，或者是被卤代、OH、SH、CF3、链烷酰基噻吩基或链烷酰氧基取代的烷基、芳基、芳烷基、链烯基、链炔基；其中R61是H、烷基、芳基、芳烷基、链烯基或链炔基；d是0、1或2。
21.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求20的式IV代表的化合物。
22.治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的式IV化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物由权利要求20的式IV代表。
23.式V代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中R20CO-是天然或非天然氨基酸部分，由下式代表 Y＝H、CH3；CH3CH2-；CH3CH2CH2-；Me2CH-；Me2CH2CH2-；CH3CH2CH(Me)-；PhCH2-；HOOCCH2CH2-；HSCH2-；HOOCCH2-；MeSCH2CH2-；HOCH2-； 或者Y是H2N(CH2)4-或CH3CH(OH)-；或者Y与α碳和N一起形成
24.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求23的式V代表的化合物。
25.治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的式V化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物由 23的式V代表。
26.式VI代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中AA是表AA中化学式的天然或非天然氨基酸部分。
27.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求26的式VI代表的化合物。
28.治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的式VI化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物由权利要求26的式VI代表。
29.式VII代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中R50是CH3CH(NH2)-CO-、CH3CH2(CH3)CHCH(NH2)-CO-或H2N(CH2)4CH(NH2)-CO-。
30.权利要求29的化合物，其中药学上可接受的盐是三氟乙酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐或氯化物。
31.权利要求29的化合物或其药学上可接受的盐，其中R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是 或者R50是
32.用于治疗易感的病毒性感染的药用组合物，其包括 29的化合物以及至少一种药学上可接受的载体。
33.适于口服给予的权利要求32的药用组合物。
34.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求29的式VII代表的化合物。
35.治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的式VII化合物以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平，其中该化合物由权利要求29的式VII代表。
36.权利要求35的方法，其中α-干扰素是α-2a干扰素、α-2b干扰素、共有序列干扰素、聚乙二醇化的α-2a干扰素或聚乙二醇化的α-2b干扰素。
37.式VIII代表的化合物或其药学上可接受的盐
38.药用组合物，其包含抗病毒有效量的权利要求37的化合物以及药学上可接受的载体。
39.治疗患有易感的病毒感染的患者的方法，该方法包括给予所述患者有效量的权利要求37的式VII代表的化合物。
40治疗感染了慢性丙型肝炎患者的方法，该方法包括在一定时间段内给予所述患者有效量的权利要求37的式VII化合物或其药学上可接受的盐，以及有效量的α-干扰素，该时间段足以根除可检测的HCV-RNA水平。
41.权利要求40的方法，其中α-干扰素是α-2a干扰素、α-2b干扰素、共有序列干扰素、聚乙二醇化的α-2a干扰素或聚乙二醇化的α-2b干扰素。
42.权利要求40的方法，其中式VIII代表的化合物经口服给予。
43.权利要求40的化合物，其中药学上可接受的盐是三氟乙酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、硫酸盐、2-萘磺酸盐或氯化物。
全文摘要
治疗患有慢性丙型肝炎感染患者的方法,其包括采用治疗有效量的式(Ⅰ)利巴韦林衍生物和治疗有效量的α－干扰素的联合疗法,在20－80周的时间段内,根除可检测的HCV－RNA。
文档编号C07H19/056GK1330658SQ99814344
公开日2002年1月9日 申请日期1999年10月14日 优先权日1998年10月16日
发明者A·K·甘古利, J·麦科尔米克, R·G·罗维, F·本尼特, A·K·萨克塞纳, V·M·吉里雅瓦拉班 申请人:先灵公司