用于商业化学品生产的生物平台的制作方法

文档序号:12285351阅读:来源:国知局

技术特征:

1.重组的宿主细胞,其包含

a)与相应的野生型细胞相比,活性降低的具有β-葡萄糖苷酶活性的一种或多种多肽,其中所述一种或多种多肽中的每一种由与选自NCU00130、NCU04952、NCU05577、NCU07487、NCU08755和NCU03641基因的基因具有至少80%序列同一性的基因编码;

b)与相应的野生型细胞相比,活性降低的具有纤维二糖酸盐磷酸化酶活性的多肽,其中所述多肽由与NCU09425(NdvB)具有至少80%序列同一性的基因编码;

c)与相应的野生型细胞相比,活性降低的由与NCU08807(CRE-1)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽;以及

d)与相应的野生型宿主细胞相比,活性降低的由与NCU09333(ACE-1)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽。

2.如权利要求1所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是真菌细胞。

3.如权利要求2所述的宿主细胞,其中所述真菌细胞是粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。

4.如权利要求1-3中任一项所述的宿主细胞,其中具有β-葡萄糖苷酶活性的一种或多种多肽的活性降低是由于基因突变。

5.如权利要求4所述的宿主细胞,其中基因突变存在于两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或六个或更多个编码具有β-葡萄糖苷酶活性的多肽的基因中。

6.如权利要求4或5中任一项所述的宿主细胞,其中至少一种基因突变是敲除突变。

7.如权利要求1-6中任一项所述的宿主细胞,其中具有纤维二糖酸盐磷酸化酶活性的多肽的活性降低是由于基因突变。

8.如权利要求7所述的宿主细胞,其中所述基因突变是敲除突变。

9.如权利要求1-8中任一项所述的宿主细胞,其中由与NCU08807(CRE-1)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽的活性降低是由于基因突变。

10.如权利要求9所述的宿主细胞,其中所述基因突变是敲除突变。

11.如权利要求1-10中任一项所述的宿主细胞,其中由与NCU09333(ACE-1)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽的活性降低是由于基因突变。

12.如权利要求11所述的宿主细胞,其中所述基因突变是敲除突变。

13.如权利要求1-12中任一项所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞还包含与相应的野生型细胞相比,活性降低的由与NCU08290(MUS51)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽。

14.如权利要求13所述的宿主细胞,其中由与NCU08290(MUS51)具有至少80%序列同一性的基因编码的多肽的活性降低是由于基因突变。

15.如权利要求14所述的宿主细胞,其中所述基因突变是敲除突变。

16.如权利要求1-15中任一项所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞还包含与相应的野生型细胞相比,具有增加的漆酶表达或活性的多肽。

17.如权利要求16所述的宿主细胞,其中所述多肽由与NCU04528具有至少80%序列同一性的基因编码。

18.如权利要求16或17中任一项所述的宿主细胞,其中所述多肽的表达受组成型启动子控制。

19.如权利要求1-18中任一项所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞还包含与相应的野生型细胞相比,具有增加的纤维二糖脱氢酶表达或活性的多肽。

20.如权利要求19所述的宿主细胞,其中所述多肽的表达受组成型启动子控制。

21.如权利要求1-20中任一项所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞从纤维素生产糖酸。

22.如权利要求1-21中任一项所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞生产纤维二糖。

23.如权利要求21或22中任一项所述的宿主细胞,其中所述糖酸是纤维二糖酸盐。

24.如权利要求23所述的宿主细胞,其中与相应的野生型细胞相比,所述宿主细胞的纤维二糖酸盐的消耗降低了至少80%。

25.重组的粗糙脉孢菌(N.crassa)细胞,其包含

a)在NCU00130、NCU04952、NCU05577、NCU07487、NCU08755和NCU03641基因的各个基因中的突变,其中所述突变降低了由所述基因编码的多肽的β-葡萄糖苷酶活性;

b)在NCU09425(NdvB)基因中的突变,其中所述突变降低了由所述基因编码的多肽的纤维二糖酸盐磷酸化酶活性;

c)在NCU08807(CRE-1)和NCU09333(ACE-1)基因的各个基因中的突变,其中所述突变降低了由所述基因编码的多肽的活性;

d)与野生型粗糙脉孢菌细胞相比,具有增加的表达或活性的漆酶,以及

其中所述重组的粗糙脉孢菌细胞从纤维素产生纤维二糖酸盐。

26.生产糖酸的方法,所述方法包括:

a)提供权利要求1-20中任一项所述的宿主细胞;

b)在含有纤维素的培养基上培养所述宿主细胞,从而使宿主细胞从纤维素生产糖酸。

27.如权利要求26所述的方法,其还包括从所述培养基中充分纯化糖酸的步骤。

28.如权利要求26或27中任一项所述的方法,其中所述宿主细胞生产纤维二糖。

29.如权利要求26-28中任一项所述的方法,其中所述糖酸是纤维二糖酸盐。

30.如权利要求29所述的方法,其中与相应的野生型细胞相比,所述宿主细胞的纤维二糖酸盐的消耗降低了至少80%。

31.如权利要求27-30中任一项所述的方法,其中在存在外源漆酶的情况下培养所述宿主细胞。

32.如权利要求27-31中任一项所述的方法,其中在存在外源纤维二糖脱氢酶的情况下培养所述宿主细胞。

33.如权利要求27-32中任一项所述的方法,其中所述培养基还包含氧化还原介体。

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