核酸酶介导的编辑编码HLA的基因所产生的免疫相容性细胞的制作方法

文档序号:12140331阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于产生免疫相容性细胞的方法,所述方法包括:在分离的细胞中,通过基因缺失或基因修饰来编辑一种或多种免疫相容性抗原基因的一个或两个等位基因,其中,所述免疫相容性抗原基因中的至少一种选自人类白细胞抗原(HLA)-A、HLA-B和HLA-DR并且具有杂合基因型。

2.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述方法包括:在分离的细胞中,通过基因缺失或基因修饰来编辑一种或多种免疫相容性抗原基因的一个或两个等位基因,其中,所述免疫相容性抗原基因HLA-A和HLA-B中的至少一种具有杂合基因型。

3.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述基因缺失通过基因敲除来进行。

4.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述基因修饰通过基因敲入来进行。

5.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,利用HLA-A特异性工程化核酸酶、HLA-B特异性工程化核酸酶或HLA-DR特异性工程化核酸酶来进行所述基因的编辑。

6.根据权利要求5所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,工程化核酸酶选自由锌指核酸酶(ZFN)、转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)和RNA-向导工程化核酸酶(RGEN)所组成的组。

7.根据权利要求6所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述RGEN包括向导RNA和Cas蛋白,所述向导RNA特异性结合HLA-A、HLA-B或HLA-DR基因的特定序列。

8.根据权利要求7所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,通过将特异性结合HLA-A、HLA-B或HLA-DR基因的特定序列的向导RNA,或者编码所述向导RNA的DNA;以及编码Cas蛋白的核酸,或者Cas蛋白本身引入至细胞来进行所述基因的编辑。

9.根据权利要求8所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述向导RNA为包括crRNA和tracrRNA的双重RNA的形式,或者为单链的向导RNA的形式。

10.根据权利要求8所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述Cas蛋白为Cas9蛋白。

11.根据权利要求8所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述Cas蛋白源自于链球菌Streptococcus属。

12.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述免疫相容性细胞中的所述免疫相容性抗原基因为纯合样的或半合的。

13.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述方法包括:在分离的细胞中,通过基因编辑对HLA-A、HLA-B和HLA-DR基因中的每种基因进行单等位基因的敲除,其中,HLA-A、HLA-B和HLA-DR基因都具有杂合基因型。

14.根据权利要求1或2所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述方法包括:在分离细胞中,通过基因编辑对所述HLA-DR基因进行一对等位基因的敲除,以及对所述HLA-A基因和所述HLA-B基因中的每种基因进行一个或两个等位基因的移除或修饰,其中,所述HLA-A基因和所述HLA-B基因之一为杂合型或者二者均为杂合型。

15.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述细胞是干细胞或体细胞。

16.根据权利要求15所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述干细胞是诱导多能干细胞、胚胎干细胞、体细胞核转移衍生的胚胎干细胞,或成体干细胞。

17.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,进一步包括:通过基因编辑来移除选自HLA-C、HLA-DP和HLA-DQ中的一种或多种基因的等位基因。

18.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,其中,所述方法用于产生包括所述免疫相容性细胞的细胞群。

19.根据权利要求1所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,进一步包括:分析所产生的细胞的HLA类型。

20.一种细胞群,所述细胞群包括通过权利要求1至19中任一项所述的方法来产生的所述免疫相容性细胞。

21.一种用于产生免疫相容性细胞群的方法,所述方法包括:(a)在分离细胞中,通过基因缺失或基因修饰来编辑一种或多种免疫相容性抗原基因的一个或多个等位基因,其中,所述免疫相容性抗原基因中的至少一种选自人类白细胞抗原(HLA)-A、HLA-B和HLA-DR并且具有杂合基因型;以及(b)收集在步骤(a)中产生的细胞。

22.根据权利要求21所述的用于产生免疫相容性细胞群的方法,进一步包括:(a')在进行步骤(a)之后且在进行步骤(b)之前,鉴定从步骤(a)所获得的分离的细胞的HLA基因型。

23.一种用于产生免疫相容性细胞的方法,所述方法包括:在分离细胞中,通过基因缺失或基因修饰来编辑一种或多种免疫相容性抗原基因的一个或两个等位基因,所述分离的细胞包括选自人类白细胞抗原(HLA)-A、HLA-B和HLA-DR的至少一种免疫相容性抗原基因。

24.根据权利要求23所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,所述分离的细胞可包括纯合的免疫相容性抗原基因或杂合的免疫相容性抗原基因。

25.根据权利要求23所述的用于产生免疫相容性细胞的方法,所述编辑的步骤可编辑两个等位基因。

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