本发明涉及一种胞磷胆碱钠的制备方法，属于生物制药技术领域。
背景技术：
胞磷胆碱钠，又称胞二磷胆碱钠，是脑代谢激活剂，作为内源性合成磷脂酰胆碱的中间体可促进神经细胞膜磷脂的合成，磷脂也是构建生物膜的重要成分。中枢神经损伤后，胞磷胆碱钠参与修复和再生，起神经保护作用，在神经介质的转移和生物电的传导中也起着重要作用。胞磷胆碱钠在临床上主要用于头部外伤及脑术后伴有意识障碍、脑梗塞急性意识障碍、促进脑卒中偏瘫患者上肢功能恢复及急性胰腺炎等病症，对急性中风、外科手术后引起的神经损伤、意识障碍，对帕金森综合症、痴呆症、青光眼等有明显的临床治疗效果。胞磷胆碱钠为目前临床用量最大的神经激活剂，具有以下临床用途：（1）降低脑血管阻力，增加脑血流，促进脑物质代谢，改善脑循环；（2）增强脑干网状结构的机能，增强椎体系统机能，改善运动麻痹，促进卵磷脂合成，改善脑代谢，可与脑多肽合用，对改善脑功能有协同作用；（3）主要适用症为急性颅脑外科及脑手术后意识障碍；（4）临床上还用于其他中枢神经系统急性损伤引起的功能和意识障碍、震颤麻痹、耳鸣和神经性耳聋、安眠药中毒等；（5）近年来临床上广泛用于缺血性脑中风、脑动脉硬化、多梗塞性痴呆、老年痴呆症、小儿病毒性脑炎等。目前制备胞磷胆碱钠的方法有： ①化学合成，利用CMP(5′-胞苷酸)和磷酸胆碱作为反应物，对-甲苯磺酰氯作为缩合剂，在N-二甲基甲酰胺存在下进行缩合制备，用717(Cl-)型阴离子交换柱和711(Cl-)型浓缩柱分离液酒精沉淀制备胞磷胆碱钠，其缺点是难与缩合剂分离，产品不适合药用；②酶促合成，抽提细胞液用胞苷三磷酸(CTP)和磷酸胆碱生物合成胞磷胆碱钠，酶和细胞抽提液合成需要底物CTP，合成价格高； ③游离细胞和酵母无细胞抽提液合成胞磷胆碱钠，游离酵母合成需要大量酵母，且只能一次性使用，具有很多缺点。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对目前化学合成胞磷胆碱钠中产品难与缩合剂分离，导致的产品不适合药用的问题，提供了一种胞磷胆碱钠的制备方法，本发明以氯化磷酸胆碱钙盐为原料，首先通过与苯进行二元共沸除去氯化磷酸胆碱钙盐中的结晶水，然后再将氯化磷酸胆碱钙盐与碳酸钠反应，生成碳酸钙沉淀，过滤，得到粘稠物，将粘稠物与乙酰氯进行反应，产物再与胞苷酸反应，减压蒸馏得到残余物，最后用氢氧化钠、乙醇进行结晶和重结晶得到产物，本发明操作简单，乙酰氯加水后容易除去，并且溶剂全部可以回收利用，更环保，经济效益更高，本发明产品纯度高，达到了98%以上，适合药用。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
（1）量取200～300mL苯加入到带有分流器和温度计的三口烧瓶中，置于油浴中，向三口烧瓶中加入10～20g氯化磷酸胆碱钙盐，控制油浴温度在120～130℃，磁力搅拌30～40min，得到氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液；
（2）向上述氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液中加入100～200mL0.5mol/L碳酸钠溶液，磁力搅拌反应2～3h，产生白色沉淀，过滤，将滤液进行减压蒸馏，得到粘稠物；
（3）将上述粘稠物加入到装有温度计和回流冷凝装置的三口烧瓶中，并置于油浴中，向三口烧瓶中依次加入300～400mL四氢呋喃、3～5g乙酰氯，控制油浴温度在75～85℃，磁力搅拌反应2～3h，再向反应液中加入8～12g胞苷酸，搅拌反应5～6h，得到混合液；
（4）将上述混合液倒入烧杯中，向混合液中加入100～200mL去离子水，搅拌10～20min，静置，分层，用分液漏斗进行分液，得有机相，将有机相进行减压蒸馏，得到残余物；
（5）将上述残余物加入到烧杯中，再加入200～300mL质量浓度为20%NaOH溶液，置于水浴锅中，控制温度在80～90℃，向烧杯中加入10～20g活性炭，搅拌20～30min，过滤，得滤液，将滤液加入到盛有400～500mL质量浓度为95%乙醇溶液的烧杯中，搅拌1～2h，静置14～16h，使固体全部析出，离心分离，得到粗品；
（6）将上述粗品加入到盛有200～300mL质量浓度为20%NaOH溶液的烧杯中，置于水浴锅中，水浴控制温度在80～90℃，再向烧杯中加入500～600mL质量浓度为95%乙醇，搅拌1～2h，静置14～16h，使固体全部析出，离心分离，得沉淀物，经干燥，磨碎，得到胞磷胆碱钠产品。
本发明的应用方法：称取0.3～0.5g本发明制得的胞磷胆碱钠加入到医用吊瓶中，向吊瓶中加入100～200mL质量浓度为5%～10%葡萄糖，搅拌使胞磷胆碱钠溶解，然后滴注到人体，每5～7天为一个疗程，2～4个疗程即可痊愈，主要用来治疗急性颅脑外伤及脑手术后的意识障碍。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明操作简单，乙酰氯加水后容易除去，并且溶剂全部可以回收利用，更环保，经济效益更高，本发明产品纯度高，并且可以适合药用；
（2）有效地解决了化学合成胞磷胆碱钠中产品难与缩合剂分离，导致的产品不适合药用的问题。
具体实施方式
首先量取200～300mL苯加入到带有分流器和温度计的三口烧瓶中，置于油浴中，向三口烧瓶中加入10～20g氯化磷酸胆碱钙盐，控制油浴温度在120～130℃，磁力搅拌30～40min，得到氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液；向上述氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液中加入100～200mL0.5mol/L碳酸钠溶液，磁力搅拌反应2～3h，产生白色沉淀，过滤，将滤液进行减压蒸馏，得到粘稠物；将上述粘稠物加入到装有温度计和回流冷凝装置的三口烧瓶中，并置于油浴中，向三口烧瓶中依次加入300～400mL四氢呋喃、3～5g乙酰氯，控制油浴温度在75～85℃，磁力搅拌反应2～3h，再向反应液中加入8～12g胞苷酸，搅拌反应5～6h，得到混合液；将上述混合液倒入烧杯中，向混合液中加入100～200mL去离子水，搅拌10～20min，静置，分层，用分液漏斗进行分液，得有机相，将有机相进行减压蒸馏，得到残余物；将上述残余物加入到烧杯中，再加入200～300mL质量浓度为20%NaOH溶液，置于水浴锅中，控制温度在80～90℃，向烧杯中加入10～20g活性炭，搅拌20～30min，过滤，得滤液，将滤液加入到盛有400～500mL质量浓度为95%乙醇溶液的烧杯中，搅拌1～2h，静置14～16h，使固体全部析出，离心分离，得到粗品；将上述粗品加入到盛有200～300mL质量浓度为20%NaOH溶液的烧杯中，置于水浴锅中，水浴控制温度在80～90℃，再向烧杯中加入500～600mL质量浓度为95%乙醇，搅拌1～2h，静置14～16h，使固体全部析出，离心分离，得沉淀物，经干燥，磨碎，得到胞磷胆碱钠产品。
实例1
首先量取200mL苯加入到带有分流器和温度计的三口烧瓶中，置于油浴中，向三口烧瓶中加入10g氯化磷酸胆碱钙盐，控制油浴温度在120℃，磁力搅拌30min，得到氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液；向上述氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液中加入100mL0.5mol/L碳酸钠溶液，磁力搅拌反应2h，产生白色沉淀，过滤，将滤液进行减压蒸馏，得到粘稠物；将上述粘稠物加入到装有温度计和回流冷凝装置的三口烧瓶中，并置于油浴中，向三口烧瓶中依次加入300mL四氢呋喃、3g乙酰氯，控制油浴温度在75℃，磁力搅拌反应2h，再向反应液中加入8g胞苷酸，搅拌反应5h，得到混合液；将上述混合液倒入烧杯中，向混合液中加入100mL去离子水，搅拌10min，静置，分层，用分液漏斗进行分液，得有机相，将有机相进行减压蒸馏，得到残余物；将上述残余物加入到烧杯中，再加入200mL质量浓度为20%NaOH溶液，置于水浴锅中，控制温度在80℃，向烧杯中加入10g活性炭，搅拌20min，过滤，得滤液，将滤液加入到盛有400mL质量浓度为95%乙醇溶液的烧杯中，搅拌1h，静置14h，使固体全部析出，离心分离，得到粗品；将上述粗品加入到盛有200mL质量浓度为20%NaOH溶液的烧杯中，置于水浴锅中，水浴控制温度在80℃，再向烧杯中加入500mL质量浓度为95%乙醇，搅拌1h，静置14h，使固体全部析出，离心分离，得沉淀物，经干燥，磨碎，得到胞磷胆碱钠产品。
称取0.3g本发明制得的胞磷胆碱钠加入到医用吊瓶中，向吊瓶中加入100mL质量浓度为5%葡萄糖，搅拌使胞磷胆碱钠溶解，然后滴注到人体，每5天为一个疗程，4个疗程即可痊愈，主要用来治疗急性颅脑外伤及脑手术后的意识障碍。
实例2
首先量取250mL苯加入到带有分流器和温度计的三口烧瓶中，置于油浴中，向三口烧瓶中加入15g氯化磷酸胆碱钙盐，控制油浴温度在125℃，磁力搅拌35min，得到氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液；向上述氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液中加入150mL0.5mol/L碳酸钠溶液，磁力搅拌反应2.5h，产生白色沉淀，过滤，将滤液进行减压蒸馏，得到粘稠物；将上述粘稠物加入到装有温度计和回流冷凝装置的三口烧瓶中，并置于油浴中，向三口烧瓶中依次加入350mL四氢呋喃、4g乙酰氯，控制油浴温度在80℃，磁力搅拌反应2.5h，再向反应液中加入10g胞苷酸，搅拌反应5.5h，得到混合液；将上述混合液倒入烧杯中，向混合液中加入150mL去离子水，搅拌15min，静置，分层，用分液漏斗进行分液，得有机相，将有机相进行减压蒸馏，得到残余物；将上述残余物加入到烧杯中，再加入250mL质量浓度为20%NaOH溶液，置于水浴锅中，控制温度在85℃，向烧杯中加入15g活性炭，搅拌25min，过滤，得滤液，将滤液加入到盛有450mL质量浓度为95%乙醇溶液的烧杯中，搅拌1.5h，静置15h，使固体全部析出，离心分离，得到粗品；将上述粗品加入到盛有250mL质量浓度为20%NaOH溶液的烧杯中，置于水浴锅中，水浴控制温度在85℃，再向烧杯中加入550mL质量浓度为95%乙醇，搅拌1.5h，静置15h，使固体全部析出，离心分离，得沉淀物，经干燥，磨碎，得到胞磷胆碱钠产品。
称取0.4g本发明制得的胞磷胆碱钠加入到医用吊瓶中，向吊瓶中加入150mL质量浓度为8%葡萄糖，搅拌使胞磷胆碱钠溶解，然后滴注到人体，6天为一个疗程，3个疗程即可痊愈，主要用来治疗急性颅脑外伤及脑手术后的意识障碍。
实例3
首先量取300mL苯加入到带有分流器和温度计的三口烧瓶中，置于油浴中，向三口烧瓶中加入20g氯化磷酸胆碱钙盐，控制油浴温度在130℃，磁力搅拌40min，得到氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液；向上述氯化磷酸胆碱钙盐苯混合液中加入200mL0.5mol/L碳酸钠溶液，磁力搅拌反应3h，产生白色沉淀，过滤，将滤液进行减压蒸馏，得到粘稠物；将上述粘稠物加入到装有温度计和回流冷凝装置的三口烧瓶中，并置于油浴中，向三口烧瓶中依次加入400mL四氢呋喃、5g乙酰氯，控制油浴温度在85℃，磁力搅拌反应3h，再向反应液中加入12g胞苷酸，搅拌反应6h，得到混合液；将上述混合液倒入烧杯中，向混合液中加入200mL去离子水，搅拌20min，静置，分层，用分液漏斗进行分液，得有机相，将有机相进行减压蒸馏，得到残余物；将上述残余物加入到烧杯中，再加入300mL质量浓度为20%NaOH溶液，置于水浴锅中，控制温度在90℃，向烧杯中加入20g活性炭，搅拌30min，过滤，得滤液，将滤液加入到盛有500mL质量浓度为95%乙醇溶液的烧杯中，搅拌2h，静置16h，使固体全部析出，离心分离，得到粗品；将上述粗品加入到盛有300mL质量浓度为20%NaOH溶液的烧杯中，置于水浴锅中，水浴控制温度在90℃，再向烧杯中加入600mL质量浓度为95%乙醇，搅拌2h，静置16h，使固体全部析出，离心分离，得沉淀物，经干燥，磨碎，得到胞磷胆碱钠产品。
称取0.5g本发明制得的胞磷胆碱钠加入到医用吊瓶中，向吊瓶中加入200mL质量浓度为10%葡萄糖，搅拌使胞磷胆碱钠溶解，然后滴注到人体，每7天为一个疗程，2个疗程即可痊愈，主要用来治疗急性颅脑外伤及脑手术后的意识障碍。