技术领域
本发明涉及克里唑替尼的一种前药及其制备方法和用途。属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术：
前药(Prodrug)是指一类在体外无活性或活性较小，在体内经一个或多个步骤的酶和/或化学种类的生物转化，释放出活性物质而产生药理作用的化合物，又称为生物可逆性药物。它常常是将有生物活性的药物分子(原药)与某种无毒性载体(暂时转运基团)相连接而形成的。按照化学结构，前药可分为载体连接前药、生物前药、大分子前药和药物抗体结合物4类。
前药是一种很有用的药物设计方法，广泛应用于多种药物分子的设计中。许多药物以前药的形式给予，与潜在的活性组分相比，所述前药表现出改善的生物利用度，例如改善的物理化学性质，更具体地说是溶解度、主动或被动吸收性质或组织特异性分布。通常通过前药残基改善潜在活性组分的性质(J.Med.Chem.47,2393-2404,2004)，且为了达到最佳的作用曲线，根据活性组份的性质、适应症、作用靶点与给药途径等特点，设计合理的前药残基以及理想的释放机制是十分必要的。
激酶类小分子靶向抗肿瘤药物虽然已有几个药物上市，但是对激酶类抗肿瘤药物的前药的研究一直都在进行中。例如AstraZeneca公司研发的Syk激酶抑制剂Fostamatinib目前处于三期临床实验，主要用于治疗淋巴瘤、实体瘤和风湿性关节炎；AstraZeneca公司开发的另一类Aurora激酶抑制剂Barasertib，目前处于二期临床，主要用于治疗血液恶性肿瘤；ArQule公司研发处于一期临床的ARQ-736是选择性的B-Raf突变和MAP激酶抑制剂，用于治疗肿瘤等。
克里唑替尼(crizotinib，CTB)，化学名为3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺，是美国辉瑞公司开发的一种间变性淋巴瘤激酶(ALK)口服抑制剂，2011年8月首次在美国上市(Nat.Rev.Drug Discov.10,895-896,2011)。该药临床主要用于间变性淋巴瘤(ALK)阳性的局部晚期或转移非小细胞肺癌(NSCLC)患者的治疗。克里唑替尼是第一个对间变性淋巴瘤激酶进行靶向治疗的药物，对晚期ALK阳性非小细胞肺癌患者的客观缓解率达到50％至61％。克里唑替尼的化学结构如式(Ⅰ)所示：
Crizotinib单次250mg口服给药后，绝对生物利用度是43％，但相对于伊马替尼、舒尼替尼等仍有一定差距。克里唑替尼化合物已在CN1777427、CN101023064中公开，但由于吡啶环上的氨基是活性位点(J.Med.Chem.54,6342-6363,2011)，目前现有技术中均没有对吡啶环上的氨基进行修饰的报道。本发明人意外的发现，通过对活性位点吡啶环上的氨基进行修饰获得克里唑替尼前药，能够提高克里唑替尼的生物利用度，从而完成了本发明。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种通式(Ⅱ)所示的化合物或其立体异构体、或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物：
其中，
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环，环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R3选自氢、取代或未取代C1–C12的饱和或不饱和的烃基、取代或未取代的苯基或杂芳基、取代或未取代的烷酰氧基、取代或未取代的磷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基或杂芳酰氧基，上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6炔基。
本发明化合物可以含有不对称原子，在这种情形下，本发明化合物包括外消旋物和各个R和S对映异构体，而且当存在一个以上不对称碳原子的情形，包括各个非对映异构体、它们的外消旋体和各个对映异构体。
优选的本发明化合物是：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃或芳环，环上的取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
R3选自氢、取代或未取代C1-C12的烷基、取代或未取代的苯基或杂芳基、取代或未取代的C2-C12烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基，上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
进一步优选的本发明化合物是：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、异戊基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、单取代或多取代的苯基，取代基选自卤素、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R3选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、异戊基、苯甲酰基、对氟苯甲酰基、乙酰氧基、丙酰氧基、正丁酰氧基、异丁酰氧基、正戊酰氧基、异戊酰氧基、苯甲酰氧基。
更进一步优选的本发明化合物是：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成苯基、被卤素单取代或多取代的苯基；
R3选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、乙酰氧基、丙酰氧基、正丁酰氧基、异丁酰氧基。
本发明特别优选的化合物是：
A.N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
B.N-丙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
C.N-异丁酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
D.N-正丁酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
E.N-正戊酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
F.N-甲氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
G.N-乙氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
H.N-正丙氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
I.N-异丙氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
J.N-异丁氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
K.N-正丁氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
L.N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
M.N-苯甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
N.N-对氟苯甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
O.N-乙酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
P.N-丙酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
Q.N-正丁酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
R.N-异丁酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
本发明更优选的化合物是：
A.N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
L.N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺、
O.N-乙酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
本发明还提供了制备式(Ⅱ)化合物所涉及的中间体，如下述式(2)、式(4)、式(5)所示：
式(2)中，Xm，R1，R2，R3定义如下所述：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环，环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R3选自氢、取代或未取代C1–C12的饱和或不饱和的烃基、取代或未取代的苯基或杂芳基、取代或未取代的烷酰氧基、取代或未取代的磷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基或杂芳酰氧基，上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6炔基。
式(4)中，Xm，R1，R2，R3定义如下所述：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环，环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R3选自氢、取代或未取代C1-C12的饱和或不饱和的烃基、取代或未取代的苯基或杂芳基，上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6炔基。
式(5)中，Xm，R1，R2定义如下所述：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、硝基、氰基、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环；环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
本发明还涉及式(2)、式(4)、式(5)化合物在制备通式(Ⅱ)所示的化合物中的用途。
本发明还提供了通式(Ⅱ)所示的化合物的制备方法，所述的反应物在反应过程中，手性碳的构型保持不变。其具体反应路线如下：
路线一：
使式(1)所示的原料与式(A)所示的酰氯反应，得到式(2)中间体；式(2)中间体脱除Boc保护基，得到式(Ⅱ)所示的化合物。
具体反应步骤如下：
1.式(1)所示的原料与式(A)所示的酰氯、碱在溶剂中生成式(2)化合物。所述的碱选自三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶，优选为三乙胺；式(1)化合物与式(A)酰氯的投料摩尔比为1:1～1:1.5，优选为1:1.1；式(1)原料与碱的投料摩尔比为1:1～1:10，优选为1:5～1:6；溶剂选自极性非质子溶剂，优选为二氯甲烷；反应温度为-10～50℃，优选为20～30℃；反应时间为1～12小时，优选为1～5小时。
2.化合物(2)在溶剂中与酸反应得到终产物(Ⅱ)。所述的酸选自氯化氢溶液或三氟乙酸，优选为氯化氢溶液，特别优选浓度为4N的氯化氢溶液；溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或其两种以上溶剂的混合溶剂，优选为二氧六环或二氯甲烷；反应温度为-10～50℃，优选为0～25℃；反应时间为10～60分钟，优选为15～30分钟。
路线二：
使式(3)所示的原料与式(A)所示的酰氯反应，得到式(4)中间体；然后使式(4)中间体与1-(4-N-Boc-哌啶基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(式(C))反应，得到式(2)中间体；式(2)中间体脱除Boc保护基，得到式(Ⅱ)所示的化合物。
具体反应步骤如下：
1.5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺(3)与酰氯(A)、碱在溶剂中生成(4)。所述的碱选自三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶，优选为三乙胺；式(3)化合物与酰氯(A)的投料摩尔比为1:1～1:1.5，优选为1:1.1；式(3)化合物与碱的投料摩尔比为1:1～1:10，优选为1:5～1:9；溶剂选自极性非质子溶剂，优选为二氯甲烷；反应温度为-10～50℃，优选为20～30℃；反应时间为1～12小时，优选为1～6小时。
2.式(4)化合物与式(C)化合物在碱与催化剂存在下在溶剂中反应生成化合物(2)。所述的碱选自碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐，优选为碳酸盐，特别优选为碳酸铯；所述的催化剂选自醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基膦钯、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、二氯二三苯基膦钯、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，优选为二氯二三苯基膦钯；式(C)化合物与式(4)化合物的投料摩尔比为1:0.9～1:1.3，优选为1:1～1:1.2；式(4)化合物与碱的投料摩尔比为1:1～1:4，优选为1:1～1:2；催化剂的使用量为催化量，优选为3％～10％；溶剂选自极性非质子性溶剂，优选为N,N-二甲基甲酰胺；反应温度为0～130℃，优选为60～90℃；反应时间为10～24小时，优选为10～16小时。
3.化合物(2)在溶剂中与酸反应得到终产物(Ⅱ)。所述的酸为氯化氢溶液或三氟乙酸，优选为氯化氢溶液，特别优选浓度为4N的氯化氢溶液；溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或其两种以上溶剂的混合溶剂，优选为二氧六环；反应温度为-10～50℃，优选为0～25℃；反应时间为10～60分钟，优选为15～30分钟。
上述路线一与路线二中，
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基；R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环；环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
R3选自氢、取代或未取代C1-C12的饱和或不饱和的烃基、取代或未取代的苯基或杂芳基；上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6炔基。
上述路线一中，在X不是O的情况下，也可用式(B)化合物代替式(A)化合物，
使原料(1)与式(B)化合物反应，得到中间体(2)，如路线三所示：
路线三：
具体反应步骤如下：
化合物(1)与相应的酸酐(B)反应生成(2)。其中，以酸酐(B)为反应溶剂；反应温度为0～100℃，优选为40～60℃；反应时间为1～5小时，优选为2～3小时。
上述路线二中，在X不是O的情况下，也可用式(B)化合物代替式(A)化合物，使原料(3)与式(B)化合物反应，得到中间体(4)，如路线四所示：
路线四:
具体反应步骤如下：
5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺(3)与酸酐(B)反应生成(4)。其中，以酸酐(B)为反应溶剂；反应温度为0～100℃，优选为40～60℃；反应时间为1～5小时，优选为1.5～3小时。
路线五：
通式(Ⅱ)中，当X、m、R1、R2、R3定义如下所述时，可以采用路线五所示的方法制备通式(Ⅱ)所示的化合物：
X是O或CH2；
m是0或1；
R1、R2选自相同或不同的基团，各自独立地是氢、卤素、C1-C6的饱和或不饱和的链烃基、C1-C6的饱和或不饱和的环烃基。R1与R2也可存在于同一个环中，共同构成3-6元环，该3-6元环可以是取代或未取代的环烷烃、芳环或杂芳环；环上的取代基可选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
R3选自取代或未取代的烷酰氧基、取代或未取代的磷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基或杂芳酰氧基。上述取代基选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、苯基或杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、C1-C6炔基。
具体反应步骤如下：
1.使原料(1)与式(D)化合物、碱在适当的溶剂中反应，生成式(5)化合物。所述的碱选自三乙胺、吡啶、二异丙基乙基胺，优选为吡啶；原料(1)与式(D)化合物的投料摩尔比为1:1～1:1.5，优选为1:1.1；原料(1)与碱的投料摩尔比为1:1～1:10，优选为1:5～1:6；溶剂选自极性非质子溶剂，优选为二氯甲烷；反应温度为-10～50℃，优选20～30℃；反应时间为1～5小时，优选为1.5～3小时。
2.将步骤1得到的式(5)化合物溶于适当的溶剂，加入相应的羧酸盐或磷酸盐(E)，反应生成式(2)化合物。式(5)化合物与羧酸盐或磷酸盐(E)的投料摩尔比为1:1.1～1:2，优选为1:1.3～1:1.5；所述溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮，优选为N,N-二甲基甲酰胺；反应温度为30～100℃，优选40～60℃；反应时间为1～5小时，优选为2～3.5小时。
3.步骤2得到的式(2)化合物与路易斯酸在适当的溶剂中反应，生成式(Ⅱ)所示的化合物。所述的路易斯酸选自三氯化铝、四氯化钛、溴化锌、三氯化铈，优选为溴化锌；式(2)化合物与路易斯酸的投料摩尔比为1:1.2～1:3，优选为1:1.3～1:2.5；溶剂选自极性非质子溶剂，优选为二氯甲烷；反应温度为-10～50℃，优选20～30℃；反应时间为10～24小时，优选为10～16小时。
本发明制备方法的原料可根据现有技术制备得到，例如：5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺可按照Organic Process Research&Development,2011,15(5):1018-1026或WO2007066187等文献所公开的方法制备得到；3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺可按照Journal of Medicinal Chemistry,2011，54(18)：6342-6363或WO2010003992等文献所公开的方法制备得到。
本发明还提供通式(Ⅱ)所示的化合物或其立体异构体、或其药学可接受的盐、溶剂化物或水合物在制备治疗间变性淋巴瘤激酶基因表达异常的局部晚期或转移性非小细胞肺癌药物中的用途。
通过体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用与大鼠体内药物动力学实验对本发明通式(Ⅱ)所示的化合物进行评价，结果表明，与克里唑替尼相比，通式(Ⅱ)所示的化合物体外抗肿瘤细胞增殖抑制活性明显降低，在体内可以转化为克里唑替尼，提高克里唑替尼的生物利用度。
具体实施方式：
下面通过实施例进一步详述本发明，但本发明并不限于下述的实施例。
实施例1
N-乙酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物通过酰氯法制备得到。将500mg 5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺溶于15ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入1ml三乙胺继续搅拌5分钟后，滴加1.1当量的乙酰氯后，升温至室温反应5小时。加入水终止反应，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:4柱层析，得到黄白色固体400mg，收率72％。
1HNMR(500MHz,CDCl3)δ:8.20(s,1H),7.69(d,1H),7.34(dd,1H),7.10(m,1H),6.86(d,1H),6.01(q,1H),2.47(s,3H),1.84(d,3H)。
实施例2
N-乙酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物通过酸酐法制备得到。将500mg 5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺加入到10ml乙酸酐中，加热到50℃反应2小时。反应结束后，将反应液浓缩至干，加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液，有机层用饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:4柱层析，得到黄白色固体500mg，收率90％。
实施例3
N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例1或实施例2的方法制备得到N-乙酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺。
将300mg N-乙酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺和230mg 1-(4-N-Boc-哌啶基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(C)溶于5ml DMF中，加入含300mg碳酸铯的1ml水溶液中，用氮气置换空气三次，加入20mg Pd(PPh3)2Cl2，再用氮气置换空气三次，反应混合物升温到75℃搅拌12小时。反应结束后，降至室温，加入20ml乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，合并的乙酸乙酯层以无水硫酸钠干燥后浓缩，粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:1柱层析纯化，得到白色泡沫状固体330mg，收率78％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.21(s,1H),7.78(d,1H),7.58(s,1H),7.50(s,1H),7.32(dd,1H),7.07(m,1H),6.89(d,1H),6.09(q,1H),4.27(m,3H),2.92(m,2H),2.47(s,3H),2.16(m,2H),1.94(m,2H),1.88(d,3H),1.50(s,9H)。
实施例4
N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物以3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺为原料，通过酰氯法制备得到。将100mg 3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺(1)溶于5ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入2滴三乙胺继续搅拌5分钟后，滴加1.1当量的乙酰氯后，升温至室温反应5小时。加入水终止反应，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:1柱层析，得到白色泡沫状固体70mg，收率65％。
实施例5
N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物以化合物(1)为原料，通过酸酐法制备得到。将100mg 3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺(1)加入到5ml乙酸酐中，加热到50℃反应3小时。将反应液浓缩至干，加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液，有机层用饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:1柱层析，得到白色泡沫状固体100mg，收率93％。
实施例6
N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按实施例3、实施例4或实施例5的方法制备得N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
将得到的N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺100mg溶于少量二氯甲烷中，在0℃搅拌，加入4N HCl的二氧六环溶液2ml，搅拌20分钟后，减压除去溶剂，加入10ml水，以碳酸氢钠固体调节PH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，柱层析得到白色固体71mg，收率85％。
MS m/e 492(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.11(s,1H),7.92(s,1H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.10(m,1H),4.21(m,1H),3.26(m,2H),2.78(m,2H),2.49(s,3H),2.17(m,2H),1.90(m,2H),1.87(d,3H),1.63(m,1H)。
实施例7
N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按实施例3、实施例4或实施例5的方法制备得N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
将100mg N-乙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺溶于少量四氢呋喃中，在0℃搅拌，加入2滴三氟乙酸，搅拌20分钟后，TLC检测反应完全后，减压除去溶剂，加入10ml水，以碳酸氢钠固体调节PH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，柱层析得到乙酰基化合物66mg，收率80％。
MS m/e 492(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.11(s,1H),7.92(s,1H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.10(m,1H),4.21(m,1H),3.26(m,2H),2.78(m,2H),2.49(s,3H),2.17(m,2H),1.90(m,2H),1.87(d,3H),1.63(m,1H)。
实施例8
N-丙酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为丙酰氯或丙酸酐，得到标题化合物72mg白色固体，收率85％。
MS m/e 506(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.12(s,1H),8.07(s,1H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.13(q,1H),4.22(m,1H),3.27(m,2H),2.78(m,3H),2.49(s,2H),2.17(m,2H),1.94(m,5H),1.26(t,3H)。
实施例9
N-异丁酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为异丁酰氯或异丁酸酐，得到标题化合物白色固体68mg，收率78％。
MS m/e 520(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.13(s,1H),8.07(s,1H),7.58(m,1H),7.51(s,1H),7.31(m,1H),7.09(m,1H),6.90(s,1H),6.11(q,1H),4.23(m,1H),3.27(m,2H),2.81(m,3H),2.51(s,1H),2.18(m,2H),1.91(m,5H),1.29(d,6H)。
实施例10
N-正丁酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为正丁酰氯或正丁酸酐，得到标题化合物白色固体65mg，收率75％。
MS m/e 520(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.12(s,1H),8.07(s,1H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.13(q,1H),4.23(m,1H),3.27(m,2H),2.78(m,3H),2.51(s,2H),2.18(m,2H),1.91(m,5H),1.56(m,2H),1.27(t,3H)。
实施例11
N-正戊酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为正戊酰氯或正戊酸酐，得到标题化合物类白色固体71mg，收率80％。
MS m/e 534(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.13(s,1H),8.06(s,1H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.33(m,1H),7.06(m,1H),6.91(s,1H),6.14(q,1H),4.23(m,1H),3.27(m,2H),2.77(m,3H),2.51(s,2H),2.20(m,2H),1.91(m,5H),1.59(m,4H),1.25(t,3H)。
实施例12
N-苯甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为苯甲酰氯或苯甲酸酐，得到标题化合物黄白色固体76mg，收率83％。
MS m/e 554(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.11(s,1H),8.03(m,2H),7.92(s,1H),7.63(m,3H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.10(q,1H),4.21(m,1H),3.26(m,2H),2.78(m,2H),2.49(s,1H),2.17(m,2H),1.90(m,2H),1.78(m,3H)。
实施例13
N-对氟苯甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例6或实施例7的方法和反应条件，将反应中采用的乙酰氯或乙酸酐分别替换为对氟苯甲酰氯或对氟苯甲酸酐，得到标题化合物白色固体66mg，收率70％。
MS m/e 572(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.13(s,1H),8.05(m,2H),7.92(s,1H),7.62(m,2H),7.58(m,1H),7.53(s,1H),7.31(m,1H),7.06(m,1H),6.93(s,1H),6.12(q,1H),4.21(m,1H),3.28(m,2H),2.78(m,2H),2.51(s,1H),2.17(m,2H),1.90(m,2H),1.79(m,3H)。
实施例14
N-正戊氧基甲酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物通过酰氯法制备得到。将500mg 5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺溶于20ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入1ml吡啶继续搅拌5分钟后，滴加1.1当量的氯甲酸正戊酯后，升温至室温反应1小时。加入水终止反应，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:4柱层析，得到黄白色固体480mg，收率74％。
1HNMR(500MHz,CDCl3)δ:8.05(s,1H),7.69(d,1H),7.34(dd,1H),7.10(m,1H),6.86(d,1H),6.01(q,1H),4.21(t,2H),1.85(d,3H),1.71(m,2H),1.39(m,4H),0.93(t,3H)。
实施例15
N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例14的方法制备得到N-正戊氧基甲酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺。
将320mgN-正戊氧基甲酰基-5-溴-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-2-吡啶胺和230mg 1-(4-N-Boc-哌啶基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(C)溶于5ml DMF中，加入含300mg碳酸铯的1ml水溶液中，用氮气置换空气三次，加入20mg Pd(PPh3)2Cl2，再用氮气置换空气三次，反应混合物升温到75℃搅拌12小时，反应结束后，降至室温，加入20ml乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，合并的乙酸乙酯以无水硫酸钠干燥后浓缩，粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:1柱层析，得到类白色泡沫状固体340mg，收率79％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.06(s,1H),7.78(d,1H),7.58(s,1H),7.50(s,1H),7.32(dd,1H),7.07(m,1H),6.89(d,1H),6.09(q,1H),4.23(t,2H),4.27(m,3H),2.92(m,2H),2.16(m,2H),1.94(m,2H),1.88(d,3H),1.71(m,2H),1.50(s,9H),1.41(m,4H),0.97(t,3H)。
实施例16
N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
本实施例化合物还可以3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺为原料，通过酰氯法制备得到。将100mg 3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺(1)溶于5ml二氯甲烷中，冷却至0℃，滴加1.1当量的氯甲酸正戊酯后，升温至室温反应1小时。加入水终止反应，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品用乙酸乙酯:石油醚＝1:1柱层析，得到类白色固体95mg，收率78％。
实施例17
N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺的制备
按照实施例15或实施例16的方法制备得到N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
将得到的100mg N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺溶于少量二氯甲烷中，在0℃搅拌，加入4N HCl的二氧六环溶液2ml，搅拌20分钟后，反应结束，减压除去溶剂，加入10ml水，以碳酸氢钠固体调节PH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，柱层析得到白色固体68mg，收率80％。
另一种制备标题化合物的方法为：
按照实施例15或实施例16的方法制备得到N-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
将100mgN-正戊氧基甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺溶于少量四氢呋喃中，在0℃搅拌，加入2滴三氟乙酸，搅拌20分钟后，反应结束后，减压除去溶剂，加入10ml水，以碳酸氢钠固体调节PH＝10，使用二氯甲烷萃取后干燥，浓缩，柱层析得到白色固体59mg，收率70％。
MS m/e 564(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.23(s,1H),7.78(s,1H),7.61(m,1H),7.58(s,1H),7.35(m,1H),7.06(m,1H),7.02(s,1H),6.15(m,1H),4.35(m,1H),4.15(m,2H),3.37(m,2H),2.89(m,2H),2.17(m,2H),1.90(m,2H),1.87(d,3H),1.63(m,3H),1.39(m,2H),1.26(m,2H),0.95(m,3H)。
实施例18
N-氯甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺
将1.2g 3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺溶于10ml二氯甲烷中，加入1ml吡啶后，滴加1.1当量的氯甲酸氯甲酯。室温反应2h。加入水终止反应，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥。用乙酸乙酯/石油醚＝1/2柱层析，得到白色泡沫状固体700mg，收率40％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.26(s,1H),7.78(d,1H),7.60(s,1H),7.50(s,1H),7.32(dd,1H),7.08(m,1H),6.89(d,1H),6.07(q,1H),5.78(s,2H),4.27(m,3H),2.94(m,2H),2.16(m,2H),1.94(m,2H),1.89(d,3H),1.53(s,9H)。
实施例19
N-乙酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺
按照实施例18的方法制备得到N-氯甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺。
将700mg N-氯甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺溶于5ml DMF中，加入150mg乙酸钾，加热至50℃反应3h。反应结束后，加入水终止反应；乙酸乙酯萃取后，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得N-乙酰氧基甲氧甲酰基-3-[(1R)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(4-N-Boc-哌啶基)-1H-吡唑-4-基]-2-吡啶胺400mg，收率55％。
将上个步骤得到的化合物溶于10ml二氯甲烷中，加入200mg溴化锌，室温反应12h。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠，二氯甲烷萃取，浓缩。用甲醇/二氯甲烷＝1/40过柱，得黄白色固体180mg，收率53％。
MS m/e 566(M+1).1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:8.26(s,1H),7.78(s,1H),7.60(m,1H),7.55(s,1H),7.35(m,1H),7.09(m,1H),7.02(s,1H),6.84(s,2H),6.15(m,1H),4.35(m,1H),4.15(m,2H),3.37(m,2H),2.44(s,3H),2.18(m,2H),1.90(m,2H),1.84(d,3H),1.69(m,1H)。
实施例20
1、体外对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用：
以人白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、低分化胃癌细胞BGC-823为受试细胞株，用MTS法测试化合物的抗肿瘤活性。化合物克里唑替尼及实施例6、17、19的化合物以二甲基亚砜溶解，用含0.1％二甲基亚砜的培养液为空白对照。用四参数拟合计算半数抑制浓度(IC50)。结果如表1所示。
表1：
2、大鼠体内药物动力学实验：
取健康的SD雄性大鼠12只，体重200～220g,每天定时饲以大鼠标准配方颗粒饲料，实验前禁食12h，给药后4h恢复供食，实验前后和实验过程中均自由饮水。随机分成4组，第一组单剂量灌胃给药克里唑替尼；第二组单剂量灌胃给药实施例6化合物；第三组单剂量灌胃给药实施例17化合物；第四组单剂量灌胃给药实施例19化合物。4组大鼠的给药剂量均按摩尔浓度折算为含克里唑替尼50mg/kg，分别于给药前(0h)和给药后0.5、1、2、4、6、8、10、24h由眼底静脉丛取血约0.2～0.3ml，肝素抗凝，离心分离血浆，准确量取0.1ml至EP管中，加入1.2ml乙酸乙酯，用涡旋混合器高速混匀5min，离心5min(8000r.min-1)，收集上清液，于30℃氮吹仪上用氮气吹干溶剂，残余物用流动相100μl溶解，用涡旋混合器高速混匀1min，离心5min(14000r.min-1)，转移80μl上清液至进样瓶，HPLC进样10μl检测，记录色谱图。结果如表2所示
液相检测条件如下：
液相色谱仪：岛津超快速高分离液相色谱仪Prominence UFLC XR
分析柱：Shim-pack XR-ODSⅡ(2.0*75mm 2.2um)
流动相：含5mM甲酸铵的0.1％甲酸溶液/乙腈＝80/20(V/V)
流速：0.25ml/min 柱温：40℃
进样体积：10ul 分析时间：10.5min
PDA波长范围：260～275nm 检测池温度：40℃
表2：