一种石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法与流程

技术特征：

1.一种石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述方法步骤如下：

一、微生物菌株的筛选：

(1)将油田土壤溶于无菌水中，取上清液，将其接种于基础培养基中培养2～4代，再接种于以二苯并噻吩为唯一硫源的选择性培养基中培养4～5代，然后涂布于以二苯并噻吩为唯一硫源的选择性分离平板上培养；

(2)挑选圈较大的菌落，在接种选择性培养基的三角瓶中进行选择培养2～3天后进行初筛，用HPLC测定二苯并噻吩的含量；

(3)根据测定结果，复筛得到一种脱二苯并噻吩脱除率高、遗传稳定性好的脱除二苯并噻吩菌株；

二、微生物菌株的培养：

(1)种子培养

250mL三角瓶中装入基础培养基100mL，将复筛得到的菌株接种到基础培养基中，接种量为1mL/100mL，且菌株浓度达到10⁹个/mL，于25～35℃在有氧条件下震荡，培养48～60h；

(2)选择培养

按照1～5％的接种量将培养好的种子接入选择性培养基中震荡培养，培养温度为25～35℃，培养时间为1～3d。

2.根据权利要求1所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述油田土壤为高硫油田土壤。

3.根据权利要求1所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述基本培养基的组成为：葡萄糖10.0g/L、NH₄Cl 2.0g/L、KH₂PO₄ 6.3g/L、K₂HPO₄ 8.0g/L、MgCl₂·6H₂O 2.0g/L、微量元素溶液母液1.0mL/L、维生素溶液母液1.0mL/L，pH值7.0～7.2。

4.根据权利要求3所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述葡萄糖替换为麦芽糖或果糖。

5.根据权利要求1所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述选择性培养基的组成为：可溶性淀粉2.0g/L、二苯并噻吩50mg/L、NH₄Cl 2.0g/L、KH₂PO₄ 6.3g/L、K₂HPO 8.0g/L、MgCl₂·6H₂O 2.0g/L、微量元素溶液母液1.0mL/L、维生素溶液母液1.0mL/L，pH值7.0～7.2。

6.根据权利要求5所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述可溶性淀粉替换为葡萄糖、麦芽糖或果糖。

7.根据权利要求3或5所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述微量元素母液含有0.5g/L FeCl₂·4H₂O、0.5g/L ZnCl₂、0.5g/L MnCl₂·4H₂O、0.1g/L NaMoO₄·2H₂O、0.05g/L CuCl₂、0.05g/L NaWO₄·2H₂O和120mmol/L HCl。

8.根据权利要求3或5所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述维生素母液含有400mg/L泛酸钙、200mg/L肌醇、400mg/L烟酸、400mg/L盐酸吡哆醇、200mg/L对氨基甲苯和0.5mg/L维生素B12。

9.根据权利要求1、3或5所述的石油燃料脱硫微生物的筛选和培养方法，其特征在于所述基础培养基和选择性培养基的灭菌温度为115～121℃，灭菌时间为15～20min。