一种基于发卡结构的目标区域捕获方法及其应用与流程

文档序号:11126250阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,包括以下步骤:

第1步、向包含目标捕获区域的基因组试样中,加入至少一条上游引物,进行单向扩增反应并形成发卡结构;

第2步、将第1步的单向扩增产物置于冰上,冷却;

第3步、采用单链DNA外切酶对第2步的非特异性扩增产物进行消化,并利用磁珠富集法进一步纯化,收集具有发卡结构的目标捕获序列;

第4步、向具有发卡结构的目标捕获序列中加入至少一条下游引物,进行富集扩增。

2.根据权利要求1所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述上游引物5’端为目标捕获区域下游的反向互补序列,3’端为目标捕获区域上游特异性扩增序列;其中,上游引物5’端反向互补区域的Tm值大于55℃。

3.根据权利要求2所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述上游引物5’端反向互补区域的Tm值为70~80℃,且大于3’端特异性扩增序列的Tm值。

4.根据权利要求1所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述单链DNA外切酶具有3’-5’核酸外切酶活性或5’-3’核酸外切酶活性。

5.根据权利要求1所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述单链DNA外切酶为核酸外切酶I、核酸外切酶T或核酸外切酶RecJ。

6.根据权利要求1所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述下游引物为上游引物中5’端互补序列的部分序列。

7.根据权利要求1所述的一种基于发卡结构的目标区域捕获方法,其特征在于,所述下游引物为上游引物5’端互补序列中靠近3’端的序列。

8.权利要求1~7任一所述方法在核酸检测领域中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述方法用于检测人BRCA1/2基因全部外显子。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述方法中采用的上游引物为SEQ ID NO:1~41,下游引物为SEQ ID NO:42~82。

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