大肠癌纺锤体组装检验点检测用试剂体系和试剂盒及应用的制作方法

文档序号:12249853阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大肠癌纺锤体组装检验点用试剂体系,其特征在于,

所述试剂体系包括用于BubR1基因检测的试剂,用于Mad1基因检测的试剂,用于Mad2基因检测的试剂,用于AURKB基因检测的试剂,用于PlK1基因检测的试剂和用于Cdc20基因检测的试剂。

2.根据权利要求1所述的试剂体系,其特征在于,

所述用于BubR1基因检测的试剂包括用于BubR1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.7所示;

所述用于Mad1基因检测的试剂包括用于Mad1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.8所示;

所述用于Mad2基因检测的试剂包括用于Mad2检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.9所示;

所述用于AURKB基因检测的试剂包括用于AURKB检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.10所示;

所述用于PlK1基因检测的试剂包括用于PlK1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.11所示;

所述用于Cdc20基因检测的试剂包括用于Cdc20检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.12所示。

3.根据权利要求1或2所述的试剂体系,其特征在于,

所述用于BubR1基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.1a和SEQ ID NO.1b;

所述用于Mad1基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.2a和SEQ ID NO.2b;

所述用于Mad2基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.3a和SEQ ID NO.3b;

所述用于AURKB基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.4a和SEQ ID NO.4b;

所述用于PlK1基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.5a和SEQ ID NO.5b;

所述用于Cdc20基因检测的试剂包括扩增引物序列SEQ ID NO.6a和SEQ ID NO.6b。

4.一种用于大肠癌纺锤体组装检验点靶点基因检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括用于BubR1基因检测的试剂,用于Mad1基因检测的试剂,用于Mad2基因检测的试剂,用于AURKB基因检测的试剂,用于PlK1基因检测的试剂和用于Cdc20基因检测的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,

所述用于BubR1基因检测的试剂包括用于BubR1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.7所示;

所述用于Mad1基因检测的试剂包括用于Mad1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.8所示;

所述用于Mad2基因检测的试剂包括用于Mad2检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.9所示;

所述用于AURKB基因检测的试剂包括用于AURKB检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.10所示;

所述用于PlK1基因检测的试剂包括用于PlK1检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.11所示;

所述用于Cdc20基因检测的试剂包括用于Cdc20检测的DNA探针,其序列如SEQ ID NO.12所示。

6.根据权利要求4或5所述的试剂盒,其特征在于,包括用于BubR1基因的扩增引物序列SEQ ID NO.1a和SEQ ID NO.1b;用于Mad1基因的扩增引物序列SEQ ID NO.2a和SEQ ID NO.2b;用于Mad2基因的扩增引物序列SEQ ID NO.3a和SEQ ID NO.3b;用于AURKB基因的扩增引物序列SEQ ID NO.4a和SEQ ID NO.4b;用于PlK1基因的扩增引物序列SEQ ID NO.5a和SEQ ID NO.5b;用于Cdc20基因的扩增引物序列SEQ ID NO.6a和SEQ ID NO.6b。

7.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中的试剂包括样品DNA提取组件、PCR扩增组件、PCR产物纯化组件和DNA测序反应组件。

8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR产物纯化组件包括ddH2O、SAP酶和ExoI酶。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中DNA测序反应组件包括ddH2O、EDTA溶液、乙醇溶液、去离子甲酰胺溶液和BigDyemix试剂。

10.根据权利要求7-9中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中的样品DNA提取组件包括粪便裂解液、硅胶膜结合液、硅胶膜洗涤液和蛋白沉淀液。

11.根据权利要求10所述的试剂盒,其特征在于,所述粪便裂解液包括:30-100mmol/LTris-Cl、3-10mmol/L EDTA、0.6-5mmol/L NaCl和0.1-1.0%(W/V)十二烷基硫酸钠。

12.根据权利要求10或11所述的试剂盒,其特征在于,所述硅胶膜结合液包括3-10mol/L盐酸胍。

13.根据权利要求10-12任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述硅胶膜洗涤液包括:1-5mmol/L Tris-Cl、0.5-2mmol/L EDTA、1-5mmol/L NaCl和体积含量为30-50%的乙醇。

14.根据权利要求10-13任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述蛋白沉淀液包括:0.5-2mol/L乙酸钾和体积含量为5-20%冰乙酸。

15.用于BubR1基因检测的试剂,用于Mad1基因检测的试剂,用于Mad2基因检测的试剂,用于AURKB基因检测的试剂,用于PlK1基因检测的试剂和用于Cdc20基因检测的试剂在制备检测大肠癌纺锤体组装检验点的试剂体系和试剂盒中的应用。

16.根据权利要求15所述的应用,其特征在于,所述试剂包括PCR扩增用试剂、限制性内切酶酶切用试剂、PCR产物纯化用试剂。

17.根据权利要求15或16所述的应用,其特征在于,所述试剂的作用对象为粪便。

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