本发明属于微生态制剂领域，具体而言，涉及一种用于毛皮动物的复合微生态制剂，尤其涉及一种用于水貂的复合微生态制剂及其应用。
背景技术：
毛皮动物指利用毛皮产生经济效益的动物，主要指水貂、狐狸、貉子和獭兔。随着人们对貂皮服饰及配饰多元化的需求和时尚化的追求，近些年我国水貂养殖数量逐年增加，但养殖技术水平较低，养殖场(户)长期在饲料中添加抗生素，再加上不注重养殖环境的控制，造成污染严重，不能使毛皮动物完全抵御病菌、病毒的侵染，使毛皮动物长期处于亚健康状态，严重影响了水貂的毛皮质量且降低了繁殖性能，极大地减少了养殖效益。
目前，有些养殖场(户)应用猪、鸡的饲料添加剂配方或更改部分成分含量，更改产品包装，在市场上销售来饲喂水貂。一方面水貂与猪、鸡的生理结构有差异，另一方面不了解水貂营养需求完全不同于猪、鸡，这种饲料添加剂产品完全不能满足水貂生产需要，长期饲喂会造成水貂营养代谢类疾病发生，导致严重的经济损失。另外，目前市场上有貂、狐、貉专用添加剂产品，是相同的配方组成和成分含量，即三种动物应用同一饲料添加剂产品。然而，由于水貂与狐、貉是不同属的动物，消化生理结构和采食习惯完全不同，无论从体重和生理需求上都是存在很大差异的，所以应用这种饲料添加剂产品是不能针对性的满足水貂生产需要。
技术实现要素：
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种专用于毛皮动物的复合微生态制剂，尤其提供一种特别适用于水貂的复合微生态制剂及其应用。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验筛选研究并不懈努力，最终获得了如下技术方案：
一种用于毛皮动物的复合微生态制剂，该制剂由菌粉和载体组成，所述的菌粉由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732按照重量比1:(2-3)：(3-5)配制而成。
优选地，如上所述用于毛皮动物的复合微生态制剂，其中的菌粉由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732按照重量比1:2.5:5配制而成。
优选地，如上所述用于毛皮动物的复合微生态制剂，其中的载体选自土豆、麸皮、小麦粉、牛肉膏等的一种或多种。
另外，本发明还提供了上述复合微生态制剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
A、活化保存斜面菌种：用pH为7-7.5、100-130℃高压灭菌20分钟-40分钟的LB培养基分别培养嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC10732，在30-38℃培养条件下培养12小时-20小时；
B、一级液体扩大培养：对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732分别进行的一级液体扩大培养，接种量10％-20％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732分别进行二级液体扩大培养,接种量10％-20％；
D、配制复合微生态制剂：将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、芽孢杆菌发酵液分别干燥得菌粉，按重量比为1:(2-3)：(3-5)的比例混合并加入载体后，得到复合微生态制剂。
本发明人通过大量试验筛选活性菌及其用量比，从而获得了一种用于毛皮动物的复合微生态制剂，其可以起到治养同步的目的，在治疗病毒性疾病的同时提高毛皮动物机体免疫力；可在一定范围内代替抗生素和化学抗病药物，达到真正的绿色生态养殖。因此，本发明还提供一种产品新用途，即：上述的复合微生态制剂在制备毛皮动物饲料添加剂中的应用。优选所述的毛皮动物为水貂。
下面结合试验说明本发明复合微生态制剂的安全性与治病防病效果：本发明复合微生态制剂在青岛农业大学实验室经大鼠急性毒性试验，实验组为50只大鼠，按0.6g/10g体重饲喂21天；空白对照组为50只大鼠，按照常规饲养。结论结果表明实验组大鼠全部存活,活动自如,毛发光滑,饮食正常,呼吸道、眼及口腔等处无分泌物外，未发现任何中毒症状，体重均有增加。与空白对照组比较，实验组的大鼠体重明显增加(P＜0.05)。21天观察期结束，将大鼠脱臼处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、小肠等脏器均未见明显异常表现。另外，大鼠胸腺系数和脾脏系数结果表明，实验组与空白对照组比较，实验组大鼠脾脏系数明显增加(P＜0.01)，提示本发明的复合微生态制剂具有免疫增强作用，属实际无毒类物质，安全度大。
大量实验研究表明，本发明的复合微生态制剂具有动态调节动物胃肠道菌群生态系统的作用，各菌复合后可协同提高饲料转化率、促进动物生长发育、增强毛皮动物免疫力、提高抗病菌和抗病毒的能力，进而取代抗生素防病、治病，减少兽药残留。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。另外，实施例中未注明具体技术操作步骤或条件者，均按照本领域内的文献所描述的常规技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：复合微生态制剂的制备
(1)活化保存斜面菌种：用pH为7.5、120℃高压灭菌30分钟的LB培养基分别培养嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，在32℃培养条件下培养16小时；
B、一级液体扩大培养：对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732分别进行的一级液体扩大培养(50L罐)，接种量15％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，分别进行二级液体扩大培养(500L罐)，接种量10％；
D、配制复合微生态制剂：将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、芽孢杆菌发酵液分别干燥得菌粉，按重量比为1:2.5:5的比例混合。取混合菌粉90kg，加入载体麸皮100kg，牛肉膏10kg后混匀，得到复合微生态制剂。
实施例2：复合微生态制剂的制备
(1)活化保存斜面菌种：用pH为7.0、120℃高压灭菌30分钟的LB培养基分别培养嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，在32℃培养条件下培养16小时；
B、一级液体扩大培养：对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，分别进行的一级液体扩大培养(50L罐)，接种量15％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，分别进行二级液体扩大培养(500L罐),接种量15％；
D、配制复合微生态制剂：将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、芽孢杆菌发酵液分别干燥得菌粉，按重量比为1:2.5:5的比例混合。取混合菌粉90kg，并加入载体麸皮100kg，牛肉膏10kg后混合，得到复合微生态制剂后。
实施例3：复合微生态制剂的制备
(1)活化保存斜面菌种：用pH为7.0、120℃高压灭菌30分钟的LB培养基分别培养嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，在32℃培养条件下培养16小时；
B、一级液体扩大培养：对嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，分别进行的一级液体扩大培养(50L罐)，接种量15％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188、伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii)CCTCC AY92055和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10732，分别进行二级液体扩大培养(500L罐),接种量15％；
D、配制复合微生态制剂：将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、芽孢杆菌发酵液分别干燥得菌粉，按重量比为1:2.5:5的比例混合。取混合菌粉90kg，并加入载体麸皮100kg，牛肉膏10kg后混合，得到复合微生态制剂。
为了更进一步描述水貂用复合微生态制剂对水貂体重、免疫力和肠道健康的影响，以下对水貂进行分组对照。
试验水貂，为大连黑，由青岛某农业科技有限公司毛皮动物养殖基地提供。选取150日龄仔貂60只，按性别和体重随机分成6组，每组5个重复，每重复2只，公母各半，试验从2016年4月20日起，5月24日结束，共计35天。每组小水貂分笼喂养，自由采食和饮水。
菌落计数采用平板计数法。在超净台内用经过高压的量筒取25mL菌液置于盛有250mL生理盐水的广口瓶内，充分摇匀成比例为1:10的稀释液。用容积为1.0mL的经过高压的吸管吸取1.0mL置于盛有9mL的生理盐水内，进行十倍稀释，重复上述操作直至菌液稀释倍数为109。用吸管吸取1.0mL的菌液置于经过高压、烘烤后的平皿内，同时将冷却至46℃左右的营养琼脂倒入平皿内，同时移动平皿使溶液充分混合。将平板置于恒温箱内培养24h计数，重复做三次。
免疫注射：将试验动物随机分成A、B、C、D、E、F六组，每组5个重复。对水貂进行免疫，第一次每只水貂注射等体积混合的抗原与弗氏完全佐剂0.1mL。一个星期后每只水貂注射等体积混合的抗原与弗氏不完全佐剂佐剂0.1mL，间隔一周后每只水貂重复注射等体积混合的抗原与弗氏不完全佐剂佐剂0.1mL。
(1)对水貂灌胃处理分组及剂量
表1：对试验水貂的不同处理方式
(2)不同试验组对水貂体重的影响
表2：试验期水貂的体重增长情况(单位：g)
备注：同一行中出现小写字母相同上标的表示差异不显著(P＞0.05)，具有不同小写字母的表示差异性显著(P＜0.05)。
结果分析：从表2中可以看出试验前水貂的体重基本一致。试验期间，对照组和试验组的水貂体重都有大幅增长，试验组水貂的体重普遍比对照组增长的快，差异显著(P＜0.05)。对试验前后水貂的体重增长情况进行分析，得出试验组水貂在试验前后的平均日增重比对照组增长的快，尤其是公貂，平均日增重达到了22.44g。
(3)不同试验组对水貂脏器指数的影响
表3：不同处理组小水貂的内脏指数
数据分析：用spss软件对水貂的内脏器官进行统计分析，采用多重比较的方法。
由表3得出，复合菌剂F组的水貂各内脏指数与对照组A组相比极显著(P＜0.01)且显著高于其他单菌组(P＜0.05)。
(4)ELISA试验结果分析
表4：不同处理小组水貂的血清法氏囊病毒抗体OD值
由表4与图1所示的，可以得出第一次测得的OD值除了E组之外其它试验组均比较接近，即在第一次免疫后水貂体内的抗体含量差异明显(P＞0.05)；第二、三次免疫后复合菌剂组OD数值明显高于其它试验组，说明其体内抗体含量与其它试验组相比数值升高的更大(P＜0.05)。
(5)不同试验组对水貂空肠的粘膜厚度、绒毛长度的影响
在光镜下观察得出，芽孢杆菌组、复合菌剂液组和对照组水貂空肠粘膜结构均比较完整，并且层次分明，肠绒毛完整整齐。可见有明显的支部，小肠粘膜上皮表面的纹状缘结构整齐均匀。与对照组相比，复合菌剂组小水貂空肠粘膜绒毛排列更加紧密，绒毛比较长。
本次试验结果表明，无论给水貂灌胃芽孢杆菌组、乳酸菌组、还是灌胃复合菌剂组均能促进水貂的增长，但是灌胃复合菌剂组的水貂体重在两周后与其它试验组相比远大于其它试验组。
(6)不同试验组对水貂内脏指数的影响
由试验可以得出复合菌剂组在促进小水貂内脏器官的生长方面与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。灌胃乳酸菌组、芽孢杆菌组和对脏器指数的影响与对照组相比差异显著(P＜0.05)。表明复合菌剂组对水貂的内脏指数方面效果更显著。
(7)不同试验组对法氏囊抗体效价的影响
本试验结果显示不同试验组的水貂抗体效价与对照组相比差异显著，但是复合菌剂组水貂的血清效价较对照组在第一次和第二次分别升高了29％和30％，与其它试验组相比数值变化较大。表明复合益生菌在增强抗体的效价方面效果更显著。
综上所述，本发明对水貂的生长增重，内脏器官的生长，鸡法氏囊抗体效价的升高以及肠道微绒毛的长度及肠壁厚度均有比较明显的促进作用，大幅度提高了水貂的性能。