一种猪H1N1亚型流感病毒血凝素重组蛋白的制备方法及该病毒抗体的液相芯片检测试剂盒与流程

文档序号:12399243阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1. 去除表达HA基因的信号肽的基因序列,利用HA-F和HA-R引物扩增HA基因;其中,HA-F和HA-R引物的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;

S2. 连接pMAL-c5X载体,获得pMAL-cHA重组质粒,转入原核表达菌诱导表达即可。

2. 根据权利要求1所述的猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法,其特征在于,S2所述诱导表达的条件为:IPTG 0.3mM,温度37℃,时间2小时。

3.权利要求1或2所述方法获得的猪流感病毒的血凝素重组蛋白。

4.权利要求3所述猪流感病毒的血凝素重组蛋白作为免疫原在制备检测猪流感病毒的试剂中的应用。

5.一种检测猪流感病毒的羧基化荧光微球46-HA,其特征在于,是将权利要求3所述猪流感病毒的血凝素重组蛋白与羧基化荧光微球046偶联获得。

6.权利要求5所述的检测猪流感病毒的羧基化荧光微球46-HA的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1. 羧基化荧光微球的活化:将清洗后的羧基化荧光微球046分别依次重悬于磷酸氢二钠缓冲液、Sulfo-NHS溶液和EDC溶液中进行活化;

S2. 活化后的羧基化荧光微球046悬液中加入猪流感病毒的血凝素重组蛋白进行孵育,并用PBS-TBN重悬即得。

7.一种检测猪流感病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有权利要求3所述的猪流感病毒的血凝素重组蛋白。

8.根据权利要求7所述的检测猪流感病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有权利要求5所述的羧基化荧光微球46-HA。

9.根据权利要求8所述的检测猪流感病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还含有生物标记的鸡抗鼠IgG抗体或者兔抗猪IgG抗体、链霉素-藻红蛋白。

10.根据权利要求9所述的检测猪流感病毒的试剂盒,其特征在于,所述生物标记的鸡抗鼠IgG抗体的稀释度为1:1000,兔抗猪IgG抗体的稀释度为1:5000,链霉素-藻红蛋白的稀释度为1:1000。

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