一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的制作方法

文档序号:12092184阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,编码牛呼吸道胞合体病毒关键蛋白F-蛋白野生种的氨基酸序列为简称SEQ 048055.1,具体序列为MATTAMRMIISIIFISTYVTHITLCQNITEEFYQSTCSAVSRGYLSALRTGWYTSVVTIELSKIQKNVCKSTDSKVKLIKQELERYNNAVVELQSLMQNEPASFSRAKRGIPELIHYTRNSTKKFYGLMGKKRKRRFLGFLLGIGSAVASGVAVSKVLHLEGEVNKIKNALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKELLPQVNNHDCRISNIETVIEFQQKNNRLLEIAREFSVNAGITTPLSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSSNVQIVRQQSYSIMSVVKEEVIAYVVQLPIYGVIDTPCWKLHTSPLCTTDNKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQTETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPTDVNLCNTDIFNTKYDCKIMTSKTDISSSVITSIGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKLEGKALYIKGEPIINYYDPLVFPSDEFDASIAQVNAKINQSLAFIRRSDELLHSVDVGKSTTNVVITTIIIVIVVVILMLIAVGLLFYCKTKSTPIMLGKDQLSGINNLSFSK,其特征在于:所述牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ 048055.1至少有两个位点被半胱氨酸替代,且替代后的半胱氨酸之间由二硫键连接。

2.根据权利要求1所述的一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述位点为氨基酸序列第148位缬氨酸和288位异亮氨酸。

3.根据权利要求1所述的一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述位点为氨基酸序列第158位亮氨酸和290位丝氨酸。

4.根据权利要求1中所述的一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ 048055.1,在第260位点的亮氨酸由半胱氨酸替代,并在该位点实现空穴填充。

5.根据权利要求1~3中所述的任一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述针对牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列剔除SEQ 048055.1序列中的103位点至138位点的氨基酸序列,采用sgsgs连接102位点和139位点。

6.根据权利要求1~3中所述的任一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述针对牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列剔除SEQ 048055.1序列中的103位点至142位点的氨基酸序列,采用sgsgs连接102位点和143位点。

7.根据权利要求1~3中所述的任一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白,其特征在于:所述编码牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ 048055.1序列,第99位点天冬氨酸由半胱氨酸替代,第362位点丝氨酸由半胱氨酸替代,并在替代后的半胱氨酸之间连接内二硫键。

8.一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的制备方法,其特征在于:具体工艺如下:

(1)根据结构生物学的原理,进行蛋白结晶,结晶后用X-射线观测,确定侵染病毒关键病原F-蛋白侵染前后的结构变化;

(2)根据步骤(1)结构变化设计出抗原蛋白的序列和结构;

(3)经多种抗原测试和稳定性特性检测确定出需要抗原蛋白的合格性;

(4)将经过验证的抗原蛋白序列进行相应的蛋白合成、表达、提纯和检测,得到用来作为动物试验和临床试验的针对牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白。

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