一种甲磺酸胺银杏内酯B代谢产物及合成和纯化方法与流程

本发明涉及一类化合物及其合成和纯化工艺方法，尤其涉及甲磺酸胺银内酯B代谢产物的合成和精制工艺方法，属于医药技术领域。

背景技术：

缺血性心脑血管疾病是发病率高、致死率高的重大疾病，目前最有效的治疗手段是抗血小板聚集。但此类药物易引起出血，开发可避免出血风险的新型抗血小板聚集药是目前全球的研究热点。作为银杏科银杏属唯一生存的老树种之一，银杏树的叶和果具有重要的药用价值。从银杏叶中共提取出6个萜类化合物：银杏苦内酯A、B、C、M、J和银杏新内酯，它们都具有二萜或半萜结构。银杏内酯A和B对治疗心脑血管疾病具有显著疗效。

银杏内酯B(Ginkgolide B， GB)是从银杏叶中提取的一种六环笼状结构的二萜化合物， 是迄今发现的最强的血小板活化因子 (PAF) 拮抗剂。但银杏内酯B水溶性不高，使银杏内酯临床应用受到很大的局限。我们选择银杏内酯B，经半合成制备得到甲磺酸胺银杏内酯 B。它极大的改善了水溶性，同时保持了银杏内酯B的空间结构和活性，药效学试验结果表明本品和银杏内酯B基本等效，为PAF竞争性拮抗剂，有抗血小板聚集、抗血小板粘附、抗血小板释放、抗血栓、抗凝血等药理作用。甲磺酸胺银杏内酯 B 是一种甲磺酸盐， 其母核部分是银杏内酯 B 经衍生修饰后得到的一种含氨基的分子，甲磺酸胺银杏内酯 B 的分子式为 C ₂₄ H ₃₃ O ₁₀ N·CH ₄ O ₃ S， 分子量为 591.63。

甲磺酸胺银杏内酯 B 为半合成的全新化合物， 我公司申请的中国专利 (CN1749257B)对其合成方法进行了保护， 目前国内外均未有制剂上市。甲磺酸胺银杏内酯 B结构式如下：

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是发现甲磺酸胺银杏内酯 B体内主要代谢产物，并制备得到高纯度代谢产物。但是，上述产物存在于服用甲磺酸胺银杏内酯 B的动物和人体血液中，稳定性差，极难提取分离得到高纯度的化合物。制备得到该代谢产物纯品，对于定量分析甲磺酸胺银杏内酯 B的体内代谢过程具有十分重大的意义。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

在药理和临床实验中发现，甲磺酸胺银杏内酯 B存在主要代谢产物10-O-乙氨基银杏内酯 B，为甲磺酸胺银杏内酯 B的N,N去二甲基代谢产物。 通过分离和检测手段，确定甲磺酸胺银杏内酯 B的主要代谢产物结构。其结构式如下：

其制备过程描述如下：将银杏内酯B和氨基含保护基团（苄基）的卤代乙胺混合，以碱（有机碱或无机碱）做缚酸剂，金属碘化物做催化剂，混合于有机溶剂中。设定反应温度65℃，保持反应20-30min，加入乙酸乙酯或二氯甲烷等易于溶解产物的有机溶剂，过滤，滤液浓缩，所得固体为（10-O-（N,N-二苄基）乙氨基银杏内酯 B）。将上述产物和Pb/C等金属催化剂反应，脱除N，N-保护基团，以乙醇做溶剂，设定温度温度为60℃，监控反应完全，过滤，滤液浓缩得到10-O-乙氨基银杏内酯 B粗品。

其中，所述基团R是氨基保护基团，包括易离去基团苄基或者BOC；所述基团A是卤素，包括氯、溴或者碘。

其中，所述的银杏内脂B 与氨基含保护基团（苄基）的卤代乙胺的摩尔比为1:0.8-10，优选1:2-4。

其中，所述的无机碱包括碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化钠、氢氧化钾，优选碳酸钾、碳酸铯、碳酸镁、碳酸钙。所述有机碱包括三乙胺，N,N-二异丙基乙胺，DBU，吡啶，氨水。

其中，所述的金属碘化物包括碘化钾、碘化钠、碘化镁、碘化铝、碘化锌及它们的混合物，优选碘化钾、碘化钠、碘化锌。

分离纯化过程描述如下：将10-O-乙氨基银杏内酯 B粗品通过制备高效液相色谱进行分离纯化，洗脱液用冷冻干燥工艺，除去溶剂。得到HPLC纯度>90%的10-O-乙氨基银杏内酯 B精制品。

其中，所述制备高效液相色谱型号为：Waters 2767 /QDG，柱子型号为：Waters sunfire 20*250mm 5um。

其中，所述的洗脱液为水：甲醇或者水：乙腈，并且PH≤5.0，为使流动相PH≤5.0加入酸或者缓冲盐。其中酸或为三氟醋酸、甲磺酸、醋酸、盐酸、磷酸、磷酸盐等。

附图说明

图1为本发明制备得到10-O-乙氨基银杏内酯 B的¹H-NMR。

图2为本发明制备得到10-O-乙氨基银杏内酯 B的HPLC纯度图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

在25ml三口反应瓶中，加入1.0g银杏内酯B和1.83gN，N-二苄基氯乙胺，2.5gK₂CO₃，50mgKI，10ml乙腈，磁力搅拌。设定反应温度65℃，保持反应20min，TLC监控银杏内酯B反应完全。加入50ml乙酸乙酯，过滤，滤液加无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，得到（10-O-（N,N-二苄基）乙氨基银杏内酯 B）粗品3.6g，收率>100%。

实施例2

将3.6g（10-O-（N,N-二苄基）乙氨基银杏内酯 B）粗品进行柱层析纯化（柱高18cm，柱径 5cm，洗脱剂（乙酸乙酯：二氯甲烷=5:95），TLC监控，含TLC单点产品的流份合并，减压浓缩。得到762mg（10-O-（N,N-二苄基）乙氨基银杏内酯 B）精制品，HPLC纯度98.25%。

实施例3

50ml三口反应瓶中，加入750mg（10-O-（N,N-二苄基）乙氨基银杏内酯 B）精制品，0.8gPb/C，25ml乙醇，设定反应温度为T=60℃，维持温度反应3h，停止反应，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到613mg 10-O-乙氨基银杏内酯 B粗品，收率86.5%。

实施例4

将500mg（10-O-乙氨基银杏内酯 B）固体通过制备高效液相色谱仪进行制备纯化。制备高效液相色谱型号为：Waters 2767 /QDG，柱子型号为：Waters sunfire 20*250mm 5um。将样品溶解在2ml甲醇中，进行制备（柱流速为30ml/min。流动相为水：乙腈（0.5%的TFA），梯度洗脱）。收集含产品流份。减压浓缩去除乙腈。浓缩液冷冻干燥。得到107mg（10-O-乙氨基银杏内酯 B）精制品。HPLC纯度为95.86%。