一种多阶段发酵生产利普司他汀的方法与流程

文档序号:12108978阅读:来源:国知局

技术特征:

1.多阶段发酵生产利普司他汀的方法,包括菌种活化、种子培养和发酵培养阶段,其特征在于,所述发酵培养阶段采用有氧多阶段发酵,发酵的前10~40 h为菌体生长阶段,控制溶氧水平在50-100 %;40h之后是利普司他汀产生阶段,当湿菌体重达到10-12 g/L时,转入微氧发酵阶段,溶解氧水平控制在20-30%。

2.根据权利要求1所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述的发酵培养阶段的发酵培养基的组分为:玉米粉10.0-15.0,鱼蛋白胨8.0-12.0,酵母膏10.0-15.0,甘油6.0-10.0,NaCl 3.0-8.0,葡萄糖5.0-10.0,压榨大豆油5.0-8.0,K2HPO4 1.0-5.0,MgSO4·7H2O 0.1-1.5,CaCO3 1.0-3.0,FeSO4·7H2O 0.005-0.025,ZnSO4·7H2O 0.005-0.025,MnCl2·4H2O 0.001-0.005,CoCl2·6H2O 0.001-0.005,所述组分的单位为g/L。

3.根据权利要求1所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述的菌体生长阶段控制空气流量为1.8vvm,搅拌速度为300-350 rpm,利普司他汀产生阶段调节空气流量为0.8-1.0vvm,搅拌速度为200-250 rpm。

4.根据权利要求2所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述的发酵培养阶段采用分批补料发酵,当培养基中葡萄糖浓度低于1g/L时,开始流加底物Ⅰ,以发酵液中葡萄糖的浓度来指导底物Ⅰ流加速度,使发酵罐内葡萄糖浓度控制在1.0-1.5g/L范围内发酵60-80h;

底物Ⅰ流加10-20h后开始流加底物Ⅱ,控制流加时间10-15h,至反应体系中Triton-100浓度为0.3-0.5g/L;

底物Ⅰ流加20-30h后开始流加底物Ⅲ,控制流加时间10-15h,至反应体系CaCl2浓度为0.5-0.8g/L;

其中:所述的底物Ⅰ组成为:葡萄糖 250-350 g/L,酵母膏80-120 g/L,甘油50-75 g/L;底物Ⅱ为:Triton-100液体;底物Ⅲ为:CaCl2 水溶液40-50 g/L。

5.根据权利要求1所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述的菌种活化为将砂土管保藏的菌种接种到PDA斜面培养基上,于温度24-27℃,培养6-7天,得孢子斜面。

6.根据权利要求1所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述的种子培养为:将孢子斜面用无菌生理盐水洗下来,接种到种子培养基中,在温度24-27℃,pH为6.5-8.5,转速为150-200 rpm的摇床中培养24-48h,得到种子培养液。

7.根据权利要求2所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述发酵培养基溶于60-80℃水中,搅拌均匀,倒入发酵罐中,通入冷却水,121℃高压蒸汽灭菌25-35min,灭菌前校正溶解氧为0%。

8.根据权利要求2所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述发酵培养的温度为24-27℃, pH为6.5-8.5。

9.根据权利要求2所述的多阶段发酵生产利普司他汀的方法,其特征在于,所述菌株为链霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443。

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