一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法与流程

文档序号:12399438阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

1)制备无乳链球菌菌液;

2)取步骤1)所得的菌液分别制备无乳链球菌灭活疫苗和无乳链球菌灭活抗原;

3)取步骤2)所述疫苗和抗原对家兔进行免疫接种;

4)从步骤3)免疫接种后的家兔体内收获血清。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤3)所述的家兔是2.0~4.0kg清洁级,日本大耳白兔或新西兰大白兔。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤3)所述的免疫接种包括以下步骤:

A)基础免疫:取步骤2)制备的无乳链球菌灭活疫苗,每次以2~4ml的剂量皮下多点注射2次,2次的时间间隔为10~15d;

B)灭活疫苗强化免疫:步骤A)完成7~10d后,取步骤2)制备的无乳链球菌灭活疫苗皮下和腿部肌肉多点注射2次,第1次剂量为4~6ml,第2次剂量为第1次剂量的1~2倍,2次的时间间隔为5~7d;

C)灭活抗原强化免疫:步骤B)完成5~8d后,取步骤2)制备的无乳链球菌灭活抗原皮下注射1~2次,第1次剂量为10~20ml,第2次剂量为第1次剂量的1~2倍。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于步骤A)中所述无乳链球菌灭活疫苗中活菌浓度为0.5×1010~1×1010CFU。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤4)中所述血清的抗体效价不低于1:320。

6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤1)所述菌液是通过以下方法制备的:将冻干菌种用营养肉汤培养12h~18h后,以划线方法接种至含5%~10%无菌绵羊脱纤血的血琼脂平板上纯化培养,而后挑去单菌落接种于含有2%~10%新生牛血清、0~8g/L葡萄糖的THB肉汤培养基中继代培养3~5次,每次培养的时间为4~8小时。

7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤2)所述的无乳链球菌灭活抗原是通过以下方法制备的:取步骤1)所得的无乳链球菌菌液,浓缩后于56℃热灭活30min。

8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于所述浓缩是通过离心方式实现的,离心转速为4000~8000rpm,离心时间为15~30min。

9.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于所述浓缩是通过超滤方式实现的,滤膜的孔径为0.22μm,浓缩倍数为5~20倍体积。

10.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤2)所述无乳链球菌灭活疫苗是通过以下方法制备的:取步骤1)所得的无乳链球菌菌液,以4000~8000rpm的转速离心15~30min或以0.22μm孔径的滤膜超滤浓缩5~20倍体积,而后1:100~1:500(w/w)的比例向其中加入甲醛溶液,于37℃灭活16~96h,得到灭活产物;以灭活产物与ISA201佐剂按1:1~4:5的体积比将二者混合,乳化5~10min,而后以灭活产物与氢氧化铝胶佐剂按3:1~3:5的体积比向乳化产物中加入氢氧化铝胶佐剂,混合均匀。

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