一种用于铁柱冬瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及鉴定方法与流程

文档序号:12109242阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于铁柱冬瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物,其特征是:所述引物SSR327包括上游引物SSR327-F和下游引物SSR327-R,所述引物SSR327上游引物SSR327-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述引物SSR327的下游引物SSR327-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种铁柱冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法,其特征是含以下步骤:

(1)取冬瓜子叶,提取冬瓜基因组DNA;

(2)以冬瓜基因组DNA为模板,使用权利要求1中的引物SSR327进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;

(3)对PCR扩增产物进行凝胶电泳,显色,统计电泳结果;

(4)对电泳结果进行分析,只有同时具有两个亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种,缺少其中的任意一条带或为非亲本特异性条带的单株记为假杂种,计算种子纯度,其中引物SSR327能产生184bp的如SEQ ID NO.3所示的母本特异性标记SSR327184以及199bp的如SEQ ID NO.4所示的父本特异性标记SSR327199

3.根据权利要求2所述的铁柱冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法,其特征是:步骤(2)中PCR扩增时采用的20μL反应体系为:150ng·μL-1基因组DNA 1μL、含Mg2+10×PCR buffer 2μL、2.5mmol·L-1dNTPs 1.5μL、0.25mmol·L-1上游引物SSR327-F 1μL、0.25mmol·L-1下游引物SSR327-R 1μL、2U/μL Taq酶1μL、ddH2O 12.5μL。

4.根据权利要求2所述的铁柱冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法,其特征是:步骤(2)中PCR扩增时扩增程序为:95℃预变性3min后,94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,40个循环后,72℃终延伸7min,4℃保存。

5.根据权利要求2所述的铁柱冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法,其特征是:步骤(3)中凝胶电泳时采用质量百分含量为8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1