1.猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)猪Delta冠状病毒上、下游引物和猪流行性腹泻病毒上、下游引物的设计;
(2)双重实时荧光体系的准备;
(3)双重实时荧光检测方法的实施。
2.如权利要求1所述的猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法,其特征在于:所述步骤(1)中,猪Delta冠状病毒的上游引物如SEQ ID NO:1所示,猪Delta冠状病毒的下游引物如SEQ ID NO:2所示;猪流行性腹泻病毒的上游引物如SEQ ID NO:3所示,猪流行性腹泻病毒的下游引物如SEQ ID NO:4所示。
3.如权利要求1所述的猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法,其特征在于:所述步骤(2)中,双重实时荧光体系为SYBR® Premix Ex TaqTM I 13 µL,25 pmol/μL的猪Delta冠状病毒的上游引物、25 pmol/μL的猪Delta冠状病毒的下游引物各0.5µL,25 pmol/μL的猪流行性腹泻病毒的上游引物、25 pmol/μL的猪流行性腹泻病毒的下游引物各0.5µL,样品模板2µL,用ddH2O补足25 µL体系。
4.如权利要求1所述的猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法,其特征在于:所述步骤(3)中双重实时荧光检测方法为,将步骤(2)中的双重实时荧光体系,置于荧光定量PCR仪中,设定PCR程序为95 ℃ 30 s,94 ℃ 5 s,55 ℃ 40 s,72 ℃ 40 s,共进行35个循环,通过溶解曲线确定猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒的检测结果。
5.猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法作为同时检测猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒的应用。