一株光合细菌及其在防治十字花科根肿病中的应用的制作方法

本发明涉及一株光合细菌及其在防治十字花科作物根肿病中的应用，属于微生物及植物生物防治
技术领域：
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背景技术：
：十字花科作物包括油菜和大宗蔬菜，如白菜、甘蓝、花椰菜、苤蓝、芥菜、萝卜等以及特种作物板蓝根和山葵，是我国种植最广泛、食用最普遍的蔬菜种类，在我国的浙江、广东、广西、四川、安徽、湖南、江西、福建、江苏、云南、新疆、西藏、辽宁、山东、上海、北京以及重庆等地区均有分布。但十字花科作物容易感染根肿病，我国每年发生根肿病的面积达2000万亩以上，且极难防治，严重影响到农民的生产生活和经济收益。目前对十字花科根肿病采取的主要防治措施有：农业栽培措施、抗病品种、化学防治措施，但其防治效果不理想。已有文献报道利用生物防治方法进行防治根肿病，如专利CN101416641B报道了一种防治十字花科根肿病的生物制剂，该生物制剂的生产菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillussubtilis)XF-1，该菌株是由液体和固体发酵培养获得，将该生物制剂应用于十字花科根肿病的防治，能够很好的控制根肿病的发生，增产作用明显，防治效果可达84.8％。专利CN102899266B提供了一种魔芋内生细菌成团泛菌菌株1-7及其在制备十字花科蔬菜根肿病制剂中的应用，具有高效、无毒、且促生效果好等特点。专利CN105296392A报道了一株对油菜根肿病具有高效防治功效、且施用剂量少的生防菌株，该菌株为解淀粉芽孢杆菌Bam22，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.11329。目前对于光合细菌成功应用于十字花科作物根肿病的防治尚未见相关文献报道。技术实现要素：针对现有技术中的不足，本发明的目的之一就是提供一株能够应用于防治十字花科根肿病的光合细菌，能够高效防治十字花科根肿病，降低作物发病率，并能较好促进作物增产。本发明的发明人经过大量的实验研究和摸索，获得了一株光合细菌，该光合细菌为闪板硫菌属(Lampropediasp.)，其命名为光合细菌GH-1(LampropediahyalineGH-1)，于2016年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M2016680。本发明的目的之二是提供一种光合细菌在防治十字花科作物根肿病中的应用。本发明的目的之三是提供一种光合细菌在制备防治十字花科作物根肿病的生物制剂方面的应用。本发明中的光合细菌作为生物制剂进行防治十字花科作物根肿病时包括如下步骤：(1)制备含权利要求1中所述的光合细菌的生物制剂；(2)将步骤(1)所得生物制剂采用下述方法之一进行施用：①拌入底肥或追肥中施用；②拌在种子中施用；③加水浇灌于作物根部施用。本发明的光合细菌在制备生物制剂时所含光合细菌的浓度为6～9×108cfu/mL。将上述光合细菌应用于防治十字花科作物根肿病，具有高效防治功效，能够显著降低十字花科作物根肿病的发生率，并能促进作物增产，且对环境友好。如实施例所示，将本发明的光合细菌制成制剂后应用于防治十字花科作物白菜的根肿病方面，作物的发病率降低至10％左右，平均病情指数减少为9.4，作物增产1900公斤每亩。本发明的有益效果在于：本发明所得菌株具有高效的防治十字花科作物根肿病的能力，应用于十字花科根肿病的防治上，根肿病的发病率可降低至10％左右，并显著降低植株的病情指数，同时能有效提高作物产量，增产率达150％以上；本发明中的光合细菌对环境友好，使用安全，无残留；本发明还拓宽了光合细菌的应用领域。附图说明图1为实施例1中光合细菌GH-1制剂稀释300倍后处理白菜种子后幼苗的生长发育对照图；其中，A侧为采用了光合细菌GH-1制剂处理，B侧为未采用光合细菌GH-1制剂处理。具体实施方式下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例11、实验原料及方法1.1菌株来源广汉根肿病发病严重田块里轻微发病植株根际。1.2培养基培养基配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g，水1000mL，pH调至5.0。1.3菌株的保存将菌株接种25％甘油中，-70℃或液氮保存，每月移种一次。1.4菌株的鉴定提取细菌的DNA，通过PCR法进行16SrDNA序列分析，基因序列见序列表。将所得序列在NCBI网站进行比对，并将其命名为光合细菌GH-1。1.5菌株在防治十字花科作物根肿病上的应用将所得菌株制备成试验用制剂后，采用浇根法，在播种时进行直接灌根处理或稀释后灌根的方法，未稀释菌液制剂中菌株的浓度为6～9×108cfu/mL，以每株每次浇灌100mL菌液进行灌根处理，至少处理2次，对白菜和油菜分别进行田间防效试验和增产试验。白菜和油菜根肿病的病情分级标准和调查方法按以下方式进行：白菜病情分级标准为：0级：根部无肿瘤；1级：主根肿大，其直径小于二倍茎基部；3级：主根肿大，其直径为茎基部的2～3倍；5级：主根肿大，其直径为茎基部的3～4倍；7级：主根肿大，其直径为茎基部的4倍以上或肿大的根部出现变黑。油菜病情分级标准为：0级：根部无肿瘤，根系发育正常；1级：1-30％的根着生少许肿瘤，有小的结节状肿块，相互不连接；2级：31-60％的根着生肿瘤，有大的结节状肿块，相互连接；3级：61-100％的根着生肿瘤，膨大到形成纺锤形瘤，大的瘤块一直延伸到下胚轴，植株矮小，停止生长。病情指数、发病率和防治效果按如下公式计算：发病率(％)＝(发病株数/调查总株数)×100；(一)对白菜的试验结果如下：将光合细菌作为生物制剂用于白菜根肿病的防治试验，结果如表1所示：表1将光合细菌作为生物制剂用于防治白菜根肿病的增产试验，结果如表2所示：表2处理产量(kg/亩)增产(kg/亩)增产率(％)CK900--稀释100倍28001900211.1稀释300倍24001500166.7稀释500倍19501050116.770％百菌清500倍137047052.2从表1和表2可以看出，本发明采用含光合细菌的生物制剂用于处理白菜，在防治白菜根肿病和白菜增产方面起到了很好的效果，稀释100倍的防效达87％，增产率为211.1％。将光合细菌制剂稀释300倍后进行灌根处理，对白菜幼苗的生长发育情况如图1所示，其中A侧为采用光合细菌制剂灌根处理，B侧为对照，可见A侧的白菜幼苗生长旺盛。(二)对油菜的试验结果如下：将光合细菌作为生物制剂用于油菜根肿病的防治试验，结果如表3所示：表3将光合细菌作为生物制剂用于防治油菜根肿病的增产试验，结果如表4所示：表4从表3和表4可以看出，本发明的含光合细菌的制剂在防治油菜根肿病和油菜增产方面起到了很好的效果，稀释300倍的防效为80.4％，增产率为130.9％。SEQUENCELISTING<110>四川省农业科学院植物保护研究所<120>一株光合细菌及其在防治十字花科根肿病中的应用<130>2016<160>1<170>PatentInversion3.5<210>1<211>1224<212>DNA<213>光合细菌<400>1gactgcaactgagtgtatcgctccttgcggtccgaacttcaggcacccccggcttccatg60gcttgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcgccatggctgatgcgc120gattactagcgaatccaacttcacggagtcgagttgcagactccgatccgaactgagata180ggtttttgagatttgcgcaccatcgctggttaccggccctctgtacctaccattgtaaca240cgtgtgtcgccccggacgtaagggccgtgctgatttgacgtcctcccccccttcctcaca300ccttacggtggcagtctcgttagagttcccagcttgacctgatggcaactaacgacaagg360gttgcgctcgttatggcacttaagccgacacctcacggcacgagctgacgacaaccatgc420agcacctcgatacacactattgctagctatgatatctctaccatattcctgcaccgttcg480agcccgggtaaggttcctcgcgtatcatcgaattaaaccacatgttcctccgcttgtgcg540ggcccccgtcaattcctttgagtttcaaccttgcggtcgtactccccaggtggataactt600atcgctttcgcttggtcactgactgtgtatcgccaacaactagttatcatcgtttacagt660gtggactaccagggtatctaatcctgtttgatccccacactttcgtgcctcagcgtcaat720aatggctttgtgagctgccttcgcaatcgatattctgtgtgatatctaagcatttcaccg780ctacaccacacattccactcacagcaaccatattctagcctgacagtatcaacggcattt840ttccagttaagctgaaaactttcaccactgacttatcagaccgcctacgcaccctttaaa900cccaataaatccggataacgctcgcatcctccgtattaccgcggctgctggcacggagtt960agccgatgcttattcatatggtactctcatcagtcttcgcaaagaccttaattgctccca1020tataaagcagtttacaatcccataggaccgtcttcctgctacgcagcatgctggatcaga1080ttcccatccattgtccgatatcctcactgctgacctcctcgtagagtctgggaccgtgtc1140tccagtccagtgtgggcgatcttcctctcgaatcctagacatctagtcatgtaggtcggt1200tacctacatctaacttaagtgtcc1224当前第1页1 2 3