一种同时检测柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的多重RT‑PCR方法及其应用与流程

文档序号:12167938阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种同时检测柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的多重RT-PCR方法,其特征在于:提取待检叶片样品的总核酸为模板,以SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.6所示序列为引物进行多重RT-PCR扩增,其扩增产物用琼脂糖凝胶电泳判定结果,所述多重RT-PCR扩增的退火温度为62℃~63℃。

2.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,多重RT-PCR扩增反应程序为:50℃反转录30min,94℃预变性4min,94℃变性30s,62℃~63℃退火50s,72℃延伸1min,35个循环,72℃10min,10℃终止反应。

3.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于:多重PCR扩增总反应体系中,Mg2+浓度为0.625mmol/L,dNTPs浓度为0.2~0.25mmol/L,SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2引物浓度各为0.15~0.2μmol/L,SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4引物浓度各为0.1~0.13μmol/L,SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6引物浓度为0.5μmol/L。

4.权利要求1~3任一项所述方法在检测植物柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒中的应用,其特征在于:所述的植物种类为芸香科柑橘属植物。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:所述的芸香科柑橘属植物为柚、甜橙、柠檬、沙柑、橘橙。

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