用于悬浮细胞的小规模养殖方法与流程

技术特征：

1.用于在悬液中养殖细胞的方法，其包括：

(a)提供细胞培养物；

(b)在细胞培养物中养殖细胞，其中搅动所述细胞培养物；

(c)停止对所述细胞培养物的搅动；

(d)在所述细胞培养物中所述细胞至少部分沉淀后，除去所述细胞培养物的部分培养介质；以及

(e)将新鲜培养介质加入至所述细胞培养物中。

2.用于模拟在悬液中细胞的大规模灌注培养的方法，其包括：

(a)提供小规模细胞培养物，其培养物体积为所述大规模灌注培养物的10％或更少；

(b)使用待模拟的所述大规模灌注培养的一个或多个培养条件，在所述小规模细胞培养物中养殖细胞，其中搅动所述小规模细胞培养物；

(c)停止对所述小规模细胞培养物的搅动；

(d)在所述小规模细胞培养物中所述细胞至少部分沉淀后，除去所述小规模细胞培养物的部分培养介质；以及

(e)向所述小规模细胞培养物中加入新鲜培养介质。

3.根据权利要求2所述方法，其中待模拟的所述大规模灌注培养的一个或多个培养条件选自培养介质、温度、pH值、氧浓度、细胞密度、细胞营养物的加入包括加入时间和所述培养介质中营养物的目标浓度、培养时间、具体的功率输入、气体供入速度、灌注速度以及培养介质的渗透压，其中所述培养条件用于在所述小规模细胞培养物中养殖细胞。

4.筛选用于在悬液中细胞的大规模灌注培养的培养条件和/或细胞克隆的方法，其包括：

(a)提供小规模细胞培养物，其培养物体积为所述大规模灌注培养物的10％或更少；

(b)在所述小规模细胞培养物中养殖细胞，其中搅动所述小规模细胞培养物；

(c)停止对所述小规模细胞培养物的搅动；

(d)在所述小规模细胞培养物中所述细胞至少部分沉淀后，除去所述小规模细胞培养物的部分培养介质；以及

(e)向所述小规模细胞培养物中加入新鲜培养介质；

其中所述单独的小规模细胞培养物在待筛选的培养条件和/或细胞克隆方面是不同的。

5.根据权利要求4所述方法，其中所述待筛选的培养条件选自培养介质、温度、pH值、氧浓度、细胞密度、细胞营养物的加入包括加入时间和所述培养介质中营养物的目标浓度、培养时间、具体的功率输入、气体供入速度、灌注速度以及培养介质的渗透压。

6.根据权利要求4或5所述方法，其中在所述筛选中选择这些培养条件和/或细胞克隆，其中所述筛选提供了所述细胞在所述细胞培养物中产生的目的生物分子的高细胞活力、高和/或稳定的细胞密度、高和/或稳定的产率，以及由所述细胞在所述细胞培养物中产生的目的细胞分子的所需的性质。

7.根据权利要求2至6的任意一项所述方法，其中所述大规模灌注培养物的体积为至少1升，和/或其中所述小规模细胞培养物的体积为50ml或更低。

8.根据权利要求1至7的任意一项所述方法，其中在步骤(c)中停止所述搅动后，所述细胞的沉淀发生至少35min，然后在步骤(d)中除去部分所述培养介质。

9.根据权利要求1至7的任意一项所述方法，其中在步骤(c)中停止所述搅动后，所述细胞的沉淀发生30min或更少，然后在步骤(d)中除去部分所述培养介质，并且其中在步骤(d)中，还除去所述细胞培养物中的部分细胞，从而产生细胞流失。

10.根据权利要求1至9的任意一项所述方法，其中在步骤(d)中除去所述培养介质的15％至50％和30％；和/或其中在步骤(d)中，从所述细胞培养物的顶部除去所述培养介质。

11.根据权利要求1至10的任意一项所述方法，其中在步骤(e)中加入新鲜培养介质的量基本上与在步骤(d)中除去的培养介质的量相同。

12.根据权利要求1至11的任意一项所述方法，其中在所述细胞的养殖过程中，控制所述所述培养介质中的pH值和/或氧浓度；以及其中停止控制所述pH值和/或氧浓度至少5min，然后停止在步骤(c)中对所述细胞培养物的搅动。

13.根据权利要求1至12的任意一项所述方法，其中一次或多次重复步骤(b)至(e)，并且其中在步骤(e)后，在搅动下将所述细胞培养至少1h，然后在下一循环的步骤(c)中停止所述搅动。

14.根据权利要求1至13的任意一项所述方法，其中所述待培养的细胞是真核细胞，其在悬液中生长，优选地是永生化人类血细胞，例如髓系白血病来源的永生化人类细胞，或者CHO细胞。

15.根据权利要求1至14的任意一项所述方法，其中所述细胞重组地产生目的生物分子，优选地是糖蛋白。